高二生物选修三《单克隆抗体的制备》课件
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单克隆抗体制备课件
单克隆抗体可以用于肿瘤免疫治疗，通过与肿瘤细胞表面的抗原结合，激活免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。
肿瘤免疫治疗
单克隆抗体可以用于免疫调节治疗，通过与免疫细胞表面的受体或配体结合，调节免疫细胞的活性，治疗自身免疫性疾病和感染性疾病。
免疫调节治疗
单克隆抗体可以用于制备诊断试剂，通过与特定抗原或抗体结合，用于临床诊断和实验室检测。
单克隆抗体可以用于治疗疾病，如肿瘤、自身免疫性疾病等。
单克隆抗体可以用于生物标记，如免疫荧光、免疫组化等。
03
02
01
02
CHAPTER
单克隆抗体的制备流程
根据实验需求，选择适当的抗原作为免疫原，如蛋白质、多肽、细胞或组织等。
确定免疫原
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
对免疫原进行纯化，去除杂质，提高免疫效果。
免疫原的纯化
将免疫原与佐剂混合，增强免疫反应。
THANKS
感谢您的观看。
单克隆抗体由单一B细胞克隆产生，因此其结构和特性高度均一，具有很高的特异性。
高度均一
单克隆抗体与抗原的亲和力很高，可以检测出低浓度的抗原。
高亲和力
单克隆抗体可以在长期保存过程中保持稳定，便于长期保存和使用。
长期稳定
单克隆抗体可以用于诊断疾病，如免疫组化、酶联免疫吸附试验等。
诊断试剂
生物药物
生物标记
利用离心、过滤等方法去除细胞碎片和杂质，获得较为纯净的抗体溶液。
初步纯化
利用凝胶颗粒的孔径大小分离不同大小的抗体分子，去除杂蛋白和其他杂质。
凝胶过滤层析
利用抗体分子的电荷性质分离不同电荷状态的抗体分子，进一步提高纯度。
离子交换层析
04
CHAPTER
单克隆抗体的质量控制
肿瘤免疫治疗
单克隆抗体可以用于免疫调节治疗，通过与免疫细胞表面的受体或配体结合，调节免疫细胞的活性，治疗自身免疫性疾病和感染性疾病。
免疫调节治疗
单克隆抗体可以用于制备诊断试剂，通过与特定抗原或抗体结合，用于临床诊断和实验室检测。
单克隆抗体可以用于治疗疾病，如肿瘤、自身免疫性疾病等。
单克隆抗体可以用于生物标记，如免疫荧光、免疫组化等。
03
02
01
02
CHAPTER
单克隆抗体的制备流程
根据实验需求，选择适当的抗原作为免疫原，如蛋白质、多肽、细胞或组织等。
确定免疫原
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
对免疫原进行纯化，去除杂质，提高免疫效果。
免疫原的纯化
将免疫原与佐剂混合，增强免疫反应。
THANKS
感谢您的观看。
单克隆抗体由单一B细胞克隆产生，因此其结构和特性高度均一，具有很高的特异性。
高度均一
单克隆抗体与抗原的亲和力很高，可以检测出低浓度的抗原。
高亲和力
单克隆抗体可以在长期保存过程中保持稳定，便于长期保存和使用。
长期稳定
单克隆抗体可以用于诊断疾病，如免疫组化、酶联免疫吸附试验等。
诊断试剂
生物药物
生物标记
利用离心、过滤等方法去除细胞碎片和杂质，获得较为纯净的抗体溶液。
初步纯化
利用凝胶颗粒的孔径大小分离不同大小的抗体分子，去除杂蛋白和其他杂质。
凝胶过滤层析
利用抗体分子的电荷性质分离不同电荷状态的抗体分子，进一步提高纯度。
离子交换层析
04
CHAPTER
单克隆抗体的质量控制
高二生物选修三《单克隆抗体的制备》课件
单 点
击
击 此
处
添 添
加 副
加 标
题
标 题
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性 细胞的全能性
细胞膜的流动性
细胞融合的步骤
去除细胞壁后诱导 原生质体融合
使细胞分散后诱导 细胞融合
诱导方法 用途
物理（离心、振荡、 电刺激）
化学（聚乙二醇）
获得杂种植株
物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒
主要用于制备 单克隆抗体
○
三
二一
．
○
．．
浆来 。结的抗概 抗
二 、
B
细 胞 （
源 ：
淋 巴 细 胞 ）
合 的 具
、 并 能
体 是 机
念 ：
体
有与体
单 克
免该受 疫抗抗
隆
功原原 能发刺
抗
的生激 球特后
体
蛋异产
白性生
传统血清抗体的制备
特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏
2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的 原因是 每__一__种__B_淋__巴__细__胞__只__能__分__泌__一__种__特__异__性__抗体
3.产生抗体的细胞是_效__应__B_细__胞__（__浆__细_ 胞） 产生单克隆抗体的细胞是杂__交__瘤__细__胞__
抗原 刺激 动物体 抗原不纯
浆细胞 抗体
抗体不纯
