宫颈癌Hela细胞株中Bcrp1+表型细胞的侵袭力
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细胞， 并利用 Boden 小室侵袭试验检测两组 Bcrp1 表型及 Bcrp1 表型细胞的侵袭能力。 结果
Bcrp1 表型组侵袭过人工基底膜的细胞数为 99 ʃ 14. 2 ， 侵袭深度为 （ 365. 61 ʃ 52. 32 ） μm； Bcrp1 表型组侵袭过人工基底膜的细胞数为 57 ʃ 13. 3 ， 侵 袭深度（ 301. 04 ʃ 53. 81 ） μm。Bcrp1 + 亚群细胞穿透人工基底膜的细胞数及穿透深度均明显强于 Bcrp1 -亚群， 差异有统计学意义（ P ＜ 0. 05 ） 。结论 Bcrp1 + 表型 Hela 细胞具备较强的侵袭转移能力 ， Bcrp1 可能成为宫颈癌干细胞标记物。 其中可能含有宫颈癌干细胞， 〔关键词〕 宫颈肿瘤； Bcrp1 ； 肿瘤干细胞 〔中图分类号〕 R73 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 10059202 （ 2012 ） 07141703 ；doi：10. 3969 / j. issn. 10059202. 2012. 07. 042
－
Matrigel 用 基底膜试验在 Boyden 中进行。小室置于 24 孔板内， 4ħ HDMEM 1ʒ 3 稀释， 每个小室60 μl， 分 3 次铺， 间隔 10 min。
+ 37ħ 、 5% CO2 孵 育 30 min 后， 上 室 加 入 分 选 后 的 Bcrp1 、
Bcrp1 － 细 胞， 下 室 加 入 NIH3T3 细 胞 的 条 件 培 养 液 200 μl。 37ħ 、 5% CO2 孵育 5 h， 于共聚焦显微镜下任取 5 个不重复的 视野观察细胞穿过膜的数量并测量侵袭深度 。 1. 4 统计学处理
2 采用 SPSS11. 0 统计软件， 计数资料以 χFra Baidu bibliotek
检验， 计量资料行 t 检验。
+
Hela 细胞 （ 上海中科院细胞研究所 ） ， Bcrp1 及 2 2. 1 结 果 宫颈癌 Hela 细胞系中 Bcrp1 的表达情况
－
Bcrp1 直标抗体、 Matrigel、 Transwell （ BD 公司 ） ， 标准胎牛血清 （ 灏洋生物公司） ， 高糖 DMEM 培养基、 胰蛋白酶（ Gibco 公司 ） ， 庆大霉素注射液（ 天津药业） ， 青链霉素（ 华北制药） 。 1. 2 细胞免疫荧光标记及流式细胞仪分选
+ 宫颈癌 Hela 细胞株中 Bcrp1 表型细胞的侵袭力
张松灵
〔摘
+
1
张海鹏
要〕 目的
1
王建六
（ 北京大学人民医院妇产科， 北京 100044 ）
采用免疫荧光标记物流式细胞仪分选 HeLa 细胞系中 Bcrp1 + 表型 Hela 细胞系中存在 Bcrp1 + 细胞， 比例为 7. 1% 。
-
探讨 Bcrp1 + 宫颈癌 Hela 细胞的侵袭及转移能力。方法
The research of the ability of migration and invasion of Bcrp1 + Hela cells ZHANG SongLing， ZHANG HaiPeng，WANG JianLiu. Department of Obstetric and Gynecology，Peking University People's Hospital， Peking 100044 ，China 【Abstract】 Objective To identify the ability of migration and invasion of Bcrp1 + phenotype Hela cells and in order to make sure if Bcrp1 is the marker of cervical cancer stem cells or not. Methods Methods Flow cytometry was used to isolate the Bcrp1 + cells in Hela cell line ，tumor cell migration and invasion were measured by Boyden chamber to identify the ability of Bcrp1 + phenotype Hela cells. Results Hela cells contained 7. 1% Bcrp1 + cells. The number of invasive cells under the chamber of Bcrp1 + cells was 99 ʃ 14. 2 ，the depth of invasion through matrigel was （ 365. 61 ʃ 52. 32 ） μm. The number of invasive cells under the chamber of Bcrp1 － cells was 57 ʃ 13. 3 ，the depth of invasion through matrigel was （ 301. 04 ʃ 53. 81 ） μm. The difference between the two groups was significant. Conclusions Bcrp1 + cells have more migration and invasion ability than Bcrp1 － cells. Bcrp1 might be the marker of cervical cancer stem cells. 【Key words】 Cervical cancer； Bcrp1 ； Cancer stem cells 肿瘤干细胞学说为肿瘤治疗开拓了新的思路 ， 现已在急性 髓性白血病、 乳腺癌、 脑胶质瘤等肿瘤组织中成功分离出了肿 瘤干细胞， 但国内外尚未见宫颈癌干细胞成功分离的报道 。 因 此， 本实验 对 表 达 肿 瘤 干 细 胞 通 用 标 记 物 乳 腺 癌 耐 药 蛋 白 （ breast cancer resistance protein 1 ， Bcrp1 ） 的宫颈 Hela 细胞展开 研究， 观察其是否具备较强的侵袭及转移能力 。 1 1. 1 材料与方法 材料
细胞， 并利用 Boden 小室侵袭试验检测两组 Bcrp1 表型及 Bcrp1 表型细胞的侵袭能力。 结果
