乙型肝炎实验室检测技术ppt课件

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五、洗板
• 固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定 技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的 抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特 异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异 性
抗-HBc IgG 在抗-HBc IgM下降及消失后出现，可伴随感
染者终生存在
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HBeAg 与HBsAg平行出现，较HBsAg消失早
意义 体内HBV复制、传染性强的标志
急性乙型肝炎的辅助诊断
判断预后的指标：HBeAg转阴，表示HBV复制减少或 终止，预后好；若HBeAg持续阳性，则预后不良，易转为 慢性
注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG) 后，产生的主动或被动免疫
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HBcAg 不能从血清中直接检出
Dane颗粒经去垢剂处理HBcAg释放检测
抗-HBc 非中和抗体、分IgM和IgG
主要见于慢性感染和既往感染
抗-HBc IgM 通常在出现症状时即可检出，一般持续约6个
月，提示HBV 复制，是急性感染的重要指标，也是慢性活 动性肝炎的重要标志
乙型肝炎实验室检测技术
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病毒形态与基因结构
嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)正肝DNA病毒属 电镜：3种形态
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2
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HBV基因组和基因表达产物
3200 bp 4 open reading frames 7 proteins • 大蛋白(preS1-preS2-S) • 中蛋白(preS2-S) • 小蛋白(HBsAg) • 核衣壳(HBcAg) • HBeAg • 聚合酶 • X蛋白
HBs 抗A HB gs
+
﹣
+
﹣
﹣﹣
抗-HBc IgG IgM
﹣﹣ ++ ﹣+
HBe A 抗-HBe g
+/﹣ ﹣
+
﹣
﹣
﹣
﹣
﹣+﹣
﹣
﹣
+
﹣ + +/- ﹣
+
+
-
+ +/- +
-
﹣
+
+ +/- ﹣
+
﹣ +/- +﹣ ﹣ ﹣
﹣
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﹣
+ ﹣﹣
﹣
﹣
HBV感染的血清学诊断方法
ELISA （最常用，定性） 免疫层析法（胶体金或硒标法） 发光免疫分析（定量） 反相间接血凝试验（少用）
D
ayw2, ayw3
源自文库
南欧、地中海、印度
E
ayw4
西非
F
adw4, adw2, ayw4 美国土著人、波利尼西亚、中南美
G
adw2
美国、法国
H
?
尼加拉瓜、墨西哥、美国
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传播途径
经血传播 医源性传播 母婴传播 性接触传播 日常生活接 触传播
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Source: NNDSS/VHSP
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抗原抗体系统
辽宁
青海
宁夏
山西
山东
云南
陕西
河南
江苏
四川 贵州
湖北 湖南
安徽
上海
江西
浙江
福建
广西
广东
海南
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全国不同年龄组HBsAg阳性率比较
Comparing of HBsAg prevalence between 1992 and 2006
12.00% 10.00% 8.00% 6.00% 4.00% 2.00% 0.00%
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4
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5
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6
HBV carrier distribution in China in 1992
8-12%
4-8% 4-8%
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7
HBsAg distribution in the year of 2006
No data
over7%
3~7%
Lower then3%
新疆 西藏
黑龙江
吉林
甘肃
内蒙古
北京
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酶联免疫吸附试验ELISA
❖ 利用抗原和抗体特异性结合
❖ 方法
间接法: 测定抗-HBs
夹心法：测定HBsAg和HBeAg
竞争法：测定抗-HBc和抗-HBe
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酶标技术
❖ 优点
❖ 缺点
快速简便，成本低 精密度差
敏感
难以自动化
血清标本用量少
容易出现交叉反应
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临床ELISA检验影响因素
• 临床ELISA测定现通常为采用手工操作的以 微孔板条为固相的测定模式，测定操作非 常简单，一般涉及到标本的收集保存、试 剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、 结果判断和结果报告及解释等方面，其中 任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤 以加样、温育和洗板等步骤为甚
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一、临床标本的收集和保存
• 要注意避免出现严重溶血
• 样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污 染
• 血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃ 下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存
• 冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的 反复冻融
• 标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状 物时，应离心沉淀后取上清检测
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二、试剂准备
• 实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来， 在室温下放置20分钟以上后，再进行测定
• 蒸馏水或去离子水应保证质量
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三、加血清样本及反应试剂
• 加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不 可溅出和产生气泡
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四、温育
• 要保证在设定的温度下有足够的反应时间 • 温育温度的选择 • “边缘效应”的排除
抗-Hbe HBeAg消失后出现无症状HBV携带者及非活动期
慢性肝炎患者表示HBV在体内复制减少或终止，传染性减
弱或消失
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HBV感染血清学常见模式
临床及流行病学意义 潜伏期末期 急性乙肝，病毒长期携带 HBsAg阴性的急性感染 感染消除，抗-HBs尚未出
现 健康携带者 慢性乙肝，病毒长期携带 HBV近期感染，恢复期 HBV既往感染，已恢复 乙肝疫苗接种
2006年 1992年
阳性率 1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 合计
age
年龄段
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9
地区分布
世界 我国
高流行区 ≥8% 中流行区 2～7% 低流行区 ＜2% 农村>城市 南方>北方 中南和华东>华北
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人群分布
年龄和性别
高流行区 青少年和30～40岁的成人
中流行区 仍以成人感染为主
低流行区 多20～29岁年龄组发病高峰
职业
高危人群 医务人员 托幼机构儿童
妓女
静脉内滥用毒品者
男性同性恋者
家庭聚集性明显
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HBV不同基因型和血清型的地区分布
基因型 血清型
主要地区
A
adw2, ayw1
北欧、西欧、非洲、美洲
B
adw2, ayw1
东南亚、中国、日本
C
adr, ayr, adw2
东亚、中国、日本、波利尼西亚等
HBsAg 最早出现的血清学标志之一
是HBV感染的基本标志 HBsAg阳性见于
乙肝的潜伏期、急性期 慢性乙肝 病毒携带 与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌
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抗-HBs 特异性中和抗体、保护性抗体
抗-HBs阳性可见于 乙型肝炎恢复期，在HBsAg消失后间隔一定时
间抗-HBs出现隐性感染的健康人，自身产生了免疫 力