每个浆细胞（Ｂ淋巴细胞）只能分泌一种抗体，由一 个Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单 一的。
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体
击
击 此
处
添 添
加 副
加 标
题
标 题
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性 细胞的全能性
细胞膜的流动性
细胞融合的步骤
去除细胞壁后诱导 原生质体融合
使细胞分散后诱导 细胞融合
诱导方法 用途
物理（离心、振荡、 电刺激）
化学（聚乙二醇）
获得杂种植株
物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒
主要用于制备 单克隆抗体
○
三
二一
．
○
．．
浆来 。结的抗概 抗
二 、
B
细 胞 （
源 ：
淋 巴 细 胞 ）
合 的 具
、 并 能
体 是 机
念 ：
体
有与体
单 克
免该受 疫抗抗
隆
功原原 能发刺
抗
的生激 球特后
体
蛋异产
白性生
传统血清抗体的制备
特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏
2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的 原因是 每__一__种__B_淋__巴__细__胞__只__能__分__泌__一__种__特__异__性__抗体
3.产生抗体的细胞是_效__应__B_细__胞__（__浆__细_ 胞） 产生单克隆抗体的细胞是杂__交__瘤__细__胞__
抗原 刺激 动物体 抗原不纯
浆细胞 抗体
抗体不纯
每个浆细胞（Ｂ淋巴细胞）只能分泌一种抗体，由一 个Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单 一的。
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体
单克隆抗体制备 ppt课件
实验研究的目的性 — 功能、形态、数量 实验设计的科学性 — 全面、动态、鲜明、对应、对照 实验方法的合理性 — 确切、先进 实验原理的内涵性 — 意义、要点 实验操作的规范性 — 准备、严格、准确、重复
单克隆抗体制备
1
免疫血清和单克隆抗体的制备
单克隆抗体制备
2
一、免疫血清的制备
1. 原理： 机体具有多种B细胞克隆，将适当的抗原物质注入人
单克隆抗体制备
4
4. 抗原的处理
1）颗粒性抗原：红细胞、菌体等制成悬液，不需佐 剂，直接免疫。菌体数1×1010个/ml 为宜。
2）可溶性蛋白质抗原（如人IgG）、病毒抗原、细菌 可溶性抗原组分等，可以直接与弗氏完全佐剂
（1：1 V/V）混合、乳化。 3）半抗原（多糖、多肽、激素、化学药品）需与载
2. 种类
1）卡介苗（BCG）、短小棒状杆菌（CP）、脂
多糖（LPS）、细胞因子；
2）氢氧化铝、明矾；
3）双链多聚肌苷酸：胞苷酸（poly I：C）和双
链多聚腺苷酸：鸟苷酸（poly A：U）；
4）矿物油、脂质体、免疫刺激复合物
（ISCOMs）、CPG单克寡隆抗核体制备苷酸。
6
3. 弗氏完全佐剂
1）成分：羊毛脂、液体石蜡和灭活卡介苗。 2）配方：羊毛脂：液体石蜡 为1：2，也可1：1。
体偶联。常用载体有牛血清白蛋白（BSA）、钥 孔嘁血蓝素(KLH)、鸡血清蛋白（OA）；偶联剂 有过碘酸钠、戊二醛和碳化二亚胺等。KLH是最 常用的载体蛋白，碳化二亚胺是最常用的偶联
剂。
单克隆抗体制备
5
佐剂
1. 概念
佐剂属非特异性免疫增强剂，与抗原一起注射或
预先注入机体时，可增强机体免疫应答或改变免疫应 答的类型。
单克隆抗体制备
1
免疫血清和单克隆抗体的制备
单克隆抗体制备
2
一、免疫血清的制备
1. 原理： 机体具有多种B细胞克隆，将适当的抗原物质注入人
单克隆抗体制备
4
4. 抗原的处理
1）颗粒性抗原：红细胞、菌体等制成悬液，不需佐 剂，直接免疫。菌体数1×1010个/ml 为宜。
2）可溶性蛋白质抗原（如人IgG）、病毒抗原、细菌 可溶性抗原组分等，可以直接与弗氏完全佐剂
（1：1 V/V）混合、乳化。 3）半抗原（多糖、多肽、激素、化学药品）需与载
2. 种类
1）卡介苗（BCG）、短小棒状杆菌（CP）、脂
多糖（LPS）、细胞因子；
2）氢氧化铝、明矾；
3）双链多聚肌苷酸：胞苷酸（poly I：C）和双
链多聚腺苷酸：鸟苷酸（poly A：U）；
4）矿物油、脂质体、免疫刺激复合物
（ISCOMs）、CPG单克寡隆抗核体制备苷酸。
6
3. 弗氏完全佐剂
1）成分：羊毛脂、液体石蜡和灭活卡介苗。 2）配方：羊毛脂：液体石蜡 为1：2，也可1：1。
体偶联。常用载体有牛血清白蛋白（BSA）、钥 孔嘁血蓝素(KLH)、鸡血清蛋白（OA）；偶联剂 有过碘酸钠、戊二醛和碳化二亚胺等。KLH是最 常用的载体蛋白，碳化二亚胺是最常用的偶联
剂。
单克隆抗体制备
5
佐剂
