免疫胶体金技术常见影响因素分析
免疫胶体金技术常见影响因素分析
免疫胶体金技术常见影响因素分析自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。
免疫胶体金技术的反应过程是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。
而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响和制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。
1耗材的选择1.1不同型号膜的筛选。
硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。
不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物和表面活性剂的来源、类型和数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径和分布结构不同。
膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高。
用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小和分布结构的膜,找到合适的平衡点,使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。
1.2结合垫的选择。
结合垫位于层析系统的中间,一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低,能很好地负载胶体金标记物和待检测样品,而不被吸附;玻璃纤维素膜具备以上优点,同时具有一定的硬度,为试验中常用。
1.3样品垫及吸水纸的选择。
样品垫和吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端,对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。
试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫和吸水纸,保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。
如检测样品为血清,则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可;如果检测样品为毒素,则可选择质量好的吸水纸和样品垫。
《免疫胶体金技术》课件
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
免疫胶体金技术常见影响因素分析
免疫胶体金技术常见影响因素分析自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。
免疫胶体金技术的反应过程就是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。
而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响与制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。
1耗材的选择1、1不同型号膜的筛选。
硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。
不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物与表面活性剂的来源、类型与数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径与分布结构不同。
膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但就是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就就是假阳性越高。
用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小与分布结构的膜,找到合适的平衡点,使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。
1、2结合垫的选择。
结合垫位于层析系统的中间,一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低,能很好地负载胶体金标记物与待检测样品,而不被吸附;玻璃纤维素膜具备以上优点,同时具有一定的硬度,为试验中常用。
1、3样品垫及吸水纸的选择。
样品垫与吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端,对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。
试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫与吸水纸,保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。
