细菌遗传转化与水平基因转移_谢志雄
微生物学课件第二节 细菌基因转移的方式

微生物在基因工程的兴起和发展过程中起着 不可替代的作用!
“微生物与基因工程”
一、基因工程的基本过程
1. 基因分离: a)分别提取供体DNA和载体DNA b)用专一性很强的限制性核酸内切酶分别切割供体和载体DNA
Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时, 形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子, 特称为F′因子。
F′×F-与F+×F-的不同:给体的
部分染色体基因随F′一起转入受体细胞
a)与染色体发生重组; b)继续存在于F′因子上,
形成一种部分二倍体;
二 细菌的转导(transduction)
由噬菌体介导的细菌细胞间进行遗传交换的一种方式: 一个细胞的DNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中
能将一个细菌宿主的部分染色体或质粒DNA 带到另一个细菌的噬菌体称为转导噬菌体
细菌转导的二种类型:
普遍性转导 局限性转导
1 普遍性转导(generalized transduction)
噬菌体可以转导给体细菌染色体的任何部分到
受体细胞中的转导过程
1951年,Joshua Lederberg和Norton Zinder为了证实大肠杆菌以外 的其它菌种是否也存在接合作用,用二株具不同的多重营养缺陷型 的鼠伤寒沙门氏菌进行类似的实验:
抗生素筛选
G ene cloning and E xpression using Plasm id pB R 322
DNA聚合酶
能够把脱氧核糖核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链的 3’-OH 末端,催化核苷酸的聚合作用,而不发生从引物模板上 解离的情况.
大肠杆菌HB101感受态细胞的显微观察与分析

可以得 到转化 子 , 感受 态 的建 立 与转 化 过 程可 以
一
质 粒 p R32购 至华美 生物 工 程公 司 . B 2
1 3 仪器 .
H-1 0透 射 电子 显 微 镜 . 80
步完 成 , 而不 用 象传 统转化 方 法那 样 , 要经 过玲 需
收 稿 日期 : 0 l1 —9 2 0 一10
十 讯联 系人 通 基童琉 目 国家 自 然 科 学基 金 资助 ( 07 4 83 00 ] ; 援 市晨 光 计划 项 目 (0 ] 0 5 5 ) 武 设 大 学 自强 科 技 创 新 基金 资助 30 00 0 70 ∞ 武 2 0 50 0 ] : 作 者 筒 舟 -f 谓 志雄 (9 9) 男 , 士 后 . 从 事 微 生 物 遗传 学 和分 析化 学 研 究 1 6一 , 博 现
中圈分类号 :Q 9 9 3
感受 态是 指细 菌细胞 在 一定 的生 长 阶段 自身 具 有或通 过人 为处理 而具 有摄 取外 源 D NA、 其基 因 使
型和表 型发 生相应 变 化 的能力 , 者 为 自然感受 态 , 前
C C。 a I处理细 胞 数 小 时 以诱 导 建 立 感受 态 , 后 再 然 经 过低温 、 热激 、 温 以及 在 L 中复 苏 等步 骤 , 低 B 才 能完成感受 态 建立与转 化 整个 过程 .由于简化 了感 受 态诱导 和转 化步 骤 , 而 为利 用 电镜 观察 大肠 杆 从
菌细 胞建 立感受 态提 供 了方 便 .因此 . 文 利用 透 本
后 者 为人工感 受态 L ] 照传 统 认识 t 1 .按 一般 认为 大
基因水平转移

第一节:细菌的可移动遗传元件
转座因子(transport element, TE)
DNA分子具有转座因子,帮 助DNA分子在位点之间转移
不具有自我复制功能,但是 它们具有可复制插入后的宿 主DNA
插入寄主DNA后,导致基因失活 插入时在靶DNA位点产生一个短的同向重复顺序
第一节:细菌的可移动遗传元件
复杂转座子(complex transposon)
两端是短(30-40bp)的末端反 向复杂序列(IR)或同向重复序 列(DR),中央是转座酶基因 和抗药性基因
接合型转座子 (conjugative transposon)
通过接合作用转移的转座子,末端没 有重复序列,但含有整合酶基因、切 离酶基因、接合型转移基因及抗生素 基因
