支原体试检测剂盒使用说明书(中文版)
支原体指导书
文件名称微生物标准染色方法版本文件编号状态编写日期编写审核日期审核发布日期签字【检验目的】检验样本中是否含有抗酸杆菌，为临床提供诊断依据。
【原理】结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。
利用这特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色）。
【试剂】试剂名称：结核菌染色液试剂生产厂家：珠海贝索生物技术有限公司包装规格：250ml*4试剂组成：1、石碳酸复红溶液2、酸性酒精溶液3、亚甲基蓝溶液储存条件及有效期：原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【标本要求】（1）标本类型：病人的痰、穿刺关节液、腹水、胸积液、组织、脑脊液、分泌物、尿液等。
（2）标本采集：见标本采集手册（一般须得深咳痰，其它无特殊要求。
）（3）标本储存和运输：可室温保存、室温运送。
病人标本须密封运送以避免污染环境。
【检验方法】1、痰液标本取干酪样、脓样或可疑部分约0.05毫升，其他体液标本取离心后沉淀0.05毫升，于玻片正面均匀涂抹成10*20毫米卵圆形菌膜，自然干燥。
染色前加热固定。
2、放置在染色架上，玻片间距保持10毫米以上距离；火焰固定。
3、滴加石碳酸复红溶液盖满玻片，染色10分钟或更久。
4、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。
5、自菌膜上端外缘滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟；如有必要，需流水洗去酸性酒精溶液后，再次脱色至菌膜无可视红色为止。
6、流水自玻片一端轻缓冲洗10-20秒，冲去酸性酒精溶液，沥去玻片上剩余的水。
7、滴加亚甲基蓝溶液，染色30秒钟。
8、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去亚甲基蓝溶液，然后沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检。
9、一张染色合格的玻片，菌膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块。
牛支原体环介导等温扩增检测试剂盒等2种兽药产品说明书和标签
牛支原体环介导等温扩增检测试剂盒等2种兽药产品说明书和标签一、牛支原体环介导等温扩增检测试剂盒说明书和内包装标签（一）牛支原体环介导等温扩增检测试剂盒说明书【兽药名称】通用名牛支原体环介导等温扩增检测试剂盒商品名无英文名Loop-mediated Isothermal Amplification Detection Kit for Mycoplasma bovis汉语拼音Niuzhiyuanti Huanjiedaodengwenkuozeng Jiance Shijihe【主要成分与含量】试剂盒中含有如下成分：成分含量扩增试剂混合物1瓶甜菜碱溶液1管（0.45ml）阳性对照品1管（0.1ml）阴性对照品1管（0.1ml）显色液1管（0.06ml）【作用与用途】用于牛呼吸道分泌物中牛支原体核酸的检测。
【用法与判定】1 模板制备用无菌棉签采集牛鼻拭子、咽拭子，置无菌螺口离心管中，加盖密封，2～8℃保存应不超过24小时，-20℃以下可保存3个月，但应避免反复冻融。
向离心管中加入1ml双蒸水，充分振荡后，取出棉签。
将离心管置水浴中加热煮沸10分钟，冷却至室温，液体即可作为模板使用，-20℃保存，备用。
核酸提取液或质粒不需要上述处理，可直接作为模板使用。
2 扩增反应将甜菜碱溶液加至扩增试剂混合物中，溶解后混匀，加至反应管中，每管0.02ml。
再向反应管中分别加入模板、阳性对照品或阴性对照品各0.01ml，在反应管盖的内侧加入显色液2μl。
盖上反应管盖，注意切勿使显色液脱落。
置恒温加热器中，63±1℃反应1小时。
3 结果判定反应结束后，将管盖上的显色剂甩至管底部的反应液中，反应30秒后，观察颜色变化。
加阳性对照品的管应呈绿色，加阴性对照品的管应呈紫色，则试验成立。
样本反应液如呈绿色，则判为阳性；如呈紫色，则判定为阴性。
【注意事项】（1）各步骤分区进行。
（2）所有耗材须经DEPC水处理，并高压灭菌。
支原体检测试剂盒(ver
支原体检测试剂盒（ver.1.0）说明书上海华大天源生物科技有限公司2005年9月1．试剂和材料1．1 试剂盒组成：1）说明书2）第一阶段PCR引物混合物已分装，可做50次反应3）第二阶段PCR引物混合物已分装，可做50次反应4）阳性对照DNAPCR扩增的支原体DNA片段，无污染性5）10x反应缓冲液适用于多种DNA聚合酶1．2 试剂盒中未提供的试剂：1）DNA聚合酶2）矿物油（无热盖式PCR仪需要）3）琼脂糖凝胶4）去离子水1．3 需要的仪器：1）PCR仪2）1.5ml微量离心管3）凝胶电泳设备4）离心机5）微量移液器及其适配移液头1．4 保存方式：-20 o C2．应用及测试原理2．1应用本试剂盒采用聚合酶链式反应技术（PCR）来进行支原体的检测。
