神经元特异烯醇化酶检测作业指导书医学检验

《文件已阅声明表》

《Procedure circulation form》

文件名称: 神经元特异烯醇化酶检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02

《文件修改记录页》

《Procedure amendment form》

表号:KM-MP03.02.03

《文件信息表》

《Procedure information form》表号:KM-MP03•02•04

神经元烯醇化酶（NSE）检测作业指导书

（Standard operation procedure for analysis of NSE）1.原理（Test principle）:

反应原理“三明治”法，总检测时间：18 分钟。

第一次孵育：20μl 标本和一份生物素抗NSE 特异性单克隆抗体一起孵育，一份钌复合体标记的NSE 特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原－抗体复合

体。

第二次孵育：加入链酶亲和素包被的微粒，复合体在链酶亲和素和生物素相互作用下形成固相。将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell 除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。

通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2 定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。

2.样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:

2.1样本收集（specimen collection）：类型（type）：血清（serum）；用量（volume）50μL，仪器加样量（sample volume ）20μL。

2.2拒收标本（specimen rejection）：EDTA抗凝血、严重脂血标本、接受过鼠单克隆抗体者、严重溶血（hemolysis）标本拒收

2.3标本储存条件(sample storage conditions)：室温（room temperature）保存6小时； 2-8℃24小时； -20℃3个月；十五天后处理标本。

2.4其他（others）：为避免纤维蛋白对结果的影响，必须确定离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。

3.试剂(Reagent)：

3.1Elecsys NSE 试剂盒, 产品目录号12133113

3.1.1试剂内组份：

试剂包装，100个检测

M 链酶亲和素包被的微粒（透明瓶盖）每瓶6.5ml 链酶亲和素包被的微粒：0.72mg/ml，结合力：470ng 生物素/mg 微粒，微粒经防腐处理。

R1 生物素化NSE 特异性抗体（灰色瓶盖）每瓶10ml。生物素化单克隆抗NSE 抗体18E5 （小鼠）：2mg/L；磷酸盐缓冲液：100mmol/L，PH值7.4；经防腐处理。

R2 钌复合物标记的NSE 特异性抗体（黑色瓶盖）每瓶10ml。钌复合物标记抗NSE 单克隆抗体（小鼠）：84B10 1.0mg/L；

磷酸盐缓冲液：100mmol/L，PH 值7.2；经过防腐处理。

3.1.2未随试剂盒提供的组分

Modular Analytics COBAS601 免疫分析仪所需材料:

货号12135019190, ProCell M, 1 x 2 L 系统缓冲液

货号12135027190, CleanCell M, 1 x 2 L检测池洗液

货号03023141001, PC/CC杯, 50杯用于在测定前预热Procell M及Cleancell M。

货号03005712190,ProbeWash M, 12 x 70mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗系统。

货号12102137001,分析杯/分析吸头组合装 M, 48 分析杯x 84 反应管或加液器吸头,废物袋

货号03023150001, WasteLiner,废物袋

货号03027651001, SysClean 适配器 M

货号11298500316, Elecsys SysClean, 5 x100 mL 系统清洗液

3.2试剂准备(reagent preparation)：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time；New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintain consistent results for patient specimens。Record the results。

4.仪器（Instrument）：Elecsys Cobas 601

要获得最佳的测定结果，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪特定检测的操作手册。

5.安全防范（Safety Precautions）：

操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。

6.校准（Calibration）：

6.1校准品：Elecsys Cobas 601原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material 。