最新宫颈癌Hela细胞株培养
《Hela细胞传代培养》课件
细胞数过低
细胞数量太少，可能是由于接 种量太少、营养不足或培养时 间太长等原因导致。可以通过 增加细胞数或更改营养物质来 解决此问题。
将细胞冻存存储，需要在恰当的时机进行复苏。
2 细胞的染色体分析技术
可以使用荧光原位杂交法、karyotyping和CGH等技术来分析细胞的染色体。
3 病毒感染实验技巧
可用于研究病毒的生物学特性、宿主针对病毒的反应等多个方面。
Hela细胞传代培养的应用领域
癌症研究
• 研究癌细胞 • 开发新的抗癌药物 • 探究癌症的发病机制
基因工程
• 研究基因功能 • 进行基因编辑实验 • 疾病的基因诊断和治疗
药物筛选
• 筛选对癌症具有杀伤 力的药物
• 筛选开发新药物的唯 一模型
• 提高药物筛选效率
总结和展望
总结
Hela细胞作为医学研究中最常见的细胞类型 之一，被广泛应用于生命科学领域。
展望
随着技术水平的不断提高，Hela细胞在人类 疾病研究、药物开发等领域的应用前景将广 阔且具有无限潜力。
《Hela细胞传代培养》 PPT课件
欢迎来听我的《Hela细胞传代培养》课程。本课程将会涵盖Hela细胞的来源 和特点，以及传代培养过程、应用领域、实验技巧和常见问题等。
Hela细胞的来源和特点
来源
Hela细胞是从美国Henrietta Lacks的宫颈癌细胞中分离出来的。这些细胞于1951年首次分 离出来，并被广泛应用于医学领域。
特点
Hela细胞具有很高的无限分裂能力和稳定的染色体组成，是许多细胞与分子生物学研究的 理想材料。
应用
这些细胞在癌症、病毒学、基因工程、药物筛选等领域都得到了广泛的应用。
宫颈癌实验报告
一、实验目的1. 掌握宫颈癌细胞株的体外培养方法。
2. 观察宫颈癌细胞在体外培养条件下的生长特点。
3. 通过细胞学观察，了解宫颈癌细胞的形态学特征。
二、实验材料1. 宫颈癌细胞株：Hela细胞2. RPMI-1640细胞培养基3. 胎牛血清4. 0.25%胰蛋白酶5. 75%酒精6. 细胞培养箱7. 显微镜8. 计时器三、实验方法1. 宫颈癌细胞复苏（1）将冻存的宫颈癌细胞株Hela取出，用75%酒精消毒，然后用无菌镊子将细胞接种于培养皿中。
（2）加入适量的RPMI-1640培养基，放入细胞培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。
2. 细胞传代（1）当细胞贴壁生长至80%左右时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞。
（2）将消化后的细胞悬液转移至新的培养皿中，加入适量的胎牛血清和RPMI-1640培养基，放入细胞培养箱中培养。
3. 细胞观察（1）取生长良好的细胞，用无菌镊子挑取细胞，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液滴加于载玻片上，室温晾干。
（3）用95%酒精固定细胞，晾干。
（4）用姬姆萨染液染色，晾干。
（5）在显微镜下观察细胞形态学特征。
四、实验结果1. 宫颈癌细胞在体外培养条件下，生长迅速，呈梭形、不规则形或多边形，细胞核较大，核仁明显。
2. 细胞传代过程中，细胞生长良好，细胞密度逐渐增加。
3. 细胞学观察结果显示，宫颈癌细胞呈梭形、不规则形或多边形，细胞核较大，核仁明显，细胞间连接紧密。
五、实验结论1. 成功建立了宫颈癌细胞株Hela的体外培养体系。
2. 宫颈癌细胞在体外培养条件下，生长迅速，细胞形态学特征明显。
3. 本实验为宫颈癌的研究提供了实验材料和方法。
六、实验讨论1. 在细胞培养过程中，应注意无菌操作，避免污染。
2. 适当调整培养基成分和培养条件，有利于细胞的生长和传代。
3. 细胞学观察结果表明，宫颈癌细胞在体外培养条件下，具有明显的细胞学特征，为宫颈癌的研究提供了实验依据。
4. 本实验为宫颈癌的体外研究提供了实验材料和方法，为进一步研究宫颈癌的发生、发展及治疗提供了基础。
Hela细胞简介
Hela细胞系（HeLa cell line）是生物学与医学研究中使用的源自一位名叫Henrietta Lacks美国妇女的子宫颈癌细胞的细胞系。
这名美国妇女在1951年死于该癌症。
为了让Lacks保持匿名，此细胞株原宣称是依「Helen Lane」命名。
海拉细胞系被视为「不死的」（即，不同于其他一般的人类细胞，此细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去），至今都被不间断的培养。
此细胞系跟其他癌细胞相比，增殖异常迅速。
海拉细胞系被George Gey分送给众研究单位（并未通知Lacks本人也未得到她的许可），并用作癌症细胞模型（model cancer cells）研究。
