麝香保心丸、脉平对腹主动脉狭窄高血压大鼠心肌肥厚的作用

麝香保心丸、脉平对腹主动脉狭窄高血压大鼠心肌肥厚的作用

发表时间：2013-10-24T09:19:25.250Z 来源：《医药前沿》2013年第28期供稿作者：柳玲1 石磊2 黄杲1 梁绪国2(通讯作者)

[导读] 高血压心肌肥厚是心律失常、心衰和猝死等发生的主要原因之一，故如何控制左室肥厚形成是一个十分重要的课题。

柳玲1 石磊2 黄杲1 梁绪国2(通讯作者)

（1 山东省烟台白石肛肠医院山东烟台 264001）

（2 山东省烟台毓璜顶医院山东烟台 264000）

【摘要】目的在腹主动脉狭窄高血压大鼠模型上观察了心肌肥厚的变化，并探讨其与多种细胞因子、基质金属蛋白酶、心肌细胞凋亡率、凋亡调控基因表达等多种因素之间的关系及中药麝香保心丸、脉平对心肌肥厚和各种影响因素的作用。方法双抗夹心ELISA法测定MMP-2、MMP-9和IL-6、IL-10；放免法检测TNF-α；流式细胞法测心肌细胞凋亡率和凋亡调控基因表达。结果腹主动脉狭窄6周后，大鼠左室重及室重/体重比值明显增加；同时多种细胞因子、基质金属蛋白酶、心肌细胞凋亡率、凋亡调控基因表达等均发生了相应的变化；麝香保心丸和脉平对心肌肥厚和各种影响因素有较好的治疗和预防作用。结论心肌肥厚可能与多种因素有关；麝香保心丸和脉平对预防和治疗心肌肥厚有一定的作用。

【关键词】心肌肥厚麝香保心丸脉平细胞因子基质金属蛋白酶凋亡

【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）28-0151-02

Effect of Shexiangbaoxinwan and Maiping on Left Ventricle in Pressure-Overloaded Hypertrophy Rat

【ABSTRACT】 AIM：To explore the effect of Shexiangbaoxinwan and Maiping on left ventricle in pressure-overloaded hypertrophy rats. And also the relationship between left ventricular hypertrophy (LVH) and cytokines, matrix metalloproteinases, apoptosis, and apoptosis genes. METHODS: IL-6, IL-10, MMP-2, MMP-9 were evaluated by ELISA means. TNF-alpha was measured with radioimmunoassays. Flow cytometer was used to measure the apoptosis ratio and the expression of Fas , Bcl-2 and Bax. RESULTS: 6 weeks after abdominal aortic coarctation operation, compared with the sham operated group, the weight of the left ventricle

(0.995±0.320g) and heart weight/body weight (0.369±0.149) were significantly increased in modern group. And also IL-6

(213.56±83.41pg/ml), TNF-α(1.997±0.812ng/ml), MMP-2 (72.91±35.59), MMP-9 (60.15±26.43), and apoptosis genes (Fas, Bax, Bcl-2, Bcl-2/Bax) expression were increased；apoptosis ratio (9.81±5.03), IL-10 (91.07±38.74pg/ml) decreased compared with sham operated group. The 2 groups with drugs (SB,MP) decreased the increasing weight of LV and ventricular weight/body weight; and inhibited the changes of influencing factors (IL-6, IL-10, TNF-α, MMP-2, MMP-9, apoptosis ratio, apoptosis genes expression). CONCLUSION: LVH might be related with many influencing factors. Shexiangbaoxinwan and Maiping may have the positive importance in the treatment and prevention of LVH.