实验室培养过程分离到能编码全套降解基因从而能独自完全矿 化硝基甲苯的单一菌株。
硝基甲苯降解途径
单一菌株
Biodegradation, 2003 , 14 (1) :19 ~29
第五节:水平基因转移环境修复意义
污染物生物修复作用(例2:苯酚降解基因的转移)
向污染的油井中连续 6年投加含有苯酚降 解基因pheBA菌株
FEMS MicrobiolRev 33 (2009) 376–393
第一节:细菌的可移动遗传元件
基因组岛(例:细菌水平基因转移与进化的工具)
GEI的整合、发展和排除过程 可移动GEI的生存方式示意图如下: (1)被水平基因转移获得 (2)被特殊位点重组后与宿主染
色体结合 (3)通过基因重组所致的GEI的
整合子会转移抗性基因,如图addB基因属于aad基因家族(编码氨基酸甘 转移酶,作用于不同的氨基糖苷类抗生素,使其钝化,介导耐药性) aadB主要介导庆大霉素等
21遗传工程微生物细胞间发生的自然遗传转化

研究报告
遗传工程微生物细胞间发生的自然遗传转化
陈 琪 , 陈向东 , 谢志雄 , 沈 萍
(武汉大学生命科学学院 , 武汉 430072)
摘 要 :将两株具有不同遗传标记的枯草芽孢杆菌在基本培养基中分别培养至对数生长后期后进行短时间混合静置
ment of both the possibility of intercelluar DNA transfer in natural habitats of microorganisms and the risk of the application of genetically engineered microorganisms (GEMs). Key words :genetically engineered microorganisms (GEMs);intercelluar natural genetic transformation ;recombinant plasmid ;Bacillus subtilis
固体培养基另加琼脂粉至 1.5 %。 LM 固体培养基 :LB 固体培养基另加脱脂牛奶 粉至 1.5%。
换方式进行不受控制的水平转移并造成有害生态后
果的担心 , 人们开始关注环境中发生的自然遗传转 化〔1 ,3〕 。 近年来对自然界中转化 DNA 的来源及其对 转化过程影响的研究表明 , 不仅能用 PCR、转化等技 术直接检测到自然环境中胞外 DNA 的存在 , 而且这 些 DNA 分子可因与固型物(土壤 、沙子 、水底沉积物 等)结合而得到保护 , 免受 DNase 的降解 , 并在较长 时间内保持其生物学活性〔4 ,5〕 。 而这些胞外 DNA 除 了由于细胞裂解或死亡所释放外 , 还有不少是一些 细菌在生长的特定阶段向胞外主动释放所致〔3 ,6 ,7〕 。 Stewart 等对施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)自然 转化的研究又进一步表明 , 在不加外源游离 DNA 的 情况下 , 转化不仅可在完整的供体和受体细胞间直
灰霉病菌sep5基因的致病功能初探[毕业作品]
![灰霉病菌sep5基因的致病功能初探[毕业作品]](https://img.taocdn.com/s3/m/2d5f58de5f0e7cd185253612.png)
目录中文摘要 (I)Abstract (II)第一章前言 (1)1.1灰霉病菌 (1)1.2 SEPTIN基因家族 (2)1.3农杆菌介导的遗传转化 (3)1.4本研究的内容及意义 (4)第二章材料与方法 (5)2.1实验材料 (5)2.2实验方法 (8)第三章结果与分析 (13)3.1 灰霉病菌SEP5 基因 (13)3.2灰霉病菌BcSEP5基因的敲除及遗传互补 (13)3.3生物学性状分析 (15)第四章结论 (19)讨论 (20)致谢 (21)参考文献 (22)中文摘要灰霉病菌能侵染很多宿主,环境限制小且拥有较强致病力,由于灰霉病感染植物能力较强,造成了巨大的经济损失,所以对灰霉病菌抗性和防治的研究尤为重要。
有关研究表明,Septin基因编码的蛋白参与了胞质运输、细胞分裂过程以及细胞凋亡信号通路。
本文针对BcSEP5基因在灰霉病菌中致病功能展开研究,通过运用农杆菌介导转化,同源重组替换的方法,对目的基因进行敲除及遗传互补,进而对菌株生物学性状对比分析,以得出结果。
研究结果表明,BcSEP5基因通过影响菌株的生长、产孢以及调控菌株侵染结构的形成,从而影响其整体致病力,若BcSEP5基因丧失了活性,其菌株致病力也将降低。