该方法灵敏度高，可用于检测各种生物材料（如细胞培养物）中所感染的支原体。
试剂盒中所含引物能特异性扩增支原体rRNA的保守区域，不会扩增真核细胞或细胞基因组。
相比较传统的在选择性培养基中对待检测样品进行长时间培养而言，本方法快速并且不会带来对实验环境的污染问题。
样品中是否含有支原体的污染可以通过电泳检查DNA扩增条带来判断，无需荧光或同位素标记过程。
本试剂盒能检测的支原体种类包括M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M.orale, M. salivarium, M. hominis, M. pulmonis, M.arthritidis, M. neurolyticum, M. hyponeumoniae, M.capricolum等等，上述支原体引起超过95%的生物材料污染问题。
注：本试剂盒仅用于研究，不能用于临床诊断及人体样品检测。
2．2 测试原理支原体的rRNA基因序列是比较保守的，而其基因间区（如16S基因和23S基因之间的区域）的长短却因物种的不同而异。
而我们的PCR检测过程分以下两步进行：1）用第一阶段PCR引物对扩增整个基因间区，引物分别结合16S和23S基因编码区域。
《支原体清除试剂》使用说明书
5) 以后每隔 1 个月进行支原体的常规检测，以保证没有新的支原体污染。
注意事项
根据细胞污染情况，一个疗程是 7-15 天检测一次，如果检测之后发现没有支原体污染，还 建议试用对半浓度继续维持 15 天，最后撤掉。由于我们支原体清除试剂对细胞生长几乎没 影响，可以重复添加，对于实验室环境比较不受控的情况，建议重复添加以预防。
《支原体清除试剂》使用说明书
关于支原体
支原体（Mycoplasma）是一种没有细胞壁的原核生物，大小约 0.1 - 0.6 微米。目前， 已发现的支原体品种有 100 多种。 由于支原体直径较小，经常可以穿过实验室常规的 0.20 微米孔径的除菌滤膜，高压过滤时，甚至可以穿过 0.10 微米孔径的除菌滤膜，造成细胞的 支原体污染。
科佰产品
货ห้องสมุดไป่ตู้ CBP50044
名称 支原体清除试剂（1000x）
规格 1ml
价格 900.00
货期 现货
产品用途
该产品专用于消除那些被支原体和某些无细胞壁的细菌感染的细胞系。在小型或大型 细胞培养中，也可以直接添加到液体培养基中来预防支原体及常见的细菌污染。该产品仅 用于基础研究，非临床用品。
运输和储存
细胞培养的支原体污染来源主要有：（1）细胞之间的交叉污染，这是支原体污染的最 主要原因；（2）细胞培养操作人员的口腔、皮肤等。（3）细胞培养用的组分，如血清、培 养液等；
支原体试检测剂盒使用说明书(中文版)
支原体检测试剂盒使用说明书1.试剂：支原体检测试剂盒由武汉源深生物科技有限公司提供。
2.实验方法:巢式PCR的方法检测支原体污染：A.待检细胞汇合率在90％以上时取100 µL细胞上清液到离心管内B.95o C孵育5分钟C.短暂高速离心15秒钟左右D.试剂盒里的组份：引物混合物(Primer Mix) 20 µL阳性对照DNA (Positive Control DNA) 15 µL阴性对照(Internal Control DNA) 20 µL巢式PCR一共需要做2轮PCR，本检测方法不受其他来源（如所培养细胞）DNA的影响，不但提高了检测的灵敏度，同时也提高了特异性。
(1)第一轮PCR:PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
E.热循环程序：将准备好的PCR管放入PCR仪，运行如下程序。
PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
F. 热循环程序：将准备好的PCR 管放入PCR 仪，运行如下程序。
试验结果：2％ 琼脂糖凝胶电泳，TBE 缓冲液，PCR 产物及Marker 均点样10µL ，于50V 下电泳1hr ，EB 染色15min ，紫外灯下观察。
电泳结果见下图：图中泳道M 为DNA Marker ，1和2为待检测细胞系的第一轮PCR 产物 (1st )，3和4为待检测细胞系的第二轮PCR 产物 (2nd ), 其中1、3为阳性对照管PCR 产物，2、4为阴性对照PCR 产物。
阳性对照管在200bp 左右，和300-400 bp 处各有一条带，证明本次实验准确可靠 (不同的支原体Mycoplasma, such as M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. hominis, M. arthritidis, M. hyopneumoniae and Acholeplasma laidlawii 的保守区的片段长度不一，大概在200-400 bp 之间)。