如检测样品为血清,则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可;如果检测样品为毒素,则可选择质量好的吸水纸与样品垫。
免疫胶体金的技术
2. 凝胶过滤法
u 将探针溶液装入透析袋内， 4℃ ，置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 u 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 u 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化。 用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱 ? TBS的PH根据蛋白质种类而定 u 按红色深浅分管收集洗脱液
1. 光镜免疫金银法 3 在免疫金染色的基础上增加物理显影的步骤 3 显影液的配制及显影过程应在暗处进行 3 阳性部位呈黑色颗粒状 32. 电镜免疫金银法 3 包埋前染色, 包埋后染色
【IGSS法优点】
1. 可被用于光镜和电镜观察 2. 敏感性高 3. 定位准确 4. 背景清晰, 对比度好 5. 方法简便, 安全 6. 成本较低, 标本可长期保存
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm
【具体制备方法】
（二）影响溶胶稳定性的因素 u 电解质 u 胶体金浓度 u 温度 u 大分子物质
（三）胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小 及金颗粒的均匀程度
( 七) 标记探针的鉴定
1. 负染色检查: 将胶体金溶液滴在覆有
Formavar膜( 支持膜) 的镍网上, 空气中干燥, 醋 酸铀负染, 透射电镜下观察
2. 生物活性鉴定: 可用直接或间接法放射免疫
测定, 凝聚试验及免疫组化染色进行鉴定
四. 免疫胶体金染色方法
( 一 ) 免疫金染色法
Immunogold staining, IGS
( 五）标记
1. 计算所需待标记蛋白质的总量
根据用以标记的胶体金溶液总体积及所测定的最 适蛋白质稳定量，计算出所需待标记蛋白质的总量
胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术胶体金免疫标记技术一、胶体金的制备一、胶体金的制备 根据不同的制备方法，可以制备出直径1－500nm 的胶体金粒子，但做为免疫标记探针，其直径应在3-30nm 范围内。
范围内。
在氯化金（HAuCl4）水溶液中加入还原剂使之还原并聚积形成胶体金粒子。
水溶液中加入还原剂使之还原并聚积形成胶体金粒子。
使用不同种类、使用不同种类、不同剂量的还原剂，可以控制所产生的粒子大小。
即粒子大小取决于反应溶液中最初还原试剂和还原核的数量。
还原剂浓度越高，核浓度也越高，氯化金的还原也就从更多的还原中心开始，开始，因此产生的胶体金粒子数量越多，因此产生的胶体金粒子数量越多，因此产生的胶体金粒子数量越多，但体积也越小。
但体积也越小。
但体积也越小。
粒子直径每增加一倍，数量减少为粒子直径每增加一倍，数量减少为原来的1/8。
以柠檬酸钠和单宁酸做还原剂，能够制备大小相对一致、直径3～16nm 的胶体金。
因此一般胶体金探针均使用该方法进行。
但该方法制备的胶体金粒子直径范围较窄，而且残留的多聚单宁酸残基往往干扰某些蛋白与金粒子的结合。
聚单宁酸残基往往干扰某些蛋白与金粒子的结合。
此时在溶液中添加此时在溶液中添加0.1～0.2％的H2O2能够去除这些残基。
双标记或制备5-10 nm 的胶体金时建议使用该方法。
的胶体金时建议使用该方法。
利用柠檬酸为还原剂，可以制备12～150 nm 直径的胶体金。
但制备大体积的胶体金时，胶体金粒子的误差也同时增加。
因此做单标记时，建议使用该方法制备12-16 12-16 nmnm 直径的胶体金。
金。
除了上述方法外，也可以用磷作为还原剂来制备5 nm 的胶体金，它避免了单宁酸残基的问题，但所形成的金粒子体积变化较大。
磷易燃且有毒，制备的残液需进一步处理，题，但所形成的金粒子体积变化较大。
磷易燃且有毒，制备的残液需进一步处理，故该方法故该方法已经很少使用。
已经很少使用。
氯化金极易吸湿，故一般均以小剂量密封保存（0.5g 或1g ），因此在配制氯化金溶液时一次配完，暂时不用的可以用1.5 1.5 ml ml 试管分装为1 1 ml ml 保存（-20℃）。
免疫胶体金技术常见影响因素分析
免疫胶体金技术常见影响因素分析自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。
免疫胶体金技术的反应过程是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。
而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响和制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。
1耗材的选择1.1不同型号膜的筛选。
硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。
不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物和表面活性剂的来源、类型和数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径和分布结构不同。
膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高。
用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小和分布结构的膜,找到合适的平衡点,使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。
1.2结合垫的选择。
结合垫位于层析系统的中间,一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低,能很好地负载胶体金标记物和待检测样品,而不被吸附;玻璃纤维素膜具备以上优点,同时具有一定的硬度,为试验中常用。
1.3样品垫及吸水纸的选择。
样品垫和吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端,对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。
试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫和吸水纸,保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。
如检测样品为血清,则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可;如果检测样品为毒素,则可选择质量好的吸水纸和样品垫。
免疫胶体金技术的基本原理
免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。
这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
免疫金标记技术(Immunogold labelling technique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。
2功能编辑本段常用的免疫胶体金检测技术：（1）免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。
（2）免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。
免疫胶体金技术
面临挑战与解决策略
技术挑战
提高胶体金的合成效率、稳定性和生物相容性，降低生产成本，推动技术的实际应用。
应用挑战
拓展免疫胶体金技术在生物医学领域的应用范围，提高其在实际应用中的准确性和可靠 性。
法规与伦理挑战
建立健全相关法规和标准体系，规范免疫胶体金技术的研发和应用，确保其安全性和有 效性。同时，关注伦理问题，尊重人类生命和尊严，推动技术的健康发展。
环境毒理学研究
毒性评估
利用免疫胶体金技术，可以研究 环境污染物对生物体的毒性作用 ，评估其对生态系统和人类健康
的影响。
毒理机制研究
该技术可用于揭示环境污染物与生 物体相互作用的分子机制，为环境 毒理学的深入研究提供有力工具。
污染物代谢研究
通过免疫胶体金技术，可以研究环 境污染物在生物体内的代谢过程， 了解其在生物体内的转化和排泄途 径。
食品营养成分分析
蛋白质检测
利用免疫胶体金技术，可以准确测定食品中的蛋白质含量，为食品 的营养价值评估提供依据。
维生素检测
该技术可用于食品中多种维生素（如维生素A、维生素E等）的定量 分析，有助于评价食品的营养成分组成。
矿物质检测
通过免疫胶体金技术，可以检测食品中的矿物质元素含量，如钙、铁 、锌等，为食品的营养价值提供全面数据。
02
免疫胶体金制备技术
原料选择与处理
01
02
03
氯金酸的选择
选择高纯度的氯金酸作为 原料，确保胶体金的合成 质量。
还原剂的选择
常用还原剂如柠檬酸三钠 、抗坏血酸等，用于将氯 金酸还原为金颗粒。
溶液配制
将氯金酸溶解在适量超纯 水中，配制成一定浓度的 氯金酸溶液。
胶体金合成方法
梅毒抗体的胶体金法检测及弱阳性影响因素分析
皂造，将 责匀 值分别调至 员 耀 员圆；将 缘 例经 栽砸哉杂栽 法及胶体金法 第 缘 次稀释时，诊断正确率为 员园园援 园豫（缘 辕 缘）。脂血浓度越
检测梅毒抗体为阳性患者的血清 员园园 μ造 加入不同 责匀 的生 高，检测正确率越低。
理盐水中混匀，再次检测。②溶血：取 缘 例经 栽砸哉杂栽 法及胶 猿摇 讨摇 论
（圆）肿瘤的标引：肿瘤（ 灶藻燥责造葬泽皂）包括癌（ 糟葬灶糟藻则）、瘤（ 贼怎皂燥则）和囊肿（ 糟赠泽贼）。《 酝藻杂匀》中对肿瘤有两种表达方法，一种是按 发病部位表达（ 如肺肿瘤、胃肿瘤等），一种按组织类型表达（ 如腺癌、鳞状细胞癌等）。《 酝藻杂匀》中对恶性肿瘤和良性肿瘤未加 区别，其恶性程度由肿瘤的组织类型决定。因此，对肿瘤研究类文章的主题词标引，尽可能标引两个主题词，分别表明发生部 位和组织类型，如胃腺癌需标引“ 胃肿瘤”和“ 腺癌”。
作者单位万：方缘缘数员苑园据园 贵州省毕节市人民医院检验科