此研究对于研发杀菌剂以及灰霉病的生物防治具有一定意义,为我们进一步去了解Septin基因家族,及Septin基因与人类疾病的相关研究奠定一定的基础。
关键词:灰霉病菌;BcSEP5;遗传互补;致病力AbstractBotrytis cinerea can infect many hosts, the environment is limited and has a strong virulence, due to the strong ability of plants infected with gray mold, resulting in a huge economic loss, so the resistance and control of Botrytis cinerea research is particularly important . Studies have shown that the SEPTIN gene encodes a protein involved in cytoplasmic transport, cell division processes, and apoptotic signaling pathways. In this paper, the pathogenicity of BcSEP5gene in Botrytis cinerea was studied by using Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation and homologous recombination replacement. The target gene was knocked out and genetically complementary to get the conclusion. The results showed that BcSEP5 gene could decrease the activity of BcSEP5 gene, and the pathogenicity of BcSEP5 gene could be decreased if the BcSEP5 gene lost its activity by affecting the growth of the strain, sporulation and the formation of the infected structure. This study has a certain significance for the development of fungicides and the control of Botrytis cinerea, which provides a basis for further understanding of the Septin family and related studies of Septin and human disease.Key words: Botrytis cinerea; BcSEP5; Genetic complementarity; Pathogenicity第一章前言1.1灰霉病菌1.1.1概述灰霉病菌分布非常广泛,报道了至少1000种宿主,会危害多种粮食作物,经济作物,蔬菜和园艺植物。
昆虫水平基因转移及其研究进展

昆虫水平基因转移及其研究进展
雷可心;王晓迪;万方浩;吕志创;刘万学
【期刊名称】《生物安全学报(中英文)》
【年(卷),期】2024(33)2
【摘要】水平基因转移(horizontal gene transfer,HGT)是生物体获得遗传信息的方式之一,对生物体进化起重要作用。
近年来,越来越多昆虫中的水平基因转移现象
被报道,如在鳞翅目(如家蚕、甜菜夜蛾、小菜蛾、斜纹夜蛾)、半翅目(如柑橘粉蚧、烟粉虱)、鞘翅目(如咖啡果小蠹、米象、光肩星天牛)、膜翅目(如金小蜂)、双翅目(如果蝇、白纹伊蚊)等昆虫中广泛存在水平转移基因,且不同的水平转移基因对昆虫的营养合成与共生、吸收与消化、毒素产生与解毒、生长和发育、体色改变等方面有着重要作用。
本文结合国内外专家学者的相关报道,就HGT的研究步骤与技术方法、评判HGT发生的方法、昆虫HGT的供体与功能几个方面进行了总结和讨论,
以期更加深入地了解水平基因转移现象,为探究水平基因转移的作用机制、理解昆
