分子生物学诊断方法

一、DNA印迹（Southern blot）
转基因艾美耳球虫的DNA印迹分析。
转基因球虫基因组提取后用EcoR V,
酶切，电泳分离后将DNA转印到硝酸 纤维素膜膜上，然后用地高辛标记 的、特异性针对外源基因YFP的探针 去杂交。图中显示仅仅转基因球虫 具有YFP基因特异性的杂交条带。阳 性对照为含有YFP基因的质粒DNA。
第三节 分子生物学诊断方法
从DNA双螺旋结构被发现以来，基于核酸的寄 生虫分子诊断技术就一直在飞速发展。从基于 DNA探针的DNA印迹技术，到现在广泛应用的 PCR技术，最新也发展了基于高通量测序、核 酸芯片技术的方法，分子生物学诊断技术在寄 生虫和寄生虫病的鉴定、诊断方面起到越来越 重要的作用。
材料： 待扩增的样品（提取的含有寄生虫的基因组DNA） 引物：根据寄生虫特定DNA序列设计的寡核苷酸单链 脱氧核糖核苷三磷酸：分别是dATP, dTTP dCTP dGTP DNA聚合酶：将特定的脱氧核糖核苷三磷酸添加到引物3’ 端，完成DNA扩增 酶缓冲液：含有Mg2+等成分，用于保持聚合酶的活性。
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样品
DNA聚合酶及缓冲液 引物
脱氧核糖核苷三磷酸
二、DNA聚合酶链式反应 （Polymerase chain reaction, PCR）
PCR技术是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在 的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。通过2030个重复的变性、退火和延伸步骤，DNA片段得到了大 量复制，数量可达2×106~107拷贝。
PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。