皮肤科收治的梅毒患者，均符合《 梅毒诊断的几个注意点》中 相关 诊 断 标 准［员］，且 均 经 甲 苯 胺 红 不 加 热 血 清 学 试 验 （ 栽砸哉杂栽）检测 确 诊。其 中 男 圆圆 例，女 远苑 例；年 龄 圆园 耀 源远 （猿远援 源 依 源援 缘）岁；Ⅰ期梅毒 圆愿 例，Ⅱ期梅毒 源园 例，Ⅲ期梅毒 圆员 例。 员援 圆摇 检测方法摇 愿怨 例均采用胶体金法检测，试剂盒购于厦 门英科新创公司。取患者 源 皂造 静脉血，将静脉血进行 员园 皂蚤灶 源园园园 则 辕 皂蚤灶 的离心处理，取 员 皂造 上清液，置于 源益 冰箱保存。 在 圆 凿 内严格按照说明书完成胶体金法检测［圆］。
［ 关键词］摇 梅毒抗体；胶体金法；弱阳性；影响因素 ［ 中国图书资料分类号］摇 砸 苑缘怨援 员摇 摇 ［ 文献标志码］摇 月摇 摇 ［ 文章编号］摇 员远苑圆 原 圆愿苑远（圆园员猿）园员 原 园园愿源 原 园圆
免疫胶体金法的影响因素
免疫胶体金法的影响因素
免疫胶体金法（Immunochromatographic Assay）是一种常用于
快速、简便、阳性结果可直观观察的免疫分析方法。
其影响因素包括：
1. 样品稀释系数：适当的样品稀释系数能够避免高浓度样品的背景干扰，同时保证所检测物质的有效浓度。
2. 抗原抗体反应性：抗原和抗体的选择和质量对免疫胶体金法的灵敏度和特异性有重要影响。
3. 膜滤纸的选择：膜滤纸是免疫胶体金法的重要组成部分，其表面性质和孔径大小决定了反应物质的传输速率和分离效果。
4. 胶体金颗粒的性质：胶体金颗粒的大小、浓度和稳定性直接影响了免疫胶体金法的灵敏度和稳定性。
5. 反应时间：反应时间的选择直接影响了胶体金颗粒在膜滤纸上的迁移速率和反应的充分性。
6. pH和离子强度：适当的pH和离子强度有助于提高免疫胶
体金法的灵敏度和特异性。
7. 操作技巧：正确操作和使用标准操作程序能够减少人为误差，提高免疫胶体金法的准确性和可重复性。
免疫胶体金技术的基本原理及其在兽医临床中应用的研究进展
3、多指标并行检测：未来免疫胶体金技术可能发展为多指标并行检测的能 力，同时检测多种病原体或指标，提高检测的广度和深度，满足兽医临床更为复 杂的需求。
4、生物信息学结合：将免疫胶体金技术与生物信息学相结合，可以实现大 数据分析、机器学习等算法在免疫胶体金技术中的应用，从而进一步提高其诊断 准确性和流行病学调查的精细程度。
五、未来展望
免疫胶体金技术在兽医临床中的应用前景广阔，未来其可能的应用场景和发 展方向包括：
1、拓展应用范围：免疫胶体金技术在兽医临床中的应用领域仍有待进一步 拓展。例如，可以探索其在兽药残留检测、动物食品质量安全监控等方面的应用， 提高动物产品的质量安全水平。
2、集成化与自动化：随着科技的进步，免疫胶体金技术的操作流程可能实 现更高程度的集成化和自动化，提高检测效率和准确性。例如，通过引入微流控 技术，实现样本的前处理、反应液的快速混合、洗涤等步骤的自动化操作。
二、免疫胶体金技术在兽医临床 中的应用意义
免疫胶体金技术在兽医临床中具有广泛的应用价值，其主要体现在以下几个 方面：
1、疾病诊断：免疫胶体金技术可用于动物体内多种病原体的快速诊断。例 如，可用免疫胶体金技术检测动物血清中的病毒抗原或抗体，辅助诊断禽流感、 猪瘟等重大动物疫病。此外，免疫胶体金技术也可用于动物体内其他细菌感染、 寄生虫感染等疾病的诊断。
一、免疫胶体金技术的基本原理
免疫胶体金技术是一种将抗体或抗原固定在胶体金颗粒表面的标记技术。胶 体金颗粒在溶液中由于静电作用而形成稳定的胶体溶液，当加入特异性抗体或抗 原时，抗体或抗原的特异性识别作用与金颗粒表面结合，形成特定的免疫胶体金 复合物。当加入样品溶液后，免疫胶体金复合物可与样品中的目标抗原或抗体结 合，形成肉眼可见的红色或紫色斑点或线条，从而实现定性或定量分析。
免疫胶体金技术常见影响因素分析
免疫胶体金技术常见影响因素分析自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。
免疫胶体金技术的反应过程是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。
而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响和制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。
1 耗材的选择1.1 不同型号膜的筛选。
硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。
不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物和表面活性剂的来源、类型和数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径和分布结构不同。
膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T 线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高。
用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/ 醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小和分布结构的膜,找到合适的平衡点,使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。
1.2 结合垫的选择。
结合垫位于层析系统的中间,一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低,能很好地负载胶体金标记物和待检测样品,而不被吸附;玻璃纤维素膜具备以上优点,同时具有一定的硬度,为试验中常用。
