虎杖中醌类物质的提取分离与鉴定
虎杖中羟基蒽醌的提取分离实验报告
虎杖中羟基蒽醌的提取分离实验报告好吧，今天咱们来聊聊虎杖，没错，就是那种听起来有点陌生但又不乏神秘的植物。
虎杖可不是普通的草，它的根部可是大有来头，里面藏着不少对身体有益的东西，尤其是羟基蒽醌。
这玩意儿可是一种化合物，听起来高大上，但实际上咱们提取它的过程就像做一道简单的家常菜，过程简单而有趣，今天就给大家讲讲我是如何“做”这道菜的。
咱们得找点虎杖，哈哈，别误会，不是要你去山里找。
超市或者中药店都有卖，价格还不贵。
把虎杖买回来，拿到厨房，得先把它们清洗干净。
想想这过程，就像给小朋友洗手一样，洗得干干净净，才能开始接下来的步骤。
洗完之后，把虎杖切成小段，切的时候别心急，慢慢来，免得切得一团乱，手指也被划伤，那可就得不偿失了。
咱们就要用水煮这些虎杖段。
记得水要多放点，不然煮得时候容易糊底。
把切好的虎杖段放进锅里，火开到中火，别忘了搅搅。
这个时候，你可以边等边想象下羟基蒽醌的样子，心里盘算着等会提取出来要做什么，真是令人期待呢。
水开了之后，咱们就要让它煮一段时间，差不多四五十分钟吧。
时间一到，整个厨房都是虎杖那种独特的香味，简直让人垂涎欲滴，忍不住想尝一口。
煮好了之后，得把液体和固体分开。
用个滤网把液体过滤出来，哎呀，那个过程可真有意思，就像在做科学实验。
看着清澈的液体流出来，心里那个成就感呀，简直像小孩儿拿到了糖果一样。
这个液体就是咱们的提取物了，里面就有羟基蒽醌。
咱们得让这个液体蒸发掉一部分水分，浓缩一下，让羟基蒽醌的含量更高。
你可以把液体倒进小锅里，开小火慢慢蒸发，记得时不时去看看，不然一不小心就焦了，那可就糟了。
水分蒸发到一定程度后，咱们的提取物就变得稠稠的，像是蜜糖一样。
别急，这时候可以把它放到一个小瓶子里，晾凉。
等它完全凉了之后，就能看到一些沉淀物，那就是咱们的羟基蒽醌了。
想想这个过程，真是让人心潮澎湃，仿佛自己成了个小小科学家，做出了伟大的发现。
可以想象，有一天，你把这个提取物拿给朋友们，说：“看，我自己提取的羟基蒽醌，厉害吧？”他们肯定目瞪口呆，羡慕得不行。
虎杖中蒽醌类成分的提取分离鉴定及含量测定
氢氧化铝-2%氢氧化铵混合碱分次提取至无色，合并碱
液，用少量氯仿洗涤，碱液调整至一定体积，碱液若不
澄清，垂熔漏斗过滤，滤液在沸水浴中加热4分钟，用
冷水冷却至室温，30分钟后在490nm比色，由标准曲线
计算含量。
四、 实验讨论及注意事项
1.常压蒸馏回收溶剂之前，应该加入沸石，以免暴 沸。
2.什么是梯度pH萃取法，适用于哪些物质的分离？ 试解释本次试验中pH萃取法应该注意哪些事项？
2、薄层色谱(TLC)： 吸附剂：硅胶G－CMCNa板，用前活化 展开剂：石油醚—乙酸乙酯 (2：1) 样 品：a,b,c乙醇液，大黄素标准品 显 色：①先置可见光下观察色斑， 后紫外灯下观察荧光斑点 ②再用2%NaOH喷洒显色 结果及计算比移值
（三）含量测定
虎杖中游离蒽醌的测定
▪ 1. 标准曲线的制备
三、实验内容
(一)虎杖中蒽醌苷元的提取与分离 1、虎杖中蒽醌类成分的提取： 2、蒽醌苷与苷元的分离： 3、不同酸性蒽醌苷元的分离（梯度pH萃取法）
流程图
（二）鉴定
1、颜色反应 (l)、取以上a,b,c少量，分别置于三支试管中，
加少量乙醇溶解后，加2％NaOH溶液数滴，观察颜 色变化。 （2）、取以上a,b,c少量，分别置于三支试管中， 加少量乙醇溶解后，再滴加1%醋酸镁的乙醇溶液 数滴，观察颜色变化。 （3）、取以上a,b,c少量，分别置于三支试管中， 加少量乙醇溶解后，再滴加1%三氯化铁的乙醇溶 液数滴，观察颜色变化。
