常规甘油封片剂
抗荧光衰减封片剂 (Antifade Solution)
抗荧光衰减封片剂(Antifade Solution)SC1210 5 ml 200 元10 ml 350 元概述：抗荧光衰减封片剂以高纯度甘油为介质，内含抗荧光淬灭剂，有强烈的抗荧光衰减作用，用于对荧光组织和细胞样品的封片。
样品封片后4ºC或－20ºC避光保存2-3周，可最大限度延长荧光持续时间和维持荧光发光强度，同时封片剂中的其它成分有助于保持组织抗原抗体处于结合状态。
适用于所有光谱范围的荧光如FITC，Cy2, Cy3, Rhodamine, Texas Red, Cy5, Cy7，DAPI, AMCA, R6G, Hoechst 33258 and 33342。
适用：1. 组织细胞免疫荧光组织化学染色样品封片；2. 染色体荧光观察封片；3. 核酸荧光原位杂交样品封片。
对所有光谱范围的荧光均有抗衰减作用，如FITC，Cy2, Cy3, Rhodamine, Texas Red, Cy5, Cy7，DAPI, AMCA, R6G, Hoechst 33258 and 33342。
使用方法：1. 吸去载玻片上的液体，略微晾干残留液体。
2. 取约20µl封片试剂滴加在载玻片的样品处。
也可取适量直接加到细胞培养孔内。
3. 盖上盖玻片。
盖玻片规格为24 x 24 mm或24 x 60 mm大小。
4. 轻轻压盖玻片，用滤纸小心吸除盖玻片周围多余液体，室温放置数分钟。
5. 直接进行荧光显微镜观察。
片子于4ºC或－20ºC避光保存2周，荧光无明显衰减。
6. 如需永久封片可用市售指甲油封固盖玻片周围，但通常这样做并无必要。
规格：5 ml或10 ml包装，每一24 x 24 mm盖玻片用约10-20µl。
储存：自然温度运输，收到后－20ºC避光保存。
组织自发荧光淬灭剂AutoFluo QuencherSC1212 20 ml 200 元概述：许多组织会产生可透过各种波长滤光片的内源性自发荧光，显著干扰抗体标记荧光观察甚至导致荧光组化染色失败。
硫黄素S-淀粉体
硫黄素S –淀粉体目的：鉴别组织中的淀粉沉着物。
原理：淀粉体具有均质性和嗜伊红性。
沉着于细胞外，大量存在可能引起周围组织的损伤。
当使用硫黄素S染色时，淀粉体在荧光显微镜下呈苹果绿色的荧光。
对照：存在淀粉样变性的组织。
固定：推荐用Carnoy's 和无水乙醇。
10% NBF orBouin's.技术：10μ石蜡切片。
设备：蒸馏水清洗玻璃器皿，染色缸，量筒.试剂：1% 硫黄素S 溶液：硫黄素S 0.5 gm蒸馏水50.0 ml新鲜配制，用后丢弃。
警告：避免接触和吸入。
Mayer's苏木素。
详见刚果红染色70%酒精甘油明胶封片剂：详见备用液。
安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。
避免接触和吸入。
程序：1. 脱蜡至蒸馏水2. Mayer's苏木精5 minutes。
3. 流水冲洗5 minutes。
4. 蒸馏水稍洗。
5. 硫黄素S 5 minutes。
6. 70%酒精分化5 minutes。
7. 蒸馏水稍洗，2次。
甘油明胶封片剂封裱。
结果：淀粉体：荧光显微镜下呈苹果绿色的荧光。
背景黑色注意：硫黄素T可代替硫黄素S。
程序卡硫黄素S –淀粉体对照：存在有淀粉样变性的组织。
技术：10 microns石蜡切片程序：1. 脱蜡至蒸馏水2. Mayer's苏木精5 minutes。
3. 流水冲洗5 minutes。
4. 蒸馏水稍洗。
5. 硫黄素S 5 minutes。
6. 70%酒精分化5 minutes。
7. 蒸馏水稍洗，2次。
甘油明胶封片剂封裱。
结果：淀粉体：荧光显微镜下呈苹果绿色的荧光。
背景黑色Mayer's苏木素。
详见刚果红染色1% 硫黄素S 溶液：硫黄素S 0.5 gm蒸馏水50.0 ml新鲜配制，用后丢弃。
警告：避免接触和吸入。
70%酒精甘油明胶封片剂：详见备用液。
安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。
避免接触和吸入。
激光共聚焦制样
非损伤性导入法：在正常的生理条件下加入Ca2+荧光探针与植物细胞共同孵育, 使探针渗入到细胞内的方法。
在培养液中加人荧光探针和增强膜透性的药物, 如去垢剂digitonin(毛地黄甘)、表面活性剂Pluronic F-127等, 药物使细胞膜通透性增强, 利于荧光探针的导入【1】。
周平等发现：在PH5.6条件下，绿豆、花生、水稻、烟草等细胞原生质体用5~10um ol/L Indo-1-K+或Fura-2-AM共同孵育1.5h,荧光探针可导入部分原生质体【2】。
样品的制备1：样品制备是上机检测前的关键步骤。
样品需经荧光探剂标记( 单标、双标、三标) 。
标本可以是固定的或活的组织, 也可以是固定的或活的贴壁培养, 细胞应培养在Confocal 专用小培养皿或盖玻片上, 悬浮细胞, 甩片或滴片后, 用盖玻片封片。
