细胞实验的基本操作
细胞实验的基本操作方法
细胞实验的基本操作方法
细胞实验的基本操作方法可以包括以下步骤：
1. 细胞培养：将待实验的细胞株从冷冻保存中取出，放入无菌培养皿内，并加入适宜的培养基。
设置适当的培养条件，如温度、湿度和二氧化碳浓度等。
定期观察细胞生长情况并进行细胞的传代。
2. 细胞传代：当细胞培养达到一定密度时，将细胞通过酶消化方法从培养皿中取出，然后转移到新的培养皿中重新培养。
该方法可以获得更多的细胞数量，以维持细胞培养的供应。
3. 细胞分离：对于某些实验需要用到单独的细胞的情况，可以采用细胞分离的方法，如通过胰蛋白酶消化细胞外基质、抑制细胞黏附等，使细胞单个分散。
4. 细胞检测：使用显微镜观察细胞的形态变化，细胞生长情况和细胞颜色等。
也可以利用荧光显微镜观察细胞内的特定荧光标记物，如细胞核染色剂、蛋白质荧光探针等。
5. 细胞培养基交换：定期更换细胞培养基，以保持细胞的生长状态和代谢活性。
6. 细胞处理：根据实验需要，在培养皿中添加不同浓度或种类的化合物，如药物、抗生素等，对细胞进行处理。
7. 细胞采集：根据实验需求，利用细胞刮刀、吸球等方法将细胞从培养皿中收集起来。
8. 细胞冻存：将细胞保存在液氮中，以便长时间保存和后续使用。
9. 细胞裂解：对于某些实验需要提取细胞内的特定分子或蛋白质，可以使用细胞裂解液将细胞内组分释放出来。
10. 细胞计数：通过显微镜或细胞计数仪等方法，对细胞数量进行计数和测定。
请注意，具体细胞实验的操作方法可能因不同的实验目的和细胞类型而有所差异，上述仅为一般的基本操作方法。
在进行细胞实验时，应严格遵守相关实验室规范和安全操作指南。
细胞培养的四个步骤
细胞培养的四个步骤细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。
在显微镜下不同的细胞有不同的形态。
利用免疫荧光、流式荧光标记、免疫组化都能进行细胞观察。
培养细胞的最终目的：拿到细胞进行后续的下游实验WB、ELISA等蛋白检测DNA、RNA等分子检测凋亡、增殖、周期等功能检测原代细胞培养、冻存等细胞实验细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础，细胞养得好，实验没烦恼！原代细胞培养，细胞的传代，冻存、复苏，细胞污染的防与治，我们的经验都在这篇文章里！一、细胞培养相关设备和试剂1、细胞培养的相关设备生物安全柜的安全保护等级>超净工作台，当涉及到病毒，需要使用生物安全柜。
生物安全柜：对柜内外的安全保护超净工作台：对工作台内部的安全保护超净工作台/生物安全柜的工作流程：2、细胞培养用相关试剂①培养基作用：人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
不完全培养基：直接购买或者配置的培养基。
完全培养基：不完全培养基+血清（提供营养物质）+双抗（保证无菌环境）+其他。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞培养基有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、199等。
②血清血清的功能：生长、分化必须的物质：生长因子、激素、基础培养基中没有的微量物质、小分子营养物转运维生素、脂类、金属离子和微量元素等；促进细胞贴壁、铺展；毒素灭活，蛋白质与有毒金属和热源物质结合；提供蛋白酶抑制剂；起酸碱度缓冲液作用。
血清的分类最常用的是胎牛血清。
胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体、补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。
③胰酶常用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA胰酶：胰脏中分离，选择性的水解蛋白质中有赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，最佳作用温度37℃，PH=8.0，常用浓度0.1%—0.25%，一般用不含Ca2+、Mg2+的平衡盐缓冲液配制（PBS或Hanks），可用含有血清培养基终止胰酶对细胞的作用（观察细胞的剥离状态确定终止时间）。
细胞培养基本操作技能
细胞培养基本操作技能无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验用品1. 种类︰1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌制品。
细胞培养常规操作流程
细胞培养常规操作流程英文回答：Cell culture is a fundamental technique used in biological research and biotechnology. It involves the growth and maintenance of cells in a controlled environment, providing a platform for studying cellular behavior, drug discovery, and tissue engineering. Here, I will outline the general workflow of cell culture operations.1. Cell Line Selection:The first step in cell culture is to select an appropriate cell line for the study. This can vary depending on the research objectives. For example, if I am interested in studying cancer cells, I might choose a well-established cancer cell line like HeLa cells.2. Preparation of Culture Medium:Next, I prepare the culture medium, which provides the necessary nutrients and growth factors for the cells. The medium composition can vary depending on the