AKTApurifier方法编辑窗口 on-siter training SOP II

V.Advanced Unicorn Software——Method Edit

新建柱子

具体软件操作如下：

①在Unicorn软件Method Editor界面中选择Edit→ Column List

②新建一根自己的柱子：New

③→New Column中输入柱参数：输入Height，柱子直径diameter；输入其他相关参数：Vt，Vo，Max Pressure，Default Flowrate，Max Flowrate等，然后Save As 特定的柱名。

这样在Column List中就有了我们自己编辑好的层析柱。

新建方法：

在Unicorn软件Method Editor界面中选择File→New→Wizard→OK

Main Selection层析方式选择：Affinity、Anion/Cation Exchange、HIC、Size exclusion

→Column：Any（或者预装柱）→Flexible Flow Rate在不同阶段用不同流速→Next

Wavelength 波长选择UV：280nm →Pump Inlet入口选择→Next

Equalibration： Start Concentration %B起始浓度选择→Equalibration Volunme： CV 平衡体积→Watch Equlibration和前一个条件是满足任一条件，就跳入下一步。

Sample Injection：Injection Technique: Manual注射器上样→ Empty Loop With：

1mL；

或者 System Pump Direct Loading系统泵直接上样→Injection Volume 上样体积（必须>10mL），默认样品入口为A2(如果HIC，默认B2) →Next

Wash Out Unbound Sample清洗未结合蛋白，默认2CV（最后参数表可以修改）

→Flowthrough Fractionation穿透峰收集（Frac-900、OFF、Outlet F3出口阀F3收集）→Next

Elution Fractionation洗脱收集→Frac-900收集器收集、OFF、Outlet出口阀收集

→Fixed Volume Fractionation固定体积收集、Peak Fractionation峰收集、Fixed Volume and Peak Fractionation固定体积和峰收集相结合→Fraction Volume固定体积收集每管体积→Next

Peak Fractionation设定峰收集→Peak Identification →UV Level峰高度、UV Slope紫外斜率→Minimum Peak Width最小峰宽（排除气泡峰）→Peak Fractionation Volume→Next

Elution洗脱模式(根据工艺选择一种设定)

①Isocratic等度洗脱（凝胶过滤）→Length of Elution 洗脱体积→Finish

②Isocratic with Delayed Frationation延迟峰收集的等度洗脱→Length of Elution before Fractionation 从0.2CV开始采进行峰收集→Length of Elution with Fractionation →Finish

③Linear Gradient 线性洗脱→Target Concentration目标变化浓度→Gradient Length 梯度长度（一般10~20CV）→Use cond or concB to start and stop Fractionation利用电导或B%开始或者停止收集→Clean after Elution at 100B%(5CV)清洗

→Reequilibration after Elution(5CV)再平衡→Finish

④Segmented Gradient Advanced高级梯度→ Gradient Segments最多可以设定9个步骤

Elution –Segment1(1)-Page1(2) →Step阶段梯度\Gradient线性→Pump Inlet A入口→Concentration B浓度→Length of Step 梯度长度

Fraction Volume 固定体积收集→Peak FractionVolume 峰收集设定→设定剩下的梯度后→Finish

Variables →Show details检查各个参数，可以修改→Save

运行方法

System Control→Run→方法→OK→Variables检查一下参数→Evalution Procedures→Method Information/Method Duration总体体积和运行时间→Next→Questions→Directory结果保存文件夹/Name结果名→Start

VI.Training Material ▪培训资料（pdf版本）

▪ÄKTA_purifierFrac920层析仪使用操作规程（Word）▪ÄKTA系统手动命令指南

▪UM UNICORN 5 CN

▪如何安装Unicron软件

▪ÄKTAclub 8

▪ÄKTApurifier training VCD

▪如何安装Unicron软件