实验一 组培室组成、主要设备使用方法

实验一实验室组成、主要设备使用方法、常用药剂配制及洗涤、灭菌

一、目的

了解植物组织培养实验室的基本组成，掌握主要设备的使用方法及常用药剂的配制。

二、实验室的组成：参观本院的组织培养室

三、主要设备的使用方法（课堂现场操作）

纯水仪、高压灭菌锅、分析天平、微波炉、酸度计、超净工作台、摇床、生物显微镜、体视显微镜等。

四、几种常用药剂的配制

（一）用95%酒精配制不同浓度酒精

学习配制70%和75%酒精

（二）消毒剂

1、20%次氯酸钠溶液称取20g次氯酸钠用适量的去离子水（或蒸馏水）溶解，然

后用去离子水（或蒸馏水）定容至100ml。

2、0.1%升汞（HgCl2）溶液称取0.1g HgCl2用适量的去离子水（或蒸馏水）溶解，

然后用去离子水（或蒸馏水）定容至100ml。

（三）洗涤剂

1、硫酸—重铬酸钾洗液

称取10g重铬酸钾加入蒸馏水90ml，加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml，放入棕色试剂瓶备用（注意：切记不可将盛过酒精、甲醛等还原剂的药品试剂瓶直接放入溶液中，因为重铬酸钾是一种强氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，就会失去洗涤作用）。

这些玻璃器皿必须用自来水冲洗干净并晾干后再浸入洗液。

（四）1摩尔浓度NaOH和1摩尔浓度HCl配制

摩尔浓度是指用1升（1000ml）溶液中所含溶质的分子量数来表示的溶液浓度。用M 表示。

1、NaOH摩尔浓度（M）

NaOH摩尔质量=分子克数=40g

1MNaOH是指1000ml溶液里含有40克摩尔质量的NaOH，现要配制100ml，即需NaOH4克。称取NaOH4克，用少量的去离子水（或蒸馏水）溶解，然后定容至100ml。

2、HCl摩尔浓度

具体配制酸的摩尔浓度时，应考虑原浓酸的比重摩尔浓度。

V=要配制的摩尔浓度×需配制体积×原酸分子量/原酸百分浓度×原酸的比重×1000 配制1.0MHCl100ml，即量取38%，比重为1.19的HCl8.06ml加去离子水（或蒸馏水），定容至100ml。

五、洗涤

（一）新购置玻璃器皿的洗涤

因有游离碱性物质，使用前先用1%稀盐酸浸泡一夜，然后用肥皂水浸泡、洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。

（二）已用过玻璃器皿

先将残渣除去，用清水洗净，再用热肥皂水或洗衣粉浸泡、洗净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。

六、灭菌

（一）器皿和用具常用灭菌方法：

1、热压灭菌法

将洗净的培养器皿，用具等包好，放入高压灭菌锅内，121℃灭菌20-30分钟。

2、干热灭菌法

洗净的玻璃器皿置于电热干燥箱中，150℃40分钟或120℃两个小时，待冷却后使用。

（二）接种室、培养室的灭菌

1、用新洁尔灭、70%酒精擦拭超净工作台。

2、接种前用70-75%酒精喷雾，使飘在空气中的尘埃沉积下来。

3、用紫外灯进行照射灭菌房间及超净工作台20-30分钟

4、熏蒸

用甲醛、高锰酸钾提前1-3天熏蒸密封房间：

（三）培养基灭菌（略）

（四）培养材料灭菌（略）

（五）工作人员无菌操作（略）

思考题

怎样构建商品性生产的组培室？