cell type. For example, I might use DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) supplemented with fetal bovine serum, antibiotics, andother additives.3. Sterilization and Aseptic Technique:To maintain a sterile environment, I sterilize all the equipment and materials that will come into contact withthe cells. This includes the culture dishes, pipettes, and media bottles. I also follow aseptic techniques, such as working in a laminar flow hood and wearing gloves, to minimize the risk of contamination.4. Cell Seeding and Passage:Once the cells are ready, I seed them onto a culture dish or flask. The seeding density can vary depending onthe cell type and experimental requirements. After acertain period of growth, the cells reach confluence andneed to be passaged. This involves detaching the cells from the culture vessel, usually using trypsin, and transferring them to a new dish or flask.5. Monitoring and Maintenance:During the cell culture process, I regularly monitor the cells for their growth and overall health. This includes checking for signs of contamination, such as bacterial or fungal growth. I also maintain the cells by regularly changing the culture medium, adjusting the pH level, and providing fresh nutrients.6. Experimental Manipulations:Once the cells have reached the desired confluence and are in a healthy state, I can perform various experimental manipulations. This can include treatments with different drugs or chemicals, genetic modifications, or exposure to specific environmental conditions.7. Cell Harvesting:At the end of the experiment or when I need to collect the cells for downstream analysis, I harvest them. This involves detaching the cells from the culture dish or flask and collecting them in a centrifuge tube. The harvested cells can then be used for further analysis, such as protein or RNA extraction.中文回答：细胞培养是生物研究和生物技术中的一项基本技术。
细胞培养基本操作
细胞培养基本操作细胞复苏是将休眠的细胞重新活化，使之重新生长，进入细胞周期，进而分裂产生子细胞的过程。
细胞复苏后，可进入细胞周期，重新获得细胞类型特异的生物学功能。
一、实验前准备实验开始前，水浴箱调节至36度恒温。
取细胞完全培养基，放于水浴箱中预热。
消毒双手和超净台。
取约1ml 细胞完全培养基放于15ml 离心管中。
水浴箱调节至40度恒温，由液氮中取出冻存的细胞，迅速将冻存管投入到已经预热到40度的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，注意管口处高于水面，以免进入导致污染。
整个解冻过程最好在1分钟以内，以防融化过程中产生大量冰晶损伤细胞，约1min后冻存管内液体完全溶解，用酒精喷拭冻存管的外壁，立即拿入超净台内。
注：解冻到0度时（即冻存管里还有最后一点冰）立刻转移到含培养基的离心管中。
然后用5ml的热培养基以0.5ml的加入量逐步将细胞内的DMSO渗透出来，之后补全生于的培养基到细胞瓶中。
二、制备细胞悬液吸取细胞冻存液，置于已放入细胞完全培养基的离心管中，吸取1ml培养液加入冻存管，将剩余细胞全部吸入离心管中。
上下吹打5次，使冻存液与完全培养基充分混匀，尽量减少冻存液中DMSO 的浓度，减轻细胞损伤。
离心：1000rpm，室温离心3min。
注：细胞复苏后最好等几分钟再离心，因为冻存前加了胰酶消化，对细胞造成一定损伤，复苏后立即离心对细胞造成损伤较大。
三、细胞培养离心后，倒掉上清液，缓慢操作，不要倒掉底部的细胞沉淀。
向离心管内的细胞沉淀加入1ml 细胞完全培养基，反复吹打制成细胞悬液。
培养瓶内加入4ml 完全培养基，细胞悬液加入培养瓶内，左右前后轻轻摇动培养瓶，把细胞摇均匀，将培养瓶放入37℃，5％CO2 的培养箱中培养。
24-48 小时后换液或传代继续培养，换液传代的时间由细胞情况而定。
四、注意事项1、解冻速度要快在常温下，冻存液中的DMSO 对细胞的毒副作较大，因此，必须在一到两分钟内使冻存液完全融化。
细胞实验的基本操作
细胞实验的基本操作【细胞培养】一、细胞的复苏：非原代培养的细胞一般冻存于液氮之中，需要培养时要先从液氮中取出使之复苏。