MycoGuardTM 支原体检测试剂盒(生物化学发光法) 使用说明书
MycoGuard TM支原体检测试剂盒（生物化学发光法）使用说明书——MycoGuard TM Mycoplasma Bioluminescent Detection KitCat.No.MPD-E-010(10次反应)MPD-E-050(50次反应)GeneCopoeia,Inc.广州易锦生物技术有限公司广州高新技术产业开发区广州科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器F区8楼邮编：510663电话：4006-020-200邮箱：sales@网址：©2015GeneCopoeia,Inc.使用手册：MycoGuard TM Mycoplasma Bioluminescent Detection KitI.产品简介II.应用范围III.产品优势IV.试剂盒组成V.实验流程VI.实验所需仪器及材料VII.样品准备VIII.实验步骤IX.注意事项X.结果分析XI.使用限制与质量保证I.产品简介MycoGuard TM Mycoplasma Bioluminescent Detection Kit应用了一种高效的、选择性的生物化学检测，通过检测在支原体中特定酶的活性，从而测得样本中存在的支原体。
原理：支原体被溶解后，释放到培养基的支原体酶与MycoGuard TM底物相互反应，可催化ADP转换为ATP。
ATP含量的变化可通过生物发光的原理检测，由ATP激发的荧光强度与ATP浓度呈线性关系。
通过计算样本在添加底物前和添加底物后的ATP比率，可判断样品中是否存在支原体。
II.应用范围支原体污染是细胞传代及培养中的常见问题。
支原体是最小、最简单的原核生物，由于自身缺乏生物合成功能，支原体通常依靠与细胞竞争培养基中的养分存活，易导致细胞增殖速度减慢、改变基因表达、代谢特征及细胞形态等，影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性。
支原体很难检测，传统的支原体检测方法需耗费大量时间，且无法在早期发现污染。
GeneCopoeia推出的MycoGuard TM支原体检测试剂盒可快速、简单检测出细胞培养过程中存在的支原体，便于监控细胞培养过程，或为培养基中的各组分进行常规检测。
肺炎支原体IgM说明书
肺炎支原体抗体（ IgM ）检测试剂盒（胶体金法）说明书【产品名称】肺炎支原体抗体（IgM ）检测试剂盒（胶体金法）【包装规格】40 人份 /盒或 20 人份 / 盒（详细规格见试剂盒包装标签）【预期用途】定性检测人血清中的肺炎支原体IgM 抗体，可用于支原体肺炎的协助诊疗。
【查验原理】本品应用间接法的胶体金标志免疫斑点渗滤原理，质控线采纳双抗夹心的胶体金标志免疫斑点渗滤原理。
该试剂盒里的斑点反响板上的微孔滤膜固相有肺炎支原体P1 蛋白抗原斑点，当待检测的血清中含有肺炎支原体IgM 抗体时，与微孔滤膜上的肺炎支原体P1 蛋白抗原抗原形成复合物，胶体金标志的羊抗人IgM 抗体与上述抗原抗体复合物联合，形成肉眼可见的红色斑点，即为阳性结果，不然为阴性结果。
微孔滤膜上的质控线含有羊抗人IgM 抗体，当待测血清加入后，人血清中的IgM 抗体与质控线上羊抗人IgM 抗体形成复合物，胶体金标志的羊抗人IgM 抗体再与上述复合物联合，形成肉眼可见的红色质控线。
【主要构成成份】1.斑点反响板： 40 块（或 20 块），每块斑点反响板主要由含固相肺炎支原体P1 蛋白抗原斑点的硝酸纤维膜和吸水纸构成。
2.试剂 A： 1 瓶，约 10ml （或 5 ml），无色澄清溶液，主要成份为PH7.4PBS 缓冲液、吐温－20、硫柳汞（ 0.1%）。
3.试剂 B： 1 瓶，约 8ml（或 4ml），深红色澄清溶液，主要成份为胶体金标志的羊抗人IgM 抗体、牛血清白蛋白、硫柳汞（0.1%）。
【储藏条件及有效期】试剂盒一般采纳冷链运输，并采纳最迅速的运输方式，缩短运输时间；冬季运输应注意防备制品冻结。
试剂盒储藏条件为2℃～８℃，有效期为8 个月。
【样本要求】1.本试剂盒产品仅合用于对血清样本的检测，其余样本（如，胸腹水、脑脊液、尿液等）未经过产品预期用途的有关研究，不合用于本产品的检测。
2. 样本收集：采纳静脉血于干净离心管中，不加任何抗凝剂、保护剂，置于37℃水浴 20～ 30 分钟（或置室温 1 小时以上），待纤维蛋白原充足凝结后离心（4000 转/ 分， 5～ 10 分钟）分别血清。
MP核酸检测试剂盒说明书范文
肺炎支原体（ MP）核酸检测试剂盒（PCR荧光法）说明书【产品名称】 1. 标本：痰液及咽拭子。
通用名称：肺炎支原体（ MP）核酸检测试剂盒（ PCR荧光法） 2. 收集器：应入采纳国家同意生产的一次性使用的咽拭子，拭子应该包含干净海绵头、PP 杆、英文名称： PCR-Fluorescence Detection Kit for Mycoplasma Pneumonia PP 杆与海绵头应连结坚固，经无尘冲洗包装。
