显微鉴定
中药显微鉴定
3 粉末特殊处理制片方法
含多量淀粉的药材粉末 大量淀粉粒的存在会 影响观察、描绘及摄影等效果。取一部分粉末于 试管中加水煮沸，使淀粉粒糊化而溶解，放置或 用离心机使所需细胞、组织下沉管底，用长吸管 将沉淀物吸出供制片观察。
含多量油类的药材粉末 进行脱脂以除去大部 分油脂，取少许粉末于小烧杯中，加氯仿少许搅 拌浸渍，过滤，在滤纸上再加少许氯仿洗涤粉末 即可。也可直接将粉末水洗，用柔软的毛刷轻轻的刷洗表面。 杀生 固定 保存 将需要制片材料迅速杀死，使组织保持原生活 状态，一般以渗透力较强的的药剂作杀生剂较好。 固定液 ⑴ FAA固定液 38%甲醛：冰醋酸：70%乙醇 5：5:95
用于根、茎、叶、花药、子房的固定，固定时间24h ⑵ FPA固定液 38%甲醛：丙酸：70%乙醇 5：5:95 ⑶卡诺氏固定液 乙醇：冰醋酸 3:1
冷冻切片
仪器：冷冻切片机 包埋材料：水、胶水 切片温度：-20℃ 优点：节省时间、方便快捷。
注意事项：
包埋时，不能有气泡，否则会有空洞。
一定要将材料放直立胶水的中央，使材料完全被 胶水包裹。并且外围胶水的厚度要大于等于材料 的半径，有利于粘片。
不宜将材料和胶水冻的太硬，否则在切片过程中 会造成中间材料的破损。
用于根尖、花药、子房的固定，固定不超过时间24h 材料处理时，注意不能影响要观察的显微鉴别特征。如要观察菊 糖、粘液等在软化、切片、装片等过程中，均不可与水接触，以 免溶解消失；要观察挥发油、树脂等，则不可与高浓度乙醇或其 它有机溶媒接触。
3 脱水
脱水常用乙醇、二氧六环、正丁醇、叔丁醇、丙酮等
目的 除去组织中的水分，使细胞变硬； 便于包埋物进入组织及细胞，便于切片； 脱水后的组织再经过透明，便于观察。
显微鉴定的操作方法包括
显微鉴定的操作方法包括显微鉴定是一种用显微镜观察和分析样品的方法，广泛应用于科研、专业实验室和法医学等领域。
下面将详细介绍显微鉴定的操作方法。
1. 准备工作在进行显微鉴定之前，需要做好以下准备工作：a. 清洁显微镜与配件：用清洁的无纺布或滤纸轻轻擦拭显微镜的各个零件，确保镜头与目镜清晰。
b. 样品准备：根据需要进行样品的处理和制备，如切片、染色等。
确保样品具有足够的细节和清晰度。
2. 调焦a. 将显微镜放在平稳的台面上，打开显微镜电源，调整照明灯的亮度，使其能够提供足够的光线。
b. 将目镜调整到最佳视角，使用调节轮使物镜与样品之间的距离最接近估计最优距离。
c. 通过转动调节轮，使样品聚焦在眼睛的焦点上。
此时可使用低倍物镜（通常为4倍或10倍）进行初步观察和调焦。
3. 焦距调整a. 在低倍物镜下调焦完成后，使用高倍物镜（如40倍或100倍）进一步调焦。
b. 将物镜转至最佳视野，使用调节轮细调焦距，使样品清晰度达到最佳状态。
c. 注意避免物镜和样品之间碰撞，以免损坏设备和样品。
4. 显微观察a. 将已调焦的显微镜放在一个适当的位置，使其稳定不动。
b. 将待观察的样品放在显微镜台上，将之与物镜对齐。
c. 通过调节台的移动装置，将样品移至物镜下方，然后逐渐移动至视野中央。
同时使用调焦和焦距调整使样品清晰可见。
d. 在观察过程中，可以旋转物镜头使得样品在不同方位显示。
若样品比较厚，可以使用调节轮改变物镜与样品距离，以观察不同深度的细胞结构。
5. 记录和分析a. 使用配备标尺的目镜深度计测量观察到的结构尺寸。
b. 观察到的细胞结构、微生物、矿物等特征可通过手绘或数码相机进行记录和保存。
c. 对观察到的样品特征进行分析和鉴定，比对参考资料，确定其可能的分类、性质或疾病。
显微鉴定是一项需要严密操作和仔细观察的技术，操作者需要具备良好的观察力和耐心。
同时，也需要对待样品具有一定的专业知识和实践经验。
在进行显微鉴定的过程中，务必保持设备和样品的清洁，以及注意显微镜和样品的安全操作。
第四节显微鉴定
2、根茎类粉末生药的观察：
注意鳞茎、块茎、球茎常含多量 较大的淀粉粒，其形状、大小、 脐点、层纹以及复粒等特征是鉴 别的重要依据；
鳞茎的鳞叶表皮常可察见气孔；
2、根类粉末生药的观察
木栓组织：多见，注意木栓细胞 表面观的形状、颜色、壁的厚度， 有的可见木栓石细胞(如党参)。
导管：一般较粗，注意其类型、 直径、导管分子的长度及末端壁 的穿孔的形状及排列等。
石细胞：应注意形状、大小、细胞 壁增厚形态和程度、纹孔形状及大 小、孔沟密度等特征。
纤维：观察时注意纤维的类型、形 状、长短粗细等；注意纤维束的周 围细胞是否含结晶形成晶鞘纤维。
叶肉：注意栅栏组织细胞的形状、 大小、层数及所占叶肉的比例和 分布；
叶脉：观察维管组织的形状、类 型以及周围或韧皮部外侧有无纤 维层。
2．叶的表面制片
主要观察表皮细胞、气孔及各种 毛茸的全形。
注意上、下表皮细胞的形状，垂 周壁及有无纹孔，角质层纹理， 气孔的类型及副卫细胞数。
3．叶类粉末生药的观察
2. 根据处方明确专属特征
中成药显微鉴定，一般根据处方， 对各组成生药粉末特征作分析比 较，选取各药具专属性的显微特 征，作为鉴别依据。
六味地黄丸是由熟地黄、山茱萸、 牡丹皮、山药、茯苓、泽泻六味 药组成，每味药都有数个显微特 征，大部分特征又有横向类别的 交叉。选取六味药各具专属性的 显微特征，这样六味药物均可鉴 别。
鉴定时：根据观察的对象和目的， 选择具有代表性的药材，制备不 同的显微制片，依法进行鉴别。