海拉细胞系也被用作研究细胞信号传导（cellular signal transduction）。
海拉细胞系是被人类乳突状瘤病毒第18型（Human Papillomavirus 18）转化的，和正常子宫颈细胞有许多不同。
已证实海拉细胞系难以控制。
此细胞系有时会污染同一实验室的其他细胞培养物（cell culture），干扰生物学的研究。
污染程度难以估计，因为研究人员很少检定已确立细胞系的本质和纯度。
据说有相当数目的体外细胞系（in vitro cell lines）其实就是海拉细胞系，因为原先的细胞株已被快速增殖的海拉细胞系污染物取代了。
有学者认为此细胞系是一新的物种，因为此细胞株能自行繁殖和散布。
在1991年此细胞株被命名为Helacyton gartleri。
科学研究史在Hela出现之前，科学家已经实现了某些动物细胞的人工培养，但尚未成功培养人类细胞；人类细胞由于分裂次数有限，难以实现长期留存。
肿瘤细胞HeLa以其顽强的生命力和繁殖力成为科学家获得的第一个人类细胞系。
据估计，全世界用于研究而繁育的Hela细胞的总数目已经远远超过了Lacks女士本人所有的细胞数，甚至有人认为可以将HeLa细胞看做一个新的物种。
截至2009年，全世界已经有超过60000篇科学论文是基于对HeLa细胞的研究，并且这一数字还以每月300篇的速度不断增长着。
Hela细胞的传代培养
利用Hela细胞进行药物筛选和毒性测试，评估药物对肿瘤细胞的抑 制作用和安全性。
肿瘤免疫治疗研究
利用Hela细胞研究肿瘤免疫应答机制，为肿瘤免疫治疗提供新的策 略和靶点。
基因治疗与细胞治疗
利用Hela细胞作为载体或靶细胞，开展基因治疗和细胞治疗的研究， 为遗传性疾病和肿瘤等疾病的治疗提供新途径。
Hela细胞的传代培养
目录
• 引言 • Hela细胞的传代培养过程 • Hela细胞传代培养的注意事项 • Hela细胞传代培养的应用 • 未来展望
01 引言
背景介绍
01
Hela细胞，也称为海拉细胞，是 一种源自子宫颈癌的细胞系，是 医学和生物学研究中广泛使用的 细胞模型。
02
Hela细胞的传代培养是维持其生 长和活性的重要手段，对于研究 癌症、病毒、药物筛选等领域具 有重要意义。
记录细胞生长曲线
通过绘制细胞生长曲线，了解细胞的生长规律和倍增时间。
观察异常情况
如发现细胞出现死亡、变形、颜色变化等异常情况，应及时采取 措施处理。
04 Hela细胞传代培养的应用
生物学研究
细胞生物学
Hela细胞是研究细胞增殖、分化、凋亡等基本生物学过程的良好模型，有助于深入了 解细胞生命活动的机制。
细胞培养环境的维持
温度
细胞生长需要稳定的温度环境，一般维持在37°C。
湿度
湿度过高会导致细菌滋生，湿度过低则会导致细胞干燥。
气体环境
细胞培养瓶内的气体环境需保持95%空气(细胞代谢必需的)和5% 的${CO}_{2}($维持培养基的酸碱度)。
细胞的观察与记录
观察细胞的生长状态
通过显微镜观察细胞的形态、密度和生长速度，判断细胞的生长 状态。
超声破坏载紫杉醇微泡对宫颈癌细胞株HeLa的抑制增殖及诱导凋亡作用
一
６ ９２
中 国 超声 医学 杂 志 ２ ０ ０ ８年
第２ ４卷第 ８期
Ｃ ｉｅｅＪＵｌ ａｏ ｎ ｄＶｏ ４ Ｎｏ８ ２０ ｈｎｓ ｔ ｓｕ ｄＭｅ ｌ ｒ ２ ０ ８
超 声 破坏 载 紫杉 醇微 泡 宫 细胞 株 Ｈｅ 对 颈癌 Ｌａ的抑 制 增殖 及 诱导 凋 亡 作用
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பைடு நூலகம்
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王 娜 熊正 爱 王 志 刚 伍 星
摘 要
目的 探 讨 超 声破 坏 载 紫杉 醇微 泡后 对 宫 颈 癌 Ｈｅ ａ细胞 株 的增 殖 抑制 及 凋 亡诱 导作 用 。 Ｌ
方 法 体 外 培 养 宫 颈癌 细胞 ，将 细 胞 分 为 ５ ，即 紫 杉 醇 组 ，紫 杉 醇 联 合 超 声 辐 照组 ，载 紫 杉 醇 微 泡 联 合 超 声 辐 照 组 ，载 紫 组 杉 醇 微 泡组 及 空 白对 照 组 。 ＭＴＴ 法 观 察 超 声破 坏 载 紫 杉 醇微 泡 后 在 不 同 时 间 对 细 胞 的 生 长 抑 制 情 况 ， 射 电 镜 观 察 细 胞 的 凋 亡 诱 透
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iNOS抑制剂1400W对宫颈癌HeLa细胞株生长的抑制作用
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Hela-EGFP稳转细胞株说明书