虫的进化、遗传和行为、并将水平基因转移应用到农业生产中为农业害虫的绿色防治提供更多思路。
【总页数】9页(P114-122)
【作者】雷可心;王晓迪;万方浩;吕志创;刘万学
【作者单位】中国农业科学院植物保护研究所;中国农业科学院深圳农业基因组研
究所
【正文语种】中文
【中图分类】Q96
【相关文献】
1.水平基因转移介导抗菌素耐药性传播机制的研究进展
2.昆虫的水平基因转移研究
3.亚抑制浓度抗生素对细菌水平基因转移的研究进展
4.细菌外膜囊泡介导水平基因转移机制研究进展
5.水平基因转移促进细菌耐药性传播机制的研究进展
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细菌的遗传与变异

三、转 导(Transduction)
以噬菌体为载体,将供体菌的一 段DNA片段转移给受体菌,使其获得 新的性状。
根据转导基因片段的范围,可分为两种:
普遍性转导:
可转移供体菌DNA的任何片段。
局限性转导:
只转移前噬菌体插入部位邻近的供体菌DNA片段
1)普 遍 性 转 导
噬菌体的溶菌周期发生装配错误,误将 供体菌DNA装入噬菌体内成为一个转导噬菌 体,再以正常方式感染另一宿主菌。
F′质粒:
Hfr菌中的F质粒可以从细菌染色体上 切离下来,终止其Hfr状态,切离时可能 带有染色体上临近的基因,这种质粒称为 F′质粒。
2)R质粒的接合
R质粒由耐药传递因子(RTF)和耐药(r) 决定子两部分组成,这两部分可单独,也可结 合在一起,只有结合在一起才能发生质粒的接 合性传递。
RTF的功能与F质粒相似,因此可介导类似 F质粒的接合过程;r决定子能编码对抗菌药物 的耐药性。
2、温 和 噬 菌 体
1)概 念:
前噬菌体: 整合在宿主菌染色体上的噬菌体基因组。
溶原性细菌:带有前噬菌体基因组的细菌 。 溶原状态:
噬菌体基因随溶原性细菌的分裂而传给子代 的状态。
2)溶原性周期和溶菌性周期
温和噬菌体感染宿主菌后所建立的溶原 状态可中断,前噬菌体可自发或在一定理化 因素诱导下从宿主菌染色体切离下来,重新 复制新的子代噬菌体,最终裂解细菌。
(5)质粒的相容性与不相容性
3、几种常见质粒:
F质粒 R质粒 Col质粒
fertility factor
性菌毛有关
resistance plasmid 与耐药性有关
Col plasmid
编码大肠菌素
Vi质粒 virulence plasmid 与细菌毒力有关
【备考2024】生物高考一轮复习:第17讲 DNA是主要的遗传物质

【备考2024】生物高考一轮复习第17讲DNA是主要的遗传物质[课标要求] 概述多数生物的基因是DNA分子的功能片段,有些病毒的基因在RNA分子上[核心素养] (教师用书独具)1.认识DNA分子作为遗传物质应具备的特征,形成结构决定功能的观念。
(生命观念)2.总结肺炎链球菌转化实验和噬菌体侵染细菌实验的原理和过程,学习科学探究方法。
(科学探究)3.分析人类对遗传物质探究的实验设计思路,培养探究意识。
(科学思维)考点1肺炎链球菌转化实验一、对遗传物质的早期推测1.20世纪20年代,大多数科学家认为蛋白质是生物体的遗传物质。
2.20世纪30年代,人们认识到DNA的重要性,但是认为蛋白质是遗传物质的观点仍占主导地位。
二、两种肺炎链球菌的比较项目种类S型细菌R型细菌菌落表面光滑表面粗糙菌体毒性有毒性无毒性1.实验a、b对比说明R型细菌无致病性,S型细菌有致病性。
2.实验b、c对比说明加热致死的S型细菌无致病性。
3.实验b、c、d对比说明R型细菌转化为S型细菌。
4.综合以上实验得出的结论是S型细菌中含有一种“转化因子”,能使R 型细菌转化为S型细菌。
四、艾弗里的体外转化实验1.格里菲思认为加热杀死的S型细菌的DNA是转化因子。
(×)提示:格里菲思的肺炎链球菌转化实验只是证明了S型细菌中存在“转化因子”,使无毒的R型细菌转化为有毒的S型细菌。
2.艾弗里的肺炎链球菌体外转化实验证明了DNA是主要的遗传物质。
(×)提示:艾弗里的肺炎链球菌转化实验证明DNA是遗传物质,不能证明DNA是主要的遗传物质。
3.从格里菲思的第四组死亡小鼠身上分离得到的S型活细菌是由S型死细菌转化而来的。
(×)提示:S型活细菌是由R型细菌转化而来的。
4.艾弗里的实验中加蛋白酶的作用是使蛋白质失去活性,但其他物质如RNA、DNA等仍具有生物活性。
(√) 5.肺炎链球菌属于寄生细菌,其蛋白质在寄主细胞的核糖体上合成。