【KEY WORDS】 LVH Shexiangbaoxinwan Maiping Cytokines Matrix metalloproteinases Apoptosis 近年来的研究已证实高血压的发病与许多因素有关，进而完善和发展了传统的高血压发生、发展的机制，为彻底地阐明高血压的发病机制、发展和转归机理以及人类最终完全控制高血压奠定了分子生物学机理。但其发生机理以及与心室重构和心肌肥厚的关系尚未完全阐明。本研究采用腹主动脉狭窄大鼠高血压模型，观察了麝香保心丸和脉平对高血压大鼠心肌肥厚的作用及对血清中细胞因子（IL-6、IL-10、TNF-α）、基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）水平变化以及大鼠心肌细胞凋亡率和凋亡调控基因（Bcl-2、Fas、Bax）表达的影响。

1 材料与方法

1.1 动物模型的制备

取健康SD大鼠60只，（雌雄各半，2月龄，体重160～180g）术前禁食12小时，自由饮水。用3%巴比妥钠腹腔注射麻醉后，随机分为腹主动脉狭窄手术组（45只）和假手术组大鼠（15只）。参照文献并对手术方式加以改进，于左肋弓下缘0.5cm、脊柱前0.5cm处行1.5～2.0cm纵切口，逐层分离皮下组织，于左肾后上方分离肾动脉，在左右肾动脉分支之间的腹主动脉下方穿入2.0手术缝线，沿血管走行方向放置针尖磨钝的7号注射针头与腹主动脉一起结扎，这时可触摸到结扎点下方腹主动脉搏动明显减弱，小心拔出针头，腹腔滴入青霉素（40万U/ml）适量，逐层关腹，缝合。术后肌注青霉素10万U。假手术组不结扎腹主动脉，其余同手术组。术后正常饮食，定时观查体征。

1.2 实验动物分组和程序

造模7天后，腹主动脉狭窄手术组随机分为3组，即模型对照组（模型组），麝香保心丸组（SB组），脉平组（MP组）。假手术组、模型组每日饮用水10ml/kg灌胃；SB组，SB100mg/kg、MP组，MP60mg/kg。将上述药物溶解于饮用水中，按10ml/kg每日一次胃管灌入，共6周。实验过程中动物均自由饮食。

治疗6周后，禁食12小时，称体重。麻醉后从腹主动脉抽取6ml血液，高速离心后分离出血清，-70℃保存待用。立即摘取大鼠心脏，剪断肺静脉，从肺动脉瓣之上2mm处将肺动脉切断，在心包的脏层转折处剪断主动脉和上、下腔静脉。取出心脏后用0.1mol/L、PH7.4 PBS洗涤，滤纸吸干，称重；沿二尖瓣平面分离心房与心室，去右心室，称重。计算大鼠左室重/体重（g/100g）比值。

1.3 检测方法

1.3.1 双抗夹心ELISA法测定MMP-2、MMP-9和IL-6、IL-10（分别严格按各试剂盒说明书操作）。

1.3.2 放免法检测TNF-α：采用液相竞争法，分管加样后充分混匀，4℃放置24h，加入分离剂后充分混匀，室温放置20min，4℃离心3500rpm 25min，吸弃上清夜，在自动γ计数器上计算标准曲线和TNF-α浓度。

1.3.3 流式细胞法测心肌细胞凋亡率和凋亡调控基因表达用机械法分散心肌组织,收集单细胞悬液,经300目尼龙网过滤离心沉淀

2min后,加生理盐水洗涤,再次离心沉淀后,置于70%乙醇中备用。加入碘化丙啶（promide iodine，PI）工作液0.5 ml，终浓度为10 mg/L，室温避光30 min后上机进行流式细胞仪（FACScan型流式细胞仪，美国BD公司生产）检测。

上机前以标准荧光微球调整仪器的变异系数并稳定在2%以内，上机后收集2万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在Macintosh 650计算机上用CellQuest Plot 软件（BD公司提供）分析数据，由HP1200 c/PS打印结果。

心肌细胞凋亡及凋亡基因表达量以标记阳性细胞百分率表示：=标记阳性细胞数/受检细胞数×100%-非特异结合细胞%[1]。

1.4 主要药品和试剂麝香保心丸（Shexiangbaoxinwan, SB）由上海和黄药业公司提供；脉平原粉（maiping，MP）由甘肃独一味