【包装规格】 32 人份 / 盒3. 收集：样本收集详细方法请参照《微生物标本收集手册》一书。
【预期用途】本产品用于定性检测痰液或咽拭子中的肺炎支原体核酸。
a. 自然咳痰法以晨痰为佳，使劲咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，标本量应肺炎支原体（）是人类支原体肺炎的病原体，主要经飞沫传染，潜藏期2～3 周，支原体肺。
大于等于 1ml炎的临床表现和胸部 X 线检查其实不具特点性，单凭临床表现和胸部X 线检查没法做出诊疗。
若要b. 咽拭子取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，转动拭子拿出黏液。
明确诊疗，需要进行病原体的检测。
而病原体核酸检测是当前最为直接的检测手段。
3 个月； -70℃下长久保留，但应避适应症：由肺炎支原体感染惹起的肺炎等疾病。
4.寄存： 2-8℃保留，不超出 24 小时； -20℃下保留，不超出免频频冻融。
【查验原理】5.运输：采纳冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。
本试剂盒采纳肺炎支原体（ MP ）守旧基因片段设计特异引物及特异Taqman 探针，该探针能与引物扩增地区中间的一段DNA 模板发生特异性联合，在PCR延长反响过程中， Taq 酶的外切酶活性将 5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反响系统中，进而离开了3’端荧光淬灭基团的障蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，进而实此刻全关闭反响系统中对肺炎支原体核酸的自动化检测。
【主要构成成份】构成成分规格核酸提取液含%Triton-100 、%NP40、 5%Chelex-100。
支原体染色试剂盒
支原体染色检测试剂盒简介：支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一种经典的利用DNA 荧光染色法检测支原体污染的试剂盒，其原理是当细胞发生凋亡时，染色质会固缩，Hoechst 染色后在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。
Hoechst Staining Kit 经常用于培养的贴壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测。
该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。
组成：操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁细胞1、取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS 或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次。
将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%～80%。
2、加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst 固定液固定。
3、去除固定液，用PBS 或生理盐水洗2次，吸尽液体。
4、加入Hoechst 染色液孵育。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
5、弃染色液，PBS 或生理盐水洗2次。
6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片剂，避免气泡。
(二)悬浮细胞1、离心收集细胞样品于1.5ml 离心管内并弃液，加入Hoechst 固定液，缓缓悬起细胞，固定10min 或更长时间(亦可4℃过夜)。
2、低速离心去除固定液，用PBS 或生理盐水洗2次，每次3min 。
洗涤时手动晃动数次。
3、低速离心离心后吸去大部分液体保留约50μl 液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
编号 名称 DA0140 100T Storage 试剂(A): Hoechst 固定液 50ml RT 试剂(B): Hoechst 染色液 50ml -20℃ 避光 试剂(C): 荧光封片剂 5ml 4℃ 避光 使用说明书 1份4、稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
肺炎支原体 IgG 抗体检测试剂盒 酶联免疫法
①甩掉孔中的液体。②在每个孔内加入洗板液，确保孔中 无气泡。③重复以上两步，洗板 5 次。④甩掉孔中的洗板 液，并在纸巾上拍干至目测微孔中无残留液。收集洗板液 至废液缸中，并在实验完毕后用 0.5%次氯酸钠处理。 在自动洗板机上设定洗液体积 300-350l/孔，洗板次数五 次。洗完后置于纸巾上拍干。