3.两相萃取时，不可猛力振摇，只能轻轻旋转摇动， 以免造成严重乳化现象而影响分层。如果出现乳 化现象，如何破除？
4.TLC鉴定a,b,c时，解释三者相对比移值的大小关 系？
▪
称取1,8-二羟基蒽醌25mg置于200ml容量瓶中，乙
实验二虎杖中蒽醌类成分的提取
5%NaHCO3萃取2次，每次40ml
水层（紫红色）乙醚层
HClpH=25%Na2CO3萃取数次，每次40ml
大黄酸沉淀（粗品）
水层（红色）乙醚层
HClpH=22% NaOH萃取2次，每次40ml
大黄素沉淀（粗品）水层（红色）
HClpH=2
大黄酚和大黄素甲醚
七、实验结果
八、实验讨论
九、思考题
一、思考题
（2）中等酸性成分——大黄素的分离：碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液（测5%碳酸钠水溶液的pH值）萃取5～9次，每次40ml，直至萃取液较浅为止。合并碳酸钠提取液，小心加盐酸调pH2，放置，抽滤，水洗沉淀至中性，抽干，干燥称重。计算得率。
（3）弱酸性成分——大黄酚和大黄素甲醚混合物的提取将Na2CO3提取过的乙醚液，用2%的NaOH水溶液萃取，每次40ml，萃取2次，合并碱液，滴加20%的HCl调pH1-2，放置沉淀、抽滤、水洗、干燥称重，得大黄酚和大黄素甲醚混合物。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
四、实验内容
1.亲脂性成分——羟基蒽醌类的提取和分离
2.羟基蒽醌类的鉴定
（1）显色反应
① Borntrager’s反应；
8．β-谷甾醇
9．鞣质：属缩合鞣质，可溶于醇及水，不溶于苯、乙醚、氯仿等。
10、其他虎杖中还含有少量大黄素-8-葡萄糖苷、甾醇等。
结构：
大黄素R=OH二苯乙烯衍生物
大黄酚R=H
大黄素甲醚R=OCH3
白黎芦醇R=H
白黎芦醇R=C3H11O5
虎杖中蒽醌类成分的提取分离鉴定及含量测定
2、薄层色谱(TLC)： 吸附剂：硅胶G－CMCNa板，用前活化 展开剂：石油醚—乙酸乙酯 (2：1) 样 品：a,b,c乙醇液，大黄素标准品 显 色：①先置可见光下观察色斑， 后紫外灯下观察荧光斑点 ②再用2%NaOH喷洒显色 结果及计算比移值
（三）含量测定
虎杖中游离蒽醌的测定 1. 标准曲线的制备 称取1,8-二羟基蒽醌25mg置于200ml容量瓶中，乙醚溶 解并定容，取此溶液0.05~5.00ml，分别置于25ml容量瓶 中，水浴上挥去乙醚，加5%氢氧化铝-2%氢氧化铵混 合碱液至刻度，在490nm测定光密度，绘制标准曲线。 2. 样品测定 取生药粉末（过40目）0.2g置于索氏提取器中，氯仿回 流提取至无色，将氯仿液置于分液漏斗中， 以5%氢氧 化铝-2%氢氧化铵混合碱分次提取至无色，合并碱液， 用少量氯仿洗涤，碱液调整至一定体积，碱液若不澄清， 垂熔漏斗过滤，滤液在沸水浴中加热4分钟，用冷水冷 却至室温，30分钟后在490nm比色，由标准曲线计算含 量。
中药化学典型实验多媒体课件
湖南中医药大学药学院中药化学教研究室
实验二
虎杖中蒽醌类成分 提取、分离、 鉴定及含量测定
一、教学要求
l、掌握梯度pH萃取法分离酸性成分的方法。 2、学习脂溶性成分和水溶性成分分离的方法。 3、了解蒽醌类化合物的一般性质和鉴别反应。
二、实验原理
本实验是根据虎杖中的羟基蒽醌类化合物及 二苯乙烯类成分均可溶于乙醇，故采用乙醇将 它们提取出来。羟基蒽醌类苷元成分能溶于乙 醚等弱亲脂性溶剂，采用乙醚使苷元和苷类成
