成都中医药大学--中药化学重点讲解

中药有效成分的提取分离方法

（一）溶剂提取法

原理：溶剂穿投入药材的细胞膜，溶解可溶性物质，形成细胞内外溶质浓度差，将溶质深处细胞膜，达到提取目的。

溶剂的选择：溶剂分三类：亲脂性有机溶剂，亲水性有机溶剂，和水

极性强弱顺序：石油醚<四氯化碳<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水

溶剂选择原则：1.根据相似相溶原则，以最大限度提取所需化学成分，而对共存杂质的溶解度尽可能小。 2.溶剂不能与重要成分发生化学反应，即使反应也应属于可逆性。 3.溶剂应该沸点适中，易回收，低毒安全，廉价易得。

提取方法：（一）溶剂提取法：1.煎煮法：中药粗粉加水加热煮沸提取。适用于：中药的大多数成分。

优点：简便易操作缺点：对含挥发性成分及加热易破坏的成分不宜使用。多糖类成分含量高的重要加热后药液粘稠度大，不易过滤。

2浸渍法：优点：不用加热，适用于遇热易破坏或挥发性成分的提取，也适用于淀粉或黏液质含量较多的重要成分的提取。缺点：提取时间长，效率低。3渗漉法：优点：过程中随时保持较大的浓度梯度，故提取效率高于浸渍法。

4回流提取法：优点：效率高于渗漉法缺点：受热易破坏的成分不宜使用。5连续回流提取法：优点：容积消耗量小，操作简便，提取效率高。

在实验室连续回流提取常采用索氏提取器或回流提取装置。（二）水蒸气提取法：

适用于：提取能随水蒸气蒸馏而不被破坏的难溶于水的成分。

原理：这类成分有挥发性，在100℃时有一定的蒸汽压，当水沸腾时，该类成分一并随水蒸气带出，再用油水分离器或者有机溶剂萃取法，将这类成分自馏出液中分离。

（三）超临界流体萃取法常用溶剂：2

CO

原理：超临界流体具有液体和气体的双重特性，密度与液体相似，黏度与气体相近，扩散系数为液体的100倍。物质的溶解过程包括分子间的相互作用和扩散作用，与溶剂密度和扩散系数成正比，与黏度成反比，所以超临界流体对许多物质有很强的溶解能力。

优点：可以在接近室温下进行工作，防治某些对热不稳定的成分被破坏或逸散，萃取过程几乎不用有机溶剂，萃取物中无有机溶剂残留，对环境无公害，提取效率高，节约能耗。

色谱分离法

优点：分离效能高，快速简便。

1，吸附色谱：原理：利用吸附剂对被分离化合物分子的吸附能力的差异，实现分离。常用吸附剂：硅胶，氧化铝，活性炭，聚酰胺

硅胶：应用广泛，中药各类化学成分大多可以用其分离

氧化铝：主要用于碱性或中性亲脂性成分的分离，如生物碱，甾，萜类等成分活性炭：主要用于分离水溶性物质，如氨基酸，糖类及某些苷类。

聚酰胺：以氢键作用为主，主要用于酚类，醌类如黄酮类，蒽醌类及鞣质类成分的分离。

2凝胶过滤色谱：原理：分子筛作用，根据凝胶的孔径和被分离化合物分子的大小而达到分离目的常用凝胶：葡聚糖凝胶，羟丙基葡聚糖凝胶

3离子交换色谱：基于混合物中各成分解离度差异进行分离。

离子交换剂有离子交换树脂，离子交换纤维素，离子交换凝胶三种

4大孔树脂色谱：大孔树脂是一类没有可解离基团，具有多孔结构，不溶于水的固体高分子物质。它可以通过物理吸附有选择的吸附有机物质而达到分离的目的。

5分配色谱原理：利用被分离成分在固定相和流动相之间的分配系数的不同而达到分离。分为：正相色谱法和反相色谱法

中药有效成分的波普测定

红外光谱（IR）用于测官能团紫外光谱（UR）用于测共轭体系

核磁共振光谱（NMR）用于测H,C的数目位置，相互关系

质谱（MS）用于测分子量

苷键的裂解：苷键具有缩醛结构，在稀酸或酶的作用下，苷键可发生断裂，水解为苷元和糖

1.酸催化水解：苷键易被稀酸催化水解，反应一般在水或稀醇中进行，所用酸有盐酸，硫酸，乙酸和甲酸等。

原理：苷键原子首先发生质子化，然后苷键断裂生成苷元和糖的阳碳离子中间体，在水中阳碳离子中间体经溶剂化，再脱去氢离子形成糖分子

★六点规律！（1）按苷键原子的不同，苷类化合物酸水解速率的顺序为：N-苷>O-苷>S-苷>O-苷（2）呋喃糖苷较吡喃糖苷易水解（3）酮糖苷较醛糖苷易水解（4）吡喃糖苷中，吡喃环5

C上的取代基越大越难水解。顺序为：五碳糖苷>甲基五碳糖苷>六碳糖苷>七碳糖苷>糖醛酸苷（5）氨基糖苷较羟基糖苷难于水解，而羟基糖苷又比去氧糖苷（尤其2-去氧糖苷）难水解。（6）芳香族苷因苷元部分有供电子结构，其水解比脂肪族苷容易得多。

