sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书
弗氏完全佐剂制备
弗氏完全佐剂制备弗氏完全佐剂是一种特殊的辅助药物制剂，它通过将多种药物或药品结合在一起，形成一种配方，达到协同作用，提高药物疗效或减少药物副作用的效果。
下面将详细介绍弗氏完全佐剂的制备方法。
弗氏完全佐剂的制备包括以下几个步骤：物质准备、制剂配方、制剂制备、制剂封装和贮存。
首先，需要准备配方中所需的物质。
这些物质包括原料药、辅料和溶剂。
原料药是佐剂中起主要作用的药物成分，辅料用于提高药物的稳定性和流动性，溶剂用于制剂制备时的溶解。
接下来，需要进行制剂配方。
配方的制定需要根据弗氏完全佐剂的具体功能和要求来确定，一般需要根据临床实践和科学研究的结果进行调整和改进。
在配方中，需要考虑药物之间的相容性，以及药物与辅料之间的相互作用。
然后，进行制剂的制备。
制剂制备的方法有多种，常见的有干混法、湿混法、溶剂法等。
具体选择何种方法需要根据佐剂中所使用的药物和辅料的性质以及制剂的要求来决定。
在制剂制备的过程中，需要注意控制温度、湿度和加料的顺序，以确保最终制得的佐剂符合要求。
制剂制备完成后，需要进行封装。
封装的方式有很多种，常见的有胶囊、片剂、注射剂等。
封装时需要注意保持无菌环境，并按照规定的药物剂量将制剂分装入相应的包装中。
最后，将制备好的佐剂进行贮存。
贮存要求佐剂防潮、防光、防氧和保持在低温下。
在贮存过程中需要定期检查佐剂的质量，确保其有效期内保持稳定。
弗氏完全佐剂的制备是一个复杂而细致的过程，需要严格按照药典和相关规定进行操作。
在制备过程中，需要密切关注药物的稳定性和相容性，以及药物与辅料之间的相互作用。
只有正确地控制每个步骤，才能制得质量稳定、疗效显著的弗氏完全佐剂。
单抗制备小鼠免疫SOP
单抗制备免疫一、材料准备：弗式完全佐剂（complete Freunds adjuvant，CFA）弗氏不完全佐剂（incomplete Freunds adjuvant，IFA）实验动物：小鼠（Balb/c）雌性，8周以上,体重20g以上每种抗原蛋白免疫小鼠4只靶抗原：具有免疫原性的抗原或蛋白质、多肽，生理盐水抗原要求：抗原要尽量在无毒无刺激溶液中（PBS或生理盐水），纯度大于80%，浓度1mg/ml以上，总量大于2mg。
抗原尽量是可溶性抗原，溶液为PBS，如必需加入刺激物质，SDS浓度在0.5%以下，尿素在2M以下，不含咪唑，丙烯酰胺等变性剂，要求溶液澄清，无沉淀。
二、实验步骤1.抗原准备：每只小鼠按照100ug/100ul蛋白质或多肽置于生理盐水中制备成抗原。
2.抗原-佐剂的准备：将抗原液与佐剂混合制成乳状液，抗原与佐剂混合按照1：1比例进行，加入搅拌子后于4度搅拌过夜。
注射量为200ul 每只小鼠，抗原量为100ug。
第一次免疫使用弗氏完全佐剂，以后加强使用弗氏不完全佐剂，最后一次加强不加佐剂，免疫前采集阴性血做为对照，乳化因考虑损失，多计算两只小鼠的量。
乳化完全判断标准：挤出一滴乳状液滴于冷水表面以检测乳状液是否稳定，如果液滴散开则继续混合操作直至稳定的乳状液形成。
将乳状液移入1ml注射器。
3.小鼠免疫：将小鼠放在鼠笼上，拉住小鼠尾尖部，背部75%酒精消毒，针头15度角刺入小鼠皮下，挑起注射。
皮下注射共200ul，分5个点（背部皮下任意点）4.冲击免疫：如计划在免疫3d后进行细胞融合实验，则使用水相溶解的游离抗原进行直接脾脏免疫。
过程：将小鼠在固定架上固定，脾脏位置毛剪掉并消毒，快速分别剪开外皮和内皮，将脾脏拉出，吸取100ul/100ug抗原注入脾脏内，并快速用手术线分别缝合内皮和外皮。
5.小鼠阳性血清采集：尾部剪尾采血20ul，用生理盐水稀释10倍，离心收集上清。
6.效价检测：间接法检测小鼠多抗血清效价。
完全和不完全福氏佐剂的作用
完全和不完全福氏佐剂的作用以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法。
为了提高免疫效果，在免疫的时候，常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间，使抗原缓慢释放，同时非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果。