1. 概念
佐剂属非特异性免疫增强剂，与抗原一起注射或
预先注入机体时，可增强机体免疫应答或改变免疫应 答的类型。
高中生物 单克隆抗体的制备课件 新人教版选修3
4.杂交瘤细胞的特点: 既能无限增殖，又能分泌特异性抗体 _______________________________ 杂交瘤细胞 5.首次筛选是为了获得_____________
第二次筛选时为了获得
既能无限增殖，又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞 _______________________________
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 请同学们在课本P32页上找出：
1.细胞融合的概念
2.诱导动物细胞融合的方法 3.意义
并用笔画出来
2.动物细胞融合过程：
诱导
细胞膜穿通
细胞膜融合
细胞核融合，形成单核杂种细胞
动物细胞融合
植物细胞A 植物细胞B
去壁
原生质体B
原生质体A
动物细胞A
动物细胞B
杂种细胞
原生 质体 融合 植物 组织 培养
（2）单克隆抗体制备过程中应 用哪些细胞 工程技术手段？
动物细胞融合技术 动物细胞培养技术
抗原 ？
（3）制备过程为何 要经过两次筛选？
AA型、BB 型 A 型B型 AB型杂交瘤细胞
效应 ？ B细胞
筛选
杂交瘤细胞
筛选
能产生所需抗体的细胞
比较项目
第一次筛选
第二次筛选
原理
在选择性培养基中添 抗原—抗体的特 加某种药物，特异性 异性结合 杀死骨髓瘤细胞和骨 髓瘤细胞自身融合的 细胞 杂交瘤细胞
①B淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴 细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身 融合细胞⑤杂交瘤细胞
A、① ② ③ ④
C、① ③
B、 ① ③ ⑤
D、② ④
6下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：
（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得 效应B 细胞，该细胞能够产生___________ 抗体 __________ 。 从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射 抗原 类物质。 _____________ 细胞融合 过程，该过程的 （2）B过程是一个____________ 聚乙二醇 的诱导。 进行需要灭活的______ 病毒 或_____________
高中生物单克隆抗体制备(共38张PPT)
2、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？ 3、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？
1.1动物细胞融合的概念
鼠B淋巴细胞 鼠骨髓瘤细胞
人工诱导
动物细胞融合（细胞杂交）
是指（在一定的条件下）两
个或多个细胞结合形成一个
细胞（该单核细胞称为杂交
细胞）的过程。
杂交瘤细胞
问题：1、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？ 2、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
3.若细胞两两融合后， 有几种融合情况？
选择性培养基 筛选1 克隆化
多种杂 交细胞
抗原-抗体 杂交法
筛选2（有限稀释）
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
4.第一次筛选出的杂交瘤
细胞为何需进行克隆化培
选择性培养基 筛选1
养和专一抗体检测？
多种杂
（ 特异性强、灵敏度高，可大量制备）
（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 迅速（ 大量增殖 ）特点，又具备淋巴细胞 的（ 分泌专一抗体）特点，经过选择性培养 的杂交瘤细胞，还需进行（ 克隆化培养 ） 和（ 抗体检测 ），经多次筛选，就可获得足
够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂 交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或小 鼠腹腔内增殖，从（ 细胞培养液 ）或 （ 小鼠的腹水 ）中，就可以提取出大量 的单克隆抗体了。
