乙型肝炎实验室检测技术ppt课件
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最新乙型肝炎血清学和分子生物学检测技术PPT课件
•表面抗原抗体系统 (HBsAg，抗-HBs) •e 抗原抗体系统 (HBeAg，抗-HBe) •核心抗原抗体系统 (HBcAg，抗-HBc)
HBsAg 最早出现的血清学标志之一
是HBV感染的基本标志 HBsAg阳性见于
乙肝的潜伏期、急性期 慢性乙肝 病毒携带 与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌
抗-HBc IgM 通常在出现症状时即可检出，一般持续约6个月，提 示HBV 复制，是急性感染的重要指标，也是慢性活动性肝炎的重 要标志
抗-HBc IgG 在抗-HBc IgM下降及消失后出现，可伴随感染者终生 存在
临床机构一般常规检测抗-HBc ，抗但-HB检c测Ig抗M-H≠B抗c-HIBgcM，相对较少（
▪ 新增检测指标
➢ Pre–S1抗原等
19
3. HBV分子生物学检测
➢HBV基因型和基因变异研究：
必要性 主要方法
➢HBV-DNA病毒载量测定：
PCR结合荧光探针技术 病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传
染性和疾病进展密切相关； 主要用于HBV感染的判断，治疗适应症的选
择及抗病毒疗效的判断。
F
G (甘) R (精)
99
137--S-S- 149
164
107 S-S 138 139 S-S 147 D
E
145 144 G R
D E
Loop 2 of “a”determinant
Vaccine escape mutant
PCR扩增相应区段 PCR 产物直接测序 生物信息学分析与数据信息挖掘
22
121 S-S 124 Loop 1 of “a”determinant
F (苯丙) Y(酪)
E (谷) D (天冬)
HBsAg 最早出现的血清学标志之一
是HBV感染的基本标志 HBsAg阳性见于
乙肝的潜伏期、急性期 慢性乙肝 病毒携带 与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌
抗-HBc IgM 通常在出现症状时即可检出，一般持续约6个月，提 示HBV 复制，是急性感染的重要指标，也是慢性活动性肝炎的重 要标志
抗-HBc IgG 在抗-HBc IgM下降及消失后出现，可伴随感染者终生 存在
临床机构一般常规检测抗-HBc ，抗但-HB检c测Ig抗M-H≠B抗c-HIBgcM，相对较少（
▪ 新增检测指标
➢ Pre–S1抗原等
19
3. HBV分子生物学检测
➢HBV基因型和基因变异研究：
必要性 主要方法
➢HBV-DNA病毒载量测定：
PCR结合荧光探针技术 病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传
染性和疾病进展密切相关； 主要用于HBV感染的判断，治疗适应症的选
择及抗病毒疗效的判断。
F
G (甘) R (精)
99
137--S-S- 149
164
107 S-S 138 139 S-S 147 D
E
145 144 G R
D E
Loop 2 of “a”determinant
Vaccine escape mutant
PCR扩增相应区段 PCR 产物直接测序 生物信息学分析与数据信息挖掘
22
121 S-S 124 Loop 1 of “a”determinant
F (苯丙) Y(酪)
E (谷) D (天冬)
慢性乙型肝炎的检测与诊断精品医学PPT课件
乙肝治疗的最优结果
——中国著名肝病专家、中国工程院院士庄辉教授
乙肝的临床治疗途径
筛查
HBsAg
伴有肝炎 症状的个 体
妊娠妇女 手术之前 供血
诊断
生化 HBeAg 抗-HBe 抗-HBc HBV-DNA
HBs-Ag定 量检测
治疗方法的 选择
ALT HBeAg 抗-HBe HBV-DNA HBV基因 型 CBC 肝硬化
05 总结
HBsAg与HBV-DNA的水平形成病毒与宿主之间信息的互补， 尤其对于隐匿性慢性乙肝，有助于我们更好地认识疾病分期及 预后风险。
THANK YOU
其中HBsAg膜外区的“a”决定簇 是突变的热区。目前HBsAg检测 试剂盒主要检测“a”决定簇 的AA141-145表位，其突变后，检测 试剂无法识别HBsAg，临床上会出现HBsAg检测结果为阴性（隐 匿型乙型肝炎）
病原学
2、免疫组化法显示： （1）、早在发病前几周肝细胞浆内和细胞核内可分别检测出
病毒感染所引发的直接或间接的结果是疾病的诊断与预后，临 床医生的任务。通常利用实验室参数分析器官功能。
病毒性疾病病程的诊断与评价
病毒性实验室诊断的主要技术
检测病毒性传染病 光学显微镜和电子显微镜 病毒的细菌培养（鸡胚、实验动物） 用特定的抗体作病毒结构成分的检测 分子生物学诊断