4.加入酶联物：每孔中加入酶联物 100l。 5.温育：温度：室温(20-25C) 时间：255 分钟。 6.洗板：重复步骤 3 的操作进行洗板。 7.加入显色液(TMB)：每孔中加入 TMB 100l。 8.温育：温度：室温(20-25C) 时间：10-15 分钟。 9.加入终止液：每孔加入终止液 50l 以终止反应。 10.读数：在加入终止液 30 分钟内，将微孔板置于 450nm 波长下 读取每个孔的光密度值，以空白试剂作对照。 【结果判定】 1.质量控制 校正品、阳性对照、阴性对照的 OD 值应符合以下要求： 项目 阴性对照 校正品 阳性对照
结果 阴性标本 可疑标本 阳性标本 【参考值】
标本参考值 ≤0.90 0.91-1.09 ≥1.10
正常人群 MP IgG 抗体呈阴性(标本参考值≤0.90)，每个实验 室应根据当地的实际情况建立自己的正常值参考范围。 【注意事项】 1.酶标板应平衡到室温后从铝箔袋中取出， 剩余的板条立即放回铝 箔袋中并封好(保留铝箔袋)。 2.试剂和样本的交叉污染会导致错误的结果。 3.避免不同批次的试剂混合使用。 【贮存】 试剂盒应在 2-8° C 下保存。
OD值阴性 ≤0.250
OD 值范围
OD值阴性 OD值校正 ≤0.9
OD值阳性 OD值校正 ≥1Biblioteka 25OD值校正 ≥0.300
OD值阳性 ≥0.500
【试剂盒规格】 96T/盒
肺炎支原体IgM说明书
防腐剂的磷酸盐缓冲液。 3a.阴性对照品，2.0毫升 肺炎支原体抗体阴性的稀释人血清，含有作为防腐
剂的 0.05％Bronidox®和红色显色剂。 3b.临界值对照品，2.0毫升 肺炎支原体 IgM 抗体处于临界值的稀释后人血清，
含有作为防腐剂的 0.05％Bronidox 和红色显色剂。 3c.阳性对照品，2.0毫升 含有0.05％Bronidox®作为防腐剂和红色显色试剂的 人稀释血清。 4.酶结合物，30毫升 缓冲盐溶液，含有专利商品添加剂、红色显色剂、 与辣根过氧化物酶结合的抗人IgM（羊）和作为防腐 剂的0.1％N‐甲基异噻唑酮。 5.TMB底物溶液，即用型, 18毫升 含有专用商品添加剂和0.01％凯松作为防腐剂的 3,3',5,5'‐四甲基联苯胺和过氧化氢柠檬酸缓冲 液。 6.终止液，25毫升 0.45 M H2SO4 7.洗涤液，100毫升 浓缩的柠檬酸缓冲盐水、含有专有添加剂和作为防 腐剂的0.05％Bronidox®。 微孔板贴膜 2个 试剂槽 6 个 注：试剂应保存在+2℃~+8℃下。 每个组分的标签及包装上均印有效期。
PCR支原体检测说明书
支原体PCR检测及治疗试剂盒PCR Mycoplasma Test Kit可用于各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测。
应用聚合酶链式反应技术（PCR）对支原体16s-rRNA基因保守区域的特异性片段进行扩增检测。
该方法可以在数小时内得到结果,与传统的选择性培养基培养检测方法相比较，本方法更快速，灵敏度和特异性更高，不会出现由于培养法检测时大量培养支原体而可能带来的次级污染的问题。
国内外研究表明，细胞培养的支原体污染中，有98％以上是由以下五种支原体引起的：M.orale、M.arginini、M.hyorhinis 和idlawii，M.Fermentans。
本试剂盒能检测包括以上五种常见支原体在内的40种支原体。
注：本试剂盒仅用于研究，不能用于临床诊断。
【试剂盒组成】1PCR反应液400ul（20ul/次，20次反应）2Taq酶20ul（1ul/次，20次反应）3DNA阳性对照1管4使用说明书1份5支原体治疗试剂1份（详细说明见说明书第三页）【原理】PCR检测试剂盒中含有PCR反应所需要各种试剂组分，如：引物、dNTPs、缓冲液、Taq酶、稳定剂等。
PCR 反应液中加入检测样品和Taq酶，即可进行PCR扩增反应。
PCR扩增产物经琼脂糖电泳染色判断，阳性样本将在290bp处出现特异性条带。
【使用方法】1实验所需器材与试剂1.1器材1）PCR仪2）PCR反应管3）电泳仪及水平电泳槽4）高速离心机5）微量移液器及移液器吸头1.2试剂1）琼脂糖2）EB（溴化乙锭）3）去离子水或双蒸水2实验操作步骤注：当细胞生长至80-90％时可以取样进行检测，培养液中的青霉素和链霉素不会影响检测效果。
1.收取待检样品（贴壁细胞：细胞生长至80％左右即可，送检细胞不能用消化液消化细胞，可以使用细胞刮刀刮取细胞；悬浮细胞：细胞生长至80％左右即可），取150ul（约1～3×105细胞数）至离心管，沸水浴10min。
肺炎支原体检测试剂盒
肺炎支原体检测试剂盒简介肺炎支原体是一种常见的革兰阴性细菌，是引起人类呼吸道感染的重要病因。
肺炎支原体感染可导致轻度到中度的上呼吸道感染、肺炎、气管支气管炎等疾病。
为了准确检测和诊断肺炎支原体感染，科学家们开发了肺炎支原体检测试剂盒，以便在临床诊断中使用。