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第22卷第4期 中南民族大学学报(自然科学版) V ol.22No.4 2003年12月 Journal of South-Central University for Nationalities(Nat.Sci.Edition) Dec.2003细菌遗传转化与水平基因转移谢志雄 沈 萍*(武汉大学生命科学学院)摘 要 介绍了细菌中水平基因转移、转移途径(转化、接合和转导)以及细菌遗传转化即自然条件中的转化、自然遗传转化及人工转化等研究进展,并且对细菌遗传转化在水平基因转移中的作用进行了探讨.关键词 细菌;遗传转化;水平基因转移中图分类号 Q933 文献标识码 A 文章编号 1672-4321(2003)04-0001-05 水平基因转移(ho rizontal g ene tra nsfer)在20世纪90年代后开始频繁出现在文献报道中.水平基因转移研究引人关注的主要原因是由于基因工程技术的发展,人工构建的转基因动植物和微生物越来越多,对其释放于环境后可能发生的基因转移及其深远影响还没有明确的认识.目前人们对于遗传工程生物的安全性问题的争论多集中在这个方面[1,2].笔者拟从水平基因转移的角度探讨细菌遗传转化现象及其在水平基因转移中的作用.1 水平基因转移水平基因转移有别于一般亲本和其后代之间遗传信息垂直的传递形式,是在生物个体之间进行的基因转移.对水平基因转移的研究不仅使我们能了解水平基因交换对生物进化历程的深刻影响,更重要的是可以作为对偶然或有意识向环境中释放遗传工程生物(genetically modified o rganisms,GMOs)的风险评估依据[3].通过对特定基因的核苷酸序列或由其推导出的蛋白质氨基酸序列的分析,发现在生物进化过程中普遍存在着基因的侧向传播,其中细菌处于中心环节.先后在植物与细菌间、人细胞与细菌间、植物与动物间、真菌与细菌间、古生菌与细菌间、原生生物与细菌间以及细胞器与细胞核之间发现存在水平基因转移现象[4,5].1.1 细菌中的水平基因转移在细菌中,基因转移不是其生活周期中的必需部分,遗传物质从一个机体转移到另一个机体可产生深远的影响,如提高细菌致病能力或使其具有针对某种抗生素的抗性.此外,供体细胞的一些基因转移到受体细胞中,来源于2个不同细胞的基因(DN A)间的整合有助于保持群体的遗传多样性[6].通过对大肠杆菌(Esc herichia coli)M G1655菌株全序列的分析来评估水平基因转移对细菌基因组进化的全面影响,发现自E.coli从Salmonella中分离出来,至少发生了34起水平基因转移事件,其基因组4288个开放阅读框中的755个(共547.8kb)是通过水平基因转移而来,约占总数的17.6%.由于E.coli染色体长度是保守的,当通过水平转移获得新的序列后会通过缺失丢掉等长的其他序列,所以在E.c oli基因组中基因组成是动态的,使得基因组中具现实意义的基因得以引入并保留,替换非必需部分,整个染色体是镶嵌性的,通过这种方式可以有效地改变一种细菌的适应能力和致病特性[7,8].1.2 水平基因转移研究水平基因转移的研究不仅有助于对生物进化、物种形成等生物学基本问题全面、深刻地认识,更为重要的是水平基因转移研究的现实紧迫性:(1)抗生素抗性问题.近年来,陆续发现不能被目前任何一种已知抗生素控制的病原菌的“超级细菌”变种.细菌除自发突变产生新的抗药性并遗传给后代外,多数情况下细菌通过从其它细菌接受抗药性基因,而获得对某种抗生素的抗药性[8,9].人类在与细菌性疾病的对抗中面临着新的挑战.利用水平基因转⒇收稿日期 2003-07-09 *通讯联系人作者简介 谢志雄(1969-),男,博士后,研究方向:微生物遗传学,武汉430072基金项目 国家自然科学基金资助项目(30370017)、武汉市青年科技晨光计划资助项目(20015005051)和武汉大学青年创新科技基金移的研究成果,建立合理有效地使用抗生素的方式,降低新的抗药性产生的频率,特别是减少抗药性基因传播的几率,将会有助于人类在这场与细菌的对抗中取得优势.(2)遗传工程生物的安全性问题.随着遗传工程的产生与发展,越来越多的GM Os已经或将被释放于环境中,人们对GM Os释放的安全性疑虑重重.这种担心主要集中在2个层面.一方面是GM Os中经改造后的遗传物质及其产物对人的潜在影响,另一方面是GM Os释放于环境中改变了原有基因库的结构和组成,对生物多样性和生物进化的影响方式和程度.