HBsAg阳性超过6个月，或有乙肝HBsAg阳性史，现HBsAg仍为阳性者， 可诊断为慢性HBV感染。根据HBV感染者的血清学、病毒学、肝功能试验 及其他临床和辅助检查结果，可将慢性HBV感染分为： 1．HBeAg阳性慢性乙型肝炎：血清HBsAg、HBV-DNA和HBeAg阳性， 抗-HBe阴性，血清ALT持续或反复升高，或肝组织学检查有肝炎病变。 2．HBeAg阴性慢性乙型肝炎：血清HBsAg和HBV DNA阳性，HBeAg阴 性、抗-HBe阳性或阴性，血清ALT持续或反复异常，或肝组织学检查有肝 炎病变。
实验室检查——乙肝五项-PPT
- 既往感染恢复期
+ 既往感染或“窗口期”
- 既往感染或接种过疫苗
4
5
受试者入选标准
结果分析
HBsAg
无症状携带者
+
急性乙型肝炎
+
+
+
慢性乙型肝炎
-
HBV DNA定量检测
-
来区别稳定期或活动 -
期（检测标准） -
Hale Waihona Puke 抗-HBs+ + +
HBeAg
+ + -
抗-HBe
+ + + -
抗-HBc
+ + + + -
6
大三阳与小三阳区别
大三阳
小三阳
化验单检查 结果
DNA
HBsAg（+）HBeAg （+）
抗-HBc（+）
阳性
HBsAg（+）抗-HBe （+）
抗-HBc（+）
阴性
传染性
强
弱
乙肝病毒复 制
活跃
不活跃
演变
慢性肝炎 肝硬化、肝癌
7
预防及免疫
1.控制传染源、切断传播途径 2.人工主动免疫：
疫苗（血源性、基因工程-HBsAg) 3.人工被动免疫：
2
4.HBeAb-乙肝病毒e抗体：为病毒复制停止标志。传染性较弱，但并非 完全没有传染性。乙肝病毒感染后的恢复期或慢性感染者可以阳性。
5.HBcAb-乙肝病毒核心抗体：HBcAg是乙型肝炎病毒的核心抗原, 一般 存在于肝细胞内，不易检测, 因此乙肝两对半五项指标中不包括此项。 但只要体内有HBcAg就会产生抗-HBc。因此HBcAb提示体内存在 HBcAg，为曾经感染过或正在感染者都会出现的标志。核心抗体IgG是 新近感染或病毒复制和传染性的标志，急性乙肝、慢性乙肝、肝硬化等 均可以表现为阳性。核心抗体IgG是感染后就会产生的。
乙肝标志物检测PPT课件
乙型肝炎病毒（电镜） DANE氏颗粒直径42NM 核心直径27NM
㈠乙肝六项检测
参考值：ELISA法为阴性 放射免疫分析（RIA）法为阴性
㈡HBV抗原抗体系统
HBsAg：表面抗原，是HBV的外壳，不含DNA, 其本身不具有传染性，但常与HBV同时存在，常被 作为传染性标志之一。是HBV感染的基本标志， 也是最早出现的血清学标志之一。
临床意义：YMDD是HBV反转录酶发挥催化活性所必需 的关键结构。
目前临床上广泛使用的胞苷类似物拉米夫定等抗病毒 药物，作用靶位主要是HBV反转录酶，通过与底物 dNTP竞争结合以抑制HBV的反转录和复制。
当病毒YMDD中M突变为异亮氨酸（I）或缬氨酸（V）， 就可能引起抗HBV类药物的药效丧失，从而产生耐药 性。
形态与基因结构
●小球形颗粒 空心包膜，不含核酸
●管形颗粒 两者均为过剩的病毒外壳，仅含HBsAg，无感染性
“空心汤团”
Dane颗粒（完整的病毒）形态
HBsAg
（外膜蛋白）
HBcAg
（核衣壳蛋白）
HBV DNA
DNAP HBeAg
HBV Viral Genome Organization
HBcAg HBeAg
约6个月，提示HBV 复制，是急性感染的重要指标， 也是慢性活动性肝炎的重要标志 抗-HBc IgG：在抗-HBc IgM下降及消失后出现，可伴 随感染者终生存在，是既往感染过HBV的指标。
HBV抗原抗体系统
HBeAg阳性： 与HBsAg平行出现，较HBsAg消失早 意义：表示乙肝处于活动期，并有较强的传染性。 HBsAg持续阳性可转为慢性或肝硬化。孕妇阳 性可垂直传播。
YMDD测定结果为临床抗HBV类治疗用药提供了实验室 诊断依据。
乙肝实验室检查课件
7.乙肝病毒的基因组最引人注目的一个特征就是它非常小， 而且乙肝病毒DNA的两链长短不一，长链完整，长度恒定， 为负链，短链是正链，长度可变，大概是长链的50％～80%。 表面抗原和核心抗原都是由Dane颗粒的DNA编码而来。
病理：（1）HBV抗原和抗体系统
1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2
4.慢性化：特别是幼儿期感染，多为慢性化过程，长期携带 HBV，体内呈“免疫耐受”状态，不能将病毒清除，这个过 程可长达10-30年或更久，是重要的传染源
5.致癌性：HBV是肝癌的重要病因，约80％-90％的肝癌有乙 肝背景。癌变的原因是HBV的基因整合到肝细胞基因上，发 生突变，导致肝癌。
6.HBV的基因变异性：HBV是极度易变异的病毒之一，它的四 个基因组（S、C、P、X）均可变异，变异是病毒的特性
（2）HBeAg 和抗-HBe
e抗原(HBeAg)： 是可溶性蛋白质 只存在于血液中 是病毒复制和传染性的标志 e抗体(抗-HBe)： 对HBV感染有一定的保护作用 其出现标志着病毒复制减少、 传染性降低
5
1,Hepatitis B（vi3ri）on(HDBaVne的par三tic种le)形态
3.生化指标：血清ALT（丙氨酸转氨酶）活力升高，有黄疸者 血 清胆红素升高。
4.病原学检查 甲型：抗HAV－IgM阳性，即可确诊。 乙型：HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc－IgM阳性）或