样品的最大厚度约1~ 2 mm, 使用的盖玻片厚度应小于0117mm, 载玻片厚度应在018~ 112 mm 之间, 而且表面光洁, 厚度均匀, 没有明显的干扰荧光。
固定样品常用封片剂进行封片,常用PH815- 9 的PBS 配制的甘油封片。
样品准备2：样品的最大厚度大约1~2mm(10×/ 0.4 物镜), 它取决于物镜的数值孔径(NA) 、物镜的工作距离、激光的穿透力以及样品的透明度。
一般要求是单层贴壁细胞, 可以是经荧光探针标记(单标、双标、三标)固定的或活的组织; 固定的或活的贴壁培养细胞(Confocal 专用小培养皿, 盖玻片); 用盖玻片封片的经甩片或滴片后的悬浮细胞。
对于非贴壁细胞的粘贴, 一般常用的粘贴剂有多聚赖氨酸﹑伴刀豆球蛋白﹑cell- tak﹑vectabond﹑琼脂凝胶等。
选择粘贴剂的标准是: 不影响实验目的, 对标本无损害[1]。
激光扫描共聚焦显微镜的样品制备技术3：3.1 取材组织标本：包括活检标本、手术切除标本、动物模型标本及尸检解剖标本等，应在标本离体后立即冰冻切片或贮存于-70℃冰箱备用，以充分保存组织的抗原性。
封片剂说明书
封片剂说明书【产品名称】封片剂【包装规格】250mL/瓶【预期用途】主要用于对组织切片及细胞涂片等生物样本进行封固保存。
【检验原理】封片剂是一种天然树脂，折光率与玻璃近似，干燥后凝结成透明无色固体，无收缩变黄、裂纹等弊病。
切片样本中的苏木素、伊红、固绿、洋红等多种染料的色彩在封片剂封固的保护下数年颜色无明显变化。
【主要组成成分】试剂名称主要成分封片剂中性树脂、二甲苯【储存条件及有效期】10℃~30℃保存，有效期为12个月；【样本要求】涂片和切片等生物样本需染色透明完成。
【检验方法】1、根据样本大小取适量封片剂滴在样本上，盖上盖玻片，轻轻挤压去气泡；2、将封片剂封好的切片样本置于通风橱通风晾干；3、将封固好的切片样本置于显微镜下，观察记录结果，或置于标本保存盒进行样本保存。
【检验结果的解释】生物切片样本在显微镜下观察，样本周围的封片剂应无色透明无杂质，样本的染色剂无扩散溶解于封片剂。
【检验方法的局限性】仅供细胞和组织等生物样本的封固，封片剂的凝固时间受温度、通风条件等因素的影响。
【注意事项】1、本试剂的使用人员需严格按照说明书操作，实验人员操作时需穿戴工作服、手套、口罩，尽可能在通风柜里操作或保持操作环境通风；2、涂片或切片制好后应染色透明后在封固；3、夏季及温度较高时可缩短凝固的时间，冬季及温度较低时可延长凝固的时间；4、样本封固晾干时不要滑动盖玻片，以免样本周围的封片剂不均一透明；5、封片后样本周围有气泡可小心按压盖玻片排出气泡；7、需在有效期内使用；第1 页共2 页第 2 页 共 2 页8、废液及涂片的处理应按国家或其他相关规定进行。
【基本信息】备案人/生产企业名称：深圳市达科为生物工程有限公司 联系方式：*************网址：售后服务单位名称：深圳市达科为生物工程有限公司 联系方式：*************住所/生产地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703【医疗器械产品备案号 /产品技术要求编号】 【医疗器械生产备案凭证编号】 【产品说明书批准日期】 【产品标签符号说明】产品标签符号说明产品标签符号说明产品编号产品批号生产日期储存条件10到30℃有效期至生产厂家易燃液体呼吸过敏公司标志皮肤腐蚀。
封片剂使用方法
封片剂：一般是指在涉及载玻片和盖玻片的实验中需要用到的一种粘稠剂。
方便标本样品的保存和信号的保留，具有隔绝空气的作用。
一般我们用到的有普通封片剂和抗荧光淬灭的封片剂。
下面以一个例子来讲讲吧。
就来讲讲组化最后的事吧--封片。
这个实验中我们可以选择的封片较多，可以用中性树脂和甘油明胶等。
那就以甘油明胶来说吧。
首先将甘油明胶加热融化。
因为在常温情况下，甘油明胶是半凝固状的，浓稠的粘稠体，不利于盖玻片的使用。
接下来就是利用移液枪或者干净的玻璃棒吸取或者沾取甘油明胶滴在组织上，观察液体表面是否有小气泡，若有，则尽量用一个盖玻片占去；若无，就直接用盖玻片和载玻片成一定角度（边缘靠近液滴）慢慢的靠近液滴，让液体慢慢的赶出盖玻片和载玻片之间的空气。
最后，只要将封好的片子晾干即可。
这里面需要注意的就是避免气泡出现在组织中，若不小心有气泡了，也要将气泡赶出组织的范围，不能影响观察结果和样品的保存。
-特殊染色
（二）网状纤维染色的原理
网状纤维的染色方法很多，但是染色原理 基本相同，有以下方面。 （1）氧化 使网状纤维具有选择性，不经氧化的切片，常 用的氧化剂是高锰酸钾。 （2）漂白 一般采用2%草酸，漂白后无色
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（3）媒染 多用2%硫酸铁氨（俗称铁明矾）。 这些试剂可增加网状纤维对银氨液的选择性。 （4）浸银 也称镀银，使银氨配位化合物与网状纤维结合， 带正电荷的二氨合银Ag（NH3）+2被具有嗜银性 物质的网状纤维吸附。 （5）还原 甲醛液是还原剂，能把与网状纤维结合的银氨配 位化合物还原成棕黑色的金属银。