干冰运输细胞： 1、 37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化
过程。待细胞冻存液完全融化后，用 70%乙醇消毒细胞 冻存管外壁。 2、 室温 200g 离心 5 分钟收集细胞。吸去上清。 3、 用 1ml 培养基重悬细胞。 4、 将细胞接种到 6mm 培养皿或 25cm 培养瓶中，补加 5ml 培养基，37℃ 5%CO2 培养。
细胞冻存： 1、 将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶和冻存液温浴到 37℃。 2、 冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。 3、 按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化，
重悬细胞。 4、 室温 200g 离心 10 分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞，
并调节浓度至大约 1×10^6 个细胞/ml。分装到细胞冻 存管。 5、 将细胞冻存管放入程序降温盒，‐80℃过夜。 6、 将冻存的细胞转入液氮中。
5、 第二天观察细胞贴壁情况，换液去除未贴壁细胞，继续 培养。
6、 细胞生长后及时消化传代，尽早冻存 1~2 支。
细胞传代： 1、 传代前将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶温浴到 37℃。 2、 吸去细胞培养液。 3、 用 PBS 漂洗一次。 4、 加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀
覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱 中，37 摄氏度消化。在倒置显微镜下观察，看到细胞分 开及稍微变圆即可，过度消化可能导致细胞贴壁困难。 5、 加入 5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。 6、 按 1:3 到 1:5 接种细胞。
培养基：DMEM 高糖培养基+10%胎牛血清 消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA 冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO 培养条件：37℃，5% CO2
211025964_褪黑素联合顺铂对宫颈癌HeLa_细胞增殖、凋亡及侵袭的影响
生物技术进展 2023 年 第 13 卷 第 2 期 311 ~ 317Current Biotechnology ISSN 2095‑2341研究论文Articles褪黑素联合顺铂对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡及侵袭的影响沈云燕 ， 邱琦*苏州大学附属第二医院门诊办公室，江苏 苏州 215004摘要：探究了褪黑素（melatonin ， MLT ）联合顺铂（cisplatin ， DDP ）对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。
体外培养宫颈癌HeLa 细胞，利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium ， MTT)法测定MLT 、DDP 及其联合使用对宫颈癌HeLa 细胞增殖的影响；将HeLa 细胞分为对照组、褪黑素组、顺铂组和联合组；其中褪黑素组采用2.5 mmol ·L -1的褪黑素处理细胞；顺铂组采用5 μg ·mL -1的顺铂处理细胞；联合组采用2.5 mmol ·L -1的褪黑素+5 μg ·mL -1的顺铂联合处理。
采用克隆形成实验、流式细胞仪、划痕实验和Transwell 小室实验分别检测各组HeLa 细胞的增殖、凋亡、侵袭情况，蛋白质印迹法检测Ki -67、PCNA 、Bcl -2、Bax 、N 钙粘蛋白（N -cadherin ）、E 钙粘蛋白（E -cadherin ）和波形蛋白（Vimentin ）蛋白表达情况。
MTT 结果显示MLT 、DDP 可以显著抑制宫颈癌HeLa 细胞的增殖（P <0.05)，且随着使用浓度的升高抑制率显著升高；相比单独使用MLT 、DDP ，联合使用MLT 和DDP 可以显著升高对HeLa 细胞增殖的抑制率（P <0.05)。