HBVDNA阳性。 丙型：抗HCV-IgG、HCV-IgM阳性，HCV－RNA阳性。 丁型：抗HDV－IgM阳性或HDV－RNA阳性。 戊型：抗HEV－IgM阳性。 庚型：抗HGV－IgM阳性
2,secreted filament 3,secreted sphere
病理：（1）HBV抗原和抗体系统
1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2
4.慢性化：特别是幼儿期感染，多为慢性化过程，长期携带 HBV，体内呈“免疫耐受”状态，不能将病毒清除，这个过 程可长达10-30年或更久，是重要的传染源
5.致癌性：HBV是肝癌的重要病因，约80％-90％的肝癌有乙 肝背景。癌变的原因是HBV的基因整合到肝细胞基因上，发 生突变，导致肝癌。
6.HBV的基因变异性：HBV是极度易变异的病毒之一，它的四 个基因组（S、C、P、X）均可变异，变异是病毒的特性
（2）HBeAg 和抗-HBe
e抗原(HBeAg)： 是可溶性蛋白质 只存在于血液中 是病毒复制和传染性的标志 e抗体(抗-HBe)： 对HBV感染有一定的保护作用 其出现标志着病毒复制减少、 传染性降低
5
1,Hepatitis B（vi3ri）on(HDBaVne的par三tic种le)形态
3.生化指标：血清ALT（丙氨酸转氨酶）活力升高，有黄疸者 血 清胆红素升高。
4.病原学检查 甲型：抗HAV－IgM阳性，即可确诊。 乙型：HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc－IgM阳性）或
HBVDNA阳性。 丙型：抗HCV-IgG、HCV-IgM阳性，HCV－RNA阳性。 丁型：抗HDV－IgM阳性或HDV－RNA阳性。 戊型：抗HEV－IgM阳性。 庚型：抗HGV－IgM阳性
2,secreted filament 3,secreted sphere
乙肝丙肝实验室检测及临床意义PPT课件
丙型肝炎抗体测定（ Anti-HCV）
血浆/血清/全血 250403014 20元 酶免
每天上午10：00前样本当天可出报告，10:00后样本第二天下午 出报告
HBV 血清学检测
HBV DNA检测
HBeAg
HCV RNA检测
HBV DNA 分子检测 HBV DNA 定量检测
HBV 耐药突变株检测
③ PCR检测结果与其它检测 项目不同，一般量值变化 在一个数量级内均视为没 有变化
乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测意义
缩短“窗口期”，有利于感染的早期诊断
HBV感染后至血液中出现可检出的HBsAg或HBV特异抗体需要一定时间。
HBV DNA先于 HBsAg出现于外周
血循环中 实时荧光定量PCR检
HBeAg
HCV RNA检测
表面抗原 (HBsAg) e 抗原(HBeAg) 表面抗体(抗-HBs) e抗体(抗-HBe)
HBV血清学检测——乙肝两对半
+ 定性（qualitative） 判断阴阳性
+ 定量（quantitative） 单位：ng/ml、IU/ml、IU/L、PEIU/ml
定性-乙肝“两对半”
HBV DNA高精度检 全血、血清、血浆 促凝管 4℃ 测
每周一、周四10:30 前样本，15:00出报 告
每周四11:00前样本 ，当日16:30出报告
HCV RNA检测 全血、血清、血浆 促凝管 4h内送 每周三10:00前样本
至实验室
，15:00出报告
HBV耐药基因检测 全血、血清、血浆 促凝管 4℃
－
－
接种疫苗获得免疫力
相关检验项目详情
检验科（84005）
检测
乙型病毒性肝炎的实验室检查PPT课件
乙型病毒性肝炎的实验室检查
·
报告人：付红伟
天津医大总医院
1
检验中心
2011.1.21
·
我国HBV感染概况
一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者 约9 300万人，占全世界的1/4；
其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全 世界慢性乙肝患者的1/3；
15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为 0.96%；1~ 4岁组HBsAb阳性率由1992年15.75%升至 72.25%; 抗HBcAb阳性率由1992年30.08%降至3.76%；
HBV DNA 定量检测
病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传染性和疾病 进展密切相关；
主要用于HBV感染的判断，治疗适应症的选择及抗病毒疗 效的判断。
HBV基因分型
基因分型的必要性； 基因分型的主要方法；
HBV耐药突变的检测
23
慢性HBV感染治疗适应症的选择
·
HBeAg 阳性，HBV DNA 载量> 105 copies/ml, ALT > 2 ×ULN;
嗜肝DNA病毒的共同特点： 内含3~3.3kb松散环状、部分双链DNA基因组
3 及DNA聚合酶；病毒的复制需逆转录过程。
HBV抗原和抗体系统
·