一个效应bb细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞动物细胞培养技术44单克隆抗体的制备方案动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体又能大量繁殖的细胞一个骨髓瘤细胞能无限增殖制备单克隆抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验5单克隆抗体制备过程步骤注射抗原效应bb细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基筛选11抗原抗体杂交法克隆化单克隆抗体筛选22有限稀释1
1.1动物细胞融合的概念
鼠B淋巴细胞 鼠骨髓瘤细胞
人工诱导
动物细胞融合（细胞杂交）
是指（在一定的条件下）两
个或多个细胞结合形成一个
细胞（该单核细胞称为杂交
细胞）的过程。
杂交瘤细胞
问题：1、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？ 2、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
3.若细胞两两融合后， 有几种融合情况？
选择性培养基 筛选1 克隆化
多种杂 交细胞
抗原-抗体 杂交法
筛选2（有限稀释）
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
4.第一次筛选出的杂交瘤
细胞为何需进行克隆化培
选择性培养基 筛选1
养和专一抗体检测？
多种杂
（ 特异性强、灵敏度高，可大量制备）
（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 迅速（ 大量增殖 ）特点，又具备淋巴细胞 的（ 分泌专一抗体）特点，经过选择性培养 的杂交瘤细胞，还需进行（ 克隆化培养 ） 和（ 抗体检测 ），经多次筛选，就可获得足
够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂 交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或小 鼠腹腔内增殖，从（ 细胞培养液 ）或 （ 小鼠的腹水 ）中，就可以提取出大量 的单克隆抗体了。
一个效应bb细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞动物细胞培养技术44单克隆抗体的制备方案动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体又能大量繁殖的细胞一个骨髓瘤细胞能无限增殖制备单克隆抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验5单克隆抗体制备过程步骤注射抗原效应bb细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基筛选11抗原抗体杂交法克隆化单克隆抗体筛选22有限稀释1
单克隆抗体的制备演示文稿课件
疾病诊断
用于检测疾病标志物，协助医生对疾病进行 早期诊断和预后评估。
药物开发
作为药物载体或治疗性抗体，用于疾病的诊 断和治疗。
免疫治疗
作为免疫治疗药物，用于治疗癌症、自身免 疫性疾病等。
02
单克隆抗体的制备过程
免疫原的制备
免疫原的纯度
确保免疫原的纯度高，无杂质和其他蛋白质的污染， 以提高免疫反应的特异性。
阳性细胞的筛选
筛选出能产生所需抗体的 阳性细胞株。
克隆化筛选
对阳性细胞株进行克隆化 筛选，确保其具有稳定的 遗传特性。
抗体的大量制备
细胞培养扩增
将筛选得到的杂交瘤细胞进行扩 增培养，以获得大量的抗体。
抗体纯化
采用适当的纯化方法，如凝胶过 滤、离子交换或亲和层析，去除 细胞培养上清中的杂质，获得高 纯度的抗体。
单克隆抗体的制 备演示文稿课件
目录
• 单克隆抗体的基本概念 • 单克隆抗体的制备过程 • 单克隆抗体的质量控制 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的未来发展
01
单克隆抗体的基本概念
单克隆抗体的定义
单克隆抗体（Monoclonal Antibody, mAb）：是由单一B细胞克隆产生的高度均 一、具有特异性的抗体。
抗体纯度的检测
蛋白含量
通过电泳、质谱等技术，检测单克隆抗体中的杂质成分，确保产品的纯度和安全性。
04
单克隆抗体的应用实例
在医学诊断中的应用
肿瘤诊断与治疗监测
单克隆抗体可以特异结合肿瘤相关抗原，用于肿瘤的早期诊断、分型、病情监测和预后评估。例如， 针对癌胚抗原（CEA）的单克隆抗体在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤的诊断和治疗中广泛应用。
05
单克隆抗体的未来发展
用于检测疾病标志物，协助医生对疾病进行 早期诊断和预后评估。
药物开发
作为药物载体或治疗性抗体，用于疾病的诊 断和治疗。
免疫治疗
作为免疫治疗药物，用于治疗癌症、自身免 疫性疾病等。
02
单克隆抗体的制备过程
免疫原的制备
免疫原的纯度
确保免疫原的纯度高，无杂质和其他蛋白质的污染， 以提高免疫反应的特异性。
阳性细胞的筛选
筛选出能产生所需抗体的 阳性细胞株。
克隆化筛选
对阳性细胞株进行克隆化 筛选，确保其具有稳定的 遗传特性。