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操作方法：
(1)切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗； (2)Weigent氏苏木素液染核5分钟； (3)自来水洗； (4)1%盐酸分化 (5)自来水洗； (6)丽春红--酸性品红溶液染5-8分钟；
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(7)1%醋酸水溶液洗； (8)1%磷钼酸分化（1-3分钟）直到各种成分被
染清晰（胶原纤维呈淡红色，肌纤维、纤维素 呈鲜红色） (9)2%亮绿液染2-5分钟（或用2%苯胺蓝水溶液 替代） (10)水洗（快速） (11)常规脱水、透明、封片。
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【结果】 胶元纤维呈红色，肌纤维、胞质及
红细胞黄色。
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㈡ 胶元纤维染色应用
胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭 形、纤维形细胞肿瘤的组织来源；
常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出 选择。
观察动脉硬化的心脏，在HＥ切片中，心肌 内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色，而作胶 原纤维染色可将胶原组织和肌肉上明显地区分开 来。
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【染色结果】
胶原纤维绿色(亮绿)（或苯胺蓝,蓝色） 肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝 黑色。
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常规甘油封片剂
常规甘油封片剂简介：常规甘油片剂是一种用于常规封固剂，亦可用于减缓荧光淬灭的封固，主要由甘油组成。
对于减缓荧光淬灭，其效果不如抗荧光淬灭封片剂(Antifade Mounting Medium)。
按每个样本需要封片剂计算，可以用于样本的封片。
组成：自备材料：1、 载玻片2、 盖玻片3、 荧光显微镜操作步骤(仅供参考)：1、贴壁细胞样本①染色完成后，吸去染色液。
②滴甘常规甘油封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。
③在显微镜下观察。
2、组织切片①染色完成后，吸去染色液。
②滴常规甘油封片剂于组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡。
③在显微镜下观察组织切片。
3、其它样品其它样品参考细胞样品或组织切片进行操作。
注意事项：1、 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2、 在使用常规甘油封片剂的情况下，虽然可减缓淬灭，仍需尽量避光。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 IH0272 IH0272 Storage 常规甘油封片剂 10ml 50ml RT 使用说明书 1份有效期：12个月有效。
相关：编号名称DH0005Mayer苏木素染色液IH0091多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml)IH0142PBS磷酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH7.2-7.4)IH0270甘油明胶封固液IH0305柠檬酸钠抗原修复液(50×)PW0053Western抗体洗脱液(碱性)TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)。
抗荧光淬灭封片剂配方
抗荧光淬灭封片剂配方一、简介抗荧光淬灭封片剂是一种用于荧光显微镜下观察细胞的试剂。
在荧光显微镜下，由于荧光分子的不可逆性猝灭作用，会导致样品中的荧光信号逐渐减弱或消失，影响观察效果。
抗荧光淬灭封片剂可以有效地减轻这种猝灭作用，提高样品中荧光信号的稳定性和持久性。
二、配方1. PVA（聚乙烯醇）：PVA是本试剂的主要成分之一，在封片剂中起到增稠、降低表面张力、防止气泡生成等作用。
常见的PVA型号有17-88和10-98两种，前者的粘度较低，后者较高。
2. Glycerol（甘油）：甘油是一种具有保湿性质的化合物，在本试剂中起到保持细胞膜完整性、减少蒸发和挥发等作用。
3. DABCO（1,4-二氨基环己烷）：DABCO是一种具有活性氮原子的化合物，在本试剂中起到抗荧光淬灭的作用。