四、 实验讨论及注意事项
1.常压蒸馏回收溶剂之前，应该加入沸石，以免暴 沸。 2.什么是梯度pH萃取法，适用于哪些物质的分离？ 试解释本次试验中pH萃取法应该注意哪些事项？ 3.两相萃取时，不可猛力振摇，只能轻轻旋转摇动， 以免造成严重乳化现象而影响分层。如果出现乳 化现象，如何破除？ 4.TLC鉴定a,b,c时，解释三者相对比移值的大小关 系？
虎杖中蒽醌类的提取分离及鉴定
HO
CH3
O
2.大黄酚（Chrysophanol）:
金黄色六角型片状结晶（丙酮中结晶）或针状结 晶（乙醇中结晶）。熔点196℃，能升华。易溶 于乙醚、氯仿、苯、冰乙酸、乙醇, 稍溶于甲醇， 难溶于石油醚，不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水 溶液。可溶氢氧化钠水溶液及热碳酸钠水溶液。
OH O OH
CH3 O
5%NaCO3溶液萃取
滤液
沉淀
水冲洗至中性，干燥
A大黄酸
5%NaCO3溶液
乙醚层3
浓盐酸调pH2 静置，过滤
沉淀物
B大黄素 晶体 水洗至中性，抽干，
干燥，依次以丙酮、 甲醇结晶
乙醚层3
2%NaOH萃取4-5次
NaOH溶液
盐酸调pH3, 静置，抽滤
沉淀物
水洗至中性，抽干，干燥， 以CH3OH-CHCl3或笨CHCl3（1:1）重结晶
2.薄层色谱(TLC)： 吸附剂：硅胶G－CMCNa板，用前活化 展开剂：石油醚—乙酸乙酯 (2：1) 样 品：A、B、C、D乙醇液，大黄素，大黄 酸，大黄酚，大黄素6-甲醚标准品 显 色：①先置可见光下观察色斑， 后紫外灯下观察荧光斑点 ②再用2%NaOH喷洒显色 结果及计算比移值
四、生物活性
2）抗病毒作用（大黄索等蒽醌类物质具有抗 病毒作用，可抑制乙型肝炎抗原阳性，治 疗慢性肝炎，急性黄疸性肝炎）
3.抗癌作用
蒽醌类化合物能抑制人早幼白细胞，作用 机理主要是抑制细胞DNA和RNA的合成。
4.修复损伤的DNA及保护大脑皮层神经元功 能
谢谢观赏
二、虎杖中醌类提取与分离
虎杖粗粉
95%乙醇回流3次，过滤
醚层1
剩余物
药渣
滤液
实验五虎杖中羟基蒽醌的提取,分离与鉴定
拌样
溶解
搅拌
至干
第三步 上样
• 均匀加到柱中
第四步 洗脱与接收
• 用不同比例的石油醚和乙酸乙酯进行梯 度洗脱 • 每个极性洗脱3－5个保留体积 • 每个保留体积接收10－20份馏分 • 整个过程加低压
第五步 浓缩 浓缩方法
• • • • 溶剂浓缩 自然挥干 减压浓缩 冻干
第六步 薄层鉴定
天然药物化学实验
Experiment of Natural Medicinal Chemistry
厦门大学医学院药学系
参考书：
《现代中草药成分化学》 吴寿金，赵泰等 中国医药科技出版社 《中草药有效成分提取与分离》徐任生， 陈仲良 上海科技出版社
实验五
虎杖中羟基蒽醌的提取、 分离与鉴定
• 一、实验目的 • 二、实验原理 • 三、提取实验 • 四、分离实验 • 五、鉴定方法 • 六、结果与讨论
• 吸附剂：硅胶—CMC • 展开剂：C6H6—EtoAc(3:2或97：9) • 显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH 喷雾
虎杖亲脂性成分与亲水性成分的分离
• 膏状物加水10ml，乙醚100ml充分振摇后 放置 • 将乙醚液倾于500ml三角瓶中 • 再于烧瓶中加50ml乙醚振摇，放置，倾 出乙醚液 • 同法操作六次 • 合并乙醚液即为亲脂性成分——总游离 蒽醌