植物性生药
中药显微鉴定
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仪器与材料
2.1 仪器 生物光学显微镜（应配有目镜测微尺和载物 台测微尺）、滑走切片机或徒手圆筒生物切 片器、小型粉碎机、镜台测微尺、离心机、 医用超声仪。
2.2 用具
放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊 与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。载玻片 、盖玻片、吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量 苯酚，潮气润湿药材样品用）、培养皿或小烧杯（放 切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、 铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻 璃棒（粗与细）、乳钵、量筒、毛笔（从刀上刷取切 片用）、铅笔（HB、4H、6H绘图用）、带盖搪瓷盘（ 装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。
粉末显微鉴别时，先记录原粉末的色泽、气味。然后边观察、
边记录。注意观察的全面性。观察每张粉末片时，应自上左至 下右，呈“之”字形扫描，逐渐移动装片，全面观察目的物， 描 述其特征，测量其长度，并注意统计最小量值、多见量值、最 大量值。一一记录。
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记录
通常以先多数后少数的顺序描述特征，并标明“多见”、“少 见” 、“偶见”。注意着重描述有鉴别意义的组织、细胞和内含物 ，
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显微鉴别法注意事项
可借助偏光装置寻找和观察，尤其是淀粉粒、结 晶，纤维、石细胞、导管等显微特征。
鉴别成方制剂前，应了解处方组成和制法，分析处方
中各种饮片的主要鉴别特征及用量的多少。进行显微
鉴别时，应观察3～5张装片，使特征不致遗漏
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记录
组织特征的记录，应以从外至内的次序进行，对有鉴别意义的 特征需详细地描述；一般应绘制简图。必要时，应利用显微描绘 器或显微摄影装置绘制详图或提供显微照片，并注明放大倍数， 或加比例尺。
显微鉴定技术实验一显微鉴定技术
了解材料的处理方法，如固定、脱水、透明、浸蜡等，以确保材料符合显微观 察要求。同时，要注意处理过程中的安全事项，避免对实验人员和环境造成危 害。
03 显微镜下观察与记录技巧
观察前准备工作注意事项
样品制备
确保样品薄而透明，避免过厚导 致光线无法透过，影响观察效果。
显微镜清洁
使用前需对显微镜进行清洁，避免 灰尘、污渍等影响视野清晰度。
由于生物学现象的复杂性和多样性，对实验 结果的解释可能存在困难，可通过查阅相关 文献、请教专家等方法进行解决。
06 实验总结与拓展应用
实验收获总结回顾
掌握了显微鉴定技术的基本原理和操作方法
通过本次实验，我们深入了解了显微鉴定技术的理论基础和实践应用，掌握了显微镜的使 用、样品制备、观察记录等基本技能。
光源选择
根据观察需求选择合适的光源，如 自然光、灯光等，以获得最佳的观 察效果。
显微镜调节和校准方法论述
调节焦距
调整光源强度
通过旋转粗准焦螺旋和细准焦螺旋， 使物像清晰可见。
根据观察需求调整光源强度，避免过 强或过弱的光线对观察造成干扰。
校准光路
确保光源、聚光镜、物镜和目镜等光 学部件处于同一光路上，以获得明亮 的视野。
试剂种类
根据实验需求选择适当的 试剂，如染色剂、固定剂、 脱水剂等。
试剂性质
了解试剂的性质，如酸碱 性、氧化还原性等，以确 保试剂的正确使用。
配制方法
掌握试剂的配制方法，按 照一定比例和顺序将试剂 配制好，以备实验使用。
实验材料准备与处理方法
实验材料准备
根据实验需求准备相应的实验材料，如生物组织切片、细胞涂片等。
显微鉴定技术拓展应用领域介绍
材料科学领域
显微鉴别法操作规程
内容：1 显微鉴别法：系指用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
2 仪器和用具2.1 仪器生物光学显微镜、显微描绘器、滑走切片机、小型粉碎机或徒手圆筒生物切片器、镜台测微尺、离心机。
2.2 用具2.2.1 放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。
2.2.2 载玻片、盖玻片2.2.3 吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）、培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒等2.2.4毛笔（从刀上刷取切片用）、铅笔（HB、3H、6H绘图用）、带盖搪瓷盘（装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。