它可以与氧气、水和其他有机分子形成复合物，从而减少荧光分子的不可逆性猝灭作用。
4. PBS（磷酸盐缓冲液）：PBS是一种缓冲液，可以调节试剂的pH 值，使其适合于细胞生长和显微镜观察。
5. DAPI（4',6-二氨基-2-苯基吡啶）：DAPI是一种DNA染料，在本试剂中起到标记细胞核的作用。
它可以与DNA结合，发出蓝色荧光。
6. Mounting medium（封片剂）：封片剂是一种用于固定细胞和显微镜观察的介质。
常见的封片剂有DABCO、Vectashield等。
三、制备方法1. 加入PVA：将适量的PVA加入PBS中，并在50℃下搅拌至完全溶解。
2. 加入甘油：将适量的甘油加入PVA溶液中，并搅拌至均匀混合。
3. 加入DABCO：将适量的DABCO加入甘油-PVA溶液中，并搅拌至均匀混合。
4. 加入DAPI：将适量的DAPI加入甘油-PVA-DABCO溶液中，并搅拌至均匀混合。
5. 制备封片：将制备好的样品滴在载玻片上，加入适量的封片剂，然后用盖玻片覆盖。
最后用胶水固定盖玻片。
四、注意事项1. 避免过度搅拌：过度搅拌会使PVA分子链断裂，导致溶液黏度降低。
免疫荧光技术
免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下：1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。
2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。
3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。
4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。
条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。
5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。
6、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要分别设定阳性和阴性对照。
二、注意事项1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，可能会使荧光提前衰退。
2、每次试验均需设置以下三种对照：（1）阳性对照：阳性血清+荧光标记物；（2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物；（3）荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。
三、免疫荧光双标的经验之谈1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red （红）。
2、我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。
抗体浓度、孵育时间要自我摸索，我感觉一抗4℃孵育过夜比较好，背景比较清晰。
3、我的阳性对照采用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。
4、封闭血清是二抗来源动物的正常血清，我用的是10%正常donkey血清。
5、其余事项同免疫荧光单标操作。
免疫荧光的标本制作的基本程序同DAB显色的免疫组化：不同的是1 免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其它相同2 免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定3 二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察4、免疫荧光在封片使用专用封片剂或甘油：0.01MPBS （1：1）5 条件许可可以购买防淬灭的试剂加入封片剂中，标本可以保存更久6荧光抗体的孵育以及后续处理需要闭光87荧光抗体染色假阳性可能会多，需要设定阳性和阴性对照注意事项1. 荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，会使荧光减弱。
常规病理染色技术
切片无污染
15
有污染物：减15分
切片染色对比清晰、红蓝适
20
①细胞核着色灰淡或过蓝：减4分；
度、透明度好
②红蓝对比不清晰：减4分
③透明度差：减1-4分；
④组织结构不清：减5-8分
切片封胶适中、无气泡，洁
10
①封胶外溢：减3分
净
②有气泡：减3分
③切片不洁净：减4分
切片标签端正牢固，编号清
10
①标签粘贴不端正及牢固：减3-5分
1g苏木精所需氧化剂的量： 100mg 40-100mg 90mg 35mg 200mg 50mg