细胞复苏的原则——快速融化：必须将冻存在－196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
具体操作如下：1、实验前准备：1.1、将水浴锅预热至37℃，并将含10%FBS的培养液置于其中预热；。
1.2、用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
1.3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。
2、取出冻存管及迅速解冻：2.1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
2.2、从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
2.3、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
3、平衡离心将细胞悬液吸到离心管中，1000～1500rpm离心3分钟；4、制备细胞悬液吸去上清液，加入10 ml培养液，用吸管轻轻吹打均匀，使细胞悬浮；5、细胞计数细胞浓度以5×105/ml为宜。
6、培养细胞将复合细胞计数要求的细胞悬液吸到培养瓶中，将培养瓶放入37℃和5％CO2的培养箱内培养（略微拧松培养瓶盖），换液的时间由细胞情况而定。
通常，除少数特别注明对DMSO 敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，可直接放入含有10-15ml（5－10倍）新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。
二、细胞的传代：培养的细胞生长至一定密度之后，由于培养液中营养逐渐消耗、代谢物逐步积累（可见到培养液变黄），而且细胞的生长空间也受到限制，就会影响到细胞的继续生存。
这时就需要分离出一部分细胞和更新培养液，这一过程就叫做传代。
细胞培养操作规范
4.一次将所有的所需要试剂、工具放入工作 台。不要半路走出工作间拿东西，传递东西 进工作室需酒精擦拭灭菌
CO2 培养箱：
1.设定的条件为 37℃ ， 5 ％CO2 。 2.使用 CO2 培养箱应注意的问题： ▫ 用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证 通气。 ▫ 保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。
▫ 箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000毫升 ，以保持箱内湿度。
控制水盘内污染的方法： 1、 定期(至少每两周一次)，更换水盘内的无菌 蒸馏水或无菌去离子水。 2、 在水盘内添加适量硫酸铜，预防真菌污染。 配制方法：20g无水硫酸铜＋5ml浓硫酸＋1L 灭菌纯水。 3、 水盘内添加适量抗生素。 4、定期为培养箱（含水盘）进行一次高温灭菌 。
细胞消化时间的控制：
4:细胞冻存： 吸出旧培养液加PBS冲洗两次 胰酶消化 加培养基中止消化，（以上步骤同细胞传代 ） 细胞计数 离心收集细胞，吸弃上清，加入冻存液调整细 胞密度至1×106个/ml
将细胞移入冻存管，写好标签（细胞种类，冻存时间 ）4 ℃15-30分钟，-20 ℃1-2小时，-80 ℃
消毒： 消毒前常用的包装：牛皮纸、棉布、铝饭盒包 装 高压蒸汽消毒：121℃ ，维持20-30分钟。
三：细胞培养方法
1.细胞复苏方法：
从 液 氮 中 取 出 冷 冻 管 ， 迅 速 投 入 37℃ 水 浴中，甩动冻存管，使其融化（1分钟左右）； 5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上； 1000转低速离心5分钟； 去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
血清： 常用血清种类：胎牛血清、新生牛血清、小牛血清 血清的灭活（消除补体活性） 56℃ ，30 分钟。 使用浓度：5%-20%，一般10% 血清的消毒：过滤除菌 血清解冻步骤：–20℃ 或–70℃至4℃冰箱溶解一 天，至室温下全溶后再分装，一般用15ml无菌 离心管分装。
细胞培养与病毒培养实验步骤
实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养一、实验目的了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特征，掌握细胞的传代培养方法、病毒接种方法及收毒方法。
二、常用细胞的种类BHK-21：仓鼠肾传代细胞PK-15：猪肾传代细胞IBRS-2：猪肾传代细胞Hela：人的子宫瘤细胞Vero：非洲绿猴肾细胞Marc-145：来源于Vero细胞TK-143：人的胸苷激酶阴性细胞Sf9：昆虫细胞三、材料1、100ml细胞瓶、吸管、吸球、96孔细胞培养板、加样器、枪头2、BHK-21（baby hamster kidney）细胞3、0.25%胰酶4、生长液：含10%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM维持液：含2-5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM5、伪狂犬病病毒液（PRV）四、传代细胞培养的条件要求1）细胞密度：2-3×105个/ml2）pH范围最适pH7.0-7.4，耐受pH6.6-7.83）培养温度哺乳动物细胞一般为37℃昆虫细胞28-30℃五、常用细胞分散剂与作用原理1、胰酶使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解，导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。
2、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：与二价钙、镁离子结合，从而使细胞分散。
3、灰色链丝菌酶：由灰色链丝菌提取的一种酶制剂，是蛋白酶、氨肽酶和羧肽酶的混合物。
六、营养液1、人工综合营养液氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、辅酶、嘌呤、嘧啶、辅助生长因子。
2、血清1）血清的种类胎牛血清、新生犊牛血清、成年牛血清、马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清，其中以新生犊牛血清使用最为广泛。