佐剂的类型较多，目前常用的还是福氏佐剂(Freund’s Adjuvant，FA)。
它是一种对大多数抗原都有效的佐剂，但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用。
因此，福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用。
FA是用矿物油(石蜡油)、乳化剂(羊毛脂)和灭活的分枝杆菌(结核分枝杆菌或卡介苗)组成的油包水乳化佐剂。
这三种成分俱全的佐剂称为福氏完全佐剂(Freund’s ComD】ele Adjuvant，FCA)，不含分枝杆菌的佐剂为福氏不完全佐剂(Freund’s InconrpleteAdjuvant，FIA)。
石蜡油因不能代谢而存留在注射的部位，这就阻碍了抗原降解或快速反应，起到抗原储存作用，使抗原缓慢持续的释放，不断刺激机体的免疫系统而产生免疫反应。
乳化剂对于水溶性抗原与油稳定地乳化是必要的。
分枝杆菌具有很强的免疫刺激作用，可以非特异性的激活免疫系统。
FCA用于基础注射，而FIA用于辅助注射以避免分枝杆菌蛋白引起的过敏反应。
FA皮下注射或肌内注射可导致多种副作用，例如肉芽肿和无菌性脓肿的形成。
腹腔注射引起腹膜炎。
由于这些严重的副作用，FA不允许用于人或动物的疫苗接种免疫。
传统的免疫方案，包括使用福氏佐剂和某些免疫程序，已不再被一些国家的权威机构所接受。
据调查，在荷兰有64％的研究人员使用FCA，而且，用于多克隆抗体的生产方案差异很大。
因此，在1993年，荷兰发布了利用动物免疫技术制备多克隆抗体的生产指南。
主要规定了加强免疫注射的次数、免疫途径、注射量和佐剂的使用，并且支持使用替代佐剂来替换FCA。
由于FCA给实验动物带来的严重的副反应，对它的使用提出了特别的限制，规定了(小鼠和大鼠sc：0．1nd；i．d：家兔0．o5 rI1l；i．P：小鼠0．2nd)推荐使用量和注射途径。
蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备方法参考
蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备方法参考一、蛋白的原核表达实验目的蛋白的原核质粒的构建。
适用范围蛋白原核表达。
实验原理参考实验室工具书《分子克隆实验指南》《抗体制备与使用实验指南》实验试剂病毒RNA的提取（Trizol法）相关试剂，反转录相关试剂（M-MLV Buffer、10M dNTPs、DEPC水、随机引物、RNA酶抑制剂、反转录酶M-MLV），GenStar高保真酶，T4连接酶，菌液PCR相关试剂，Western blot试剂盒实验设备和材料DH5a感受态细胞、BL21感受态细胞操作步骤（一）病毒RNA的提取（Trizol法）参照分子克隆的方法进行，（1）将250 μL液体样品加入1.5 mL Ep 管中，再加入750 μL冰预冷的TRIZOL。
（2）将样品剧烈混合后，在室温静置5 min。
（3）加入200 μL氯仿，颠倒Ep管混和两次，并剧烈振荡混和，使液体充分混匀呈乳白状（无分相现象）后，再室温静置5 min。
（4）在4℃条件下，以12000×g 离心15 min。
（5）将上层水相转移到一个新的Ep 管中，加入等体积的异丙醇并上下颠倒混匀，然后在室温静置至少 10min。
（6）在4℃条件下，以12000×g 离心15 min 后，小心并尽可能地去除全部上清液。
（7）用1 mL 75% DEPC 乙醇洗涤RNA 沉淀和管壁，4℃ 12000×g离心5 min后小心弃去乙醇。
（8）将RNA沉淀进行干燥（不能完全干燥）处理后，用 10μL 无 DEPC 水（无RNA酶的水）将RNA溶解并于-20℃保存。
（二）反转录反应体系（20 μL）：按下列顺序加样M-MLV Buffer 4 μL10M dNTPs 1 μLDEPC 水 3 μL随机引物 1 μL RNA酶抑制剂 0.5 μL反转录酶 M-MLV 1 μL提取的 RNA 9.5 μL总体积20 μL反应条件：42℃水浴 1~1.5 h（三）引物设计与合成依据新城疫毒株全基因序列，运用Oligo或者Primer Premier5.0软件设计上下游引物，设计引物是注意选择常用的酶切位点以及保护性碱基的添加引物使用前用灭菌超纯水配成相应浓度，-20℃保存备用。
