克隆与医学课件

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细胞核移植技术步骤；
2.1.2.1．供体细胞的准备
用 于 细 胞 核 移 植 的 供 体 ( donor) 细 胞 有 ： 早期胚胎细胞、胚胎干细胞、胚胎成纤维细胞 和体细胞，它们可来自活体或体外培养的细胞。
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2.1.2.2．受体细胞的准备
核移植的受体(recipient)细胞有：去核卵 细胞、受精卵和2细胞胚胎，其中多以卵细胞 作为受体。卵细胞一般采用超排卵法或卵巢的 卵泡，经体外培养成熟而获得。将收集到的受 体细胞经显微操作或其他方式去除细胞核。
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细胞克隆是指一个祖先细胞经分裂，增殖 而形成一群细胞，这些细胞具有相同的遗传组 成，该群细胞中的每一个细胞都含有相同的遗 传组成和特性，亦称无性繁殖细胞系。
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1.2．生殖性克隆及治疗性克隆
1.2.1．生殖性克隆及治疗性克隆的概念
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生殖性克隆(reproductive cloning)是指对 生物包括人个体的复制，即从被克隆的个体获 得细胞之后，将其植入被去除了遗传物质的卵 细胞中，通过刺激使重构胚分化发育到囊胚， 然后植入母体的子宫里孕育，发育为与供体完 全相同的遗传组成的个体。
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2.1.3．体细胞与去核卵细胞融合技术
供体细胞不一定是核，可以是含部分细胞质 甚至是整个细胞
不进行核移植，而是用细胞融合技术，使供 核细胞与去核卵细胞融合获得重构胚体细胞
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2.2．治疗性克隆技术
治疗性克隆技术是克隆技术、胚胎干细胞 技术、移植技术结合的一种综合技术。
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2．动物克隆及治疗性克 隆技术的基本方法
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2.1．动物克隆技术的基本方法
动物克隆技术的理论依据是细胞具有全能 性。从理论上讲，动物体内几乎所有的细胞， 包括已分化的体细胞，细胞核中都含有完全相 同的遗传信息，具发育的全能性。受体卵细胞 质中含有启动细胞核重新编程的各种因子，供 体核在卵细胞质内因子的作用下，可以重新回 到未分化状态。
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在核移植的基础上获得重构胚，体外培养 至囊胚，分离内细胞团细胞，培养、筛选、获 得与供体核完全相同的遗传组成胚胎干细胞。
对胚胎干细胞进行(或不进行)基因修饰， 然后定向诱导分化成为预定的细胞、组织和器 官。移植入患者病变部位，替代病损细胞、组 织、器官，达到治疗的效果。
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用胚胎分割技术产生的后代数量有限，但 方法较简单，可有效地获得同卵孪生后代。
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2.1.2．细胞核移植技术
利用细胞拆合或细胞重组技术，将卵母细 胞去核作为核受体，以不同来源和阶段的早期 胚胎细胞或体细胞或含少量细胞质的细胞核即 核质体作为核供体，将后者移入前者中，构建 重组胚，供体核在去核卵母细胞的胞质中重新 编程，启动卵裂，开始胚胎发育过程。
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体细胞克隆技术示意图
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细胞核移植技术产生的遗传组成相同的个体 数在理论上可以是无限的。
提供细胞核的细胞还可以是连续核移植的体 细胞。随着发育的进程，核维持去核卵发育的能 力逐渐减弱。某些成体组织的细胞，可维持去核 卵发育到一定时期，并非所有细胞都具有这种能 力，连续核移植可促进基因组再程序化。
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治疗性克隆(therapeutic cloning)是指出 于治疗目的而克隆人的胚胎，提取胚胎干细胞， 并使干细胞定向发育，培育出健康的可以修复 或替代坏死受损的细胞、组织和器官，然后移 植，治疗疾病。
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1.2.2．生殖性克隆及治疗性克隆的比较
生殖性克隆与治疗性克隆都是以细胞核移 植为基础，生殖性克隆的目的是要得到一个个 体，而治疗性克隆只需要得到早期胚胎，然后 从早期胚胎中分离得到ES细胞，再将ES细胞分 化为人们所需的细胞，进行细胞移植治疗或用 以构建组织工程化组织或器官。
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动物克隆的获得途径
❖ 通过核移植将细胞中的细胞核转入去核卵细 胞后被激活，借助于卵细胞质中的某些特殊 物质，进行重新编程而生长发育
❖ 通过胚胎切割的方式产生孪生子
❖ 通过细胞融合方法使体细胞与去核的卵细胞 融合为重构胚
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2.1.1．胚胎分割技术
胚胎分割(embryo splitting)技术是指在2 细胞期至囊胚期以前的早期胚胎用酶或者是机 械方法分割，然后由分割的细胞分别发育产生 新个体。
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1997年2月23日，英国科学家Wilmut等宣 布通过克隆技术，获得了世界上第一只来源于 体细胞的克隆羊——Dolly，“克隆”问题成为科 技界、法律界、宗教界、各媒体及全社会热烈 讨论的话题。
疾病的生物学机制
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多利档案 姓名：Dolly
性别：雌
种族：哺乳纲，牛科，绵羊
生日：1996年7月5日
出生地：苏格兰
基因父亲：无
基因母亲：一只Finn Dorset种白绵羊
线粒体母亲：一只苏格兰黑脸羊
生育母亲：另一只苏格兰黑脸羊
进入社交圈时间：1997年2月23日
子女：生育6名，存活5名
死亡：2003年2月14日
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1．克隆及治疗性克隆 的概念
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1.1．克隆的一般概念
克隆(clone)指通过无性方式由单个细胞或 个体产生的、和亲代非常相似的一群细胞或生 物体，在不发生突变的情况下，一个克隆内的 所有成员具有完全相同的遗传构成。
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2.1.2.3．核移植
利用显微操作技术，将供体核移入去核受 体细胞质形成重构胚。
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2.1.2.4．重构胚的培养及移植
完成核移植后形成的单个细胞在体外培养 一段时间，移入雌性子宫或输卵管进行发育， 或者是移入离体输卵管（同种或异种）进行体 外培养，再移入雌性子宫或输卵管进行发育， 直到出生。
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克隆： 克隆就是一种人工诱导的无性繁殖方式 科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克隆， 这门生物技术叫克隆技术。
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克隆的概念强调 ❖ 以无性的方式进行增殖或繁殖 ❖ 一个克隆中的每一成员其遗传构成完全 相同
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克隆在分子水平的层次 ❖ 个体克隆 ❖ 组织器官克隆 ❖ 细胞克隆 ❖ 分子克隆
治疗性克隆技术示意图