抗体的大量制备
细胞培养扩增
将筛选得到的杂交瘤细胞进行扩 增培养，以获得大量的抗体。
抗体纯化
采用适当的纯化方法，如凝胶过 滤、离子交换或亲和层析，去除 细胞培养上清中的杂质，获得高 纯度的抗体。
单克隆抗体的制 备演示文稿课件
目录
• 单克隆抗体的基本概念 • 单克隆抗体的制备过程 • 单克隆抗体的质量控制 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的未来发展
01
单克隆抗体的基本概念
单克隆抗体的定义
单克隆抗体（Monoclonal Antibody, mAb）：是由单一B细胞克隆产生的高度均 一、具有特异性的抗体。
抗体纯度的检测
蛋白含量
通过电泳、质谱等技术，检测单克隆抗体中的杂质成分，确保产品的纯度和安全性。
04
单克隆抗体的应用实例
在医学诊断中的应用
肿瘤诊断与治疗监测
单克隆抗体可以特异结合肿瘤相关抗原，用于肿瘤的早期诊断、分型、病情监测和预后评估。例如， 针对癌胚抗原（CEA）的单克隆抗体在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤的诊断和治疗中广泛应用。
05
单克隆抗体的未来发展
《单克隆抗体的制备》课件
总结与参考文献
单克隆抗体是当代生物医学研究的重要手段，具有广泛的应用前景。参考： 参考文献1，参考文献2，参考文献3。
筛选合适的杂交瘤细胞， 增加培养和传代条件的 控制。
在单克隆抗体筛选过程 中，严格控制细胞数目， 避免细胞混合。
单克隆抗体的应用领域
癌症治疗
自身免疫疾病
单克隆抗体可用于靶向癌细胞， 抑制肿瘤生长和扩散。
单克隆抗体可以干预异常的免 疫反应，调节免疫系统功能。
传染病防治
单克隆抗体用于抵御病原体， 增强人体免疫力。
2
免疫动物注射
将免疫原注射到小鼠或兔子等动物体内，激发免疫反应。
3
细胞融合
从免疫动物体内取出脾细胞和骨髓细胞，与癌细胞融合，形成杂交瘤细胞。
4
单克隆抗体筛选
通过筛选，选择具有特异性并高亲和力的单克隆抗体。
单克隆抗体制备中常见问题及解决方法
1 低抗体产量
优化免疫动物的免疫方 案和细胞培养条件。
2 杂交瘤细胞稳定性 3 克隆混杂
《单克隆抗体的制备》
单克隆抗体是生物医学研究和临床应用中的重要工具，能够精确靶向病理标 志物，具有巨大的应用潜力。
单克隆抗体的定义和作用
单克隆抗体是由一种特定的细胞克隆产生的抗体，能够与特定抗原高度特异性地结合。它在疾病诊断、 治疗和研究中发挥着重要作用。
制备单克隆抗体的步骤
1
免疫原制备
选择合适的免疫原，如蛋白质或多肽，制备免疫原样品。
单克隆抗体的市场前景
市场规模
预计未来几年内，单克隆抗体市场将继续增长。
新兴应用
单克隆抗体在精准医疗和个性化治疗领域有着广阔的市场前景。
技术进步
随着技术的不断进步，单克隆抗体的制备和应用将变得更加高效和便捷。
人教版高中生物选修三《单克隆抗体的制备及应用》教学课件
阳性细胞
二、单克隆抗体的应用
（1）作为诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
（如利用同位素标记的 单克隆抗体，可定位诊 断肿瘤、心血管畸形等）
二、单克隆抗体的应用
（2）运载药物
ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成。
ADC的抗体和药物各具有什么作用？ 抗体主要发挥靶向运输作用；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。
一个极富创造力的方案： B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
（能产生抗体）（能大量增殖）
融合细胞
（既能产生抗体，又能大量增殖）
米尔斯坦
科勒
一、单克隆抗体的制备
探究一
小组合作利用太空泥模拟细胞融合的过程（只考虑两个细胞融合）
随机融合后培养基中细胞的类 型有哪些？
一、单克隆抗体的制备
探究二
已知细胞分裂过程中，合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋 呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖，其本 身也不能在体外长期存活。 鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但 可以在体外无限增殖，如果它的D途径被阻断的话，它会因为不能合成 DNA而死亡。
二、单克隆抗体的应用
（3）直接用于治疗疾病
实例：利妥昔单抗(美罗华)是一种针对 CD20抗原的人鼠嵌合型单克隆抗体，是第 一个被FDA批准用于临床治疗的单抗。进 入人体后能通过介导抗体依赖的细胞毒性 作用、补体依赖的细胞毒性作用和抗体与 CD20分子结合引起的直接效应，抑制细胞 生长，改变细胞周期以及凋亡等方式杀死 淋巴瘤细胞。
一、单克隆抗体的制备
1.传统抗体制备方法及缺陷 （1）方法： 向动物体内反复注射某种抗原