★苷类的显色反应和沉淀反应

苷类化合物的共性在于都含有糖基部分，因此，苷类化合物可发生与糖相同的显色反应和沉淀反应，但苷元中的糖为结合糖，需要先水解成为游离糖后才能进行显色反应和沉淀反应。

糖的显色反应和沉淀反应

1.α-萘酚反应（Molish反应）单糖在浓酸作用下失去三分子水，生成的糠醛及其衍生物可与α-萘酚试剂反应（在此条件下，低聚糖或多糖先水解成单糖再脱水。）

2.菲林反应（Fehling反应）还原糖能与碱性酒石酸酮试剂反应，使高价铜离子被还原为低价铜离子，因而产生氧化亚铜的砖红色沉淀。

3.多伦反应（Tollen）还原性糖能与氨性硝酸银试剂反应，使银离子还原，生成银镜或黑褐色的银沉淀。

注：单糖均为还原性糖，低聚糖分为还原性糖和非还原性糖，多糖均无还原性。

4.碘呈色反应碘分子或碘离子排列进入多糖螺环通道中形成的有色包结化合物产生的呈色反应，所呈色调与多糖的聚合度有关，糖淀粉聚合度为300-350.遇碘呈蓝色，胶淀粉聚合度为3000左右，遇碘呈紫红色

★ 醌类物质的颜色反应

1.）Feigl 反应 醌类衍生物在碱性条件下加热能迅速与醛类及邻二硝基苯发生反应，生成紫色化合物。机理见课本

过程：取醌类化合物的水或苯溶液1滴，加入25%碳酸钠水溶液，4%甲醛及5%邻二硝基苯的苯溶液各一滴，混合后，置水浴上加热，在1-4分钟内产生显著的紫色。

2.）无色亚甲蓝显色反应 无色亚甲蓝溶液为苯醌类及萘醌类的专用显色剂， 配置方法：将亚甲蓝100mg 溶于乙醇100ml 中，再加入乙酸1ml 及锌粉1g ，缓缓振摇至蓝色消失后备用。 此反应在PC 或TLC 上进行，样品在PC 或TLC 上呈蓝色斑点，可与蒽醌类化合物相区别。

3.）bornträger 反应 羟基醌类在碱性溶液中发生颜色改变，会使颜色加深。多呈橙，红，紫红及蓝色。 机理见课本

过程：用本法检验中药中是否含有蒽醌类成分时，可取样品粉末约0.1g ，加10%硫酸水溶液5ml ，置水浴上加热2-10分钟趁热过滤，滤液冷却后加乙醚2ml 振摇，静置后分取醚层溶液，加入5%氢氧化钠水溶液1ml ，振摇。如有羟基蒽醌存在，醚层则由黄色褪为无色，而水层则显红色。

4.）Kesting-Craven 反应 苯醌类及萘醌类化合物当其醌环上有未被取代的位置时，可在碱性条件下与一些含有活性亚甲基试剂的醇溶液反应，生成蓝绿色或蓝紫色。

5.）与金属离子反应 在蒽醌类化合物中，如果有α-酚羟基或邻二酚羟基结构时，则可与++22,Mg Pb 等金属离子形成络合物。

6.）对亚硝基二甲苯胺反应 9位或10位未取代的羟基蒽醌类化合物，尤其是1，8-二羟基衍生物，其羰基对位的亚甲基上的氢很活泼，可与0.1%对亚硝基二甲苯胺吡啶溶液反应缩合而产生各种颜色。（1，8-二羟基均呈绿色。）

此反应可以用于蒽酮化合物的定性检查，通常用纸色谱，以吡啶-水-苯（1：3：

1）的水层为展开剂，以对亚硝基二甲苯胺的乙醇溶液作为显色剂，在滤纸上发生颜色变化。如大黄酚蒽酮-9在滤纸上开始为蓝立即变绿色。芦荟大黄素蒽酮-9在滤纸上开始呈绿色很快变蓝。

内酯的碱水解 香豆素类分子中具有内酯结构，碱性条件下可水解开环，生成顺式邻羟基桂皮酸的盐，顺式邻羟基桂皮酸盐的水溶液经酸化至中性或酸性即闭环恢复为内置结构。

香豆素的显色反应

（1）异羟肟酸铁反应 香豆素类成分具有内酯结构，在碱性条件下开环，与盐酸羟胺缩合生成异羟肟酸，在酸性条件下再与三价铁离子络合而显红色。

（2）酚羟基反应 香豆素类成分常具有酚羟基取代，可与三氯化铁溶液反应产生绿色至墨绿色沉淀。若其酚羟基的邻位，对位无取代基，可与重氮化试剂反应而显红色至紫红色。

（3）Gibb's 反应 香豆素类成分在碱性条件（pH=9-10）下内酯环水解生成酚羟基，如果其对位无取代基，则能与2，6-二氯（溴）苯醌氯亚胺（Gibb's 试剂）反应而显蓝色。（可用于判断碳六位有无取代基）

（4）Emerson 反应 香豆素类成分如在6位无取代基，内酯环在碱性条件下开环后与Emerson 试剂（4-氨基安替比林和铁氰化钾）反应生成红色 （可用于判断碳六位有无取代基）