相比对照组，褪黑素组和顺铂组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率以及Ki67、PCNA 、Bcl -2、E -cadherin 蛋白相对表达水平均降低（P <0.05），细胞凋亡率和蛋白Bax 、N -cadherin 、Vimentin 相对表达水平升高（P <0.05）。
HeLa细胞株
HeLa细胞株在生物学与医学研究中，HeLa细胞是指源自一名美国妇女的子宫颈癌细胞的细胞。
这名美国妇女名叫Henrietta Lacks，于1951年死于癌症。
本来为了让Lacks保持匿名，此细胞株宣称是依“Helen Lane”命名。
HeLa细胞株被George Gey分送给众研究单位（而未通知Lacks本人也未得到她的许可），因用作癌症研究而广为流传。
至今已被视为“不死的”，也就是说此细胞株（不同于其他人类细胞）不会老死，而且可以不限次数的分裂下去，而且已被培养出一个不间断的系列。
从1951年至今，Hela细胞已经培养了50多年，分裂了18000次以上仍然没有停止的迹象。
此细胞株即使和其他癌细胞相比，增殖依然异常迅速。
一般两天左右即可长到35000000～40000000个。
然而，由于当初采集细胞时并没有征得患者或家属的同意，HeLa细胞株广泛应用引发了一系列的医学伦理问题。
2009年，Rebecca Skloot将这个具有传奇性的故事编撰成书，书名为《永生的海拉》[1]。
此细胞株被用作“model cancer cells”来研究细胞信号传导（cellular signal transduction）。
HeLa细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒（Human Papillomavirus 18 或HPV18）转型成癌细胞的，而且和正常子宫颈细胞有许多不同。
目前已经证实HeLa细胞株难以控制。
此细胞株有时会污染同一实验室的其他细胞培养环境（cell culture），进而影响生物研究。
由于研究人员很少检查已确立的细胞株的本质和纯粹度，因此污染的程度不明。
据说有相当数目的“人造”细胞株其实是HeLa细胞株，也就是说原来的细胞株被一群受到HeLa细胞株污染的快速增殖细胞淹没了。
有的学者已经认为此细胞株其实是一新的品种，因为此细胞株能自行繁殖和散布。
在1991年此细胞株被命名为Helacyton gartleri。
miR-200a_对宫颈癌细胞系HeLa_增殖、迁移、侵袭调控作用观察及其靶向mRNA_和lncRN
miR -200a 对宫颈癌细胞系HeLa 增殖、迁移、侵袭调控作用观察及其靶向mRNA 和lncRNA 预测分析蔡添娥，陈丽婷，于英上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心海南医院产前诊断中心，海南三亚572000摘要：目的 观察微小RNA -200a （miR -200a ）对宫颈癌细胞系HeLa 增殖、迁移和侵袭的调控作用，对miR -200a 的靶向mRNA 及靶向长链非编码RNA （lncRNA ）进行预测分析。
方法 取人宫颈癌细胞系HeLa 分为1、2、3及4组，分别转染miRNA 模拟物miR -200a mimics 、miRNA 抑制物miR -200a inhibitor 、对照物mimics NC 及inhibitor NC 。
培养48 h 时采用qRT -PCR 法检测各组细胞miR -200a 表达；采用CCK8法检测各组细胞增殖能力，采用Tran⁃swell 侵袭实验检测细胞侵袭能力，采用Transwell 迁移实验和细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。
使用miRNA 数据库在线预测miR -200a 靶向mRNA 和靶向lncRNA ，采用基因本体论功能注释和京都基因和基因组百科全书富集分析法分析宫颈组织中miR -200a 的靶向mRNA 和靶向lncRNA 的生物学功能。
结果 与3组比较，1组细胞miR -200a 相对表达量高；与4组比较，2组细胞miR -200a 相对表达量低（P 均<0.05）。
与3组比较，培养72、96 h 时1组细胞增殖能力低，培养48 h 时侵袭细胞数及细胞穿膜数少，细胞迁移率低（P 均<0.05）；与4组比较，培养72、96 h 时2组细胞增殖能力高，培养48 h 时侵袭细胞数及细胞穿膜数多，细胞迁移率高（P 均<0.05）。
miR -200a 靶向mRNA 及lncRNA 分别有83、6个， miR -200a 靶向mRNA 功能主要有与转录调控、自噬体组装、神经元迁移和轴突导向等生物学过程，信号通路主要有Wnt 信号通路、Hippo 信号通路及内质网蛋白加工信号通路等。