从动物血清中分离所需抗体 （2）缺点： 产量低、纯度低、特异性差
《单克隆抗体制备》课件
单克隆抗体制备流程
1
免疫原选择
选择合适的免疫原，如细胞、蛋白或多肽。
2
免疫动物免疫
将免疫原注射到小鼠或其他动物中，激发其产生抗体。
3
融合细胞制备
将免疫细胞与癌细胞融细胞与癌细胞融合， 形成杂交瘤细胞，从而制备 出单克隆抗体。
重链变异法
通过重链基因的变异和筛选， 获得带有特定抗原亲和性的 单克隆抗体。
转基因动物法
通过将人类抗体基因转入小 鼠等动物，使其产生人类单 克隆抗体。
单克隆抗体制备的应用
在疾病的早期诊断中起重要作用 治疗癌症、自身免疫疾病等疾病 用于药物研发和生物学研究
单克隆抗体制备与疾病治疗
单克隆抗体在疾病治疗中发挥着重要的作用。它们可以通过靶向特定抗原或信号通路来抑制疾病的发展，为患 者提供更加个体化和有效的治疗方案。
单克隆抗体制备
欢迎来到《单克隆抗体制备》的PPT课件！本课程将介绍单克隆抗体的概念、 制备流程、方法、应用、与疾病治疗的关系，以及制备过程中的挑战。让我 们一起开始探索这个令人兴奋的领域吧！
什么是单克隆抗体
单克隆抗体是由一种单一的抗体细胞克隆所产生的抗体，具有高度专一性和 亲和性。它们被广泛应用于疾病的诊断和治疗领域。
单克隆抗体制备的挑战
• 免疫原选择的挑战 • 克隆纯化的困难 • 制备时间和成本的考虑
结论和总结
单克隆抗体制备是一项复杂而重要的技术，它为研究和治疗领域提供了丰富 的工具和机会。通过深入了解单克隆抗体的制备流程和应用，我们能够更好 地应对疾病挑战，为人类的健康保驾护航。
单克隆抗体的制备.ppt
单克隆抗体制备
总结
单克隆抗体是由单一B淋巴细胞克隆所产生 的、只作用于一个特定抗原表位的均一抗体。
动物免疫 细胞融合 HAT选择性培养
阳性杂交瘤细胞的筛选
克隆化培养
建系与冻存
单克隆抗体的大量制备
谢 谢！
Balb/c 6-8周龄
3天
免疫脾细胞
单克隆抗体制备
制备流程 细胞融合
免疫脾细胞
+
PEG
SP2/0
骨髓瘤细胞（HGPRT-/TK-）
几种细胞类型？ ？
单克隆抗体制备
制备流程 选择性培养：HAT培养基
HGPRT－/ TK－ 不能生长
死亡
HGPRT+, TK+ 能够长期生长
生长繁殖
单克隆抗体制备
制备流程
单克隆抗体制备
单克隆抗体
(monoclonal antibody, McAb)
由单一B淋巴细胞克隆所产生的、只作 用于一个特定抗原表位的均一抗体。
三个“一”
单克隆抗体制备
制备原理
致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
杂交瘤
杂交瘤技术
单克隆抗体制备
制备流程
动物免疫
1 23
采用与骨髓瘤细胞系来源相同的品系动物。
单克隆抗体制备
制备流程 杂交瘤细胞的建系与冻存
1、连续两次克隆化阳性率达100%； 2、体外连续传代三个月以上仍能稳定分泌抗体。
单克隆抗体制备
制备流程 单克隆抗体的大量制备
体外培养法（产量10-100μg/ml）
单克隆抗体制备
制备流程
单克隆抗体的大量制备 动物体内诱生法 （产量3-10mg/ml）
临床免疫学检验技术
单克隆抗体的制备 PPT课件
单克隆抗体的制备
五、应用
这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性 问题，可用于探讨
用于疾病诊断方面
用于疾病的治疗
用作研究工具
单克隆抗体的制备
可用以检测淋巴细胞表面分子, 以区分不同分化阶段的淋巴细胞, 用于 鉴别淋巴细胞。
可用于鉴定病原体, 准确诊断感染性疾病。 可以用于肿瘤的诊断和分型。
1946年--1995年
米尔斯坦 César Milstein（英国） 英国医学研究委员会 分子生物实验室 1927年--
单克隆抗体的制备
1994年Winter等创建了以噬菌体抗体库技术为代表的基因工程 抗体，是单克隆抗体技术的又一重要进步，该技术是按人工设 计所重新组装的新型抗体分了，使不经免疫既可获得任何一种 动物(包括人)的特异性抗体成为可能，目前基因工程抗体在疾 病的预防、诊断、及治疗方面已获得广泛应用。
三、分类：
非人源抗体
人-鼠嵌合抗体
人源化抗体
全人源抗体 抗体的应用经历了非人源抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体，最
终同的阶 段。
单克隆抗体的制备
四、优缺点：
1、优点
具有特异性高、效价高、纯度高、 理化性状均一、重复性强且来源稳 定可大量生产等优点。
单克隆抗体的制备
二、制备原理
1. 致敏淋巴细胞 2. 骨髓瘤细胞 3. 饲养层细胞 4. 细胞融合 5. 选择性培养 6. 特异性抗体的检测 7. 杂交瘤细胞的克隆化 8. 杂交瘤的冻存和复苏 9. 单克隆抗体的大量制取 10.单克隆抗体的纯化
单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针
单克隆抗体制备(共44张PPT)
单克隆抗体制备流程图