1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2
S
表面抗原(HBsAg)：
大分子蛋白
中分子蛋白 S蛋白
★HBV外膜糖蛋白=S+L+M蛋白
S蛋白：狭义的HBsAg指S蛋白。
16
Back
大三阳
vs
小三 阳
·
17
·
HBV血清学标志检测结果分析
·
报告人：付红伟
天津医大总医院
1
检验中心
2011.1.21
·
我国HBV感染概况
一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者 约9 300万人，占全世界的1/4；
其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全 世界慢性乙肝患者的1/3；
15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为 0.96%；1~ 4岁组HBsAb阳性率由1992年15.75%升至 72.25%; 抗HBcAb阳性率由1992年30.08%降至3.76%；
HBV DNA 定量检测
病毒复制水平最可靠，最直接的证据，与传染性和疾病 进展密切相关；
主要用于HBV感染的判断，治疗适应症的选择及抗病毒疗 效的判断。
HBV基因分型
基因分型的必要性； 基因分型的主要方法；
HBV耐药突变的检测
23
慢性HBV感染治疗适应症的选择
·
HBeAg 阳性，HBV DNA 载量> 105 copies/ml, ALT > 2 ×ULN;
嗜肝DNA病毒的共同特点： 内含3~3.3kb松散环状、部分双链DNA基因组
3 及DNA聚合酶；病毒的复制需逆转录过程。
HBV抗原和抗体系统
·
1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2
S
表面抗原(HBsAg)：
大分子蛋白
中分子蛋白 S蛋白
★HBV外膜糖蛋白=S+L+M蛋白
S蛋白：狭义的HBsAg指S蛋白。
16
Back
大三阳
vs
小三 阳
·
17
·
HBV血清学标志检测结果分析
临床检验乙肝课件ppt
控制脂肪摄入
避免高脂肪食物，如油炸食品、肥肉 等，以降低脂肪肝的风险。
多摄入新鲜蔬菜和水果
提供丰富的维生素和矿物质，有助于 改善免疫功能。
运动指导
适量运动
乙肝患者应进行适量运动，如散 步、慢跑、瑜伽等，以增强体质
和免疫力。
避免剧烈运动
避免过度劳累和剧烈运动，以免加 重肝脏负担。
定期复查
在运动过程中，乙肝患者应定期进 行肝功能等指标的复查，以确保身 体状况良好。
VS
详细描述
乙肝两对半检测包括乙肝病毒表面抗原（ HBsAg）、表面抗体（HBsAb）、e抗原 （HBeAg）、e抗体（HBeAb）和核心 抗体（HBcAb）的检测。HBsAg阳性表 示感染了乙肝病毒，HBsAb阳性表示体 内产生了保护性抗体。HBeAg阳性表示 病毒复制活跃，传染性强，HBeAb阳性 则表示病毒复制减弱，传染性降低。 HBcAb阳性表示感染过乙肝病毒。
免疫调节剂
通过调节机体免疫功能，增强机体对乙肝病毒的清除能力。
新型抗病毒组合疗法
将直接抗病毒药物与免疫调节剂联合使用，提高治疗效果。
乙肝疫苗研究
新型疫苗研发
01
针对不同基因型和亚型的乙肝病毒，研发更广泛覆盖的疫苗。
加强疫苗接种
02
针对已接种过疫苗的人群，研究加强接种方案，提高免疫效果
。
疫苗接种策略优化
性传播的预防
正确使用安全套，避免多个性 伴侣和无保护性行为。
加强个人卫生
注意个人卫生，勤洗手、勤洗 澡、勤换衣，保持生活环境清
洁卫生。
4
乙肝患者生活指导
饮食指导
饮食原则
乙肝患者应遵循高蛋白、低脂肪、高 维生素、易消化的原则，确保摄入足 够的营养素。
乙肝病毒五项检测 ppt课件
乙型肝炎病毒表面抗原
乙型肝炎病毒表面抗原
注意事项
本样品仅用于体外诊断，操作应按说明说严格进行。封板膜不能重复使用，不同 批号、酶标试剂和阴性对照不可混用，不能与其它厂家试剂混用。
避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒液（如84消毒液）的环境下操作。 使用前请将试剂平稳至室温（平衡30分钟以上），实验前将试剂轻轻振荡混匀， 使用后立即回放2~8℃。未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2~8℃保存。 过期试剂请勿使用。 加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组 份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。 洗涤时各孔均匀需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定 30~60秒浸泡时间。在洗版结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板干燥。 避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。 结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能 有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕可能影响板孔的读值。 所有样品、废液和废弃物都应按照传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意