采用慢病毒载体干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株的构建及意义
胞株 。结果 ： 确定 嘌呤霉素的最佳筛选浓度为 ０ ． ９ ｍｇ ／ Ｌ ； ５ 种慢病毒载体均成功转染人宫颈癌 Ｈ ｅ ｌ ａ 细胞 中， 经 嘌呤霉素筛
选 ２周后成功获得稳定转染细胞株 。结论： 干扰 Ａ Ｌ Ｄ Ｈ 一 １ 表达的宫颈癌 Ｈｅ ｌ ａ 细胞稳转株成功构建。
【 关键词 】 氧化还原酶类 ；乙醛 ；慢病毒属 ； 遗传 载体 ； 转染 ；Ｈ ｅ Ｌ ａ 细胞
Ｔ ｈ ｅ Ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｓ ｕ ｃ ｃ ｅ ｓ ｓ ｆ ｕ ｌ Ｃｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｉｏ ｔ ｎ ｏ ｆ Ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ Ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｅ ｃ ｌ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｈｅ ｌ ａ Ｃｅ ｌ ｌ ｓ ｗｉ ｔ ｈ Ｌ ｅ ｎ ｉ ｆ ｖ ｉ ｒ ａ ｌ Ｖｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｕ Ｕ Ｌ ｏ ｎ ｇ － ｙ ａ ｎ ｇ．
刘龙 阳 张 帝开 易娟娟 陈 勃 张 丙忠 陈志辽 梁金 晓 林仲秋
【 摘 要 】 目的 ： 采用干扰 乙醛脱氢酶 １ （ ＡＩ Ｄ Ｈ一 １ ） 表达的慢病毒载体转染宫颈癌 Ｈｅ ｌ ａ 细胞 ， 构建干扰 Ａ Ｌ Ｄ Ｈ 一 １ 表
达的稳转株 ， 以利进一步探讨干扰 Ａ Ｌ Ｄ Ｈ一 １ 表达 的宫颈癌 Ｈ ｅ ｌ ａ 细胞株的生物学特性 。方法 ： 体外培养宫颈癌 Ｈｅ ｌ ａ 细胞 ， 加入梯度浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选 ， 确定最佳筛选浓度 ； 取 ２ ４孔板 中对数生长的宫颈癌 Ｈ ｅ ｌ ａ 细胞 ， 吸弃 旧培养液 ， 加入 ４ ０ ０ 新培养基 ， 分别加入 ４ 种干扰慢病毒液（ Ａ Ｌ Ｄ Ｈ 一 １ 、 Ａ Ｌ Ｄ Ｈ１ — １ ７ １ ９ 、 Ａ Ｌ Ｄ Ｈ１ — ７ ４ ０ 、 Ａ Ｌ Ｄ Ｈ１ — ９ ２ １ ， 其 中有一种具最
STAT3对宫颈癌HeLa细胞的增殖、凋亡及自噬的影响
STAT3对宫颈癌HeLa细胞的增殖、凋亡及自噬的影响张慧蓉;申东翔;罗敏;李军鹏;杨耀【摘要】目的探讨信号转导和转录活化因子3(STAT3)对宫颈癌HeLa细胞的增殖、凋亡及自噬的影响.方法通过基因过表达及低表达等方法分析STAT3对宫颈癌HeLa细胞的增殖、凋亡及自噬的影响.结果过表达STAT3后HeLa细胞的增殖能力明显增强(P<0.01),凋亡率明显下降(P<0.01),无凋亡小体及自噬小体,同时可使HeLa细胞的Caspase-3、Beclin1和LC3-II蛋白表达降低,Bcl-2表达增加(P<0.01);而抑制STAT3表达后,则相反.结论 STAT3可以促进宫颈癌HeLa细胞增殖,抑制其凋亡及自噬,可能与影响凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3及自噬相关基因Beclin1和LC3-II的蛋白表达有关,参与宫颈癌细胞的自噬过程,从而影响宫颈癌的发展进程.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2018(034)016【总页数】6页(P2653-2658)【关键词】宫颈癌;STAT3;增殖;凋亡;细胞自噬【作者】张慧蓉;申东翔;罗敏;李军鹏;杨耀【作者单位】广州军区广州总医院妇产科广州510010;广州中医药大学广州510006;广州军区广州总医院妇产科广州510010;广州中医药大学广州510006;广州中医药大学广州510006;广州中医药大学广州510006【正文语种】中文宫颈癌是育龄期女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，居女性恶性肿瘤死亡第2位，且发病率逐年升高及呈年轻化趋势，药物和妇科手术治疗对肿瘤虽取得一定疗效，但中晚期恶性肿瘤普遍预后不良的局面并未改变［1］。
近年来对宫颈癌的研究不断深入，但宫颈癌的具体发病机制仍不明确。
因此，目前迫切需要进一步深入探讨宫颈癌的具体发病机制，为宫颈癌尤其是晚期及复发性宫颈癌的治疗与预后提供新思路。