弗氏完全佐剂(complete
弗氏完全佐剂（complete freund’s adjuvant, CFA）弗氏不完全佐剂（incomplete freund’s adjuvant, IFA）佐剂的作用：1．形成抗原储存库。
2．形成局部肉芽肿。
3．刺激淋巴细胞增殖和分化。
二、抗体特异性体液免疫是由抗体介导的免疫。
是人和动物的B细胞在抗原刺激下转化成浆细胞，并由浆细胞产生的具有与抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白（Ig）。
存在于血液、淋巴液和组织液中。
（一）抗体的种类与结构抗体的种类多，血清中可有千百种不同的抗体，分为五种，已统一命名为IgG、IgM、IgA、IgD相IgE。
五种免疫球蛋白的分子结构基本相似（P257图9—9）说明。
(1)每个单体由两条长链又称重链(H链)及两条短链又称轻链(L链)构成。
各链之间以二硫键(S—S)相连接，两条L链位于两条H链所形成的Y形结构的两侧。
(2) 重链：每条H链分子量为55000，由420--460个氨基酸组成，重链共分四段，各段约含110个氨基酸。
靠近氨基(N—端)的第一段为重链可变区(V区)，简称VH，其余三段为恒定区(简称CH)，以CH1、CH2、CH3表示。
重链有γ、α、μ、δ、ε五种类型，每种抗体只能有一种类型的重链。
(3)轻链：分子量为22000，由2l3—216个氨基酸组成。
每条轻链分为两段：轻链可变区(简称v L)和轻链恒定区(简称C L)。
V L区有109个左右的氨基酸，CL区有l04个左右氨基酸。
轻链有两种类型，κ链和λ链。
一种抗体只能有同一种轻链。
(4)可变区：重链与轻链的可变区共同构成抗体结合价(即抗原结合簇部位)，与抗原呈特异性结合。
一个单体抗体分子具有两个结合抗原的部位，故为二价。
(5)用木瓜蛋白酶消化抗体，可得到三个片段：两个抗原结合片段，称为Fab，一个可结晶片段Fc；用胃蛋白酶消化，得到一个二价抗体活性部分，称F(ab’)2和两个剩余的小分子片段Fc’,不具任何生物活性。
弗氏佐剂使用方法
弗氏佐剂使用方法弗氏佐剂是一种广泛应用于实验动物免疫接种的添加剂，能够增强疫苗的免疫原性，提高疫苗的效果。
在使用弗氏佐剂时，需要注意以下使用方法：一、弗氏佐剂的分类与选择1. 根据成分可分为油剂弗氏佐剂和水剂弗氏佐剂。
油剂弗氏佐剂主要包括油酸钠和胆固醇等，适用于油溶性抗原；水剂弗氏佐剂主要包括氢氧化铝和磷酸铝等，适用于水溶性抗原。
2. 根据剂型可分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂主要适用于初次免疫，添加比例一般为0.5%-5%；完全弗氏佐剂适用于加强免疫，添加比例一般为1%-5%。
二、弗氏佐剂的使用步骤1.准备抗原：根据实验需要，制备相应浓度和纯度的抗原溶液。
2.配制弗氏佐剂：根据实验需求，将弗氏佐剂与抗原溶液混合，充分搅拌，确保抗原充分吸附。
3.免疫接种：将配制好的弗氏佐剂-抗原混合物接种到实验动物体内，如小鼠、大鼠等。
接种部位可选择腹腔、皮下、肌肉等。
4.观察与监测：在免疫过程中，定期观察实验动物的生长状况、疫苗反应等，以评估疫苗效果。
三、弗氏佐剂的注意事项1.严格无菌操作：弗氏佐剂在使用过程中，应确保无菌操作，避免细菌污染。
2.适量使用：根据实验动物的体重、年龄等因素，合理控制弗氏佐剂的用量，避免过量导致不良反应。
3.观察动物反应：在免疫过程中，密切观察实验动物的反应，如食欲、精神状态等。
一旦发现异常，应及时处理。
4.储存条件：弗氏佐剂应存放在密封容器中，置于阴凉、干燥处，避免高温、潮湿。
总之，弗氏佐剂在实验动物免疫接种中发挥着重要作用。
正确选用和使用弗氏佐剂，可以提高疫苗的免疫效果，为实验研究奠定基础。
在使用过程中，要严格遵循使用方法，注意观察实验动物的反应，确保实验安全顺利进行。
佐剂比较表
需构建表达CpG的质粒与病毒颗粒联合免疫。
非商品化
脂质体(LIP)和
Novasomes
人工合成
佐剂
既是抗原载体，也是免疫佐剂；