游离蒽醌分离
• 强酸性成分的分离 总游离蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中 加5%碳酸氢钠水溶液40ml萃取，分出碱水溶 液 同法提取二次 碱水提取液，加6N盐酸调至pH2 放置即可析出沉淀，抽滤， 用水洗涤沉淀至中性，干燥 主要成分：大黄素和大黄酸
游离蒽醌分离
• 中等酸性成分的分离 碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠 溶液萃取5～9次，每次40ml 合并碳酸钠提取液 加盐酸调至pH3 放置，抽滤，抽干， 称重 主要成分：大黄酚和大黄素6-甲醚
实验五虎杖中羟基蒽醌的提取,分离与鉴定
一、实验目的
• 掌握蒽醌类化合物的提取分离方法及原 理 • 掌握低压柱层析分离技术及薄层层析鉴 定 • 了解反相色谱的原理及方法及制备色谱 的原理
二、 实验原理
• 利用化合物的酸性不同进行 分离 • 利用吸附色谱原理进行分离 • 利用反相色谱进行分离
化合物结构比较
• 1、大黄素（Emodin） • 2、大黄酚（Chrysophanol） • 3、大黄素6-甲醚，（Emodinmonomethl ether） • 4、大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷 （Anthraglycosibe A）
拌样
溶解
搅拌
至干
第三步 上样
• 均匀加到柱中
第四步 洗脱与接收
• 用不同比例的石油醚和乙酸乙酯进行梯 度洗脱 • 每个极性洗脱3－5个保留体积 • 每个保留体积接收10－20份馏分 • 整个过程加低压
第五步 浓缩 浓缩方法
• • • • 溶剂浓缩 自然挥干 减压浓缩 冻干
第六步 薄层鉴定
• 吸附剂：硅胶—CMC • 展开剂：C6H6—EtoAc(3:2或97：9) • 显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH 喷雾
虎杖亲脂性成分与亲水性成分的分离
• 膏状物加水10ml，乙醚100ml充分振摇后 放置 • 将乙醚液倾于500ml三角瓶中 • 再于烧瓶中加50ml乙醚振摇，放置，倾 出乙醚液 • 同法操作六次 • 合并乙醚液即为亲脂性成分——总游离 蒽醌
天然药物化学实验
Experiment of Natural Medicinal Chemistry
厦门大学医学院药学系
参考书：
《现代中草药成分化学》 吴寿金，赵泰等 中国医药科技出版社 《中草药有效成分提取与分离》徐任生， 陈仲良 上海科技出版社
说明虎杖中蒽醌类成分提取与分离的流程
说明虎杖中蒽醌类成分提取与分离的流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!虎杖中蒽醌类成分提取与分离的流程一、前期准备在进行虎杖中蒽醌类成分提取与分离实验之前，需要做好一些前期准备工作。
虎杖中游离蒽醌的提取分离鉴定
一、实验目的
• 1、掌握用乙醇回流提取中药中有效成分技 术和注意点 2、掌握蒽醌类化合物亲脂性成分、亲水性 成分分离技术 3、掌握柱层析法,并能通过被分离化合物的 结构分析实训结果 4、能正确判断薄层色谱、显色反应的结果
四、实验步骤
• 1、提取：连接好实验装置装入已称好的20 克虎杖药品，加入70%乙醇90摄氏度，水 浴回流2h得到总蒽醌提取液，将提取液减 压蒸馏，回收乙醇并浓缩，得到类糖浆状 物置于烘箱烘干，得到粉红色粉末，备用