亲本细胞的选择与制备
骨髓瘤细胞 (NS-1)
骨髓瘤细胞需定期用
细胞株稳定，易传代培养；
细胞株本身不产生Ig
是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖 转换酶 缺陷株
(hypoxanthine-guanine phos phoribosyl transferase ,HGPRT)
最常用的骨髓瘤细胞是NS-1 和SP2/0细胞株
PEG可导致细胞膜上 脂类物质的物理结构 重排，使细胞膜容易 打开而有助于细胞融 合。
常见的几种融合形式
细胞DNA合成途经
HAT选择培养基
三种关键成分：
次黄嘌呤（hypoxanthine,H）
氨基蝶呤（aminopterin,A）
胸腺嘧啶（thymidine ，T）
◆是根据细胞内嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的 生物合成途径设计的用于筛选杂交瘤细胞
因此在传统抗血清中，都含有许多种不同的抗体，分别针对这些不同的eptope。
每 mL 含有100 个 但除非抗原来源困难或有其它目的，我们仍采用传统方法，因免疫反应的启动机制非常复杂，生物整体的免疫反应是最可靠的。
单克隆抗体的制备流程和应用
细胞，若只要取一个 试采血 确定有抗体产生后，即可取出 脾脏以收集脾脏细胞(大多为B 细胞) 与骨髓瘤细胞进行 细胞融合。
2)体外增量培养法： 把杂交瘤细胞在大型培养槽 中培养，收集培养液上清即得抗体，但每 mL 只得 约数 mg，浓度较腹水稀约一千倍。最近有一种细 胞培养瓶，可产生如腹水般浓度的上清，但价格极 为昂贵 (IBS Integra Bioscience: Integra Celline)。
单克隆抗体的性质鉴定
种抗体；因此在传统抗血清中， 都含有许多种不同的抗体，分
单克隆抗体制备课件
细胞培养：选择合适的细胞 系进行培养
克隆化：将杂交瘤细胞进行 克隆化培养
抗体纯化：通过亲和层析法 纯化抗体
抗体鉴定：通过ELISA法鉴 定抗体的特异性和亲和力
PART FOUR
单克隆抗体在诊断试剂中的应用 单克隆抗体在免疫诊断中的应用 单克隆抗体在肿瘤诊断中的应用 单克隆抗体在传染病诊断中的应用
PPT,a click to unlimited possibilities
汇报人：PPT
CONTENTS
PART ONE
PART TWO
单克隆抗体：由 单一B细胞克隆产 生的抗体
特性：特异性强， 只识别一种抗原
制备方法：杂交 瘤技术、基因工 程等
应用：疾病诊断、 治疗、科学研究 等
制备过程：通过细胞融合技术， 将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合，形成杂交瘤细胞
产生来源：单克隆抗体是由 B淋巴细胞产生的
筛选：通过筛选，得到能够产 生特异性抗体的杂交瘤细胞
培养：将杂交瘤细胞进行培养， 使其大量增殖，产生大量的单 克隆抗体
PART THREE
确定抗原：选择合 适的抗原，如蛋白 质、多肽等
纯化抗原：通过离 心、层析等方法纯 化抗原
抗原处理：对纯化 后的抗原进行化学 修饰，如偶联、标 记等
PART FIVE
特异性强：能够识别并结合特异性 抗原
稳定性好：不易受环境因素影响
添加标题
添加标题
添加标题
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灵敏度高：能够检测低浓度的抗原
应用广泛：可用于疾病诊断、治疗 和预防
制备过程复杂，需要较高 的技术水平
成本较高，需要大量的资 金投入
制备周期较长，需要较长 的时间才能得到结果
存在一定的风险，如免疫 反应、过敏反应等
克隆化：将杂交瘤细胞进行 克隆化培养
抗体纯化：通过亲和层析法 纯化抗体
抗体鉴定：通过ELISA法鉴 定抗体的特异性和亲和力
PART FOUR
单克隆抗体在诊断试剂中的应用 单克隆抗体在免疫诊断中的应用 单克隆抗体在肿瘤诊断中的应用 单克隆抗体在传染病诊断中的应用
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汇报人：PPT
CONTENTS
PART ONE
PART TWO
单克隆抗体：由 单一B细胞克隆产 生的抗体
特性：特异性强， 只识别一种抗原
制备方法：杂交 瘤技术、基因工 程等
应用：疾病诊断、 治疗、科学研究 等
制备过程：通过细胞融合技术， 将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合，形成杂交瘤细胞
产生来源：单克隆抗体是由 B淋巴细胞产生的
筛选：通过筛选，得到能够产 生特异性抗体的杂交瘤细胞
培养：将杂交瘤细胞进行培养， 使其大量增殖，产生大量的单 克隆抗体
PART THREE
确定抗原：选择合 适的抗原，如蛋白 质、多肽等
纯化抗原：通过离 心、层析等方法纯 化抗原
抗原处理：对纯化 后的抗原进行化学 修饰，如偶联、标 记等
PART FIVE
特异性强：能够识别并结合特异性 抗原