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在几种氧化剂中，碘酸钠为首选氧化剂，其优点是在 室温下易溶于水，无需加热，稳定性好。 理论上，1g苏木精（3水）被完全氧化成苏木红需要 185mg碘酸钠。 1g苏木精（无水）被完全氧化成苏木红需要218.2mg 碘酸钠。 在实际配制苏木精染液时，常用半量碘酸钠，目的是 先使部分苏木精氧化成苏木素，染液中未被氧化的苏 木素在染液保存和使用过程中慢慢被完全氧化。
五、HE切片的规范技术标准
1 2 3 4 5
6
7 合计
质量标准
满分（分）
质量缺陷减分
切片完整
15
①稍不完整：减1-7分
②不完整：减8-15分
切片厚薄均匀
15
①厚薄不均：减3-6分
②切片厚，影响诊断：减7-15分
切片无刀痕、无皱褶、无颤
15
①有刀痕、皱褶、颤痕尚不影响诊断：减2-7分；
痕
②影响诊断：减8-15分。
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分化液： 0.5ml 浓盐酸+99.5ml 70%酒精 蓝化液： 1g碳酸锂+100ml蒸馏水 0.3ml浓氨水+99.7ml蒸馏水
生物实验教学显微镜操作考核试卷
B.观察的图像模糊不清
C.镜头上有油污
D.每次使用后
5.在显微镜下观察细胞时，以下哪些方法可以调整物像的位置？（）
A.移动装片
B.调整目镜
C.转动物镜
D.调节细准焦螺旋
6.显微镜的物镜与目镜的配合使用，下列哪些组合可以实现较高的放大倍数？（）
A. 10X物镜与10X目镜
B. 40X物镜与10X目镜
三、填空题（本题共10小题，每小题2分，共20分，请将正确答案填到题目空白处）
1.显微镜的物镜通常有几种不同的放大倍数？物镜的放大倍数通常有______种。
2.在显微镜下，物像的移动方向与装片的移动方向是______的。
3.显微镜的目镜放大倍数通常为______倍或______倍。
4.显微镜的粗准焦螺旋主要用于快速找到物像，其调节范围大约为______mm。
3. A
4. B
5. C
6. D
7. C
8. A
9. C
10. A
11. D
12. C
13. C
14. B
15. D
16. D
17. C
18. A
19. D
20. B
二、多选题
1. ABD
2. ABC
3. ABC
4. AC
5. AD
6. BD
7. AB
8. AC
9. ABC
10. AD
11. ABC
D.光圈大小只影响物像清晰度
17.在显微镜下观察到清晰的细胞结构，以下哪个操作是不必要的？（）
A.调节细准焦螺旋
B.调整光源亮度
C.换用低倍镜
D.移动装片至适当位置
18.下列哪种显微镜适合观察透明的活细胞？（）
甘油明胶封片液
北京雷根生物技术有限公司
甘油明胶封片液
简介：
甘油明胶封固液又称甘油明胶封片液，其英文名称是Glycerol Jelly Mounting Medium ，是一种参考经典的Kaiser 方法配制的水性封片液，经过Leagene 改良，不含苯酚，可以用于常规的各种切片、涂片等的封片。
按照每个样品封片需要50μl 计算，10ml 可以用于200个样品的封片。
组成：
自备材料：
1、 盖玻片、载玻片
2、 显微镜
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁细胞样品
1、染色完毕后，尽量吸干净染色液。
2、加一滴Glycerol Jelly Mounting Medium 于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。
3、显微镜下观察细胞。
(二)组织切片
1、染色完毕后，尽量吸干净染色液。
2、加一滴Glycerol Jelly Mounting Medium 于组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡。
3、显微镜下观察切片。
(三)其它样品：参考贴壁细胞样品或组织切片进行操作。
注意事项：
1、 封片液在温度较低时呈固态，使用前须在37～40℃温育，并在完全溶解后使用。
编号 名称 IH0270 IH0270 Storage Glycerol Jelly Mounting Medium 10ml 50ml 4℃ 使用说明书 1份。
片剂常用的辅料
片剂常用的辅料辅料在片剂中起着重要的作用，它们的分类主要分为填充剂、润湿剂或粘合剂、崩解剂和润滑剂。
填充剂是最常用的辅料之一，它的主要作用是增加片剂的重量和体积。
填充剂可分为水溶性、水不溶性和直接压片用填充剂。
填充剂的发展趋势是将崩解剂和润滑剂加入，一并作成颗粒状填充剂供用，压片时不再加这些辅料。
常见的油类吸收剂有硫酸钙、磷酸氢钙、氧化镁和氢氧化铝等。
除了填充剂，还有润湿剂或粘合剂、崩解剂和润滑剂等辅料。
这些辅料可以使药物具备一定的流动性、粘着性以及不粘贴冲模和冲头的性能。
同时，这些辅料还能使药物遇体液能迅速崩解、溶解、吸收，达到应有的疗效。
但是，很少有药物能完全具备这些性能，因此必须添加物料或适当处理以满足要求。
辅料的分类主要根据它们在片剂中的主要功能不同。