对GM Os释放的生物安全性的认识存在2种对立观点,均承认水平基因转移的存在,而对其作用和影响程度的评估是两派的重要分歧所在[2,5].目前有关水平基因转移方面的研究工作还处于初级阶段,大多集中在2个层次,一方面不断发现并证实各种水平基因转移现象,另一方面从系统发育的角度研究进化过程中的水平基因转移事件,而对水平基因转移发生机制的研究还是一个薄弱环节[7,10].2 细菌水平基因转移的途径一般认为细菌仅通过二分裂方式增殖,没有类似于真核生物通过有性生殖而获得遗传信息转移重组的机制.细菌转化、接合和转导的研究已有数10年的历史,但一直是作为细菌中类似于高等生物的有性现象和作为遗传作图的工具.自然条件下进行的转化、接合和转导过程实际上介导了细菌间的水平基因转移.水平基因转移现象的发现与确证赋予转化、接合和转导研究新的生命力,这方面的研究成果将有助于阐明细菌间水平基因转移的机制及水平基因转移在生物进化中的地位[6].2.1 转化转化一般是指某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一个基因型细胞的游离DN A(free DN A)而使它的基因型和表型发生相应变化的现象[11].1928年英国医生Griffith在研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)感染小鼠的实验中发现转化现象.Griffith发现将活的粗糙非致死肺炎链球菌与经加热杀死的光滑致死肺炎链球菌混合物注射小鼠,小鼠染病致死,从中分离到活的光滑型肺炎链球菌.粗糙型肺炎链球菌可被转变为光滑型肺炎链球菌,而且这种改变可以遗传.文献[12]从元素分析、酶学分析、血清分析以及生物活性鉴定等方面证实引起肺炎链球菌转化的转化因子是DN A,第一次为遗传物质是DN A而不是蛋白质提供了直接证据,也表明水平基因转移的主要载体是DN A.在肺炎链球菌中发现转化现象后,在许多种类生物中观察到转化现象,如Acinetobacter、B acillus、Haemophilus、N eisse-ria和Staphyloc occus以及酵母.细菌整个转化过程是由染色体上的众多基因参与调控编码的,是细菌典型的基因水平转移方式.有关转化机制的研究表明,抽提得到的裸露DN A与感受态细胞混合,每细胞最多可摄取约10个DN A片段,低于正常细胞中DN A量的5%.DN A摄取只发生在细胞生长的特定阶段,可能在完整细胞壁形成以前.在此阶段,一种被称为感受态因子的蛋白质释放于介质中促进DN A进入细胞内,而且缺乏感受态因子的培养物经其处理后可建立感受态而摄取DN A 片段.然而,不是所有细菌都可建立感受态,即不是所有的细菌可以被转化.DN A进入细胞依赖于细胞壁的改变和质膜上形成可结合DN A的特异性受体,有的受体可以识别不同来源的DN A,结合来源相同或近缘种属的DN A,而排斥远缘种属的DN A.在转化过程中,DN A与特异性受体结合前对DNase I是敏感的,这是转化的一个基本特征.DN A结合到膜上后,内切酶将双链DN A切割成7000~10000个碱基对大小的片段,双链分离,仅一条链进入细胞,经过重组整合到染色体上[12,13].2.2 接合文献[11]首先发现细菌中存在由质粒介导的类似有性过程的基因交换重组现象.接合与转化之间存在明显的差异.首先,接合需要细胞与细胞之间的直接接触;其次,可以进行接合的细胞必须属于不同的配型,即供体细胞必须携带质粒(性因子、致育因子),而受体细胞则没有.细菌的接合过程分为接合配对的形成和DN A的转移2步进行,质粒上携带的基因表达形成特定的结构(如性伞毛)使供体和受体细胞配对,在其间建立一种通道,DN A可借此从供体细胞进入受体细胞,然后如同转化过程中发生的一样,与受体DN A进行重组,受体细胞借此获得新的性状.接合过程是由染色体外遗传因子编码的功能.2.3 转导转导是由病毒介导的细胞间进行遗传转移的一种方式,是指一个细胞的DN A或RN A通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中.转导过程中,裸露DN A不能完成转导,不同于转化或接合过程.转导是与噬菌体生命周期密切相关的,噬菌体感染细菌后其DN A在细菌体内增殖,在装配过程中发生误包装,一2 中南民族大学学报(自然科学版)第22卷些新的颗粒携带的是细菌DN A而不是噬菌体DN A,携带宿主DN A的噬菌体感染新宿主时带入原宿主DN A,噬菌体介导了两宿主之间的DN A重组,转导频率低,但具有在宿主间转移整个质粒和一些染色体片段(片段大小受噬菌体包装容量的限制)的能力,可能会导致一种基因的广泛扩散.