乙型肝炎病毒e抗体
检验方法：
配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。
编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性 对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。
加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50µl。
加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。 温育：用封板膜封板后置37℃温育30min。 洗涤：小心撕掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 显色：每孔加人显色剂A、B液各50µl，轻轻振荡混匀，37℃避光 显色15min。 测定：每孔加终止液 50µl ，轻轻振荡混匀， 10min 内测定结果。
乙肝病毒的实验室检测(ppt)
Q 3’ 5’
Taq
3’ 5’
Taq
3’ 5’
R 5’
R
Taq
R
Taq
R
l
R
3’
退火
1. 链取代
3’
5’
2. 水 解
3’
5’
3. 聚 合
3’
5’
4. 检测荧光
3’
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
（一） 乙型肝炎病毒结构及特点
HBsAg：是HBV感染的主要标志 HBsAb：保护性抗体
HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，
HBV DNA检测的临床意义
HBV DNA是HBV存在最直接的依据 HBV DNA是HBV复制的标志 HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
PCR检测 HBV HCV HIV
• 每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板 、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（dNTP）
荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入荧光 标记，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过 标准曲线对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始 模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的 核酸测定中最灵敏的方法。
HBV DNA检测的临床意义
提供直接证据缩短“窗口期”
“窗口期” 56 70 22
核酸检测缩短的“窗口期”的天数 6-15 41-60 10-15
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
HBV DNA检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于 HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳” 的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否 处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV DNA来决定。
Taq
3’ 5’
Taq
3’ 5’
R 5’
R
Taq
R
Taq
R
l
R
3’
退火
1. 链取代
3’
5’
2. 水 解
3’
5’
3. 聚 合
3’
5’
4. 检测荧光
3’
乙肝病毒的感染
乙肝病毒的感染
（一） 乙型肝炎病毒结构及特点
HBsAg：是HBV感染的主要标志 HBsAb：保护性抗体
HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，
HBV DNA检测的临床意义
HBV DNA是HBV存在最直接的依据 HBV DNA是HBV复制的标志 HBV DNA是患者具有传染性的标志 HBV DNA对乙肝两对半起补充作用 HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标 HBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎
PCR检测 HBV HCV HIV
• 每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板 、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（dNTP）
荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入荧光 标记，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过 标准曲线对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始 模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的 核酸测定中最灵敏的方法。
HBV DNA检测的临床意义
提供直接证据缩短“窗口期”
“窗口期” 56 70 22
核酸检测缩短的“窗口期”的天数 6-15 41-60 10-15
有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断
HBV DNA检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于 HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳” 的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否 处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV DNA来决定。
乙肝检验(ppt)
国内现状：
乙型病毒性肝炎在我国是一种高发传染病，人群感染率达60%左右； 我国现有乙肝病毒携带者1.2亿人，占世界乙肝病毒携带者3.5亿
人的1/3； 根据推算，我国现有慢性乙肝患者约3000万人，每年新发生的急
性肝炎病人就有120多万，其中甲型肝炎约占50%，乙型占25%，丙 型占5%，戊型占10%，其他型及未定型占10%。 每年约有30万人因晚期肝病而死亡。
反映肝细胞损伤的项目（酶学检查）： 谷丙转氨酶ALT（GPT）、 谷草转氨酶AST（GOT）、 碱性磷酸酶（ALP）、 γ－谷氨酰转肽酶（γ－GT或GGT） 其他酶类
临床意义：谷丙转氨酶（ALT）主要存在于肝细胞中。当肝脏发生炎症、 坏死时，ALT就会从肝细胞内大量释放入血，导致血清中ALT升高，因 此ALT升高是判断肝细胞损害的一个敏感指标。但是除了病毒性肝炎外， 其它类型的肝炎或肝脏疾病，ALT也会升高。
<1%暴发肝炎
非活动性携带 （HBeAg－）
慢性肝炎 （HBeAg + ）
95%清除病毒
非活动性携带 （HBeAg －）
5%慢性感染
慢性肝炎 （HBeAg + ）
40%肝硬化
15~20%肝硬化
乙肝病毒的传播途径
各种传染途径的本质都是 血液传播
医源性传播
母婴传播
血液
血液
血液 性传播
乙肝病毒的传播途径
反映肝脏肿瘤的标志物： 甲胎蛋白（AFP）
乙肝的血清学标志物检测
机 体 感 染 HBV 后 产 生 相 应 的 免疫反应，形成多种不同的 抗 原 (Ag) 、 抗 体 （ Ab ） 系 统 。
乙型肝炎病毒是一种嗜 肝病毒。
乙肝流行的地区分布图
乙肝流行现状
乙型病毒性肝炎在我国是一种高发传染病，人群感染率达60%左右； 我国现有乙肝病毒携带者1.2亿人，占世界乙肝病毒携带者3.5亿
人的1/3； 根据推算，我国现有慢性乙肝患者约3000万人，每年新发生的急
性肝炎病人就有120多万，其中甲型肝炎约占50%，乙型占25%，丙 型占5%，戊型占10%，其他型及未定型占10%。 每年约有30万人因晚期肝病而死亡。
反映肝细胞损伤的项目（酶学检查）： 谷丙转氨酶ALT（GPT）、 谷草转氨酶AST（GOT）、 碱性磷酸酶（ALP）、 γ－谷氨酰转肽酶（γ－GT或GGT） 其他酶类
临床意义：谷丙转氨酶（ALT）主要存在于肝细胞中。当肝脏发生炎症、 坏死时，ALT就会从肝细胞内大量释放入血，导致血清中ALT升高，因 此ALT升高是判断肝细胞损害的一个敏感指标。但是除了病毒性肝炎外， 其它类型的肝炎或肝脏疾病，ALT也会升高。
<1%暴发肝炎
非活动性携带 （HBeAg－）
慢性肝炎 （HBeAg + ）
95%清除病毒
非活动性携带 （HBeAg －）
5%慢性感染
慢性肝炎 （HBeAg + ）
40%肝硬化
15~20%肝硬化
乙肝病毒的传播途径
各种传染途径的本质都是 血液传播
医源性传播
母婴传播
血液
血液
血液 性传播
乙肝病毒的传播途径
反映肝脏肿瘤的标志物： 甲胎蛋白（AFP）
乙肝的血清学标志物检测
机 体 感 染 HBV 后 产 生 相 应 的 免疫反应，形成多种不同的 抗 原 (Ag) 、 抗 体 （ Ab ） 系 统 。
乙型肝炎病毒是一种嗜 肝病毒。
乙肝流行的地区分布图
乙肝流行现状
实验室检查——乙肝五项ppt课件
1.HBsAg-乙肝病毒表面抗原：为已经感染病毒的标志，并不反映病毒有 无复制、复制程度、传染性强弱
2.HBsAb-乙肝病毒表面抗体：为中和性抗体标志，是康复或有抵抗力的 主要标志。乙肝疫苗接种者，若仅此项阳性，应视为乙肝疫苗接种后正 常现象；感染乙肝病毒后依靠自身免疫力清除乙肝病毒的人体内也会产 生乙肝表面抗原体，这是一种好现象