填充剂又称稀释剂，主要用途是增加片剂的重量和体积。
填充剂可分为水溶性、水不溶性和直接压片用填充剂。
填充剂的发展趋势是将崩解剂和润滑剂加入，一并作成颗粒状填充剂供用，压片时不再加这些辅料。
常见的油类吸收剂有硫酸钙、磷酸氢钙、氧化镁和氢氧化铝等。
辅料在片剂中的作用非常重要。
它们的主要作用是满足片剂的制备工艺和产品质量的特殊要求，以便制成优良的产品。
填充剂是最常用的辅料之一，它的主要作用是增加片剂的重量和体积。
填充剂可分为水溶性、水不溶性和直接压片用填充剂。
填充剂的发展趋势是将崩解剂和润滑剂加入，一并作成颗粒状填充剂供用，压片时不再加这些辅料。
常见的油类吸收剂有硫酸钙、磷酸氢钙、氧化镁和氢氧化铝等。
因此，在设计处方时必须掌握各种辅料的特点，并灵活运用。
崩解剂是制作片剂时必不可少的一种辅助剂。
在加入崩解剂时，应该根据具体的对象和要求来选择加入的方法。
一般来说，有三种加入方法：内加法、外加法和内外加法。
其中，内加法是在制粒前将崩解剂加入，与粘合剂共存于颗粒中，一旦崩解就会成为粉末颗粒，有利于药物的溶出。
外加法是将崩解剂加入经过整粒后的干颗粒中，此时崩解存在于颗粒之外，各种颗粒之间，因此水易于透过，崩解速度很快，但颗粒内没有崩解剂，不易崩解成粉末颗粒，因此药物的溶出稍差。
荧光抗体标记_实验报告
一、实验目的1. 掌握荧光抗体标记技术的基本原理和操作步骤。
2. 学会使用荧光显微镜观察荧光标记的抗体与抗原的结合情况。
3. 了解荧光抗体标记技术在生物医学研究中的应用。
二、实验原理荧光抗体标记技术是将荧光素与特异性抗体结合，形成荧光标记抗体。
这种标记抗体仍保持抗体原有的活性，当与相应的抗原发生特异性结合时，荧光标记抗体在荧光显微镜下呈现出明亮的荧光，从而实现对抗原的检测和定位。
三、实验材料1. 实验试剂：FITC标记的抗体、抗原、抗体稀释液、磷酸盐缓冲液（PBS）、甘油、甲醇等。
2. 实验仪器：荧光显微镜、离心机、移液器、吸管、试管、载玻片等。
四、实验步骤1. 标准化抗体将FITC标记的抗体用抗体稀释液稀释至适当浓度。
2. 制备抗原将待检测的抗原用磷酸盐缓冲液（PBS）稀释至适当浓度。
3. 制备细胞悬液将待检测的细胞用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤后，离心弃去上清液，加入适量的磷酸盐缓冲液重悬细胞。
4. 混合抗原与抗体将抗原与抗体按一定比例混合，在室温下孵育一段时间。
5. 洗涤将混合后的溶液在室温下用磷酸盐缓冲液洗涤3次，每次洗涤后离心弃去上清液。
6. 封片将洗涤后的细胞沉淀用甘油封片，封片剂与细胞沉淀的比例为1:1。
7. 荧光显微镜观察将封片置于荧光显微镜下观察，调整显微镜参数，观察荧光标记的抗体与抗原的结合情况。
五、实验结果通过荧光显微镜观察，发现荧光标记的抗体与抗原发生了特异性结合，形成明亮的荧光复合物。
阳性细胞在荧光显微镜下呈现出明显的荧光信号，而阴性细胞则无荧光信号。
六、实验讨论1. 实验过程中，抗体与抗原的孵育时间、洗涤次数和封片剂的选择对实验结果有较大影响。
本实验中，抗体与抗原的孵育时间为30分钟，洗涤次数为3次，封片剂为甘油。
2. 荧光抗体标记技术具有特异性高、灵敏度高、操作简便等优点，广泛应用于生物医学研究、临床诊断等领域。
3. 在实验过程中，应注意以下几点：（1）抗体与抗原的比例要适中，过多或过少都会影响实验结果；（2）孵育时间不宜过长或过短，以免影响抗体与抗原的结合；（3）洗涤时要充分，以去除未结合的抗体和抗原；（4）封片剂的选择要合适，以保证荧光信号的稳定。
免疫荧光方法
免疫荧光(Iｍmunoflｕoresｃeｎcｅ, IF)实验方法免疫荧光技术就是在免疫学、生物化学与显微镜技术得基础上建立起来得一项技术、它就是根据抗原抗体反应得原理,先将已知得抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内得相应抗原(或抗体)。
利用荧光显微镜可以瞧见荧光所在得细胞或组织,从而确定抗原或抗体得性质与定位,以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。
免疫荧光实验得主要步骤包括细胞片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、抗体孵育及荧光检测等。
细胞片制备(通俗得说法就是细胞爬片)就是免疫荧光实验得第一步,细胞片得质量对实验得成败至关重要,原因很简单,如果发生细胞掉片,一切都无从谈起。
这一步关键得就是玻片(Ｓｌiｄes or Cｏverslips)得处理以及细胞得活力,有人根据成功经验总结出许多有益得细节或小窍门,非常值得借鉴、固定与通透步骤最重要得就是根据所研究抗原得性质选择适当得固定方法,合适得固定剂与固定程序对于获得好得实验结果就是非常重要得、免疫荧光中得封闭与抗体孵育与其它方法(如ＥLＩＳA或 Wｅsｔeｒn Ｂｌot)中得相同步骤就是类似得,最重要得区别在于免疫荧光实验中要用到荧光抗体,因此必须谨记避光操作,此外抗体浓度得选择可能更加关键。
