【CN110373388A】一种用于类器官培养的培养基及类器官培养方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910333214.3

(22)申请日 2019.04.24

(71)申请人 博奥生物集团有限公司

地址 102206 北京市海淀区生命科学园路

18号

(72)发明人 郭弘妍　张怡然　隋锡朝　王俊　

邢婉丽　程京　

(74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限

公司 11245

代理人 关畅　陈晓庆

(51)Int.Cl.

C12N 5/09(2010.01)

C12N 5/078(2010.01)

C12N 5/071(2010.01)

C12Q 1/02(2006.01)

(54)发明名称

一种用于类器官培养的培养基及类器官培

养方法

(57)摘要

本发明涉及生物技术领域，涉及一种用于类

器官培养的培养基及类器官培养方法，所述用于

类器官培养的培养基包括：基础培养基、胸水上

清液、酶解酪蛋白、氢化可的松、左旋谷氨酸、胰

岛素、转铁蛋白、霍乱病毒、Y -27632、EGF、两性霉

素B、盘尼西林和链霉素。所述类器官培养方法包

括：将肿瘤细胞先进行二维培养；将培养后的细

胞进行三维培养，形成类器官组织。本发明的培

养基配方，在避免缺氧损伤的同时，可促进肿瘤

组织快速增殖，同时配合本发明的培养方法可极

大缩短后续药敏测试所需时间，药敏测试的精确

性，

且降低了测试成本。权利要求书1页 说明书7页 附图3页CN 110373388 A 2019.10.25

C N 110373388

A

权　利　要　求　书1/1页CN 110373388 A

1.一种用于类器官培养的培养基，其特征在于，包括：基础培养基、胸水上清液、酶解酪蛋白、氢化可的松、左旋谷氨酸、胰岛素、转铁蛋白、霍乱病毒、Y-27632、EGF、两性霉素B、盘尼西林和链霉素。

2.根据权利要求1所述的用于类器官培养的培养基，其特征在于，其中所述胸水上清液在所述基础培养基中的体积浓度为5-40％、所述酶解酪蛋白的在所述基础培养基中的质量百分比为0.5-5％、所述氢化可的松在在所述基础培养基中的浓度为1-100ng/mL、所述左旋谷氨酸在所述基础培养基中的浓度为1-10mM、所述胰岛素在所述基础培养基中的浓度为1-5μM、所述转铁蛋白在所述基础培养基中的浓度为1-200nM、所述霍乱病毒在所述基础培养基中的浓度为0.1-1nM的、所述Y-27632在所述基础培养基中的浓度为1-50μM、所述EGF在所述基础培养基中的浓度为0.5-100ng/mL、所述两性霉素B在所述基础培养基中的浓度为1-10μg/mL、所述盘尼西林在所述基础培养基中的浓度为100U/mL和所述链霉素在所述基础培养基中的浓度为100μg/mL。

3.根据权利要求2所述的用于类器官培养的培养基，其特征在于，包括：所述胸水上清液在所述基础培养基中的浓度为10％、所述酶解酪蛋白在所述基础培养基中的质量百分比为1％、所述氢化可的松在所述基础培养基中的浓度为25ng/mL、所述左旋谷氨酸在所述基础培养基中的浓度为2mM、所述胰岛素在所述基础培养基中的浓度为2μM、所述转铁蛋白在所述基础培养基中的浓度为70nM、所述霍乱病毒在所述基础培养基中的浓度为0.1nM、所述Y-27632在所述基础培养基中的浓度为10μM、所述EGF在所述基础培养基中的浓度为0.5ng/ mL、所述两性霉素B在所述基础培养基中的浓度为2.5μg/mL、所述盘尼西林在所述基础培养基中的浓度为100U/mL和所述链霉素在所述基础培养基中的浓度为100μg/mL。

4.根据权利要求1-3任一所述的的用于类器官培养的培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM培养基、DMEM/F12培养基、MEM培养基或者1640培养基。

5.体外类器官培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将肿瘤细胞先进行二维培养；

(2)将步骤1)培养后的细胞进行三维培养，形成类器官组织；

其中，所述二维培养中使用的培养基是权利要求1-4任一所述的培养基。

6.根据权利要求5所述的体外类器官培养方法，其特征在于，所述肿瘤细胞是从体液中提取得到的；优选的，体液为胸水；优选的，所述肿瘤细胞为能造成胸腔积液的原发或转移型肺部肿瘤细胞，包括鳞癌细胞、腺癌细胞或者间皮瘤细胞。

7.根据权利要求6所述的体外类器官培养方法，其特征在于，所述从体液中提取肿瘤细胞的方法中包括如下步骤：微孔芯片富集大尺寸的肿瘤细胞或细胞团，保留一部分淋巴细胞及成纤维等细胞；优选的，微孔芯片的孔径为7-20μm；所述二维培养的条件包括低氧，所述低氧是指含氧量为为2-6％。

8.一种由权利要求5-7任一所述的体外类器官培养方法培养的类器官组织。

9.一种权利要求5-7任一所述方法得到的类器官在作为药物评价模型中的应用，所述药物评价模型为抗肿瘤药物评价。

10.一种抗肿瘤药物的评价方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)利用权利要求5-9任一所述的方法得到类器官组织；

(2)使用类器官组织进行抗肿瘤药物敏感性评价。

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