转导现象是由噬菌体基因编码的功能所致[14].2.4 细菌基因转移的途径比较细菌几种主要的遗传信息转移类型最基本的差异涉及DN A转移的量和转移所采用的机制.转化是通过裸露DN A发生的遗传性状的改变.转化中供体细胞中少于1%的DN A转移到受体细胞中,转移过程的调控仅涉及染色体上基因的功能(相对于接合质粒而言),此过程需要感受态因子.接合由致育因子启动,通过性伞毛可以转移整个基因组进入受体细胞.转导则依赖于噬菌体装配过程中DN A的误包装,片段大小受包装容量限制,DN A转移范围与噬菌体宿主范围相关[6,11].转化过程中供体与受体的低专一性和转化机制的简约性,体现了转化在基因转移机制中的原始性.3 细菌遗传转化3.1 自然条件中的转化感受态(com petence)是指细胞具有结合摄取外源DN A并发生遗传改变的能力.依据建立感受态的方式,转化可分为人工转化和自然遗传转化(简称“自然转化”),后者感受态的出现是细胞一定生长阶段的生理特性,前者则是利用高剂量的二价阳离子(如: Ca2+,M g2+)、诱导原生质体形成以及电穿孔等方法处理细胞,使其获得摄取外源DN A的能力[12,13].虽然转化是在实验室中发现的,但转化不仅仅是一种实验室现象,转化在自然环境中可以进行,只是自然条件下转化对生物遗传多样性的贡献有多大还不得而知.自然条件下,细菌可建立感受态,而且释放于环境中的DN A可吸附于粘土、沉积物或高岭石等表面,从而获得可以抵御被DNa se降解的自我保护能力,并能保持一定的转化活性,因此自然界中进行的转化是普遍的,已报道至少24属43种细菌可以进行自然转化[13,15,16,17].环境中也不乏存在转化DN A.采用竞争PC R方法检测质粒pV ACM C1在人唾液中的降解及转化活性的变化,发现虽然质粒DN A在唾液中会被部分降解,但24h后还可检测到靶DN A片段的存在,而且经新鲜唾液处理后的质粒DN A依然可以保持转化活性,而且DN A在通过胃肠道后还可得到部分保存[18].这些发现显示由细菌或食物中释放的DN A具有转化可建立自然感受态的消化道细菌的潜力.据报道用PCR可以在自然环境条件下检测到转基因植物的DN A,最长可达2年[12,13,19].从中可以发现环境中具转化活性的DN A可以生存,而且在实验室中可诱导细菌建立感受态的营养胁迫条件在自然生境中是普遍存在的,因此在自然环境中自然转化现象,特别是GMOs释放于环境后的深远影响值得关注.3.2 自然遗传转化不同于接合和转导,转化是由细菌染色体基因控制的[20],在细胞密度、营养条件等信号诱导下细菌建立感受态摄取外源DN A的过程,可能是由最初细菌为获得营养物质的一种方式演化而来的[21].已有报道在许多革兰氏阴性和阳性细菌中可以建立自然感受态,如:Streptococcus,Bacillus、N eisseria、Haemophilus、Acinetobacter、Helicobacter、Methy-lobacterium、Microc occus、Myc obacterium、Pseu-domonas和Streptomyces[22].对细菌而言,自然转化的优势体现在3个方面:(1)自然转化是细菌通过水平基因转移获得新的遗传信息的一种途径,在人类病原菌之间抗药性的快速传播中,自然转化扮演着重要的角色[23];(2)细菌以自然转化过程中摄取的外源DN A 为模板,可通过同源重组方式帮助修复受损染色体, UV-DN A(细菌经UV照射后,补加DN A)实验结果表明,细菌转化率随UV剂量增加而提高,而不论DN A是否经UV处理过,自然转化是细菌在进化中逐步建立起来,以获得外源DN A修复受损染色体的一种机制,这对细菌维持生存是极重要的[24],因为单细胞生物不象多细胞生物那样可以通过免疫系统或细胞编程性死亡途径清除受损细胞,由正常细胞增殖取代;(3)可作为细菌在营养胁迫条件下获得营养物质的方式[21].转化过程中受体细胞为防止供体DN A 的降解而表达相应的DN A结合蛋白,诱导产生对应的重组酶系,这些表明转化是细菌在一定生长阶段采取的主动调节过程[13,20].近年来不仅观测到细胞接触转化,而且实验表明细胞间的接触大大促进转化活性,从而进一步证明完整的供体细胞在转化中的作用[12].