• 2、分离：称取10g虎杖乙醇提取物加入30g 80~100目的硅胶，搅拌均匀，置于60摄氏度 的水浴加热，待液剂挥发后成样品胶。取 200g 300~400目的硅胶作为分离胶，均匀装 住，再装入干燥好的样品胶。然后用纯氯仿打 通柱子，以不同配比的氯仿与甲醇溶剂作为流 动相洗脱，包层层析法（TLC）跟踪检测，分 别收集。
• 3、检测：薄层层析检测，展开剂采用氯仿-甲 醇-水体系，265nm紫外光检测
本方法的优点
1、使用索氏回流提取装置，提取率高 2、该分离方法分离的效果好，因为都把组分
大部分分离出来 3、紫外光检测，比较精确
其他方法
• 虎杖为蓼科植物虎杖(Polygonumcus pidatum siedet Zucc)的根及根茎.别名阴阳莲,花斑竹.味 苦、性微寒.能清热解毒、祛风利湿、利尿通淋、 祛痰、止咳、通经等.主要用于湿热黄疸、风湿痹 痛、淋浊带下、经闭、烫伤. 虎杖中含有较多的羟基蒽醌类成分及二苯乙烯 类成分.其中主要有大黄素、大黄酚、大黄素-6-甲 醚、大黄素3-D-葡萄糖苷及β-谷甾醇、鞣质等.虎 杖得主要药理作用有抗菌、抗病毒及镇咳平喘、 常用来治疗急性炎症、烧烫伤、肝炎、气管炎等.
说明虎杖中蒽醌类成分的提取与分离流程
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虎杖中蒽醌类的提取分离及鉴定.共21页
虎杖中蒽醌类的提取分离及鉴定.
•
26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关7、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
•
28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
•
29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
•
30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
虎杖中游离羟基蒽醌类成分的提取分离和鉴别
虎杖中游离羟基蒽醌类成分的提取分离和鉴别虎杖为蓼科植物虎杖（Polygonumcus pidatum siedet Zucc）的根及根茎，别名阴阳莲，花斑竹。
味苦、性微寒。
能清热解毒、祛风利湿、利尿通淋、祛痰、止咳、通经等。
主要用于湿热黄疸、风湿痹痛、淋浊带下、经闭、烫伤。
虎杖中含有较多的羟基蒽醌类成分及二苯乙烯类成分。
其中主要有大黄素、大黄酸、大黄素-6-甲醚、大黄素-8-D-葡萄糖苷及白藜芦醇苷、β-谷甾醇和鞣质等。
虎杖的主要药理作用为抗菌、抗病毒及镇咳平喘，常用来治疗急性炎症、烧烫伤、肝炎、气管炎等。
一、实验目的1．掌握从虎杖中提取蒽醌类成分的一般方法；2．掌握pH梯度法分离混合蒽醌成分的原理和操作技术；3．了解蒽醌类成分的性质和检识方法。
二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（125mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（500mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药虎杖粗粉乙醇氯仿乙醚碳酸氢钠盐酸碳酸钠丙酮氢氧化钠盐酸醋酸镁硅胶 CMC-Na 苯乙酸乙酯石油醚（30-60℃）甲酸乙酯甲酸大黄素对照品浓氨水三、主要成分的结构与性质R 1 R 2OH H 大黄素 H H 大黄酚OCH 3 H 大黄素-6-甲醚OCH 3 glu 大黄素-6-甲醚-8-D-葡萄糖苷OH glu 大黄素-8-D-葡萄糖苷R=H 白藜芦醇 R=glu 白藜芦醇葡萄糖苷另外。