最后需要注意得就是,标记好荧光得细胞片应尽早观察,或者用封片剂封片后在４℃或－20℃避光保存,以免因标记蛋白解离或荧光减弱而影响实验结果、由于操作步骤比较多,同时在分析结果时无法像WB那样可以根据分子量得大小区分非特异性识别,所以要得到一个完美得免疫荧光实验结果,除了需要高质量得抗体,以及对实验条件进行反复优化外,还必须设立严谨得实验对照、总之,免疫荧光实验从细胞样品处理、固定、封闭、抗体孵育到最后得封片及观察拍照,每步都非常关键,需要严格控制实验流程中每个步骤得质量,才能最终达到您得实验目得。
基本实验步骤:(1) 细胞准备。
细胞免疫荧光的方法(自己实践记录)
免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光，下文主要列举了三种细胞免疫荧光染色的实验步骤。
zo-1的免疫荧光，步骤如下：1、细胞在盖片上生长融合到95%-100%时，从孵箱中取出。
2、用预温的1×PBS洗3次，每次10分钟3、4%的甲醛室温固定20-30分钟4、1×PBS洗3次，每次10分钟5、0.2%Triton X-100透化2-5分钟6、1×PBS洗3次，每次10分钟7、5%BSA室温封闭30分钟8、加一抗(用1%BSA稀释)放在湿盒里，4度过夜9、1×PBS洗3次，每次10分钟10、加二抗(用1%BSA稀释)30分钟，闭光11、1×PBS洗3次，每次10分钟12、95%甘油封片注：4%甲醛，0.2%Triton，5%BSA均用1×PBS稀释从大鼠分离的T细胞能否直接做细胞免疫荧光细胞爬片的免疫荧光步骤基本一致：1.取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。
注意：有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心，注意反正面，放在皿里洗比较方便，避免了来回夹取，另外洗的时候加PBS不要太冲，不要细胞冲下来。
洗的时候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，没有等5分钟或10分钟。
2. 4%冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。
3. 0.2%Triton X-100通透10分钟，PBS洗三遍。
4. 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。
5. 一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果好，PBS洗三遍。
6.二抗室温2小时(避光)，或者37度1半小时，PBS洗三遍。
7.最好用DAPI染核，然后直接照荧光片。
8.蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周，因为甘油不象树脂那样会干，所以不用指甲油封的话会弄的一塌糊涂。
三种封片胶封片的效果比较
术解除占位，患者术后 １年随访状态良好，无复发迹象。 通过病理切片和多种染色的联合运用，对罕见的阑尾寄
生虫病可起到鉴别作用。但对于组织结构中寄生虫的类别 区分还需积累要多病例，尤其对于虫体或虫卵形态学结构不 明显的病例可行分子标记技术精确区分寄生虫的种类［４］。
参考文献：
［１］ Ｈａｔｉｐｏｇ珓ｌｕＳ，ＬｋＵ，Ｇüｌａｔ１Ｕ，ｅｌｉｋＴ．Ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅｓｔｏｏｌａｎａｌ ｙｓｉｓｆｏｒｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐａｒａｓｉｔｅｓａｎｄｆｅｃａｌｏｃｃｕｌｔｂｌｏｏｄｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａ ｃｕｔｅａｐｐｅｎｄｉｃｉｔｉｓ［Ｊ］．ＵｌｕｓＴｒａｖｍａＡｃｉｌＣｅｒｒａｈｉＤｅｒｇ，２０１６，２２ （５）：４７１－４７６．
1时可在最低限度使用二甲苯达到最佳封片浓度然而在对市面上的三种类型的封片胶进行对比试验时发现以二甲苯和汽油作为溶剂的封片胶在使用过程中二甲苯和汽油均会有一定的挥发其浓度难以保持在最佳状态导致封片胶浓稠不易散开分布不均匀树胶难以渗入到细胞核致使细胞核呈黑色再者也易产生大量的空泡腔隙难以驱除造成类似色素样颗粒的细小黑点影响镜下观察用力挤压则会产生胶外溢现象
临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０２０Ｆｅｂ；３６（２）
·２２７·
网络出版时间：２０２０－２－１８１５：５６ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．ｒ．２０２００２１７．１５００．０２７．ｈｔｍｌ
三种封片胶封片的效果比较
代 鹏，肖 磊，周 晟
［２］ 李志 尚．病 理切 片 中 寄生 虫 的识 别 ［Ｊ］．诊 断 病 理 学 杂 志， ２００１，８（３）：１２９－１３０．