2）血清的处理无菌采集，过滤除菌。
用前56℃灭活30min。
3）血清的作用A、能提供细胞生存、生长和增生所必须的生长调节因子。
B、能补充基础培养液中没有或量不足的营养成分。
C、含有一些可供贴壁依赖型细胞在培养器皿表面贴附和铺展的生长基质成分。
细胞培养和实验操作技巧
细胞培养和实验操作技巧一、细胞培养基本操作：1、基本试剂：培养基、血清、双抗、L-Glutamine、PBS（或D-Hanks）、胰酶。
有些培养基中含有L-Glumamine，因此可不必加，不然需加入2mM L-Glutamine。
血清对于维持培养细胞的生存和促进细胞增殖起着关键性作用。
常见的血清有胎牛血清和小牛血清，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
一般选用血清种类可以根据ATCC及实验需要来选择。
胎牛和小牛血清可选择多种不同批号的小牛血清进行小样分析。
一旦确定某一厂家的某一批号小牛血清后，就保持应用至实验完成。
可保证细胞状态和实验条件的稳定性。
2、培养耗材：包括培养瓶、培养皿等，选择TC-treated 培养耗材，保证细胞贴壁良好，一些特殊细胞需要培养耗材经特殊处理，如明胶、胶原包被。
成像耗材包括6、12、24、48、96、384、1536孔板，也需要相应处理。
普通多孔板厚度约为1um，适合于20倍及以下镜头。
为达到更好的成像效果，当需要使用40倍、63倍镜时推荐用薄底板，PerkinElmer的CellCarrier 板，板底厚度只有0.19um，可满足所有物镜的需要。
3、设备：培养箱、超净台等4、细胞均匀铺板的“秘密”：细胞加入微孔板后应立即振匀，振匀方法推荐“前后-左右”法。
即把培养板方在桌面上，两手扶住板，先快速前后振动8-10次，振幅在15cm-20cm。
然后将板水平转动90度，重复刚才的动作。
振动完后平拿板，轻轻放入培养箱内。
2小时内不要碰触。
二、常用染料选择：1、细胞核染料：DAPI（Ex/Em：358nm/461nm）、hoechst33342（Ex/Em：350nm/461nm）、DRAQ5 （Ex/Em：647nm/681nm）。
2、细胞骨架：Actin一般选用 phalloidin 标记FITC、或AlexaFluo系列荧光基团，tubulin 用抗体标记。
细胞实验基本操作与实验室要求
次氯酸钙
9~10
次氯酸钠
2
漂白粉 饱和溶液1~2
溴水
10~12
过氧化氢 0.1~1
升汞
70~75
酒精 4~5(mg/L)
抗生素
1
硝酸银
去除难易
易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难
消毒时间(min)
5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 5~30
效果
很好 很好 很好 很好
3．药品存贮和配制仪器设备
4．观察分析仪器设备
显微镜（高倍、倒置、实体解剖和荧光显微镜等） 及配套照相系统、解剖镜、离心机、液氮容器、 恒温箱、精密天平等。
5．其它仪器设备，如流式细胞仪，酶标仪等。
10
精选ppt
11
精选ppt
12
精选ppt
二氧化碳细胞培养箱
13
精选ppt
14
精选ppt
15
补充因子浓度补充因子浓度激素和生长因子胰岛素胰高血糖素促卵泡激素生长激素生长调节素c表皮生长因子神经生长因子甲状旁腺激素孕酮睾酮促甲状腺激素释放激素促黄体生长激素释放激素前列腺素f12前列腺素e氢化可的松成纤维生长因子雌二醇510gml0055gml0055gml00505gml1100ngml1100ngml110ngml110ngml1100nmoll110nmoll110ngml110ngml1100ngml1100ngml1100pmoll10100nmoll110ngml110nmoll微量元素和低分子量营养成分na抗坏血酸生育酚维生素a亚麻油酸结合蛋白无脂肪酸牛血清白蛋白转铁蛋白贴壁和铺展因子纤粘蛋白层粘连蛋白冷析球蛋白血清扩散因子胎球蛋白胶原和聚赖氨酸10100nmoll05moll100moll10gl10gl50gl052mgml05100gml01mgml01mgml055mgml055mgml015mgml包盖基质无血清培养基的补充成分4平衡盐溶液两种常用的平衡盐缓冲液
标准操作规程(SOP)——细胞计数
一、目的细胞计数法是细胞学实验中进行细胞计数的基本方法，通过细胞计数，能够保证实验的准确性、稳定性和可重复性。
二、范围适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行细胞计数的操作。
三、定义细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。
一般利用计数板（红细胞计数板）进行。
即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。
不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
四、程序（一）生物安全要求实验室生物安全级别：BSL-2（二）材料1．生长成片的MDCK 细胞2．血细胞计数板3．1mL 、10mL 无菌移液管4．台盼蓝（0.4% PBS 溶液）建议：经常检查试剂使用的有效期（三）实验步骤1．消化细胞（方法见MDCK 细胞培养标准操作规程）。
2．用血细胞计数板来计算细胞悬液中的细胞数，需要充分分散细胞。
3．在18μL 台盼蓝（0.4% PBS 溶液）中加入2μL 细胞悬液，混匀，成10倍标准操作规程（SOP稀释。
死细胞被染成蓝色。
4．将以上细胞悬液加入到血球计数板的载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下计数。
5．计算计数室四个角上三线包围的正方形中的活细胞，压线的细胞计数遵循计数原则，数上不数下，数左不数右。
如果观察到成片或者成团的细胞，应重新悬浮细胞液，重新计数。
用以下公式计算每毫升悬液中活细胞的数量。
C=4个角正方形内的活细胞总数/4×104×10C：每毫升活细胞数；五、参考文件《流行性感冒诊断标准》。
细胞培养标准操作程序
细胞培养标准操作程序（SOP）1．目的：为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。
2．适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。