Novasomes为非磷脂亲水脂分子，在体内稳定性比常规LIP好，而且价廉、易制备；
无毒性、无免疫原性；在可体内的可降解性，不引起组织损伤。
需制备油包水乳剂。
Roche/Sigma
MF59
油乳佐剂
可降解鲨烯与Tween 80和Span 85混合后进行微流化进而形成均一的滴状油包水乳液；耐受性良好；
第一个可用于人体的疫苗佐剂。
Chiron公司
CpG-ODN
佐剂
水溶性分子佐剂
含有胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的寡脱氧核苷酸；
有很强的粘膜佐剂活性，通过膜受体TLR9直接激活DC和B细胞，是一种高效的Thl型疫苗佐剂；不同类型CpG-ODN具有不同疫苗佐剂活性,B和c型CpG-ODN在小鼠体内的体液免疫佐剂效果优于A型CpG-ODN.
稳定性较差；
脂质体在制备过程中要求一定的技术性；费用比其他免疫佐剂高
非商品化？
ImmunEasyMouse Adjuvant
水溶性
佐剂
为免疫小鼠而设计、只适用于小鼠；
含有特效免疫诱导剂CpG DNA，产生的抗体效价高于FIA；
免疫周期2周；
无毒性，无副作用；
容易操作，只需加入抗原混合，室温下5～10分钟后即可注射，无需加热、超声波处理、乳化等复杂步骤。
Qiagen公司（已停产）
QuickAntibody系列免疫佐剂
水溶性
佐剂
使用时不需复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免疫动物。
弗氏佐剂说明书
弗氏佐剂说明书
弗氏佐剂（Freund's adjuvant）是一种常用的免疫佐剂，用于增强抗原的
免疫原性，常用于制备疫苗和进行免疫学研究。
以下是弗氏佐剂的基本信息和使用说明：
1. 成分：弗氏佐剂主要包含羊毛脂和液体石蜡，有时还会加入卡介苗（BCG）或其他微生物成分。
2. 用法：在免疫动物前，将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，制备成“油包水”乳状液。
佐剂和抗原体积比一般为1：1。
制备好的乳化剂可用于免疫
注射。
3. 作用机制：弗氏佐剂的作用机制包括延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，延长抗原在体内滞留时间，有利于高亲和力抗体的产生。
此外，弗氏佐剂还能活化巨噬细胞并促进巨噬细胞与T细胞的相互作用，对淋巴细胞有特异性加强刺激的作用。
4. 注意事项：
弗氏佐剂对动物有一定的毒性，使用时应严格按照说明书操作，避免直接接触皮肤或吸入。
储存和运输过程中应避免阳光直射和高温，选择阴凉干燥处存放。
弗氏佐剂含有羊毛脂等成分，可能会引起过敏反应，使用前应了解受试者的过敏史，如有过敏情况应及时处理。
注射后可能会引起局部和全身的不良反应，如注射部位红肿、炎症等，应密切观察受试者的反应情况，及时处理。
5. 安全性：弗氏佐剂具有一定的安全性，但也有一定的副作用和不良反应，如局部炎症、全身发热等。
因此，在实验过程中应严格控制剂量和使用条件，确保安全有效。
总之，在使用弗氏佐剂时，应严格按照说明书操作，注意安全性和有效性。
如有任何疑问或需要更多帮助，请咨询专业人士。
兽用疫苗保护剂和佐剂讲解
②抗原寻的（antigen targeting）
指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞受体的结合等有重要作用。
③免疫调节（immune modulation） 是指任何可以修饰的免疫效应细
（二）病毒的保护剂 ① 5%蔗糖 脱脂乳； ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二 甲基亚砜和50%犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。
兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖）5g，加脱脂乳至100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
• 注意:佐剂和免疫增强剂的关系?