3 试药与试液3.1 水合氯醛试液取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。
此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等。
3.2 甘油醋酸试液（斯氏液）取甘油、冰醋酸与水各等份，混合即得。
此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉不膨胀变形，便于测量其大小。
3.3 甘油-乙醇溶液取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。
此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。
3.4 苏丹Ⅲ试液取苏丹Ⅲ0.01g，加90%乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀即得。
本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。
此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。
3.5 钌红试液取10%醋酸钠溶液1～2ml，加钌红适量使呈酒红色即得。
本液应临用新制。
此液可使粘液染成红色。
3.6 间苯三酚试液取间苯三酚1g，加90%乙醇100ml使溶解，滤过即得。
应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。
此液与浓盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。
生药学_ 生药的鉴定_33 生药的显微鉴定_
2.根类粉末生药的观察
观察木栓细胞、导管（类型、 大小、末端穿孔等）、石细胞（形状、 大小、有无分枝、纹孔等）、纤维、 分泌组织（分泌细胞、分泌腔、分泌 室、乳汁管）、草酸钙结晶（形状、 大小等）、淀粉粒（多少、类型、脐 点形状、位置、层纹等）。
（二）根茎类生药
观察要点同根类生药
（三）茎藤类生药
一、显微鉴定常用的方法：
（一）制作显微制片 ⒈组织制片(横切片或纵切片) ⒉表面制片 ⒊粉末制片
（二）观察生药组织切片或粉未中的后含物 （三）测量细胞和后含物的直径、长短
➢组织鉴定：观察药材的切片或磨片，鉴别其组 织特征，适合于完整的药材或粉末特征相似的 同属药材的鉴别
➢粉末鉴定：观察药材的粉末制片或解离片鉴别 其细胞分子及内含物的特征，适合于破碎、粉 末状药材或中成药的鉴别
➢草酸钙结晶：偏光显微镜下呈不同的多彩颜色； ➢石细胞：细胞壁呈亮黄色或亮橙黄色； ➢纤维、导管、矿物类物质：呈强弱不同的色彩； ➢动物的骨碎片、肌纤维、结晶状物、毛茸等也呈
现出不同的偏光特性。
偏光显微镜
人参（草酸钙结晶）
川牛膝（木质部）
扫描电镜
n 扫描电子显微镜（扫描电镜） n 扫描电镜分辨率高，放大倍率5倍～10万倍，
2.木类粉末生药的观察 导管、韧皮纤维、纤维管胞、 木薄壁细胞等。
（六）叶类生药
1.叶类生药的组织构造：
表皮：观察表皮细胞的形状、大小、 外壁、气孔、角质层厚度、毛茸类 型和特征
叶肉：栅栏组织细胞（形状、大小、 层数等）
主脉：维管组织的形状、类型、及 周围或韧皮部外侧有无纤维层
2.叶的表面制片：气孔、腺毛、非腺 毛、腺鳞、表皮细胞。
能使物质的图像呈现显著的表面立体结构(三 维空间)的特征 n 特别在同科属种间的表面结构的鉴别比较
显微鉴定
植物细胞的结构紫色洋葱细胞碘化铋钾的配制：直接用碘化铋钾0.85g，加冰醋酸10ml与水40ml溶解后，摇匀，即得。
水合氯醛的配制：稀甘油配制：稀碘液配制：碘-碘化钾溶液配制：临时装片的制作方法操作步骤口诀：擦、滴、取、展、盖、染、吸。
1、准备擦——用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净滴——把载玻片放在实验台上，用吸管在载玻片上滴一滴蒸馏水2、制片取（撕、刮、切、挑）——用镊子从洋葱鳞片叶内表皮上撕取一小块方形透明薄膜放（展、抹）——将撕下的洋葱鳞片叶内表皮浸入载玻片上的水滴中，用镊子轻轻展平盖——用镊子轻夹盖玻片的一边，使盖玻片另一边先接触载玻片上的水滴，而后慢慢地把盖玻片轻轻盖在材料上，尽量避免气泡产生。
如有气泡，可用镊子从盖玻片的一侧掀起，然后再慢慢重新盖上。
如有水溢出盖玻片，用吸水纸吸干净3、染色染——滴一滴染液（中性红试液、碘化钾试液）在盖玻片一侧，用吸水纸在另一侧吸引，直至染液浸润到标本的全部，如有染液溢出，用吸水纸吸干净洋葱内表皮细胞注意识别下列各部分：(1)细胞壁为植物细胞所特有。
为细胞的最外层，比较透明。
调节细调焦螺旋可见两细胞间实际上为三层；两侧为相邻两个细胞的细胞壁；中间是两个细胞共有的胞间层。
(2)细胞质：为无色透明的胶状物，紧贴在细胞壁以内，被中央大液泡挤成一薄层，仅细胞两端较明显。
(3)细胞核：埋在细胞质内；贴近细胞侧壁的只见其窄蔺，呈扁圆形，贴在上、下整的可见其宽面，呈球形。
仔细观察，可见包在细胞核外面的核膜，细胞核内有1—3个发亮的颗粒，即核仁。