3．操作规程：培养液、PBS、胰蛋白酶的配制1000ml培养液的配制1、准备用品：培养粉、1000ml烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH仪、2～3天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCO3粉、1000ml无菌玻璃瓶（100ml×10个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3个过滤器、注射器。
紫外线照台30min。
2、将培养粉用900ml新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。
3、充分搅拌，按说明添加成分（如Invitrogen公司的RPMI-1640配制1000ml需加NaHCO3粉，Invitrogen 公司的DMEM需加NaHCO3粉等），再充分搅拌。
无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。
4、用1M（1mol/L）HCl 调PH至左右（细胞适宜在～生长，配制好后PH值会升高～，故配时调PH 至左右）。
5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到1000ml。
6、配青霉素80万/瓶+ 4ml 蒸馏水溶解配链霉素100万/瓶+ 4ml 蒸馏水溶解取青霉素和链霉素加入到1000ml培养液中，使其终浓度均为100U/ml，充分搅拌混匀。
7、在无菌操作台里用的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到100ml玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20℃保存备用。
注意：（1）配制培养液及调节培养液PH值所使用的HCl和（或）NaOH均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。
一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。
（2）准备的100ml×10个玻璃瓶必须事先高压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。
PBS（平衡盐溶液）的配制NaCl 8gKCl ＋新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至1000mlNa2HPO4*H2OKH2PO4（1）无需调PH值，其成分溶解后PH为，不需除菌滤膜过滤除菌，放于4℃保存，用前直接高压灭菌（高压时，装PBS的瓶子的瓶盖要插针头!）（2）Na2HPO4*H2O 则Na2HPO4*12 H2O需（3）如欲配制500ml，以上成分减半即可%胰蛋白酶的配制胰蛋白酶粉EDTA（乙二胺四乙酸二钠）NaClKCl` +新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至1000ML NaHCO3Glucose(葡萄糖)酚红（1）配出来的PH值为，在PH值～范围内，故不需调PH值。
细胞培养的操作流程
实验题目：细胞传代实验材料：细胞培养箱，安全柜，手套，酒精灯，吸管，移液管（5ml，10ml），50mL离心管，培养瓶（25cm2），移液枪，离心机，计时器，真空泵，抽滤瓶，水浴锅，记号笔，冰箱实验原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
实验步骤：以Hela细胞为例说明具体实验操作步骤一．实验前准备工作：进细胞室先换拖鞋，带上手套75%的酒精进行表面消毒；检查酒精灯有无95%酒精，电枪有无电；将实验过程中用到的实验器材（包括培养瓶、50mL离心管、移液管）放于安全柜里，实验前安全柜开紫外照15~20min；将细胞培养液放于37℃水浴中预热；抽滤瓶与真空泵相连，废弃缸套袋。
二．.准备实验：先关闭紫外等30min后再进行实验；75%酒精喷于纸上，将超净工作台仔细擦试干净；点燃酒精灯，小心的将细胞从孵箱中拿出。
1．吸除旧的DMEM培养液：拿出吸管（要拿吸管的上端），插入与抽滤瓶相连的橡胶管中，在酒精灯外焰灼烧灭菌，细胞培养瓶倾斜将吸管插入瓶底部一角，吸出旧的DMEM培养液，将用后的吸管弃于废弃缸里。
注意：一定要吸除干净，否则消化时间过长，细胞损伤过大。
2．消化：拿出5mL移液管，插入电枪中，酒精灯过火灼烧，吸取2mL 0.25%胰酶加入培养瓶中，混匀，放于37℃孵箱中消化5-6min。
取下用后的移液管。
3．中和：从孵箱中拿出培养瓶，显微镜下观察细胞是否被完全消化下来，5mL灭菌后移液管加入3mLDMEM培养液终止消化。
反复吹打混匀；吸出中和液转移到50mL离心管中。
4．离心收集细胞：配平后离心200×g，3min。
将新的DMEM培养液加入新培养瓶中，2mL／瓶（培养瓶底面积为25cm2）。
5．重悬细胞：离心后吸出中和液，（先吸出表面泡沫，一定注意不要吸出细胞）。
细胞培养标准流程
细胞间基本规定每次操作结束后开启超净台紫外（30 min）和房间大紫外（30 min)。
显微镜开启使用后将光调暗，最后一个操作者将显微镜关闭。
超净台用完收拾干净，移液器、盒子等摆放整齐。
带走空盒子、细胞圆盘以及封口膜等任何因你而产生的垃圾.细胞培养盘至少需备注：所属者，细胞系名称细胞间冰箱内物品至少需备注：所属者，物品名称。
基培需写上开启时间。
细胞培养标准流程1、细胞换液、传代（以圆盘培养为例）Note：所有用于培养细胞的液体均需提取20-30分钟从冰箱取出恢复到室温或置于37℃的水浴箱内。
所有物品（包括双手）进入安全柜之前要酒精消毒。
步骤：1.观察：高倍镜下观察细胞状态、密度以及是否染菌2。
弃旧：细胞生长融合达90％时，吸出培养基3.漂洗：PBS（2mL）漂洗1—2次4。
消化：加入1ml 0。
25％胰蛋白酶，轻轻晃动圆盘让所有细胞接触到胰酶，后吸去胰酶计时CO2 放置40s-1min，，轻轻拍打圆盘侧壁促使细胞脱壁。
5.终止：吸弃胰酶后加入2ml含10％FBS的完全培养基终止消化。
6。
吹悬：轻轻吹打混匀，(倒置显微镜下观察细胞完全脱壁,呈卵圆形)，吹打成单细胞悬液后按1：2 或1：3 比例传代接种于新培养皿.再加入10ml全培。
（大盘10ml全培，小盘6ml全培）（细胞生长快留30％，慢40%-50%；其余细胞可提取蛋白或RNA）7。