检测试剂盒原理肺炎支原体检测试剂盒是一种基于分子生物学原理的检测工具。
它利用核酸扩增技术，特别是聚合酶链反应（PCR），可以从临床标本中扩增并检测肺炎支原体的核酸。
该检测试剂盒通常包含肺炎支原体特异性的引物和探针，并且还可能包含一些辅助试剂和储存缓冲液等。
在使用肺炎支原体检测试剂盒时，首先需要采集患者的呼吸道标本，如咽喉拭子、痰液等。
然后，将标本中的核酸提取出来，并与检测试剂盒中的引物和探针混合。
通过PCR反应，将肺炎支原体的核酸扩增成千倍。
如果在标本中存在肺炎支原体的核酸，那么PCR反应将在一定的温度条件下产生阳性信号，表明该患者可能感染了肺炎支原体。
检测结果解读肺炎支原体检测试剂盒可以提供两种结果：阳性和阴性。
阳性结果表示在患者的标本中检测到肺炎支原体的核酸，说明患者可能感染了肺炎支原体。
阴性结果则表示未检测到肺炎支原体的核酸，表明患者可能没有感染肺炎支原体。
请注意，肺炎支原体检测试剂盒并不能完全排除肺炎支原体感染的可能性。
在某些情况下，可能由于标本采集、核酸提取等环节的技术原因，导致结果的假阴性或假阳性。
因此，在进行结果解读时，仍需结合临床症状和其他检查结果进行综合分析。
应用领域肺炎支原体检测试剂盒主要应用于临床肺炎的诊断和流行病学调查。
通过及时检测和诊断肺炎支原体感染，可以采取有效的治疗措施，避免疾病的进一步发展和传播。
此外，肺炎支原体检测试剂盒还可用于研究肺炎支原体的流行病学特征，为疫情监测和预防控制提供重要依据。
注意事项使用肺炎支原体检测试剂盒时需要遵循以下注意事项：1.仅供专业人员使用：肺炎支原体检测试剂盒是一种专业的医疗设备，仅应由经过培训和具备相关专业知识的人员操作和解读结果。
北京索奥生物医药 肺炎支原体(MP)核酸扩增检测试剂盒 说明书
肺炎支原体(MP)核酸扩增检测试剂盒说明书(PCR-荧光探针法)【名称】中文名：肺炎支原体(MP)核酸扩增检测试剂盒英文名：Myeoplasma Polymerase Chain Reaction(PCR)Diagnostic Kit汉语拼音：fei yan zhi yuan ti he suan kuo zeng jian ce shi ji he【目的】本试剂盒适用于检测呼吸道分泌物、咽拭子等标本中肺炎支原体(MP)DNA，适用于肺炎支原体感染的辅助诊断及其感染病人药物疗效监控和流行病学调查。
其检测结果仅供参考。
【原理】本试剂盒选取一对肺炎支原体(MP)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法提取肺炎支原体(MP)DNA，后者在耐热DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对肺炎支原体(MP)进行扩增，从而达到快速检测定量之目的。
【组成】名称数量规格核酸提取液B4管500μl/管Taq酶系1管80μl/管MP-PCR MIX1管960μl/管MP阳性质控品1管50μl/管(107Copies/ml)阴性质控品1管500μl/管【标本采集、保存和运输】1.适用标本：呼吸道分泌物、咽拭子等标本。
2.标本采集：呼吸道分泌物：使用一次性吸痰器，患儿取头部向上平卧位，将吸痰管缓缓插入咽喉部，调节负压，将气管深部分泌物(在雾化吸入后效果更好)缓缓吸入储存瓶中，反复数次，储存瓶中分泌物即为标本，标本应立即密闭送检。
咽拭子：用无菌棉试子取咽部分泌物(多数会有粘稠的痰液)，将咽拭子转至一盛有1-3ml生理盐水(或PBS)的5ml离心管中，密闭送检。
3.保存和运输：述处理后的标本可保存于-20℃，保存期为6个月，-70℃可长期保存。
运送应采用0℃冰壶。
【适用仪器】主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM7300、LightCycler 等毛细管的仪器，MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。
江门市凯林贸易 支原体试剂组合 （ ID2+ST ） 说明书
支原体试剂组合支原体试剂组合（（ID2+ST ID2+ST）） 使用说明书使用说明书【产品名称】支原体试剂组合（培养法）【组成、型号规格】组成：本产品由支原体ID2试剂盒（以下简称ID2试剂盒）和支原体药敏试剂盒（以下简称ST 试剂盒）组成。
型号规格：S2401。
【预期用途】本产品供临床诊断泌尿生殖道支原体用，并可进行药敏试验。
【检验原理】ID2为鉴定、计数用培养基。
其肉汤提供了支原体生长的最理想环境（酸碱度、底物和一些生长因子）。
肉汤中的特殊底物（用于解脲脲原体U. urealyticum 的尿素，用于人型支原体M. hominis 的精氨酸）和指示剂（苯酚红）显示由於pH 值提高而产生颜色变化的阳性反应。
三种抗生素和一种抗真菌药物的组合提供了选择性，确保标本中出现的污染菌群不会影响试验。
ST 为药敏试验用试剂。
试剂条里的反应孔将抗生素按高、低浓度设置，分别接种一定量的支原体培养物，经培养后，根据支原体在高低浓度生长与否，将支原体分为敏感、中度敏感和耐药。