(有的细胞看不见细胞核是因为该细胞被撕破，只剩一半了）(4)液泡：位于细胞中央，占细胞体积的大部分，由于澈泡内充满细胞液；所以比细胞质更透明。
植物细胞后含物1.观察马铃薯淀粉粒淀粉粒在形成时，先从一个点（脐点）开始，向外层层沉积，形成许多同心的层次——层纹（直链淀粉和支链淀粉交替沉积而成）。
切取马铃薯一小块，用刀片刮少许混浊液，置于载玻片上，或用马铃薯块直接涂片，加蒸馏水一滴，盖上盖玻片。
显微鉴定名词解释
显微鉴定名词解释
显微鉴定是一种测定显微生物细胞及其各类产物的技术，使用荧光显微镜、透射电镜等高级仪器仪表，对细胞结构、细胞内细胞器的形态、细胞表面特征以及细胞内的成分、物质的状态及单独的物质进行有效检测和识别。
显微鉴定技术在现代生物学研究中具有举足轻重的作用，它是一种观察和测定细胞、细胞内结构和成分、细胞分子及有机物质的技术，其结果可以帮助研究者深入探索生命科学的奥秘。
显微鉴定的优点是可以获得精细的形象资料，具有较大的检测范围，从细胞和细胞分子水平上观察生物体的结构和形态，对对真菌、细菌、病毒和细胞的结构及功能有重要的应用。
它的主要缺点是由于使用显微镜来观察生物体是一种比较远的观察，所以根据观察结果往往无法在生物体内确定结构和形态信息。
此外，受限于显微镜的细节，往往无法确定被观察物体的活动状态，所以显微鉴定通常只能得到模糊的结果。
显微鉴定概述
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淀粉粒：一般较小，应注意淀粉粒 的多少、形状、类型、大小、脐点 形状及位置、层纹等特征。
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(二)根茎类中药
1、根茎类中药的组织构造
根据中柱、维管束的类型，区别 其为蕨类植物、双子叶植物或单 子叶植物的根茎。
双子叶植物茎 单子叶植物茎
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双子叶植物茎：
草质茎：有表皮；皮层为初生皮 层，有的可见内皮层；中柱鞘常 分化为纤维或夹杂有石细胞；束 中形成层明显；次生韧皮部大多 成束状或板状，少数呈筒状；髓 射线较宽；髓较大。
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木质茎：外层为木栓组织；皮层 多为次生皮层；中柱鞘厚壁组织 多连续成环或断续；形成层环明 显；次生韧皮部及次生木质部呈 筒状结构；射线较窄，细胞壁常 木化；髓较小。
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2、根茎类粉末中药的观察：
注意鳞茎、块茎、球茎常含多量 较大的淀粉粒，其形状、大小、 脐点、层纹以及复粒等特征是鉴 别的重要依据；
鳞茎的鳞叶表皮常可察见气孔；
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单子叶植物根茎较易见到环纹导 管；
蕨类植物根茎一般只有管胞，无 导管。.Biblioteka 23(三)茎藤类中药
1．茎藤类中药的组织构造 根据维管束的类型及排列：
根类中药中常有各种草酸钙结晶， 如簇晶、方晶、砂晶或针晶等， 兼有簇晶与针晶或砂晶与簇晶共 生。
纤维、石细胞及淀粉粒、菊糖的 有无及其形状亦应注意。
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2、根类粉末中药的观察
木栓组织：多见，注意木栓细胞 表面观的形状、颜色、壁的厚度， 有的可见木栓石细胞(如党参)。
导管：一般较粗，注意其类型、 直径、导管分子的长度及末端壁 的穿孔的形状及排列等。
中药鉴定基本技术—显微鉴定
分泌 组织
花粉粒
气孔
为被子植物的主要输导组 织，其次生壁未完全木化增 厚而形成纹孔。根据纹孔的 类型，分为具缘纹孔导管、 网纹导管、梯纹导管、螺纹 导管、环纹导管、孔纹导管 等。
⒈木薄壁细胞 ⒉⒊环纹导管 ⒋⒌⒍螺纹导管 ⒎梯纹导管 ⒏梯、网纹导管 ⒐孔纹导管
知识拓展
二、显微鉴别常见的细胞及细胞内含物
主要用于观察淀粉粒，或配合其他试剂 检查细胞壁或细胞内含物的性质。
多用于观察菌类药材的菌丝团块和菌丝。
知识拓展
二、显微鉴别常见的细胞及细胞内含物
纤维 石细胞
为两端尖锐的细长细 胞，具次生增厚壁， 细胞壁纤维化或木质 化，有少数纹孔。
导管
木栓 细胞
腺毛、 非腺毛
分泌 组织
花粉粒
气孔
⒈五加皮 ⒉苦木 ⒊关木通 ⒋肉桂 ⒌丹参 6.分隔纤维（姜） ⒎纤维束 ⒏嵌晶纤维（南五味子根） ⒐晶纤维(甘草)
纤维
石细胞
导管
木栓 细胞
腺毛、 非腺毛
分泌 组织
花粉粒
气孔
细胞壁木栓化，断面观呈扁方形，
表面观呈多角形或类方形，有的部 分增厚，如杜仲、肉桂。
木 栓
细
胞
特
征
图
知识拓展
二、显微鉴别常见的细胞及细胞内含物
纤维
石细胞
导管
木栓 细胞
腺毛、 非腺毛
分泌 组织
花粉粒
气孔
腺毛 为具有分泌作用的毛茸，分为腺头和 腺柄两部分。 非腺毛 为表皮上无分泌作用的保护毛。
菊糖
酸钙结晶、淀粉粒等比较常见的
细胞内含物。
淀粉粒
草酸钙簇晶
④不定式：副卫细胞数目不定，大小基本相同，形状与表皮细胞相似，如菊科；
显微鉴定法——精选推荐
显微鉴定法是利⽤显微技术对中药进⾏显微分析，以确定其品种和质量的⼀种鉴定⽅法。