培养:每天或每两天更换一次培养基,直至细胞生长至融合时再次进行传代，每日在倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况.PS：六孔板一般加培养基2300μL/孔。
2、细胞转染TurboFect 转染试剂转染(用于质粒的转染,说明书附后）细胞接板24 h 后转染。
转染时细胞密度需达到70-90%。
以6 孔板为例，转染前细胞先换液,加4ml全培。
取1.5 ml 离心管，加入400 μL 无血清无双抗DMEM 培养液，加入质粒2 μg，混匀后静置5 min，再转染试剂4 μL,混匀(转染试剂是质粒的2倍），室温静置15－20 min。
细胞计数的实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞计数的基本原理和操作方法。
2. 学会使用血细胞计数板进行细胞计数。
3. 了解细胞密度与培养条件的关系。
二、实验原理细胞计数是细胞生物学和医学研究中的重要技术之一，通过计数细胞数量，可以了解细胞生长、增殖和衰老等生物学过程。
细胞计数原理通常采用显微镜直接计数法，即将一定稀释的细胞悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数。
三、实验材料1. 显微镜2. 血球计数板3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬浮液四、实验步骤1. 准备计数板：将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
2. 制备细胞悬液：将细胞悬浮液吸出少许，注射在盖片边缘，使细胞悬液自然流至计数板内。
3. 充池：用微量移液管吸取细胞悬液，将悬液均匀地充入计数板的计数室中。
4. 计数：于显微镜下观察，计数四个大方格内的细胞数量。
通常只用四周大方格内的细胞数进行计数。
5. 计算：求出每个大方格的平均值，即得出一个大方格中的平均细胞数。
根据公式换算成1ml菌液中的总细胞数。
五、实验结果本次实验采用显微镜直接计数法对细胞悬浮液进行计数，计数结果如下：- 平均每个大方格内的细胞数为N个。
- 菌液稀释倍数为M倍。
- 1ml菌液中的总菌数为：10000xMxN/10000MN（个）。
六、实验分析1. 细胞计数是细胞生物学和医学研究中的重要技术，通过对细胞数量的检测，可以了解细胞生长、增殖和衰老等生物学过程。
2. 本实验采用显微镜直接计数法，操作简便、快速、直观，适用于细胞数量检测。
3. 细胞密度与培养条件密切相关，过高或过低的细胞密度都会影响细胞的生长和增殖。
七、实验总结本次实验成功掌握了细胞计数的基本原理和操作方法，学会了使用血细胞计数板进行细胞计数。
通过实验，我们了解了细胞密度与培养条件的关系，为后续的细胞生物学和医学研究奠定了基础。
八、注意事项1. 保证计数板、载玻片、盖玻片的清洁，以防影响实验结果的准确性。
细胞实验操作基本流程
细胞实验操作基本流程（基于明确的细胞试验计划）1. 实验物品准备1.1 实验耗材准备书面准备：明确列出使用物品名称、数量，报请老师批准。
操作准备：物品清洗、干燥、打包灭菌、合理放置。
1.2 实验试剂准备书面准备：明确列出使用物品名称、数量，报请老师批准。
操作准备：选择合适的物品存放地点；使用前集中放置；需要配制的试剂根据有无灭菌需要提前配好；需要无菌配制的试剂在无菌操作要求下配制。
2. 实验预约2.1 操作预约：401室在预约本上登记；分析测试中心向屈老师交申请单后在预约本上登记。
2.2 细胞冻存复苏预约：每周定时开放液氮罐，由负责同学在群里通知。
2.3 细胞检测预约：填写申请单，向主管老师申请。
3. 细胞房环境检查3.1 清洁消毒：操作前后有无清洁台面、地面，并行紫外线杀菌10-15分钟。
3.2 仪器设备：运行是否正常，有无灯光闪烁报警或标志警示，有无异常状况。
3.3 台面：是否洁净无污垢，有无多余物品放置，必要物品是否放置齐备。
4. 清洁准备4.1 洗手：肥皂洗——5‰新洁尔灭泡手10秒——70%酒精喷手4.2台面物品放置：正中：酒精灯；左侧：吸管及其他耗材盒子；右侧：试管架、大镊子、酒精棉球瓶、打火机、移液器；左上方：试剂瓶；右上方：废液缸5. 实验操作5.1 基本操作：换液、传代、冻存、接板、复苏、细胞计数、细胞观察5.2 垃圾处理：培养基、缓冲液等使用过的无害废液用废液缸装；固体垃圾丢入垃圾筐中6. 实验善后6.1 可回收实验耗材处理：吸管、试管、离心管等可反复使用的耗材按标准流程清洗。
6.2 不可回收实验废物处理6.2.1 酸碱类废液分类倒入废液瓶存放，由学院通知处理6.2.2 无害废液弃入水槽，大量流水冲洗6.2.3 固体垃圾放入垃圾袋，丢入垃圾桶6.3 种子细胞处理：实验过程中需要保种或实验完成后仍有未用完的种子细胞，按标准流程进行细胞冻存，以待后续使用。
6.4 实验试剂处理：未用完的试剂重新放回合适的存放地点；如试剂污染或变质，按实验废物处理。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验技术实验医学研究中心编订2013-08实验一实验准备【目的】了解组织培养中实验器材的处理过程。
【概述】目前多数的实验室还达不到用后即弃的条件，常要反复使用一些器皿，在组织细胞培养中器材的清洗、消毒灭菌仍是重要环节，是一项繁重而艰苦的工作,而且工作量很大, 其主要目的是去除器皿上杂质及其对细胞生长有影响的物质及各种微生物。
【材料】1.玻璃器皿：培养瓶，血清瓶，试管，吸管2.塑料器皿：枪头，EP管【操作步骤】（一）玻璃器皿的处理玻璃器皿用于培养细胞、细胞冻存、培养用液的存放等。
提供细胞生长的玻璃表面不但要清洁干净，而且要带适当电荷。
苛性碱清洗剂会使玻璃表面带的电荷不适于细胞附着，需以HCL或H2SO4中和。
清洗玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，且不能残留任何毒性物质。
为了保证清洗的质量，一般玻璃器皿的处理分为六个个步骤。
1.浸泡：新的玻璃器皿首先用自来水初步刷洗，5％稀盐酸溶液中浸泡过夜。
使用过的玻璃器皿用1‰的新洁尔灭或清水浸泡。
泡时应将器皿完全浸入水中，使水进入器皿内而无气泡空隙遗留。
2.刷洗：一般多用毛刷和洗涤剂或洗衣粉进行洗涤，以去除器皿内外表面的杂质。
3.浸酸：酸就是清洁液，由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水桉一定比例配制而成,具有很强的氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。