虎杖叶、茎中含β-谷甾醇、鞣质、少量羟基蒽醌类化合物、有机酸、槲皮苷、异槲皮OOOR 2OHCH 3R1OH OHOR苷、虎杖黄酮苷、扁蓄苷、金丝桃苷及芸苷等。
四、实验原理：1．羟基醌类化合物及二苯乙烯类成分，均可溶于乙醇中，故可用乙醇将它们取出来。
羟基蒽醌类易溶于乙醚和含水氯仿等弱极性溶剂，白藜芦醇苷在乙醚和含水氯仿中溶解度很小，利用它们对含水氯仿的溶解性差异使羟基蒽醌类与白藜芦醇苷分离；2．利用各羟基蒽醌类结构的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离它们。
虎杖
三、实验药材：
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虎杖【 Huzhang】
【药材学名】 Rhizoma Polygoni Cuspidati。 【别名】花斑竹、酸筒杆、酸桶笋、酸汤梗、川筋龙、斑庄、斑杖根、大叶蛇总管、 黄地榆 【分布】分布于山东、河南、陕西、湖北、湖南、江西、福建、台湾、云南、四川、 贵州。 【采制贮藏】春、秋二季采挖，除去须根，洗净，趁鲜切短段或厚片，晒干。置干燥 处，防霉，防蛀。 【性状】本品多为圆柱形短段或不规则厚片，长1～7cm，直径0。5～2。5cm。外皮棕 褐色，有纵皱纹及须根痕，切面皮部较薄，木部宽广，棕黄色，射线放射状，皮部与 木部较易分离。根茎髓中有隔或呈空洞状。质坚硬。气微，味微苦、涩。 【性味与归经】微苦，微寒。归肝、胆、肺经。 【功能与主治】清热解毒，利胆退黄，祛风利湿，散瘀定痛，止咳化痰。用于关节痹 痛，湿热黄疸，经闭，癓瘕，咳嗽痰多，水火烫伤，跌扑损伤，痈肿疮毒。 【使用注意】孕妇慎用。 【气味】 （根）微温。
虎杖的提取分离与检识
-------郭爽、潘潇、孙超
一、实验目的：
1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。 2.掌握用PH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类 化合物。 3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。 4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识法。 5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
二、实验原理：
• 此次实验是根据大黄中的羟基蒽醌苷经酸水解成 游离羟基蒽醌，而游离羟基蒽醌不溶于水，可溶 于氯仿、乙醚等亲脂性有机溶剂的性质，用氯仿 从水解液中将游离羟基蒽醌提取出来，再利用各 游离羟基蒽醌的酸性不同，采用PH梯度萃取法将 其分离，其中大黄素和大黄素甲醚的酸性十分相 近，用PH梯度萃取法难以分离，可利用两者的极 性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
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虎杖中蒽醌类物质的提取、分离及鉴定
（吕培银）
【药物简介】
虎杖，又名阴阳莲、斑杖、苦杖、酸汤杆等。
可在春、秋两个季节采挖，除去须根，洗净后，趁鲜切短段或厚片，晒干。