稳定性好：不易受环境因素影响
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灵敏度高：能够检测低浓度的抗原
应用广泛：可用于疾病诊断、治疗 和预防
制备过程复杂，需要较高 的技术水平
成本较高，需要大量的资 金投入
制备周期较长，需要较长 的时间才能得到结果
存在一定的风险，如免疫 反应、过敏反应等
《单克隆抗体制备》课件
02
单克隆抗体制备的流程
免疫动物
免疫动物选择
选择适合的动物作为免疫原注 射的宿主，如小鼠、大鼠等。
免疫方案设计
根据免疫原的性质和目的，设 计合适的免疫方案，包括免疫 途径、免疫次数、免疫剂量等 。
免疫原注射
将免疫原物质注射到选定的动 物体内，激发免疫反应。
杂交瘤细胞的培养
脾细胞与骨髓瘤细胞融合
免疫学研究
细胞生物学研究
单克隆抗体可以用于标记、分离和鉴定细胞，研究 细胞的生长、分化和凋亡等过程。
单克隆抗体是免疫学研究的重要工具，可用 于研究抗原、抗体和免疫反应的机制。
蛋白质组学研究
单克隆抗体可以用于蛋白质的检测、纯化和 相互作用研究，推动蛋白质组学的发展。
单克隆抗体的未来发展与挑战
技术创新
单克隆抗体的应用
01
02
03
04
生物研究
用于免疫学、细胞生物学和分 子生物学等领域的基础研究， 如检测、分离和纯化等。
医学诊断
用于疾病诊断和治疗监测，如 免疫组织化学、酶联免疫吸附 试验和放射免疫分析等。
生物制药
用于药物研发和生产，如治疗 性抗体、诊断试剂和疫苗等。
生物安全
用于检测和预防生物恐怖袭击 和传染病爆发，如检测生物武 器和病原微生物等。
特点
单克隆抗体在结构和功能上均具有高 度一致性，使其在生物研究和医学诊 断治疗中具有广泛应用。
单克隆抗体的特性
80%
高度特异性
单克隆抗体能够特异性识别和结 合抗原，具有极高的选择性。
100%
高纯度
单克隆抗体由单一B细胞克隆产 生，纯度高，避免了多克隆抗体 中不同抗体的交叉反应。
80%
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为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测，多次筛选
大量增殖杂交瘤细胞获得单 抗的方法
比较项目
第一次筛选
克隆化培养和多 次筛选
原理
在选择性培养基中添 抗原—抗体的特 加某种药物，特异性 异性结合，进行 杀死未融合细胞和融 抗体检测 合的同种核细胞
选出杂交瘤细胞 选出既能无限增 殖，又能产生特 异性抗体的杂交 瘤细胞
目标
【堂堂清】ຫໍສະໝຸດ 1.单克隆抗体的优点是 特异性强、灵敏度高、可大量制备 ________________________________ 杂交瘤细胞的优点是
既能无限增殖（迅速大量繁殖）又能产生专一的抗体 ________________________________
2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的 原因是 每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体 _________________________________ 效应B细胞（浆细胞） 3.产生抗体的细胞是_______________ 杂交瘤细胞 产生单克隆抗体的细胞是__________
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体 体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 怎样解决这个问题？
二、单克隆抗体
设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
注射抗原的目的是什么
诱导其融合的方法有哪些？
融合后培养液中有几种细胞
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目 植物体细胞杂交
细胞膜的流动性 细胞的全能性
动物细胞融合
细胞膜的流动性 使细胞分散后诱导 细胞融合
物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 主要用于制备 单克隆抗体
原理
细胞融合的步骤
去除细胞壁后诱导 原生质体融合
物理（离心、振荡、 电刺激） 化学（聚乙二醇） 获得杂种植株
诱导方法 用途
1、抗体
1.1 概念： 抗体是机体受抗原刺激 后产生的、并能与该抗原发 生特异性结合的具有免疫功 能的球蛋白 。 1.2 来源： 浆细胞（B淋巴细胞）
传统血清抗体的制备
特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 抗原 刺激 动物体 浆细胞 抗体 抗体不纯
抗原不纯
每个浆细胞（Ｂ淋巴细胞）只能分泌一种抗体，由一 个Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单 一的。