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甘油的一般性能及在标本封装上的应用
甘油的一般性能及在标本封裝上的应用
甘油的一般性能及在标本封裝上的应用
甘油是一种植物油的一种，又称棕榈油酸甘油，也可以说是一种多用途植物油。
甘油既适用于食品，又适用于非食品用途。
甘油是非常温润的植物油，它不但可以抑制体内水分的挥发，而且在食品和非食品行业中被广泛应用，如在食品上用作护肤、滋润和柔顺，在医药上用作护肤剂和柔顺剂，甚至在工业上也被用作润滑油和液体密封剂。
此外，甘油还有另一个重要应用：在标本封闭处理中。
甘油可以作为一种冷藏
和固定标本的保存液，可以维持标本的原汁原味，具有良好的结构保存能力，使标本具有很长的保存期。
还可用作胶片和玻璃组织的拼接，防止制品上的水分挥发，使其保持最佳状态。
甘油具有良好的性能，包括低温耐受性，透明度，粘度，吸水性，和耐腐蚀性，使其成为多种行业的题材。
它比其他植物油更有用，因为它具有最佳的保湿性，无毒性和分解性，以及抗腐蚀性。
总之，甘油在食品，非食品和标本封裝中均有广泛的应用，它具有良好的性能，具有低温耐受性，可靠性，无毒性和分解性。
甘油也在抗腐蚀和保湿方面表现出特别优势，使其成为科研分析中重要的原料之一。
甘油作为湿润剂在药片制备过程中的应用
甘油作为湿润剂在药片制备过程中的应用药片的制备过程中，湿润剂是一个不可或缺的组成部分。
湿润剂的作用是使药片表面保持湿润，促进溶解和吸收，改善药物的可溶性和可吸收性。
甘油是一种常用的湿润剂，在药片制备中有着广泛的应用。
本文将详细介绍甘油在药片制备过程中的应用以及其作用机制。
甘油，也称为丙三醇，化学式为C₃H₈O₃，是一种无色、无臭的液体。
它具有良好的湿润性能和保湿性能，因此广泛应用于制药工业中。
甘油可与水和其他溶液混溶，并且能够吸湿，保持药物片剂的湿润状态，有助于药物的溶解和扩散。
首先，甘油作为湿润剂在药片制备中的应用主要表现在制备过程的控制上。
在药片的成型过程中，药物和辅料经过混合后会形成团块。
甘油的添加能够有效防止团块的形成，并保持药物和辅料的均匀分散。
这样可以保证药物在整个药片中的均一性，提高药物的有效性和稳定性。
其次，甘油作为湿润剂还有助于药物的释放。
在口服药片中，药物需要从药片中释放出来才能被人体吸收。
甘油能够提高药物的可溶性，使药物更容易溶解在胃酸等消化液中。
此外，甘油还可促进药物的扩散，加快药物的释放速度。
这样可以增加药物的生物利用度，提高治疗效果。
再次，甘油作为湿润剂还具有保湿的作用。
在药片的制备过程中，甘油能够吸湿，并保持药片的湿润状态。
这对于一些药物来说尤为重要，特别是对于那些对湿度敏感的药物而言。
保持药片的湿润状态可以避免药物变质和降解，确保药物的质量和稳定性。
此外，甘油还具有改善药片口感的作用。
有些药物具有苦味或难以咽下的特点，这会影响患者的服用体验。
甘油作为湿润剂的添加可以改善药片的口感，减轻药物的苦味和刺激感，提高患者的服用舒适度。
至于甘油作为湿润剂的作用机制，主要与其物理和化学性质有关。
首先，甘油可以与水形成氢键，使溶液的粘度增加。
这使得甘油能够在药物表面形成一层保护膜，防止药物与空气接触，降低药物的氧化速度。
其次，甘油具有可渗透性，能渗透进入药片中，与其他物质形成物理交联结构，增强药片的强度和稳定性。
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常规甘油封片剂
简介：
常规甘油片剂是一种用于常规封固剂，亦可用于减缓荧光淬灭的封固，主要由甘油组成。
对于减缓荧光淬灭，其效果不如抗荧光淬灭封片剂(Antifade Mounting Medium)。
按每个样本需要50～100μl 封片剂计算，5ml 可以用于至少50样本的封片。
组成：
自备材料：
1、 载玻片
2、 盖玻片
3、 荧光显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞样本
①染色完成后，吸去染色液。
②滴一滴甘常规甘油封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。
③在显微镜下观察。
2、组织切片
①染色完成后，吸去染色液。
②滴一滴常规甘油封片剂于组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡。
③在显微镜下观察组织切片。
3、其它样品
其它样品参考细胞样品或组织切片进行操作。
注意事项：
1、 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2、 在使用常规甘油封片剂的情况下，虽然可减缓淬灭，仍需尽量避光。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 IH0272 IH0272 Storage 常规甘油封片剂 10ml 50ml RT 使用说明书 1份。