微苦，微寒。
归肝、胆、肺经。
利湿退黄，清热解毒散瘀止痛，止咳化痰。
用于湿热黄疸，淋浊，带下，风湿痹痛，痈肿疮毒，水火烫伤，经闭，癥瘕，跌打损伤，肺热咳嗽。
虎杖中主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、黄酮类、香豆素类以及一些脂肪酸类化合物。
药理作用包括抗炎、抗病毒、抗菌、调血脂、抗血栓、改变血流变、扩张血管、保护心肌、抗氧化、抗肿瘤，改善阿尔茨海默症及预防艾滋病等。
【实验目的】
一、学会撰写实验方案。
二、掌握中药材有效成分回流提取的方法和操作。
三、掌握pH梯度萃取法分离不同酸度游离羟基蒽醌的原理和操作。
四、掌握硅胶柱层析的操作方法。
五、掌握羟基蒽醌的理化检识和薄层检识方法。
【实验原理】
羟基蒽醌类化合物及二苯乙烯类成分均可溶于乙醇，所以可以采用乙醇回流提取法，利用羟基蒽醌类苷元与苷的溶解度差异可以用乙醚捏溶的方法分离游离的蒽醌衍生物苷元和蒽醌苷类。
根据游离羟基蒽醌类化合物含有酚羟基数目和位置不同，不同表现出酸性强弱不同，利用梯度pH萃取法分离不同酸性强弱的有蒽醌衍生物。
硅胶吸附柱色谱法的原理是物质的吸附性具有差别，属于物理吸附。
碱梯度萃取虎杖中主要蒽醌的方法，优点是简单快捷，但很难提取到单一的蒽醌，往往夹带有酸性接近的蒽醌，要通过多次重结晶或色谱再分离，才能获得单一蒽醌，收率低。
柱色谱法虽然能分离到单一蒽醌，但是该法耗时间费溶剂，难以形成规模生产。
【1】化学检识的原理是羟基蒽醌类在碱性溶液中发生颜色改变，会使颜色加深，多呈橙、红、紫红色以及蓝色。
该显色反应与形成共轭体系的酚羟基和羰基有关。
【实验用品】
实验材料：虎杖（100g）、95%的乙醇、乙醚、5%NaHCO3溶液、5%Na2CO3溶液、2%NaOH溶液、硅胶、石油醚、乙酸乙酯、MgAc2乙醇溶液。
仪器设备：1L烧瓶、回流冷凝管、水浴锅、纱布、烧杯、蒸发皿、漏斗、分液漏斗、铁架台、抽滤装置、薄层板、离心管等。
【实验内容】
提取：1.乙醇回流提取法：将虎杖研磨成粉，取虎杖粗粉100g置于1L烧瓶中，搭好回流冷凝装置，加95%乙醇回流提取两次，分别是500ml，1h ; 300ml，0.5h。
用四层纱布过滤，合并滤液。
滤液减压回收乙醇至糖浆状(约40ml)，趁热转入烧杯或蒸发皿中，并用少量乙醇洗涤烧瓶，洗液并入烧杯中，水浴浓缩至稠膏状，得到乙醇总提取物。
乙醇总提取物加50mI乙醚充分搅拌捏溶，倾出乙醚层。
再同法提取4次，合并乙醚溶液。
乙醚液用滤纸自然过滤，得到总脂溶性成分。
2.传统的水煮醇沉淀法：称取虎杖药末100g，用2000ml (1000、500、500ml)水煮沸提取3次，每次煮沸1h，并注意补充水量.过滤，合并水液，浓缩至100ml，加乙醇至含醇浓度为70%，静置4h，过滤。
滤液置100ml量瓶中，加70%乙醇
至刻度，摇匀，备用。
同法做3批。
【2】
分离：1.pH梯度萃取法：留下2mL乙醚提取液做薄层检识对照，剩下的乙醚提取液移入合适大小的分液漏斗中，用碱性由弱到强的碱液依次萃取。
用5%NaHCO3溶液(测PH值)萃取三次，分别80、40、40ml。
合并萃取液(碱液)。
萃取液加热挥尽乙醚，小心滴加HC1至pH=2，放置析出沉淀，抽滤并水洗至中性，得到沉淀Ⅰ。
乙醚液用5%Na2CO3溶液(测pH值)萃取5 次，每次40ml，合并萃取液。
萃取液同上一步操作得到沉淀Ⅱ。
乙醚液用2%NaOH溶液(测pH值)萃取5次，每次20ml，合并萃取液。
萃取液同上的操作得到沉淀Ⅲ。