3.HBeAg-乙肝病毒e抗原：为病毒复制标志，提示传染性较强。持续阳 性3个月以上则有慢性化倾向
完整版课件
2
4.HBeAb-乙肝病毒e抗体：为病毒复制停止标志。传染性较弱，但并非 完全没有传染性。乙肝病毒感染后的恢复期或慢性感染者可以阳性。
5.HBcAb-乙肝病毒核心抗体：HBcAg是乙型肝炎病毒的核心抗原, 一般 存在于肝细胞内，不易检测, 因此乙肝两对半五项指标中不包括此项。 但只要体内有HBcAg就会产生抗-HBc。因此HBcAb提示体内存在 HBcAg，为曾经感染过或正在感染者都会出现的标志。核心抗体IgG是 新近感染或病毒复制和传染性的标志，急性乙肝、慢性乙肝、肝硬化等 均可以表现为阳性。核心抗体IgG是感染后就会产生的。
抗-HBc
+ + + + -
完整版课件
6
大三阳与小三阳区别
化验单检查 结果
DNA 传染性 乙肝病毒复
制 演变
大三阳
HBsAg（+）HBeAg （+）
抗-HBc（+）
阳性 强
活跃
慢性肝炎
小三阳
HBsAg（+）抗-HBe （+）
抗-HBc（+）
阴性 弱
不活跃
肝硬化、肝癌
完整版课件
7
预防及免疫
2.HBsAb-乙肝病毒表面抗体：为中和性抗体标志，是康复或有抵抗力的 主要标志。乙肝疫苗接种者，若仅此项阳性，应视为乙肝疫苗接种后正 常现象；感染乙肝病毒后依靠自身免疫力清除乙肝病毒的人体内也会产 生乙肝表面抗原体，这是一种好现象
3.HBeAg-乙肝病毒e抗原：为病毒复制标志，提示传染性较强。持续阳 性3个月以上则有慢性化倾向
完整版课件
2
4.HBeAb-乙肝病毒e抗体：为病毒复制停止标志。传染性较弱，但并非 完全没有传染性。乙肝病毒感染后的恢复期或慢性感染者可以阳性。
5.HBcAb-乙肝病毒核心抗体：HBcAg是乙型肝炎病毒的核心抗原, 一般 存在于肝细胞内，不易检测, 因此乙肝两对半五项指标中不包括此项。 但只要体内有HBcAg就会产生抗-HBc。因此HBcAb提示体内存在 HBcAg，为曾经感染过或正在感染者都会出现的标志。核心抗体IgG是 新近感染或病毒复制和传染性的标志，急性乙肝、慢性乙肝、肝硬化等 均可以表现为阳性。核心抗体IgG是感染后就会产生的。
抗-HBc
+ + + + -
完整版课件
6
大三阳与小三阳区别
化验单检查 结果
DNA 传染性 乙肝病毒复
制 演变
大三阳
HBsAg（+）HBeAg （+）
抗-HBc（+）
阳性 强
活跃
慢性肝炎
小三阳
HBsAg（+）抗-HBe （+）
抗-HBc（+）
阴性 弱
不活跃
肝硬化、肝癌
完整版课件
7
预防及免疫
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D
ayw2, ayw3
南欧、地中海、印度
E
ayw4
西非
F
adw4, adw2, ayw4 美国土著人、波利尼西亚、中南美
G
adw2
美国、法国
H
?
尼加拉瓜、墨西哥、美国
.
12
传播途径
经血传播 医源性传播 母婴传播 性接触传播 日常生活接 触传播
.
Source: NNDSS/VHSP
13
抗原抗体系统
.
19
酶联免疫吸附试验ELISA
❖ 利用抗原和抗体特异性结合
❖ 方法
间接法: 测定抗-HBs
夹心法：测定HBsAg和HBeAg
竞争法：测定抗-HBc和抗-HBe
.
20
酶标技术
❖ 优点
❖ 缺点
快速简便，成本低 精密度差
敏感
难以自动化
血清标本用量少
容易出现交叉反应
.
21
临床ELISA检验影响因素
• 临床ELISA测定现通常为采用手工操作的以 微孔板条为固相的测定模式，测定操作非 常简单，一般涉及到标本的收集保存、试 剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、 结果判断和结果报告及解释等方面，其中 任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤 以加样、温育和洗板等步骤为甚
2006年 1992年
阳性率 1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 合计
age
年龄段
.
9
地区分布
世界 我国
高流行区 ≥8% 中流行区 2～7% 低流行区 ＜2% 农村>城市 南方>北方 中南和华东>华北
.
10
人群分布
年龄和性别
高流行区 青少年和30～40岁的成人
中流行区 仍以成人感染为主
.
26
五、洗板
• 固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定 技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的 抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特 异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异 性
HBsAg 最早出现的血清学标志之一
是HBV感染的基本标志 HBsAg阳性见于
乙肝的潜伏期、急性期 慢性乙肝 病毒携带 与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌
.