信号转导和转录活化因子3（signal transducers and activators of transcription，STAT3）是一种重要的调控基因，对宫颈癌细胞具有重要的调控作用，与宫颈癌的复发、淋巴转移及患者预后等明显相关，能够引起细胞自噬调控的异常从而影响肿瘤的进展［2］。
宫颈癌Hela细胞株中Bcrp1+表型细胞的侵袭力
Matrigel 用 基底膜试验在 Boyden 中进行。小室置于 24 孔板内， 4ħ HDMEM 1ʒ 3 稀释， 每个小室60 μl， 分 3 次铺， 间隔 10 min。
+ 37ħ 、 5% CO2 孵 育 30 min 后， 上 室 加 入 分 选 后 的 Bcrp1 、
Bcrp1 － 细 胞， 下 室 加 入 NIH3T3 细 胞 的 条 件 培 养 液 200 μl。 37ħ 、 5% CO2 孵育 5 h， 于共聚焦显微镜下任取 5 个不重复的 视野观察细胞穿过膜的数量并测量侵袭深度 。 1. 4 统计学处理
+ 宫颈癌 Hela 细胞株中 Bcrp1 表型细胞的侵袭力
张松灵
〔摘
+
1
张海鹏
要〕 目的
1
王建六
（ 北京大学人民医院妇产科， 北京 100044 ）
采用免疫荧光标记物流式细胞仪分选 HeLa 细胞系中 Bcrp1 + 表型 Hela 细胞系中存在 Bcrp1 + 细胞， 比例为 7. 1% 。
-
探讨 Bcrp1 + 宫颈癌 Hela 细胞的侵袭及转移能力。方法
2 采用 SPSS11. 0 统计软件， 计数资料以 χ
检验， 计量资料行 t 检验。
+
Hela 细胞 （ 上海中科院细胞研究所 ） ， Bcrp1 及 2 2. 1 结 果 宫颈癌 Hela 细胞系中 Bcrp1 的表达情况
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Bcrp1 直标抗体、 Matrigel、 Transwell （ BD 公司 ） ， 标准胎牛血清 （ 灏洋生物公司） ， 高糖 DMEM 培养基、 胰蛋白酶（ Gibco 公司 ） ， 庆大霉素注射液（ 天津药业） ， 青链霉素（ 华北制药） 。 1. 2 细胞免疫荧光标记及流式细胞仪分选
人宫颈癌获得性放射抗拒细胞株(Hela-R)DNA修复能力的观察
细胞 显 著 增 多 。Ｈｅ ｌ ａ — Ｒ 细 胞 株 放 疗后 ２ ４ ｈ与 ４ ８ ｈ ， 彗 星 尾 长 均 短 于 Ｈｅ ｌ ａ细 胞株 。Ｘ 射 线 照 射 １ ｈ后 ， Ｈｅ ｌ ａ — Ｒ 细胞 株 Ｅ ｄ Ｕ 荧光 强度 为 １ ２ １ ． ３ ２ ±３ ９ ． ６ ７ （ Ｐ ＜０ ． ０ １ ） ， 高 于 Ｈｅ ｌ ａ细胞 株 。结 论
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ： １ ６ ７ １ ８ ３ ４ ８ （ ２ Ｏ １ ３ ） １ ２ － １ ３ ７ ０ — ０ ４
Ｏｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏｆ ｔ ｈｅ ＤＮＡ ｒ ｅ ｐ ａ ｉ ｒ ｃ ａ ｐａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ａ ｃ ｑ ｕｉ ｒ ｅ ｄ ｒ ａ ｄｉ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ｆ ｒ ｏｍ ｈｕ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｖ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ Ｌｉ ｕ Ｃｈｅ ｎ， Ｐａｎ ｇ Ｘｕ ｅ ｌ ｉ
（ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｏｎ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｓ ｔ Ｈｏ ｓ ｐｉ ｔ ａ ｌ ， Ｔｈ ｉ ｒ ｄ Ｍｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ ｑ ｉ ｎ ｇ ４ ０ ０ ０ ３ ８ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： ０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔｏ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ＤＮＡ ｒ ｅ ｐ ａ ｉ ｒ ｃ ａ ｐ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｄ ｉ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ（ Ｈｅ ｌ ａ — Ｒ）ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ
Hela细胞转染实验报告
Hela细胞的传代培养及生长周期观察HE染色观察高学敏生36 2013012322一、实验背景（一）关于Hela细胞Hela细胞是源自美国妇女Henrietta Lacks的子宫颈癌细胞，取于1951年，属于增殖型表皮癌细胞。
在体外培养条件下，经过筛选，目前实验使用的Hela 细胞为无限细胞系，在适宜条件下可以无限分裂，不会衰退，可以连续传代。
经过六十多年，Hela细胞已经被培养出多个细胞系，它几乎成为细胞生物学中的一种“模式生物”。
似癌细胞的特征，其核型已非二倍体型，而是非整数倍体（aneuploid）。
2013年Andrew Adey等人在Nature发表的研究表明，Hela细胞的基因组相当稳定，可将不同细胞系区分开的点突变和基因拷贝数改变相当少1，这是Hela细胞的一大特点。
（二）原代培养、传代培养、衰退进行细胞体外培养前，最初需要从活体中获得细胞。
从体内获得细胞进行的首次培养为原代培养。
当原代培养细胞增殖达到一定密度后，需要做继代培养，被称为传代培养。
细胞在体外培养过程中的群体生存状况与在完整机体内的生存与衰老死亡基本一致；本次所做的Hela细胞实验为Hela细胞传代实验，即将已长到相当密度的原培养皿中的Hela细胞转移至新培养皿中培养。
在原代培养期，细胞增殖能力弱，第一次传代后，部分细胞可以重新贴壁，此时细胞增殖能力增强；另外亦是为了获得更多的细胞，因此进行传代操作。
培养的组织细胞在体外可以反复传代十几次左右，若传代十几次后细胞进入衰退阶段并死亡，则该细胞系称为有限细胞系；若在衰退阶段，部分细胞的遗传特性发生改变，可以无限传代，则该部分细胞将发展为无限细胞系。
Hela 细胞系即为无限细胞系，已历经六十多年的传代培养。
（三）贴附型细胞与悬浮型细胞在体外培养时，根据细胞能否贴附于支持物上分为贴附型细胞和悬浮型细胞两类。
大多数细胞系属于贴附型细胞，血液中的白细胞和某些癌细胞属于悬浮型细胞。
Hela细胞属于贴附型细胞，它需要贴附于支持物上才可能存活并增殖。
人宫颈癌细胞Hela移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的比较
人宫颈癌细胞Hela移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的比较李小颖;马春梅;张连峰【摘要】目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的人宫颈癌细胞系,建立移植瘤模型并比较移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的优缺点.方法以Lipofectamine 2000介导chicken β-actin-GFP-NEO转染人宫颈癌细胞Hela,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养.BALB/cA-nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,利用活体荧光成像系统和游标卡尺观察肿瘤的生长情况.结果获得了稳定表达GFP的人宫颈癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤.活体荧光成像观察发现,1至3周随着肿瘤体积逐渐增大,平均荧光光子数逐渐增加;4周时随着肿瘤出现明显坏死,平均荧光光子数呈现下降趋势,而游标卡尺测量结果显示肿瘤在4至5周仍然不断的增大.结论绿色荧光蛋白能够在人宫颈癌细胞Hela 中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人宫颈癌细胞Hela建立的裸鼠肿瘤模型可以为人宫颈癌研究提供理想的实验材料,应用小动物活体成像系统能够客观定量评价活的肿瘤细胞在动物体内的生长情况,而不是肿瘤体积的变化.