经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的未刷洗掉的微量杂质可被4.流水灌满、倒掉，须重复十次以上，然后，再用蒸馏水漂洗2～3次，最后用三蒸水漂洗一次。
烤箱内烘干备用。
5.包装：包装的目的是防止消毒灭菌后再次受到污染，所以经清洗烤干的器材应严格包装后再进行消毒灭菌处理。
6.消毒灭菌：包括干热消毒和湿热消毒。
干热消毒一般在烤箱中进行，主要用于消毒玻璃器皿，需加温到160℃，保持90～120min方能杀死芽孢。
湿热消毒是一种有效的消毒方法,一般使用高压蒸汽灭菌器进行消毒。
因物品不同，其有效灭菌压力和时间不同，一般物品（如布类、金属器械、玻璃器皿等）消毒的要求是101.33kpa（相当于15磅,121℃）20min，某些培养用液、橡胶制品、塑料器皿等要求为67.55kpa (相当于10磅,115℃)10min。
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细胞实验的基本操作【细胞培养】一、细胞的复苏：非原代培养的细胞一般冻存于液氮之中，需要培养时要先从液氮中取出使之复苏。
细胞复苏的原则——快速融化：必须将冻存在－196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
具体操作如下：1、实验前准备：1.1、将水浴锅预热至37℃，并将含10%FBS的培养液置于其中预热；。
1.2、用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
1.3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。
2、取出冻存管及迅速解冻：2.1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
2.2、从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
2.3、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
3、平衡离心将细胞悬液吸到离心管中，1000～1500rpm离心3分钟；4、制备细胞悬液吸去上清液，加入10 ml培养液，用吸管轻轻吹打均匀，使细胞悬浮；5、细胞计数细胞浓度以5×105/ml为宜。
6、培养细胞将复合细胞计数要求的细胞悬液吸到培养瓶中，将培养瓶放入37℃和5％CO2的培养箱内培养（略微拧松培养瓶盖），换液的时间由细胞情况而定。
通常，除少数特别注明对DMSO 敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，可直接放入含有10-15ml（5－10倍）新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。
二、细胞的传代：培养的细胞生长至一定密度之后，由于培养液中营养逐渐消耗、代谢物逐步积累（可见到培养液变黄），而且细胞的生长空间也受到限制，就会影响到细胞的继续生存。
这时就需要分离出一部分细胞和更新培养液，这一过程就叫做传代。
1、贴壁细胞的传代具体操作如下：1.1、传代前准备：1.1.1、预热培养用液：把装有培养液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
1.1.2、用75％酒精擦拭双手和经过紫外线照射的超净工作台1.1.3、正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。
1.1.4、点燃酒精灯：注意火焰不能太小。
1.1.5、准备好将要使用的已灭菌的空培养瓶。
1.1.6、取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
1.1.7、从培养箱内取出细胞，注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞，并做好记录。
1.1.8、细胞培养瓶经用75％酒精擦拭后，再放入超净台。
1.2、胰蛋白酶消化：1.2.1、将瓶盖过酒精灯火焰消毒后，打开瓶盖，靠近酒精灯，小心吸出旧培养液，用PBS清洗2－3次，沿壁（无细胞的一面）缓缓加入适量消化液（胰蛋白酶液），轻轻摇晃。
注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。
1.2.2、显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。
1.3、吹打分散细胞：1.3.1、弃去大部分消化液（仅留少量在瓶内），并轻轻拍打培养瓶，使细胞分散，然后加入新鲜的培养液，再用吸管轻轻吹打成细胞悬液（尽可能不要出现泡沫，否则对细胞有损伤〕1.4、分装稀释细胞1.4.1、将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。
1.4.2、倒置显微镜下观察细胞量，必要时计数。
注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。
最后在瓶上做好标记，如细胞代数、日期及姓名等。
1.5、继续培养：1.5.1、用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。
传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。
当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。
2、悬浮细胞的传代悬浮细胞可以直接将培养瓶中的液体吸掉，只留下少量，然后加入新鲜培养液即可。
当细胞悬液中碎片或颗粒物较多，感觉到比较脏时，可以将悬液移到离心管内，1000～1500rpm离心3分钟，弃上清，加入约2ml培养液，吹打至均匀，滴加2-3滴至已加入新鲜培养液的培养瓶中。
然后置于二氧化碳培养箱中培养（拧松培养瓶盖）。
三、细胞的冻存细胞冻存的原则是要逐步缓慢降温，以避免细胞内部形成冰晶对细胞造成伤害。
1、具体操作如下：1.1、从增值期到形成致密单层以前的细胞都可以用于冻存，但最好选择对数增长期细胞，已长满的细胞冻存复苏后生存率低。
在冻存前一天最好换一次培养液。