14
抗-HBs 特异性中和抗体、保护性抗体
抗-HBs阳性可见于 乙型肝炎恢复期，在HBsAg消失后间隔一定时
间抗-HBs出现隐性感染的健康人，自身产生了免疫 力
乙型肝炎实验室检测技术
.
1
病毒形态与基因结构
嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)正肝DNA病毒属 电镜：3种形态
.
2
.
3
HBV基因组和基因表达产物
3200 bp 4 open reading frames 7 proteins • 大蛋白(preS1-preS2-S) • 中蛋白(preS2-S) • 小蛋白(HBsAg) • 核衣壳(HBcAg) • HBeAg • 聚合酶 • X蛋白
注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG) 后，产生的主动或被动免疫
.
15
HBcAg 不能从血清中直接检出
Dane颗粒经去垢剂处理HBcAg释放检测
抗-HBc 非中和抗体、分IgM和IgG
主要见于慢性感染和既往感染
抗-HBc IgM 通常在出现症状时即可检出，一般持续约6个
月，提示HBV 复制，是急性感染的重要指标，也是慢性活 动性肝炎的重要标志
抗-HBc IgG 在抗-HBc IgM下降及消失后出现，可伴随感
染者终生存在
.
16
HBeAg 与HBsAg平行出现，较HBsAg消失早
意义 体内HBV复制、传染性强的标志
急性乙型肝炎的辅助诊断
判断预后的指标：HBeAg转阴，表示HBV复制减少或 终止，预后好；若HBeAg持续阳性，则预后不良，易转为 慢性
.
22
一、临床标本的收集和保存
• 要注意避免出现严重溶血
• 样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污 染
• 血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃ 下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存
• 冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的 反复冻融
• 标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状 物时，应离心沉淀后取上清检测
.
23
二、试剂准备
• 实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来， 在室温下放置20分钟以上后，再进行测定
• 蒸馏水或去离子水应保证质量
.
24
三、加血清样本及反应试剂
• 加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不 可溅出和产生气泡
.
25
四、温育
• 要保证在设定的温度下有足够的反应时间 • 温育温度的选择 • “边缘效应”的排除
.
4
.
5
.
6
HBV carrier distribution in China in 1992
8-12%
4-8% 4-8%
.
7
HBsAg distribution in the year of 2006
No data
over7%
3~7%
Lower then3%
新疆 西藏
黑龙江
吉林
甘肃
内蒙古
北京
抗-Hbe HBeAg消失后出现无症状HBV携带者及非活动期
慢性肝炎患者表示HBV在体内复制减少或终止，传染性减
弱或消失
.
17
HBV感染血清学常见模式
临床及流行病学意义 潜伏期末期 急性乙肝，病毒长期携带 HBsAg阴性的急性感染 感染消除，抗-HBs尚未出
现 健康携带者 慢性乙肝，病毒长期携带 HBV近期感染，恢复期 HBV既往感染，已恢复 乙肝疫苗接种
辽宁
青海
宁夏
山西
山东
云南
陕西
河南
江苏
四川 贵州
湖北 湖南
安徽
上海
江西
浙江
福建
广西
广东
海南
.
8
全国不同年龄组HBsAg阳性率比较
Comparing of HBsAg prevalence between 1992 and 2006
12.00% 10.00% 8.00% 6.00% 4.00% 2.00% 0.00%
HBs 抗A HB gs
+
﹣
+
﹣
﹣﹣
抗-HBc IgG IgM
﹣﹣ ++ ﹣+
HBe A 抗-HBe g
+/﹣ ﹣
+
﹣
﹣
﹣
﹣
﹣+﹣
﹣
﹣
+
﹣ + +/- ﹣
+
+
-
+ +/- +
Hale Waihona Puke -﹣+
+ +/- ﹣
+
﹣ +/- +﹣ ﹣ ﹣
﹣
.
18
﹣
+ ﹣﹣
﹣
﹣
HBV感染的血清学诊断方法
ELISA （最常用，定性） 免疫层析法（胶体金或硒标法） 发光免疫分析（定量） 反相间接血凝试验（少用）
低流行区 多20～29岁年龄组发病高峰
职业
高危人群 医务人员 托幼机构儿童
妓女
静脉内滥用毒品者
男性同性恋者
家庭聚集性明显
.
11
HBV不同基因型和血清型的地区分布
基因型 血清型
主要地区
A
adw2, ayw1
北欧、西欧、非洲、美洲
B
adw2, ayw1
东南亚、中国、日本
C
adr, ayr, adw2
东亚、中国、日本、波利尼西亚等