试验时，将标本接种到复溶的肉汤后，再分配到试剂条中培养。
【主要组成成份】1.支原体ID2试剂盒 1） 试剂（R1）每一个瓶内含有3.1ml 肉汤，混有用于泌尿生殖道支原体诊断的样品制剂所需的稳定的营养成分。
它可抑制大多数革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌的生长，并且可用于R2试剂的复溶。
2） 试剂（R2）每一个瓶内含有1ml 冻干的尿素－精氨酸肉汤。
3） 鉴定、计数试剂条每个支原体鉴定计数试剂条含有3人份的测试，每个测试有5个反应孔，见表1： 表12． 支原体药敏试剂盒1） 药敏试验试剂条含有20个反应孔，分上下两行各10个反应孔，上行（H）为高浓度药敏试验，下行（L）为低浓度药敏试验。
反应孔决定10种抗生素药敏试验结果。
见表2。
表2注：1、药敏试验试剂条会不断更新改进，试验板上的标识如行号、孔号等或会发生改变，以当时试验板上的标识、并结合产品说明书的指引为准； 2、没有被注明的孔为空白孔。
Q_HZSK 16-2019支原体DNA检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
Q/HZSK 湖州申科生物技术有限公司企业标准Q/HZSK16—2019支原体DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）2019-12-09发布2019-12-10实施前 言本公司生产的《支原体DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）》无上级标准，按《标准化法》规定，制定本标准，作为公司组织生产的依据。
本标准编制格式按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定。
本标准由湖州申科生物技术有限公司提出。
本标准起草单位：湖州申科生物技术有限公司。
本标准主要起草人：吴婉欣、宗伟英、豆敏华、朱冰美。
支原体DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）1范围本标准规定了支原体DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）的规格和检测原理、要求、试验方法、检验规则、标志、标签、使用说明书、包装、运输和贮存。
本标准适用于支原体DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法），以下简称试剂盒。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T191包装储运图示标志GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写YY/T1182-2010核酸扩增检测试剂盒USP509Residual DNA Testing3规格和检测原理3.1规格MyqPCR Reaction Buffer、MyPrimer&Probe MIX、内部质控（IC）、阳性质控（PC）、DNA稀释液、说明书组成，组成见表1。
表1序号组份名称装量1MyqPCR Reaction Buffer400μL/管×1管2MyPrimer&Probe MIX75μL/管×1管3内部质控（IC）600μL/管×1管4阳性质控（PC）500μL/管×1管5DNA稀释液 1.5mL/管×1管6使用说明书—3.2检测原理试剂盒是采用PCR-荧光探针法原理，定性检测主细胞库、工作细胞库、病毒种子批以及临床治疗用细胞中是否有支原体污染。
支原体培养检验操作程序
支原体培养检验操作程序一、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。
二、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。
1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照；2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。
3、将混有标本的培养液各100μL 加入A排余下及B排各孔中；4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。
第24、48小时分别观察记录结果。
结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。
培养基不变色为阴性。
B1孔阳性为解脲支原体阳性；B2孔阳性为人型支原体阳性。
药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。