显微鉴定主要包括组织鉴定和粉末鉴定，利⽤显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状及内含物的特征、矿物的光学特性，和⽤显微化学⽅法，确定细胞壁及细胞执业药师,中药鉴定学,辅导,精华,内含物的性质或某些品种有效成分在组织中的分布等，⽤以鉴别药材的真伪与纯度甚⾄品质。
（⼀）显微制⽚⽅法 显微鉴定时可根据检品的不同情况制作相应的制⽚，包括横切⽚或纵切⽚、表⾯制⽚、粉末制⽚、解离组织⽚、花粉粒与孢⼦制⽚、磨⽚制⽚、含粉末药材的制剂显微纸⽚等。
制作解离组织⽚时，解离液选择原则为：如样品中薄壁组织占⼤部分，⽊化组织少或分散存在，可⽤氢氧化钾法；如果样品坚硬，⽊化组织较多或集成较⼤群束，可⽤硝铬酸法或氯酸钾法。
（⼆）植物细胞壁和内含物的鉴别 （1）细胞壁性质的鉴别： ①⽊质化细胞壁加间苯三酚试液显红⾊或紫红⾊。
②⽊栓化或⾓质化细胞壁加苏丹Ⅲ显橘红⾊⾄红⾊。
③纤堆素细胞壁加氯医`学教育搜集整理化锌碘试液显蓝⾊或紫⾊。
④硅质化细胞壁加硫酸⽆变化。
（2）细胞内含物性质的鉴别： ①淀粉拉加碘试液显蓝⾊或紫⾊。
②糊粉粒加碘试液显棕⾊或黄棕⾊。
加硝酸汞试液显砖红⾊。
③脂肪油、挥发油或树脂加苏丹Ш试液显橘红⾊、红⾊或紫红⾊。
④菊糖加10%α-萘酚⼄醇溶液，再加硫酸显紫红⾊并很快溶解。
⑤黏液加钌红试液显红⾊。
⑥草酸钙结晶加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解⽽⽆⽓泡医`学教育搜集整理发⽣。
加硫酸逐渐溶解，析出结晶。
⑦碳酸钙结晶（钟乳体）加稀盐酸溶解，同时有⽓泡发⽣。
⑧硅质加硫酸不溶解。
（三）显微测量 （四）显微常数测定 常见的显微常数主要有⽤于叶类鉴别的⽓孔数、⽓孔指数、栅表⽐、脉岛数和脉端数等。
（五）显微临时制⽚常⽤封藏试液 显微鉴定所⽤试剂包括⽔、稀⽢油、⽢油醋酸试液及⽔合氯醛试液。
（六）扫描电⼦显微镜和偏光显微镜的应⽤ 扫描电镜已⼴泛应⽤于⽣物样品表⾯及其断⾯⽴体形貌的观察。
显微鉴定要点
• 6.反光镜的使用：反光镜通常与遮光器（或光圈）配合使 用，以调节视野内的亮度。反光镜有平面和凹面。对光时， 如果视野光线太强，则使用反光镜的平面，如果光线仍旧 太强，则同时使用较小的光圈；反之，如果视野内光线较 弱，则使用较大的光圈或使用反光镜的凹面。 7.镜头的擦拭：①用专门的擦镜纸；②擦镜头时，先将擦 镜纸折叠几次，然后朝一个方向擦，不可来回擦或转动擦； ③如果镜头被油污污染，则可在擦镜纸上滴几滴二甲苯， 然后按上述方法擦拭。 8.显微镜的放大对象：是物体的长和宽，不是面积，更不 是体积。
• 9.显微镜的焦距问题：物镜离装片的远近，准焦螺旋的使 用。 10.显微镜使用时物象移动方向：相反，即物象在视野何 方，则装片即向该方向移动。 11.显微镜使用时异物的判断：目镜、物镜或装片上，通 常通过移动玻片（是否在玻片上），转动转换器（是否在 物镜上）来判断，剩下在目镜上。 12. 实验后显微镜的安置：显微镜使用完毕后，应将玻片 取吓，将其机械部分用白纱布擦拭干净；转动转换器，让 两个物镜偏于两旁；转动粗准焦螺旋，使镜筒下降至最低 点，将反光镜竖起，蒙上红绸布，然后将显微镜锁入箱内。
显微镜的使用
• 1.显微镜的取送：①右手握镜臂；②左手托镜座；③置于 胸前。 2.显微镜的旋转：①镜筒朝前，镜臂朝后；②置于观察者 座位前的桌子上，偏向身体左侧，便于左眼向目镜内观察； ③置于桌子内侧，距桌沿5cm左右。 3.对光：①转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升，然后转动 转换器，使低倍物镜对准通光孔；②用手指转动遮光器 （或片状光圈），使最大光圈对准通光孔，左眼向目镜内 注视，同时转动反光镜，使其朝向光源，使视野内亮度均 匀合适。
• 4.低倍物镜的使用：①用手转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐 下降，同时两眼从侧面注视物镜镜头，当物镜镜头与载物 台的玻片相距2～3mm时停止。②用左眼向目镜内注视（注 意右眼应该同时睁着），并转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐 上升，直到看清物象为止。如果不清楚，可调节细准焦螺 旋，至清楚为止。 5.高倍物镜的使用：使用高倍物镜之前，必须先用低倍物 镜找到观察的物象，并调到视野的正中央，然后转动转换 器再换高倍镜。换用高倍镜后，视野内亮度变暗，因此一 般选用较大的光圈并使用反光镜的凹面，然后调节细准焦 螺旋。观看的物体数目变少，但是体积变大。
显微鉴定要点
显微鉴定要点显微鉴定是一种常用的分析技术，可以用于材料的组成分析、结构分析、形态分析等方面。
在显微鉴定中，需要注意以下几个要点。
一、样品制备样品制备是显微鉴定的第一步，样品的制备质量直接影响到后续的分析结果。
在样品制备过程中，需要注意以下几个方面。
1. 样品的选择：样品应该具有代表性，能够反映出整个样品的特征。
2. 样品的制备：样品的制备应该尽量避免对样品的结构和形态造成影响，同时要保证样品的纯度和完整性。
3. 样品的保存：样品在制备完成后应该妥善保存，避免受到外界环境的影响。