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2010(020)001【总页数】6页(P15-18,后插2,后插4)【关键词】人宫颈癌细胞;裸小鼠;活体荧光成像系统;游标卡尺【作者】李小颖;马春梅;张连峰【作者单位】中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京100021;中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京100021;中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京100021【正文语种】中文【中图分类】R541Hela细胞源自一名美国妇女的子宫颈癌细胞,此细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒 (Human Papillomavirus 18或 HPV18)转型成癌细胞的,而且和正常子宫颈癌细胞有许多不同,此细胞显角蛋白免疫沉淀染色阳性,包含 HPV-18序列,有正常水平的 pRB表达和 p53的低水平表达。
hela细胞_电转_条件_解释说明以及概述
hela细胞电转条件解释说明以及概述1. 引言1.1 概述在生物学研究领域，细胞是一个重要的研究对象。
近年来，为了更深入地了解细胞的功能和特性，科学家们不断发展新的实验技术和方法。
其中，电转技术作为一种有效的基因转染手段，在细胞研究中得到了广泛应用。
本文将对Hela细胞进行电转实验条件进行解释说明，并介绍其概述、历史、特点、应用价值和争议等方面内容。
同时，还将对电转技术的原理、过程、条件要求及其在细胞研究中的应用和发展趋势进行简要介绍。
1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、Hela细胞简介、电转技术简介、Hela细胞的电转实验条件解释说明以及结论与展望。
引言部分主要对文章进行概述，并介绍电转技术在生物学研究中的重要性。
Hela细胞简介部分将详细介绍Hela细胞的定义和历史，以及其特点和应用领域。
同时，还将探讨Hela细胞所带来的价值和争议。
电转技术简介部分将对电转技术的原理、背景及其在细胞研究中的过程、条件要求和发展趋势进行简要介绍。
这一部分将为后续Hela细胞的电转实验条件解释说明提供基础知识。
Hela细胞的电转实验条件解释说明部分将解析具体的实验操作和参数优化，包括转染基因的选择与构建、细胞培养条件及支持物质控制要点以及电转参数优化与影响因素分析等内容。
结论与展望部分将对全文进行总结，并提出未来研究的展望与建议。
通过本文的研究，我们可以更全面地理解Hela细胞的特性和应用，并为相关领域的进一步研究提供参考依据。
1.3 目的本文旨在详细介绍Hela细胞在电转实验中所需的条件，通过对电转技术原理和Hela细胞特点的阐述，提供实验操作指南，并为该领域未来研究方向提供展望和建议。
同时，希望通过本文使读者们能够更好地了解和应用电转技术在细胞研究中的意义和作用。
2. Hela细胞简介:2.1 定义和历史:Hela细胞是一种人类宫颈癌细胞系，最早由美国科学家乔治·格威普斯（George Gey）在1951年从艾尔中心查理医院的病患名叫海拉（Henrietta Lacks）的宫颈癌组织中分离出来。
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宫颈癌H e l a细胞株
培养
本科学生综合性
实验报告
姓名：学号：
学院：专业、班级：
实验课程
指导教师及职称
开课学期至学年上学期
云南师范大学教务处编印
胰酶溶液，并加入适量培养液终止消化，吹打分散。
细胞计数：取5ul细胞悬浮液加入等量台盼蓝染液，混匀后用血球计数板计算细胞的成活率。
如果样本成活率高，无污染即可用于传代。
(计数结果：4.5×106个/ml)。
将细胞分装至新鲜的培养液中，使细胞的最终数量调节至1×105～3×105个/mL。
置于37℃二氧化碳培养箱中继续培养。
具体操作：
每两个小组共用一个培养瓶配制100ml的生长培养基
每人取10ml培养基到自己的细胞培养瓶内
向细胞培养瓶内接种400ul的HeLa细胞株原液
放入二氧化碳培养箱，旋松瓶盖
根据细胞的数量看细胞瓶是否平放或直立放置
（四）、死活细胞的鉴别
将细胞悬液充分混匀后取20ul放入干净的离心管中，加入等体积的0.4%的台盼蓝染液混合，放置2min。
取一干净的血球计数板，盖上盖片，从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。
注意滴液勿有气泡，也不能太多（约10ul），否则会使盖片浮起而是细胞计数不准。
低倍镜下观察，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。
找出计数板上的方格，计算四角大格内总的细胞数，压着大格线者只计左侧或上方，不计右侧或下方。
五、实验结果分析与讨论：
六、参考文献：。