Bcrp1 表型组侵袭过人工基底膜的细胞数为 99 ʃ 14. 2 ， 侵袭深度为 （ 365. 61 ʃ 52. 32 ） μm； Bcrp1 表型组侵袭过人工基底膜的细胞数为 57 ʃ 13. 3 ， 侵 袭深度（ 301. 04 ʃ 53. 81 ） μm。Bcrp1 + 亚群细胞穿透人工基底膜的细胞数及穿透深度均明显强于 Bcrp1 -亚群， 差异有统计学意义（ P ＜ 0. 05 ） 。结论 Bcrp1 + 表型 Hela 细胞具备较强的侵袭转移能力 ， Bcrp1 可能成为宫颈癌干细胞标记物。 其中可能含有宫颈癌干细胞， 〔关键词〕 宫颈肿瘤； Bcrp1 ； 肿瘤干细胞 〔中图分类号〕 R73 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 10059202 （ 2012 ） 07141703 ；doi：10. 3969 / j. issn. 10059202. 2012. 07. 042
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Matrigel 用 基底膜试验在 Boyden 中进行。小室置于 24 孔板内， 4ħ HDMEM 1ʒ 3 稀释， 每个小室60 μl， 分 3 次铺， 间隔 10 min。
+ 37ħ 、 5% CO2 孵 育 30 min 后， 上 室 加 入 分 选 后 的 Bcrp1 、
Bcrp1 － 细 胞， 下 室 加 入 NIH3T3 细 胞 的 条 件 培 养 液 200 μl。 37ħ 、 5% CO2 孵育 5 h， 于共聚焦显微镜下任取 5 个不重复的 视野观察细胞穿过膜的数量并测量侵袭深度 。 1. 4 统计学处理
2 采用 SPSS11. 0 统计软件， 计数资料以 χFra Baidu bibliotek
检验， 计量资料行 t 检验。
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Hela 细胞 （ 上海中科院细胞研究所 ） ， Bcrp1 及 2 2. 1 结 果 宫颈癌 Hela 细胞系中 Bcrp1 的表达情况
－
Bcrp1 直标抗体、 Matrigel、 Transwell （ BD 公司 ） ， 标准胎牛血清 （ 灏洋生物公司） ， 高糖 DMEM 培养基、 胰蛋白酶（ Gibco 公司 ） ， 庆大霉素注射液（ 天津药业） ， 青链霉素（ 华北制药） 。 1. 2 细胞免疫荧光标记及流式细胞仪分选
+ 宫颈癌 Hela 细胞株中 Bcrp1 表型细胞的侵袭力
张松灵
〔摘
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1
张海鹏
要〕 目的
1
王建六
（ 北京大学人民医院妇产科， 北京 100044 ）
采用免疫荧光标记物流式细胞仪分选 HeLa 细胞系中 Bcrp1 + 表型 Hela 细胞系中存在 Bcrp1 + 细胞， 比例为 7. 1% 。
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探讨 Bcrp1 + 宫颈癌 Hela 细胞的侵袭及转移能力。方法
The research of the ability of migration and invasion of Bcrp1 + Hela cells ZHANG SongLing， ZHANG HaiPeng，WANG JianLiu. Department of Obstetric and Gynecology，Peking University People's Hospital， Peking 100044 ，China 【Abstract】 Objective To identify the ability of migration and invasion of Bcrp1 + phenotype Hela cells and in order to make sure if Bcrp1 is the marker of cervical cancer stem cells or not. Methods Methods Flow cytometry was used to isolate the Bcrp1 + cells in Hela cell line ，tumor cell migration and invasion were measured by Boyden chamber to identify the ability of Bcrp1 + phenotype Hela cells. Results Hela cells contained 7. 1% Bcrp1 + cells. The number of invasive cells under the chamber of Bcrp1 + cells was 99 ʃ 14. 2 ，the depth of invasion through matrigel was （ 365. 61 ʃ 52. 32 ） μm. The number of invasive cells under the chamber of Bcrp1 － cells was 57 ʃ 13. 3 ，the depth of invasion through matrigel was （ 301. 04 ʃ 53. 81 ） μm. The difference between the two groups was significant. Conclusions Bcrp1 + cells have more migration and invasion ability than Bcrp1 － cells. Bcrp1 might be the marker of cervical cancer stem cells. 【Key words】 Cervical cancer； Bcrp1 ； Cancer stem cells 肿瘤干细胞学说为肿瘤治疗开拓了新的思路 ， 现已在急性 髓性白血病、 乳腺癌、 脑胶质瘤等肿瘤组织中成功分离出了肿 瘤干细胞， 但国内外尚未见宫颈癌干细胞成功分离的报道 。 因 此， 本实验 对 表 达 肿 瘤 干 细 胞 通 用 标 记 物 乳 腺 癌 耐 药 蛋 白 （ breast cancer resistance protein 1 ， Bcrp1 ） 的宫颈 Hela 细胞展开 研究， 观察其是否具备较强的侵袭及转移能力 。 1 1. 1 材料与方法 材料