供体功能的研究对全面了解自然转化过程中转化DN A的来源及转化在水平基因转移中的地位和作用具有重要意义.3.3 细菌人工转化3第4期 谢志雄等:细菌遗传转化与水平基因转移 以大肠杆菌为例.大肠杆菌是分子生物学研究中的最常用模式菌之一,也是DN A克隆操作中通用的受体菌,但一般认为大肠杆菌不具有建立自然感受态的能力,是“安全的”基因克隆受体菌[22].据报道[25~28]发现大肠杆菌经Ca Cl2处理后可以摄取噬菌体DN A而被转导,此发现是随后衍生出的众多化学转化方法的基础.但是化学方法诱导大肠杆菌建立感受态的原理与机制还不是十分明了.一般认为是由于细胞在低温、Ca2+等因子诱导下,细胞膜通透性发生改变,膜通透性的改变使细胞可以摄取DN A.发现大肠杆菌在低温下经一定浓度的Ca2+或Mg2+处理和热激后,部分细胞形成原生质体,认为细胞壁的破坏也许是摄取DN A所必需的[28].研究发现大肠杆菌转化能力与膜上(U-聚羟基丁酸(U-polyhydroxy butyra te,PHB)浓度相关、建立感受态过程中,细胞生理活性发生改变,其中涉及PHB 的重新合成及整合到膜上,PHB直接合成掺入细胞膜,而不是原有的PHB颗粒融合到膜上[29].大肠杆菌转化能力在脂质代谢水平上可以进行生理调节,而且其它细菌中(如Azotobacte、B acillus、Haemophilus)也发现膜PHB浓度与转化能力之间存在相关性,表明这可能是细菌跨膜运输的一种基本模式[27].从自然环境中采集的含一定离子的天然水样中,大肠杆菌可以建立感受态,由此认为大肠杆菌可能具有通过其内在调节机制建立自然感受态的可能,而大肠杆菌感受态建立与转化不完全依赖于人工诱导[30].笔者最近的工作[31].和文献[32]研究结果也支持大肠杆菌具有建立自然感受态的能力.大肠杆菌建立感受态是对外界刺激(如低温、Ca2+等)应答的过程.笔者发现在简单的转化介质中即可完成感受态建立与转化过程,这些都暗示大肠杆菌感受态建立和转化过程可能是一个生理调节过程,在大肠杆菌中没有发现其具有建立自然感受态的能力可能是对其转化原理与机制还缺乏全面的认识.这可能意味着,在细菌中具有建立自然感受态能力的细菌远多于我们原来所估计的水平,这一问题的深刻认识对遗传工程微生物合理构建及释放安全性的评估和水平基因转移规律的认识均具有直接意义.4 小结近年来不断有报道,发现在自然环境中检测到可用于转化的DN A,也检测到土壤环境中的自然转化现象[33].对细菌在自然环境中遗传转化的进一步认识,不仅有助于对细菌进化历程的深刻理解和转化在水平基因转移中作用的认识,而且能够对细菌间抗性基因和致病基因转移控制和GM Os释放的安全评估提供理论依据.参 考 文 献[1] Law rence J G,Har tl D L.Inference o f ho rizo ntal 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and Horizontal Gene Transfer in BacteriumX ie Zhix iong Shen PingAbstract In this paper ,the outline o f recent studies o n ho rizo ntal gene transfer ,transformer line (tra ns-forma tion,linking and transfo rmer induce)and genetic transfo rmation o f bacteria na tural tra nsfo rmatio n,natural gene transfo rmatio n a nd artifical transforma tion w as summarized,and the pertinence betw een bac-teria l g enetic transfo rmation and ho rizontal genetic transfo rmatio n wa s also discussed .Keywords bacterium ;genetic transfo rmatio n ;ho rizontal gene transferXie Zhixiong Assoc Prof ,Ph D ,Colleg e of Life Science ,W uhan U niv e rsity ,W uhan 430072,China5第4期 谢志雄等:细菌遗传转化与水平基因转移 。