1.3 样品垫及吸水纸的选择。
样品垫和吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端,对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。
试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫和吸水纸,保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。
如检测样品为血清,则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可;如果检测样品为毒素,则可选择质量好的吸水纸和样品垫。
兽医临床上胶体金检测常见问题的分析
兽 医 临 床 上 胶 体 金 检 测 常 见 问 题 的 分 析
刘中成 （ 尔 哈 滨市兽药饲料监察所 １０７ ） ５００
胶体金是常用 的标记技术 ，以胶体 金作为示踪 标志物应用于抗原 、 抗体 的新型免疫标记技术 ， 有其 独特的优点 。近年 已在各种生物学研究中广泛使用 。 在兽 因 临 床使用的免疫印迹技术几乎都使用 了胶体 金标记 ， 但经常会遇到一些问题 ， 现将其分析介绍如
３试纸检 测的可 靠性
患 犬 发 病 初 期 可 通 过 粪 便 排 出大 量 细 小 病 毒 ，
病毒粒子散在 ， 传染性也较强。发病后期 由于肠黏膜 分 泌的 Ｉ ｇ Ａ抗体 和随血进 人肠 道 中的 ＩＭ抗 体增 ｇ 多， 病毒被抗体中和并相互凝集 ， 此时若用试纸检测 可 能会测 不 到病毒 。 另外 ， 临床 中对发生呕 吐、 在 腹泻 、 脱水 等肠 炎 综合症病犬 ，要进行物理性 的鉴别工作。犬感染细
其结合的金标抗体呈正比， 线 的颜色偏红 ，但不 同 Ｔ 厂家在产品的设计中的单位指标 （ 包被胶体金抗体 的浓 度 、 Ｃ膜孔 径 的大小 、 闭剂 的选择 等 ） 不 一 Ｎ 封 是 样的 ， 以， 所 不要过分纠缠颜色深浅 ， 阳性线条 出现 才是 最终 结论 。
分钟时 Ｔ线可能呈现较淡 ，到 ｌ ０分钟反应结束后 ， 线 条会 呈 现的相 对 清晰 。 若反应结束 １ 小时后 ， 线处再有线出现 ，这是 Ｔ 胶体金倒流现象造成 “ 回线 ” 现象 ， 硝酸纤维膜具有 双 向的毛细渗透作用 ， 若滴加检测样品量过多 ， 膜在 湿 润 的状 况下 ， 能 出 现渗 透 现 象 ， 试 纸 Ｃ 线处 可 而 Ｗ 有肉眼见不到的痕迹 ， 若胶体金沉落 ， 便会呈现红色 线条 ， 该结 果无 效 。 “ 检测 中 Ｔ线消失 ” 现象 ， 主要是样 品中病毒浓 度过高 ， 当病毒浓度过高 ， Ｔ处先形成的夹心免疫 在 抗原抗体复合物被游离的病毒竞争性结合 ，失去相 应 的结合位点 ， 从而出现 的红色线条逐渐变浅 ， 甚至
胶体金检测技术
3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如
1.1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸 附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状 颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。 2.1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌 抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。 3.1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上， 实现了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记 在凝集素上的应用。
待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检尿样检测区不出现红色条带为阳性
阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。
培训资料
四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于 猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。
培训资料
-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说 明检测卡有效。
如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带， 出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。
胶体金侧流免疫层析法
胶体金侧流免疫层析法
胶体金侧流免疫层析法是一种以抗原抗体反应为基础的免疫层析技术，主要应用于临床诊断、食品安全检测、环境监测等领域。
其原理是利用抗原抗体反应,来定性和定量地分析被检者体内的免疫球蛋白含量和类型。
胶体金侧流免疫层析法具有操作简便、结果快速可视化等特点。