二、显微镜的选择显微镜是显微鉴定的核心工具，不同类型的显微镜适用于不同类型的分析。
在选择显微镜时，需要注意以下几个方面。
1. 分析目的：根据分析目的选择不同类型的显微镜，如光学显微镜、电子显微镜等。
2. 分析样品：根据样品的性质和形态选择适合的显微镜。
3. 分析条件：根据分析条件选择适合的显微镜，如分辨率、放大倍数等。
三、显微镜操作显微镜操作是显微鉴定的关键步骤，需要注意以下几个方面。
1. 样品的放置：样品应该放置在显微镜的适当位置，避免对样品造成损伤。
2. 显微镜的调节：根据分析需要调节显微镜的放大倍数、焦距等参数。
3. 观察样品：观察样品时需要注意样品的结构和形态，同时要注意观察样品的不同部位。
四、数据分析数据分析是显微鉴定的最后一步，需要注意以下几个方面。
1. 数据的准确性：数据的准确性是显微鉴定的关键，需要注意数据的来源和准确性。
2. 数据的解释：数据的解释需要结合样品的结构和形态进行分析，同时要注意数据的可靠性和合理性。
3. 结果的呈现：结果的呈现需要清晰明了，同时要注意结果的可读性和易于理解性。
总之，显微鉴定是一项复杂的分析技术，需要在样品制备、显微镜选择、显微镜操作和数据分析等方面注意各种要点，才能得到准确可靠的分析结果。
生药鉴定(显微)
用量少；
但该技术所需的一对引物设计，需要
知道物种的遗传信息，因而在生药研
究中具有一定的局限性。
聚合酶链反应（polymerase chain reaction,
PCR）是1985年美国Cetus公司 Kary Mullis等建
立的最新生物技术。
一、PCR的定义：是在体外模拟体内条件
下应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段 的技术。
常用的理化鉴定方法
物理常数
包括相对密度、旋光度、折光率、硬度、
黏稠度、沸点、熔点等。
一般理化鉴别
呈色反应：
利用生药的某些化学成分能与某些试 剂产生特殊的颜色反应来鉴别。
多在试管中进行，或在生药切面或
粉末上滴加各种试液，观察呈现的 颜色以了解某成分所存在的部位。
沉淀反应：
利用生药某些化学成分能与某些试
二、PCR的原理
1. PCR扩增首先需要一对引物，根据待扩增区
域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷
酸引物（一般长15~30bp），这一单链引物序列将决 定扩增片段的特异性和片段长度。 2. PCR反 应 体 系 由 基 因 组 DNA、 一 对 引 物 、 dNTP、TaqDNA聚合酶、酶反应缓冲体系及必需的 离子浓度等组成。
polymorphic DNA marker ， AFLP ）；
DNA 测序法和基于 DNA 序列测定的 PCR-RFLP 、特 异引物 PCR 方法。
二、DNA遗传标记技术的方法及原理
1、限制性内切酶酶切片段长度多态性(RFLP， restriction fragment length polymorphism)
identification)：
中药鉴定专项技能—显微鉴定技术
三、显微镜使用注意事项
1．搬动显微镜时，要一手握镜臂，一手扶镜座，两上臂紧靠 身体。切勿一手斜提或前后摆动，不要发生太大震动，以防镜 头或其他零件跌落。
2．观察标本时，显微镜离实验台边缘应保持一定距离(5cm)， 以免显微镜翻倒落地。
3．使用时要严格按步骤操作，熟悉显微镜各部件性能，掌握 粗、细调节钮的转动方向与载物台升降关系。转动粗调节钮向 下时，眼睛必须注视物镜头。
二、使用方法
（2）高倍镜的使用
①依照低倍镜操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。
②将需要观察的部分移到视野的中央。
③眼睛从侧面注视物镜，用手移动转换器，换高倍镜40X。
④眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调节钮，直至视野内看到清晰的物 像为止。此时应把聚光器的孔径光阑适当调大，使之与物镜的镜口率相匹配。光 源的强度也应调高。
党参菊糖（水合氯醛装置）
五、装置液的作用
水合氯醛装 置液的作用
➢使细胞膨胀,便于观组织、细胞及 其内含物特征。 ➢去除细胞表面或内部杂质。 ➢增强透明度。
五、装置液的作用
稀甘油装置 液的作用
➢增加透明度。 ➢防止气泡生成。 ➢防止水合氯醛结晶析出。
显微鉴定技术
目录
CONTENTS
01 02 03
二、测微尺的使用方法
中药粉末制片
目录
CONTENTS
01
02
03 04 05
粉末临时制片操作要领 水装片或斯氏液装片 水合氯醛加热透化装片 水合氯醛或乙醇装片 装置液的作用
一、粉末临时制片操作要领
➢粉末用量：米粒大小，尽可能少。 ➢每次滴加装置液2~3滴。 ➢每次滴加装置液后需要搅拌均匀。 ➢控制搅拌范围约为盖玻片大小。 ➢如加热透化，则重复进行3~4次， 沸即离火，勿烧干、焦。
显微鉴别工作总结
显微鉴别工作总结
显微鉴别工作是科学研究和实验室工作中常见的一项重要技术。
通过显微镜观
察样品的微观结构和特征，可以对其进行鉴别和分析，为科学研究和实验结果的准确性提供重要支持。
在进行显微鉴别工作时，需要注意一些关键点，以保证工作的准确性和可靠性。
首先，样品的制备是显微鉴别工作中至关重要的一步。