•
有时佐剂也是免疫增强剂.
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
免疫佐剂作用机理
作用方式
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释，
弗氏不完全佐剂,弗氏完全佐剂
弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂一、定义：弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。
二、区别：弗氏不完全佐剂产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。
佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。
为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强免疫。
弗氏完全佐剂产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。
弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。
佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
三、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。
一般首次注射时用1／2体积FCA加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
完全弗氏佐剂的成分
完全弗氏佐剂的成分
完全弗氏佐剂是一种用于预防和治疗动物疾病的佐剂，它由多种
成分组成。
以下是完全弗氏佐剂的成分以及其作用。
1. 矿物质与微量元素：矿物质和微量元素在动物体内发挥着重
要的生理作用，例如在体内协调传递神经信息、维持酸碱平衡。
此外，还参与多种代谢过程和酶反应，帮助机体增强免疫力。
2. 维生素：动物体内需要多种维生素，如A、C、D、E、K和B
族维生素。
维生素A有助于提高免疫功能和增强视力，维生素D有利
于钙和磷的吸收和利用，维生素B族则是合成和酵解蛋白质和糖类重
要的辅酶。
3. 氨基酸：氨基酸是蛋白质合成的主要原料，同时还能促进生
长和增强免疫力，对于动物的生长和健康至关重要。
4. 植物提取物：植物提取物是从各种植物中提取的天然化合物，具有多种生化活性，例如抗氧化、抗炎和抑菌作用等。
5. 生物活性成分：这些成分能够直接参与机体生化代谢反应，
提高机体免疫功能，促进生长发育，减轻疲劳和改善身体健康。
最后，完全弗氏佐剂除了以上基本成分外，还可能添加其他成分，以适应不同种类动物和不同的生长期需求。
这些成分可以发挥协同作用，提高佐剂的治疗效果，对于保障动物健康至关重要。
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sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书
生物商城 / 2011-02-08
一、定义：
弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。
二、制备方法：
弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。
一般首次注射时用1／2体积FCA 加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：
（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。
待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。
本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。
（2）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠
的乳剂为止。
本法优点是容易做到无菌操作，抗原损失少，适用于制备少量的抗原乳剂。
但同时难以乳化完全，个别抗原，用塑料注射器根本推不动，而用玻璃注射器又有渗漏。
制备好的乳化剂经鉴定才能适用。
鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即乳化完全，为合格的油包水剂。
（3）超声：实验室条件好点的，比如说有超声破碎仪的，一定要控制超声频率和时间，超声容易激发一些自由基，对抗原有未知损害。
乳化方法要根据抗原和需要而定。
三、其他免疫佐剂的物质
弗氏佐剂也属于免疫佐剂。
其他免疫佐剂的物质有：①微生物及其产物，常用的微生物有分枝杆菌、短小棒状杆菌、百日咳杆菌以及处左兰氏阴性杆菌的提取物脂多糖，自分枝杆菌的提取物质胞壁酰二肽等。
②多聚核苷酸，如多聚肌苷酸：胞苷酸（poly1:C）,多聚腺苷酸（poly1:A：μ）等;。
③无机物，如明矾及氢化铝等。
佐剂的作用机制尚不完全清楚：①它可能增加抗原的表面面积，易为巨噬细胞所吞噬；②延长抗原在体内的存留期，增加与免疫细胞接触的机遇；③诱发抗原注射部位及其局部淋巴结的炎症反应，有利于刺激免疫细胞的增殖作用。
四、区别：
弗氏不完全佐剂
产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。
佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。
为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强免疫。
弗氏完全佐剂
产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。
弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。
佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
五、储存：
储存在低温，通风的区域。