剩下的乙醚液可以丢弃。
2.硅胶柱层析法分离沉淀Ⅱ：
1）装柱：取100~200目柱层析硅胶30g ，按湿法装样，溶于100ml石油醚-乙酸乙酯( 1：2 )混合溶液中，边搅拌边装柱，打开活塞，待沉降匀实，（也可以待沉降匀实后再打开活塞）保持硅胶界面平整，保持溶液至硅胶界面0.5-1cm ，关闭活塞，开始上样。
2）上样：取沉淀Ⅱ0.01g于试管中，加入2mL石油醚-乙酸乙酯( 1：2 )混合溶液溶解。
取硅胶0.5g于蒸发皿中，使用胶头滴管滴加样品溶液，边加边搅拌，置水浴锅中挥干溶剂，得拌样硅胶。
打开硅胶柱活塞使液面与硅胶界面柱一致，通过硅胶柱上方漏斗加入拌样硅胶，界面平整后加入1g空白硅胶。
（空白硅胶起保护作用）
3）洗脱：用石油醚-乙酸乙酯( 1：2 ，约100ml )为洗脱剂洗脱，分段收集，每份7mI ，约5份，标记各流份准备薄层检识。
为避免顺序错乱，可以先把离心管按顺序标号，再按照顺序收集样品。
鉴定：1.薄层检识：使用10*10cm硅胶G-CMC-Na板一块湿法铺板，105℃活化0.5小时，对照品为大黄素、大黄酚溶液，样品为乙醚总提物，沉淀I、I、I、柱层析洗脱各流份。
展开剂为石油醚-乙酸Z酯=1：2 ，20ml，加两滴乙酸显色。
首先可见光观察，接下来紫外光观察，，最后NH3熏蒸后观察。
根据显色分析实验结果。
2.化学检识：沉淀1、2、3的乙醇溶液各取约2ml ，分别滴加MgAc2乙醇溶液数滴，观察颜色变化。
【注意事项】
1.虎杖中蒽醌类化合物的种类、含量与虎杖采集季节和贮存时间有关系。
由于游离蒽醌类衍生物部分有升华性，所以新鲜的原药材蒽醌类成分含量高，如果是贮存时间长的饮片，则蒽醌类成分含量低，实验选材要注意。
2.HCl酸化时产生大量CO2气体，小心防止气体产生时内容物溢出。
3.当用碱液萃取Z醚溶液时，碱水层变为红色，发生了Borntrager 反应，加酸后溶液变为黄色。
4.使用乙醚要注意安全，绝对禁止明火。
【实验拓展】
虎杖中游离蒽醌类化合物提取工艺条件优化研究：选用提取时间、提取温度、提取次数和加水倍数作为考察因索，采用工艺流程从虎杖中提取游离蒽醌类物质，通过正交表试验，筛选虎杖游离蒽醌的提取工艺条件。
结果虎杖游离蒽醌提取最佳条件为乙醇浓度70%，
提取温度为90C ，提取时间为2.0 h，料液比为1：20。
通过正交试验优化提取虎杖游离葱醌的工艺条件能够得到最佳效果。
【3】不同提取方法对虎杖中蒽醌类成分的影响和研究：采用回流、索氏、微波及超声四种提取方法，测定四种提取液中的游离蒽醌和总蒽醌的含量；结果在对游离蒽醌的测定中以索氏法为最高(0.53%)，其次为超声(0.45%)，各种方法之间相比差异显著(P<0.05)；在对总蒽醌的测定中，结果如下：索氏(1.16%) >超声(1.15%) >微波(1.04%) >回流(0.80% )。
【4】
【参考文献】
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【2】时莉梅."虎杖中总蒽醌提取工艺比较."江苏药学与临床研究.03 (1996)：18-19.Print.
【3】张春复，申野，段大航."虎杖中游离蒽醌类化合物提取工艺条件优化研究."中国现代药物应用.13 (2010)：150-151.Print.
【4】刘建华,韩立强,赵汉雨,莫娟,张素梅,潘玉善."不同提取方法对虎杖中蒽醌类成分及其抗氧化活性影响的研究."时珍国医国药.04
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