1.2、贴壁细胞经消化、离心（1000～1500rpm，5min）收集，悬浮细胞经离心收集；1.3、大约106个细胞加入1ml冻存液（10％DMSO+90%血清），用吸管吹打，使细胞分散成单细胞悬液；1.4、加入到冻存管中，每个冻存管加1－1.5ml的细胞悬液；密封；1.5、在冻存管上标明细胞名称及冻存日期；1.6、将冻存管直立放置于塑料盒或纸盒内，管置于4℃半小时，然后置于-20℃两小时，再置于-70℃两小时，然后置于液氮上方过夜；第二天将细胞置于液氮中；1.7、记下冻存管存放的位置，作好冻存记录（冻存的细胞名称、代数、冻存日期等）。
2、注意事项：2.1、使用DMSO前，不需要进行高压灭菌，它本身就有灭菌的作用。
高压灭菌反而会破华它的分子结构，以至于降低冷冻保护效果。
在常温下，DMSO对人体有害，故在配制时最好戴上手套操作。
2.2、不宜将冻存细胞放置在0℃～-60℃这一温度范围内过久，低温损伤主要发生在这一温度区内，是“危险温区”。
2.3、注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。
2.4、细胞在液氮中贮存的时间理论上是无限的。
但为妥善起见，特别是很多未被冻存过的细胞在首次冻存后要在短期内复苏一次，观察细胞对冻存的适应性。
已建系的细胞最好也每年取一支复苏一次后，再继续冻存。
四、细胞计数实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作如下：1、准备工作：取一瓶传代的细胞，按上述二的传代方法繁殖细胞，待长成单层后以使用。
2、细胞悬液制备：细胞悬液的制备方法：用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液（或Hanks液或PBS等平衡盐溶液），吹打制成待测单细胞悬液。
3、细胞计数：2.1、盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。
2.2、制备计数用的细胞悬液：用吸管吸适量细胞悬液（如5滴）到一离心管中，加入等体积台盼蓝染液（0.4％）或苯胺黑，活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。
若仅是单纯的进行细胞计数，不考虑细胞的活力，则可省略台盼蓝染色步骤。
2.3、、将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
2.4、统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大格（每个大格含有16个中铬）中没有被染液染上色的细胞数目。
2.5、计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度：（细胞悬液的细胞数）/ml＝（四个大格子细胞数/4) ×2×104说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以2因为细胞悬液于染液是1：1稀释。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3 ；而1ml＝1000mm3细胞计数要点：①进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；②要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。
③取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确；④数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。
如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。
⑤操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。
注：4％台盼蓝母液的配制：称取4克台盼蓝，加入少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100毫升，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时，用PBS稀释至0.4％。
五、细胞活力的测定1.染料排斥试验：其原理是细胞损伤或死亡时，某些染料可穿透细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色。
而活细胞则能阻止该染料进入细胞内。
借此可鉴别死细胞和活细胞。
常用的染料有台盼蓝、伊红Y和苯胺黑等。
以台盼蓝染色为例。
步骤同上述细胞计数的操作步骤。
注意以下几点:①计数：在3－10min内，用血球计数板分别计数活细胞和死细胞（死细胞被染成淡蓝色，活细胞则拒染）。
②台盼蓝染色时，时间不宜太长，否则活细胞也会着色，从而干扰计数。
③活细胞率（％）＝活细胞总数/(活细胞总数＋死细胞总数)×100％2、MTT比色实验：可测定测药物或病毒的IC50原理：活细胞线粒体琥珀酸脱氢酶催化四甲基偶氮唑盐(MTT)，还原成紫色不溶性结晶物，沉积于细胞中。
用酸性异丙醇或DMSO溶解后，于酶标仪上测定光吸收值。
紫色不溶性结晶物形成的多少与活细胞数目和功能状态相关。
2.1、将细胞接种于96孔板上，密度为大约105个/ml，每孔接种100μl；2.2、培养至对数生长期加入待测样品；2.3、作用一定的时间之后，加入三蒸水配制的5μg/ml的MTT溶液，每孔20μl；2.4、37℃温育4小时；2.5、取出培养板，小心吸去上清，注意不要吸掉底部的蓝紫色沉淀；如果是悬浮细胞则用板离心机离心后除去上清；2.6、每孔加入100μl的DMSO，摇床上摇动30分钟以使沉淀溶解；2.7、用酶联免疫检测仪（DNA Expert）在595nm（或490nm）波长处检测96孔平板中每孔细胞的光密度值（OD值），按下列公式计算药物或病毒对细胞生长的抑制率：细胞存活率（％）＝治疗组OD值/ 对照组OD值×100％2.8、求出各药物（或病毒）浓度下的OD值占对照OD值的百分比，用此百分比对药物（或病毒）浓度作图；在所得的曲线上，百分比值为50时所对应的浓度就是IC50值。
或根据各浓度下细胞的存活率，采用Logit法计算IC50。
六、细胞的运输装运细胞的方法有两种：1、冷冻贮存运输即利用特殊内内盛液氮或干冰冻存，保存效果较好，但较麻烦，且不能长时间运输，多需空运。
2、充液法2.1、选生长状态良好的细胞，去掉培养液，充满新培养液，液量要达到培养瓶颈部，拧紧螺帽或塞以胶塞，保留微量空气。