其试剂通常包含特定抗体或抗原的测试线和对照线，当与试纸条上的抗体或抗原结合后，会形成可见的彩色线条。
这种方法的敏感性高、特异性强，可以在数分钟内得到结果，而且不需要复杂的仪器设备,因此在临床诊断、食品安全检测、环境监测等领域得到广泛应用。
需要注意的是，胶体金侧流免疫层析法的结果会受到一些因素的影响，如试剂的特异性、操作过程中的误差等。
因此，在解读结果时需要结合具体情况进行判断。
影响胶体金产品均一性的多方面因素
影响胶体金产品均一性的多方面因素影响产品均一性的多方面因素要从多方面来分析，先主要从几个大方面来看看，首先是NC 膜，其次是金子垫，最后是样品垫。
它们都有不同程度得影响到胶体金产品的精密度。
既然把膜对产品均一性的影响放在第一位，首先让我们看看膜为什么会对产品的均一性有如此严重的影响，当然就是喷膜时点喷不均。
最主要的就是造成这种单纯性膜CT线不均一的的原因，排除操作上的原因最主要考虑这几点：I，膜本身的差异。
II，喷膜设备的问题。
III，所用的包被材料及缓和液。
首先让我们来具体分析一下膜的差异：NC膜本身也有不均一的情况，先看一下膜的生产工艺：首先,匀浆配比购买回的原料硝酸纤维素粒子是一种非常普遍的有机化学物,溶解形成混浆,在该浆体内,会加入一定比例的试剂来调整最后形成的膜的性质,一般是一个试剂配方,主要包含表面活性剂/高分子聚合物/盐离子/成型剂等溶解在一个缓冲体系内. 不同的厂家加入的溶液配方不一样,直接导至了在产品的差异.其次,滚筒铺膜配好的匀浆通过滚筒,形成了一张薄膜,平摊在十分光滑的平面载体上.这个和造纸的过程是非常相似的.最后,成型在匀浆内的成型剂开始挥发,膜逐步干燥成型.同时在这个过程中由于温度比较高,有些厂家在这个过程采取了在密闭腔体内成型,同时补充配方溶液的形式,来避免一些有效成分的蒸发.切割出产品通过以上步骤生产出来的膜是呈一个宽度极大的产品,宽度的大小直接和滚筒的大小相关,滚筒越大生产越方便,但设备的成本也越高.宽膜要经过切割才能成为我们购买到的25mm或18mm(或20mm)宽,而长度上,成品卷膜和宽膜的长度是相同的.理论上可以让厂家切成你需要的任意宽度,但这样会造成原料的浪费和人力成本的增加,后来厂商在和试纸生产厂家的协调过程中,综合用料成本和生产便利性基本确定了上面说的宽度,以次为标准.关于不同宽度的用途差异,稍后详述.从生产的过程,我们可以得知, NC膜本身是已经添加了表面活性剂来改善亲水能力,而且已经存在有一定的缓冲系统(虽然对纸条测试影响不会很大)，另从它的生产工艺来看容晚造成膜不均一情况的环节主要在滚筒铺膜，可能会出现滚压厚薄不均，厚度不均匀影响生物原料在膜上的扩散性能, 点出来的C/T线宽窄不一. 另外也影响爬速.其次，匀浆配比时在膜上表面活性剂/高分子聚合物/盐离子/成型剂等分布不均，可直接影响膜对蛋白质的吸附能力，从而蛋白与膜的结合，我们都知道蛋白与膜的结合都要靠静电作用力，同时将膜的放置环境也变成了一个不可忽略的环节，因为在不同的温湿度环境中膜的带静电会发生变化，一般湿度在45~65%，湿度过低会加速膜老化。
产品胶体金检测技术推广应用中存在的问题与应对措施
产品胶体金检测技术推广应用中存在的问题与应对措施下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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免疫胶体金技术常见影响因素分析
免疫胶体金技术是一种常用的生物检测方法，主要通过胶体金纳米颗
粒与抗原或抗体的特异性结合反应来实现对目标物质的检测和定量分析。
然而，在实际应用过程中，免疫胶体金技术的结果往往受到多种影响因素
的影响。
下面将对免疫胶体金技术常见的影响因素进行分析。
首先，溶液的pH值是影响免疫胶体金技术的重要因素之一、在免疫
胶体金技术中，溶液的pH值对胶体金纳米颗粒的稳定性和表面电荷有一
定的影响。
一般来说，胶体金纳米颗粒在弱酸性条件下比较稳定，而在碱
性条件下容易发生凝聚。
因此，在实验过程中，选择合适的缓冲液来调节
溶液的pH值是非常重要的。
其次，离子强度也是影响免疫胶体金技术的重要因素之一、离子强度
的增加会导致胶体金纳米颗粒表面的电荷屏蔽，从而使胶体金纳米颗粒发
生凝聚。
为了解决这个问题，可以通过加入适当的离子强度调节剂来降低
离子强度，从而增加胶体金纳米颗粒的稳定性。
此外，胶体金纳米颗粒的浓度也会对免疫胶体金技术的结果产生影响。
在浓度较高时，胶体金纳米颗粒之间的空间距离较小，容易发生凝聚，从
而影响检测结果的准确性。
因此，在实验操作中，需要根据具体情况调整
胶体金纳米颗粒的浓度，以确保检测结果的可靠性。
此外，免疫胶体金技术中还涉及到抗体或抗原的结合效率。
免疫反应
的结合效率受到多种因素的影响，例如抗体或抗原的浓度、结合时间、温
度等。
因此，在进行免疫反应时，需要对这些因素进行优化，以提高结合
效率和准确性。
最后，非特异性吸附也是影响免疫胶体金技术的重要因素之一、在实
际应用中，样品中存在的其他非目标物质往往会与胶体金纳米颗粒发生非
特异性吸附，形成背景信号。
因此，在进行实验前，需要对样品进行预处理，如去除杂质、选择合适的探针等，以减少非特异性吸附的影响。
综上所述，免疫胶体金技术的结果可能受到溶液的pH值、离子强度、胶体金纳米颗粒浓度、抗体或抗原的结合效率以及非特异性吸附等影响因
素的影响。
在实际应用中，需要认真分析和处理这些影响因素，以提高免
疫胶体金技术的准确性和可靠性。