当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感；高浓度不变色低浓度变红为该药物中介；高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。
结果一：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。
结果二：第24小时B1孔不变色示解脲支原体阴性；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。
报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。
结果三：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。
结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。
肺炎支原体操作规程
肺炎支原体操作规程
贮存条件：试剂应置0℃以下冷冻保存。
（-14℃冰箱）
标本要求：标本为患者咽拭子或痰液，采集标本前，用生理盐水漱口，在所采集标本为痰时，当痰标本粘度比较大需要用无菌拭子蘸取进行接种培养，当痰标本比较稀时可以用无菌拭子蘸取或用移液器量取100μl进行培养，所采集的标本应尽快接种，室内放置不得超过四小时。
检验方法：
1、取出培养液及药敏试验板，使其在接种样本前接近室温，旋开培养液瓶
盖，用吸嘴吸取100μl培养液加入C-对照孔；
2、接种咽拭子（痰拭子或痰液100μl）于剩余的培养液中，加盖摇匀使之
混匀；
3、将含样本的培养液加入其余微孔中，每孔100μl，轻轻震荡药敏试验板；
4、所有微孔滴加1滴试剂盒所附矿物油（使矿物油覆盖液面，否则培养液
蒸发，结果不准）；
5、将药敏试验板加盖后，置培养箱中，35-37℃培养24-48小时观察结果。
检验结果的解释：
1、培养24-48小时培养液由桔红色变成黄色且澄清，表示有肺炎支原体生
长，用（+）表示；培养液保持红色不变，表示没有肺炎支原体生长，用（-）表示；培养液由桔红色变成黄色但浑浊，不能作为阳性结果。
2、药敏试验板抗生素结果判定：依托红霉素（EST）孔培养液桔红色为敏感
（S），黄色为耐药（R）;其他13种抗生素如药敏试验板上孔培养液变黄而下孔桔红色判为中介（I）,如上下两孔均为桔红色判为敏感（S）,如上下两孔均为黄读为耐药（R）。
检验科
2011-9-5。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
支原体检测试剂盒使用说明书
1.试剂：支原体检测试剂盒由武汉源深生物科技有限公司提供。
2.实验方法:
巢式PCR的方法检测支原体污染：
A.待检细胞汇合率在90％以上时取100 µL细胞上清液到离心管内
B.95o C孵育5分钟
C.短暂高速离心15秒钟左右
D.试剂盒里的组份：
引物混合物(Primer Mix) 20 µL
阳性对照DNA (Positive Control DNA) 15 µL
阴性对照(Internal Control DNA) 20 µL
巢式PCR一共需要做2轮PCR，本检测方法不受其他来源（如所培养细胞）DNA的影响，不但提高了检测的灵敏度，同时也提高了特异性。
(1)第一轮PCR:
PCR 混合物：
向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，
盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
E.热循环程序：
将准备好的PCR管放入PCR仪，运行如下程序。
PCR 混合物：
向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，
盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
F. 热循环程序：
将准备好的PCR 管放入PCR 仪，运行如下程序。
试验结果：
2％ 琼脂糖凝胶电泳，TBE 缓冲液，PCR 产物及Marker 均点样10µL ，于50V 下电泳1hr ，EB 染色15min ，紫外灯下观察。
电泳结果见下图：
图中泳道M 为DNA Marker ，1和2为待检测细胞系的第一轮PCR 产物 (1st )，3和4为待检测细胞系的第二轮PCR 产物 (2nd ), 其中1、3为阳性对照管PCR 产物，2、4为阴性对照PCR 产物。
阳性对照管在200bp 左右，和300-400 bp 处各有一条带，证明本次实验准确可靠 (不同的支原体Mycoplasma, such as M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. hominis, M. arthritidis, M. hyopneumoniae and Acholeplasma laidlawii 的保守区的片段长度不一，大概在200-400 bp 之间)。
M 1 2 3 4。