样品的制备质量直接影
响到后续的观察和鉴别结果。
在制备样品时，需要注意避免样品的污染和损坏，保证样品的原始状态得到保留。
同时，还需要根据样品的特性选择合适的制备方法，以保证样品的微观结构得到清晰展现。
其次，显微镜的使用和调试是显微鉴别工作中的关键环节。
在使用显微镜观察
样品时，需要根据样品的特性选择合适的放大倍数和光源强度，以保证观察到的图像清晰度和对比度。
同时，还需要进行显微镜的定期维护和校准，以保证显微镜的观察结果准确可靠。
最后，对观察到的样品进行鉴别和分析是显微鉴别工作的最终目的。
在进行鉴
别和分析时，需要结合样品的特性和先前的研究成果，进行综合判断和推断。
同时，还需要注意避免主观偏见和错误判断，以保证鉴别和分析结果的科学性和可靠性。
总的来说，显微鉴别工作是科学研究和实验室工作中不可或缺的一项技术。
通
过严格的样品制备、显微镜的使用和调试以及对样品的鉴别和分析，可以为科学研究和实验结果的准确性提供重要支持。
希望在今后的工作中，能够进一步提高显微鉴别工作的水平和质量，为科学研究和实验结果的可靠性和准确性提供更好的保障。
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淀粉粒：一般较小，应注意淀粉粒 的多少、形状、类型、大小、脐点 形状及位置、层纹等特征。
(二)根茎类中药
1、根茎类中药的组织构造
根据中柱、维管束的类型，区别
其为蕨类植物、双子叶植物或单 子叶植物的根茎。 蕨类植物根茎：外层为厚壁性的 表皮及下皮细胞，基本组织较发 达。中柱的类型有：原生中柱、 双韧管状中柱及网状中柱等。
石细胞：应注意形状、大小、细胞 壁增厚形态和程度、纹孔形状及大 小、孔沟密度等特征。 纤维：观察时注意纤维的类型、形 状、长短粗细等；注意分泌腔 (室)、分泌管(道)及乳汁管等类型、 形状、颜色、周围细胞的排列及形 态等特征。 结晶：大多为草酸钙结晶，偶有含 硅质块的，应注意结晶的类型、大 小、排列及含晶细胞的形态等。
有异常构造（三生构造）： 何首乌根的形成层环外方有数个 复合维管束； 牛膝根有数轮同心排列的维管束 (维管束环的束间形成层不明显)； 商陆根有数轮同心排列的形成层 环及其所形成的三生构造；
单子叶植物
无木栓组织，其表皮细胞外壁有
时增厚，也有表皮发育成数列根 被细胞，壁木栓化或木化； 皮层宽广，占根的大部分，内皮 层凯氏点通常明显； 中柱小，木质部束及韧皮部束数 目多，相间排列成一圈。 中央有髓。
三、扫描电镜等的应用
1．偏振光显微镜（偏光显微镜 ） 在偏光显微镜下，中药的鉴别要 素在色彩上表现出一定的变化， 可作为大多数植物、动物、矿物 类中药的显微鉴别依据之一。
例如：
淀粉：在偏光显微镜下呈现黑十
字现象，不同类型的淀粉其黑十 字形象不同； 草酸钙结晶：类型多样，在偏光 显微镜下呈不同的多彩颜色；
2．果实类粉末中药的观察 外果皮细胞的形状、垂周壁的增 厚状况、角质层纹理以及非腺毛、 腺毛的有无及中果皮、内果皮的 细胞形态等特征。
(九)种子类中药
1．种子类中药的组织构造
重点观察
种皮的构造，有的种皮只有1层
细胞，多数的种皮由数种不同的 细胞组织构成；
种子的外胚乳、内胚乳或子叶细
双子叶植物根茎：有木栓组织；皮
层中有时可见根迹维管束；中柱维 管束无限外韧型；中心有髓。少数 种类有三生构造，髓部有复合维管 束。 单子叶植物根茎：外层为表皮；皮 层中有叶迹维管束；内皮层明显； 中柱中散有多数有限外韧维管束， 也有周木维管束 ( 如菖蒲 ) ；多含草 酸钙针晶束，存在于黏液细胞中。
鉴定叶、花、果实、种子、全草
等类中药，可取叶片、萼片、花 冠、果皮、种皮制表面片，以观 察各部位的表面(皮)特征。 可将中药作粉末片进行观察。
可制解离组织片，以观察某些细
胞组织，如纤维、石细胞、导管 等。 对于中成药，可直接取目的物， 选用不同试液制片，观察粉末的 具有鉴别意义的组织、细胞及细 胞后含物显微特征。
显微鉴定
显微鉴定(microscopical idenifiction)是利用显微镜来观察中药的 组织构造、细胞形状以及内含物， 描述显微特征，制定显微鉴别依据， 用以鉴定中药品种和质量的重要手 段之一。
一、显微鉴定的常用方法
显微鉴定 组织鉴定：观察药材的切片或磨 片，鉴别其组织特征，适合于完 整的药材或粉末特征相似的同属 药材的鉴别； 粉末鉴定：观察药材的粉末制片 或解离片鉴别其细胞分子及内含 物的特征，适合于破碎、粉末状 药材或中成药的鉴别。
粉末片：
水合氯醛透化片；
水合氯醛不透化片；
醋酸甘油片或稀甘油片或水装片。
磨片：观察矿物药，相当于固定
片。
目镜测微尺
观察细胞和后含物时，常需要测
量其直径、长短(以µ m计)，作为 鉴定依据之一，测量可用目镜测 微尺进行。 先将目镜测微尺用载台测微尺标 化，计算出每一小格的µ m数，应 用时将测得物的小格数，乘以每 一小格的µ m数，即得所欲测定物 的大小。
双子叶植物茎：
草质茎：有表皮；皮层为初生皮
层，有的可见内皮层；中柱鞘常 分化为纤维或夹杂有石细胞；束 中形成层明显；次生韧皮部大多 成束状或板状，少数呈筒状；髓 射线较宽；髓较大。
木质茎：外层为木栓组织；皮层
多为次生皮层；中柱鞘厚壁组织 多连续成环或断续；形成层环明 显；次生韧皮部及次生木质部呈 筒状结构；射线较窄，细胞壁常 木化；髓较小。
(十一)菌类中药
