链球菌、肠球菌

CAMP试验
原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子， 该物质可促进金黄色葡萄球菌β溶血素的活性，故 在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成 箭头状透明溶血区。
方法：在羊血琼脂平板上，用金黄色葡萄球菌 划种一条横线，在将被检菌距金葡菌接种线3mm 处直角接种一短线，35℃培养18-24h观察结果。同 时设阳性对照和阴性对照。
杆菌肽敏感试验
原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎 100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐 药。
方法：挑取被检菌落，密涂于血琼脂平 板上，将杆菌肽纸片（0.04U/片）贴于平板 上，35℃孵育18-24h观察。
结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A 群化脓性链球菌。
B
化脓性链球菌杆菌肽阳性
B群无乳链球菌
痰标本肺炎链球菌革兰染色
A群(化脓性)链球菌
生物学性状
1. 形态与染色 球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性(G＋)， 无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。
化脓性链球菌
A群(化脓性)链球菌
生物学性状
2. 培养特性
营养要求高：血平板或含血清培养基； 液体培养为沉淀生长； 血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同 菌株溶血不一， 多数有透明溶血环(b溶血现象)。
时在卡片相应区域加一滴控制液与任意一
滴致敏乳胶混匀，作为阳性对照，轻摇卡 片，观察结果。
结果判断：在2-10min内发生胶乳凝集，Leabharlann Baidu 阳性。待检菌与哪群致敏胶乳凝集就表明 该菌为相应血清群的链球菌。
Lancefield血清凝集分型
（7）胶乳凝集试验：
原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高 滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和 后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O” 抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀 的凝集颗粒。
方法：先将病人血清56℃30min灭活， 然后用生理盐水做1：15稀释。在反应板个
空内分别滴加稀释血清、阳性和阴性对照 血清1滴（50ul），再于各孔内滴加1滴溶血 素“O”溶液，轻摇1min混匀，最后在各孔 内分别滴加1滴ASO胶乳试剂，轻摇3min后 观察结果。
结果判断：出现凝集为阳性、不凝集为阴
方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸
钠培养基， 35℃培养48h，3000r/min离心 30min,吸取上清液0.8ml于另一试管，加入 FeCl30.2ml，立即混匀，10-15min观察结果。
结果：出现恒定沉淀物为阳性。
3、生化反应 1）触酶试验： 链球菌属为阴性。
（6）血清学试验（链球菌快速分群乳胶凝集 试验）
性。ASO阳性可认为患者近期受溶血性链球 菌感染过，可辅助诊断风湿热、肾小球肾 炎等疾病。
肠球菌属
步骤和方法
1、菌落观察: 将菌株接种于血琼
脂平板上，35℃孵育 18-24h后观察菌落， 肠球菌在血琼脂平板 上呈灰白色、不透明、 表面光滑的小菌落， 菌落周围可出现α溶 血环，也可无溶血环。
2、形态观察 涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细
实验五
链球菌及肠球菌的鉴定
目的要求：
1.掌握链球菌属及肠球菌属的分离培 养与鉴定方法。
2.掌握链球菌及链球菌的菌落特点、 菌体形态及染色性。
步骤与方法
1、观察菌落 将菌株接种于血琼脂平板上，35℃孵育
18-24h后观察菌落，记录菌落大小、形态、 表面、边缘、透明及颜色、有无溶血及特 点。将肺炎链球菌继续孵育2-3天看菌落中 心有无凹陷呈“脐状”。
培养特性：营养要
求高，兼性厌氧。初 次分离需提供5%-10% 的CO2。 18-24h后血平板上形 成灰白色、圆形、针 尖样的菌落。菌落周 围有草绿色溶血环。
肺炎链球菌 S. pneumoniae
培养特性：培养48h
后，菌落有自溶现象， 菌落的中心会出现凹 陷，像“肚脐”称脐 状凹陷。
肺炎链球菌 S. pneumoniae
链球菌的溶血性
β溶血性链球菌
2、形态观察 涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下
细菌染色性、大小、形态、排列及荚 膜。
肺炎链球菌 S. pneumoniae
形态与染色：G+球菌,矛头
状 ,成双排列，宽端相对 ，尖端向外,有荚膜
肺炎链球菌革兰染色有荚膜
肺炎链球菌荚膜染色特点
肺炎链球菌 S. pneumoniae
原理：Lancefield根据链球菌细胞壁中多 糖抗原的不同，将链球菌分为20多个群，对 人类治病的多数为A群，偶见B、C、D、F、 G群。用这6群抗原的兔免疫血清分别致敏 的乳胶颗粒，与具有相应群特异性抗原的 链球菌发生间接乳胶凝集反应，可在10min 内对链球菌作出主要的分群鉴定。
方法：挑取菌落2-3个转种于含有提取酶的 试管中，使其成为乳化均匀的菌悬液，置 37℃水浴15min。在卡片的相应区域滴加一 滴A、B、C、D、F、G致敏胶乳，再加入 处理后的菌悬液一滴分别与胶乳混匀，同
B、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血 清肉汤培养液1ml分别加入2支试管，再于各 管中加入去氧胆酸钠溶液0.1ml，摇匀后置 于37℃水浴30min后观察结果。
结果判断：平板法若菌落消失为阳性，
不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透 明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别 甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试 验，后者阳性。
结果报告：
在两种细菌划线的交接处出现箭头型透 明溶血区为阳性，否则为阴性，此试验为B 群链球菌与其他链球菌鉴别的重要试验， 无乳链球菌为阳性，其他为阴性。
无乳链球菌CAMP试验阳性
CAMP阳性
马尿酸水解试验
原理：B群链球菌有马尿酸水解酶，可 水解马尿酸为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可 与FeCl3，结合形成苯甲酸铁沉淀。
主要生化反应
optochin试验: 含 5μg optochin 纸片 贴于 涂布有待测菌 的平板上35℃孵育过
夜，抑菌圈大于 14mm即为敏感。
甲型溶血链球菌(R)
肺炎链球菌(S)
胆汁溶菌试验
原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自 溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解而 自溶。
方法：A、平板法：在血琼脂平板上选择 出待检的草绿色溶血的菌落，观察记录菌 落特点，然后于菌落上加一滴去氧胆酸钠 溶液，35℃孵育15-30min观察结果。