大多以子实体或菌核的形式入药。
观察时应注意菌丝的形状、有无
分枝、颜色、大小； 团块、孢子的形态； 结晶的有无及形态、大小与类型； 应无淀粉粒和高等植物的显微特 征出现。
(十二)动物类中药
因药用部位不同，可分为： 动物体：应注意皮肤碎片细胞的 形状与色素颗粒的颜色；刚毛的 形态、大小及颜色；体壁碎片、 骨碎片等特征。
切片类型
横切片或纵切片 切片方法 徒手切片：10～20µ m，最为简便、 快速，较为常用。 石蜡切片：便于教学用。 滑走切片：有专用机器切制。 冰冻切片：宜于科研，不利于教 学，无法染色。
解离组织片：可用氢氧化钾法，
使细胞间质溶解，细胞分离后观 察目的物。 表面片：叶、花、果实、种皮等 多用，可观察各部位的表皮特征。
根类中药常有分泌组织，大多分
布于韧皮部，有乳管、树脂道、 油室或油管、油细胞等。 根类中药中常有各种草酸钙结晶， 如簇晶、方晶、砂晶或针晶等， 兼有簇晶与针晶或砂晶与簇晶共 生。 纤维、石细胞及淀粉粒、菊糖的 有无及其形状亦应注意。
2、根类粉末中药的观察 木栓组织：多见，注意木栓细胞 表面观的形状、颜色、壁的厚度， 有的可见木栓石细胞(如党参)。 导管：一般较粗，注意其类型、 直径、导管分子的长度及末端壁 的穿孔的形状及排列等。
切向纵切面：观察木射线的形状
(梭形或线状)、宽度、高度及类 型(单列或多列)，同时观察导管、 木纤维等。 ２、木类粉末中药的观察 以导管、韧型纤维、纤维管胞、 木薄壁细胞的形态特征以及细胞 后含物为主要鉴别点。
(六)叶类中药
1．叶类中药的组织构造 横切片观察： 表皮：要注意上、下表皮细胞的 形状、大小、外壁、气孔、角质 层厚度，以及有无内含物，特别 是毛茸的类型及其特征。
(十四)中成药显微鉴别要点
中药丸散锭丹等成方制剂，大多直 接用各种粉末中药及中药浸膏配制 而成。 显微鉴定是鉴定中成药丸散锭丹 和制定品质标志的科学方法之一， 对保证中成药的质量，有一定的 科学意义和应用价值。
中药的粉末鉴定研究对于中成药的 科学鉴定有重要作用。 1．了解组方中药、剂型和制法 熟悉处方中组成药物的显微特征 是中成药鉴别的基础。 中成药的显微鉴别要比中药材粉 末鉴别复杂得多，制备方法及辅 料等会产生一定的影响和干扰。
皮层及韧皮部：有厚壁组织存在，
是为鉴定特征，要注意纤维和石 细胞的形状、大小、壁的厚度、 排列形式等。 皮类中药常有树脂道、油细胞、 乳管等分泌组织以及草酸钙结晶。
2．皮类粉末中药的观察
主要有木栓细胞、纤维、石细胞、
分泌组织及草酸钙结晶等，都有 鉴别意义。
(五)木类中药
1．木类中药的组织构造 从三个切面观察组织构造： 横切面：年轮、木射线宽度(细 胞列数)、密度，导管等； 径向纵切面：木射线的高度、长 度及细胞类型等；
胞的形状、细胞壁增厚状况； 所含脂肪油、糊粉粒或淀粉粒等。
2．种子类粉末中药的观察 注意种皮的表面观及断面观形态 特征； 注意种皮支持细胞、油细胞、色 素细胞的有无和形态； 有无毛茸、草酸钙结晶、淀粉粒、 分泌组织碎片等。
(十)全草类中药
大多为草本植物的地上部分，少
数为带根的全株。 全草类包括了草本植物药的各个 部位，其显微鉴定可参照以上各 类中药的鉴别特征。
(八)果实类中药
1．果实类中药的组织构造 观察果皮的组织特征，由子房壁 分化和增大形成的真果的果皮， 可分为： 外果皮：相当于叶的表皮，为1 列表皮细胞，需注意的问题同叶 类。
中果皮：相当于叶肉，为多列薄
壁细胞，有细小维管束散布。 内果皮：相当于叶的表皮，变异 较大，有的为1层薄壁细胞，有 的散在石细胞，有的为结晶细胞 层，也有分化为纤维层。
2.
根据处方明确专属特征 中成药显微鉴定，一般根据处方， 对各组成中药粉末特征作分析比 较，选取各药具专属性的显微特 征，作为鉴别依据。
六味地黄丸是由熟地黄、山茱萸、
牡丹皮、山药、茯苓、泽泻六味 药组成，每味药都有数个显微特 征，大部分特征又有横向类别的 交叉。选取六味药各具专属性的 显微特征，这样六味药物均可鉴 别。
叶肉：注意栅栏组织细胞的形状、
大小、层数及所占叶肉的比例和 分布； 叶脉：观察维管组织的形状、类 型以及周围或韧皮部外侧有无纤 维层。
2．叶的表面制片 主要观察表皮细胞、气孔及各种 毛茸的全形。 注意上、下表皮细胞的形状，垂 周壁及有无纹孔，角质层纹理， 气孔的类型及副卫细胞数。
3．
叶类粉末中药的观察 与叶的表面制片基本一致，但毛 茸多碎断，粉末中还可见到叶片 的横断面及晶体。
(七)花类中药
1．花类中药的显微鉴定 根据不同的中药，将苞片、花萼、 花冠、雄蕊或雌蕊等分别作表面 制片，或将完整的花作表面制片 观察。 苞片、花萼的构造，与叶相似。
2．花类粉末中药的观察 花粉粒：是鉴别花类中药的主要 特征，注意其形状、大小、萌发 孔形态、外壁构造及纹饰(理)等 特征。 花粉囊内壁细胞，毛茸； 注意草酸钙结晶、分泌组织及色 素细胞等。
单子叶植物茎：
最外层为表皮，基本组织中散生
多数有限外韧维管束，中央无髓。 裸子植物茎： 木质部主为管胞，通常无导管。
2．藤茎类粉末中药的观察
除了无叶肉组织外，其它组织一
般都可能存在。
(四)皮类中药
1．皮类中药的组织构造 皮类中药：指裸子植物和双子叶 植物的形成层以外的部分，以茎 干皮的种类较多，根皮、枝皮的 种类较少。 木栓组织：注意层数、颜色、细 胞壁的增厚程度；