实验2特殊显微镜及其使用
显微镜的使用实验报告
显微镜的使用实验报告实验目的，通过使用显微镜观察不同样本，了解显微镜的使用方法及其在科学研究中的重要性。
实验器材，显微镜、玻璃片、载玻片、盖玻片、草屑、细胞、昆虫标本等。
实验步骤：1. 准备工作，将显微镜放在平整的桌子上，调整显微镜镜筒至最低位置，将玻璃片放置在显微镜平台上。
2. 取样本，用镊子将需要观察的样本放在载玻片上，加一滴水或显微镜油，再用盖玻片盖好。
3. 调整显微镜，将载玻片放在显微镜平台上，用粗调焦轮将载玻片移到显微镜镜筒最低位置，再用细调焦轮将载玻片移到焦点上。
4. 观察样本，通过目镜观察载玻片上的样本，根据需要调整镜头倍数和光源亮度，观察样本的细节结构。
实验结果：1. 观察草屑，在显微镜下，我们可以清晰地看到草屑的细胞结构，包括细胞壁、细胞质和细胞核等。
2. 观察细胞，细胞在显微镜下呈现出丰富多彩的结构，有些细胞内含有色素颗粒，有些细胞内有明显的细胞器。
3. 观察昆虫标本，显微镜下昆虫的体表纹理和细小的结构都能清晰地展现出来，让我们对昆虫的微观世界有了更深入的了解。
实验结论：通过本次实验，我们深刻认识到显微镜在科学研究中的重要性。
显微镜能够帮助我们观察微小的结构，揭示微观世界的奥秘，为生物学、医学、材料科学等领域的研究提供了重要的工具。
因此，掌握显微镜的使用方法对于科学研究人员来说至关重要。
在今后的学习和工作中，我们将继续加强对显微镜的使用和维护，不断提高观察样本的技巧，为科学研究做出更大的贡献。
总结，本次实验通过观察不同样本，深入了解了显微镜的使用方法及其在科学研究中的重要性。
希望通过这次实验，能够对同学们今后的学习和科研工作有所帮助。
实验一特殊显微镜的工作原理和使用
实验一特殊显微镜的工作原理和使用特殊显微镜是一种能够观察微观尺度物体的仪器，它通过利用光学、电子、声波等原理来放大和显示样品的细节。
特殊显微镜在科学研究、医学诊断、材料分析等领域起着重要的作用。
本文将重点介绍光学、电子和声学显微镜的工作原理和使用。
一、光学显微镜光学显微镜是一种利用可见光作为照明源的显微镜，其主要由物镜、目镜、调焦机构和光源构成。
它的工作原理是通过物镜将样品上的光聚焦到目镜上形成放大的影像。
光学显微镜的使用步骤如下：1.确保显微镜放置在平稳的台面上，并保持垂直。
2.调节光源亮度，使其能够提供足够的照明。
3.将样品放在载物台上，并使用样品夹夹紧。
4.用粗调焦机构将物镜与样品靠近，然后用细调焦机构调节焦距，直到看到清晰的影像。
5.调节目镜，使影像更为清晰。
6.根据需要，可以使用滤光片或偏振片来改变光的属性。
7.使用目镜检查样品，并调节焦距和目镜，如有需要。
光学显微镜的优点是成本较低、易于操作，并且可以观察到样品的活体细胞。
缺点是分辨率有限，仅能观察到大约200-300纳米的细节。
二、电子显微镜电子显微镜是一种利用电子束取代可见光来照射样品的显微镜，它可以提供比光学显微镜更高的分辨率和放大倍数。
电子显微镜的工作原理是通过电子束的散射、透射和反射来获得样品的影像。
具体而言，电子束通过电子枪产生，然后经过准直系统和电子透镜聚焦。
在样品中穿透或被散射后，电子束最终落在屏幕或探测器上生成影像。
电子显微镜的使用步骤如下：1.准备样品，通常需要制备薄片并清洁表面。
2.打开电子显微镜，等待其预热。
3.将样品放置在样品台上，并将其安装在显微镜中。
4.调节电子束的对焦，使其尽可能锐利。
5.对样品进行调节，以便获得所需的放大倍数和分辨率。
6.观察和记录样品的影像，可以使用照相机或电子影像探测器。
电子显微镜的优点是具有更高的分辨率和放大倍数，可以观察到更小的细节，如原子尺度。
缺点是设备复杂、操作困难，并且样品必须处于真空环境中才能进行观察。
实验荧光显微镜及激光共聚焦显微镜使用
2. 共聚扫描显微镜的成像原理
采用点光源照射标本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的 光点，该点被照射后发出的荧光被物镜收集，并沿原照射光 路回送到由双向色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到 探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明 针孔和探测针孔。两者的几何尺寸一致，约100-200nm；相 对于焦平面上的光点，两者是共轭的，即光点通过一系列的 透镜，最终可同时聚焦于照明针孔和探测针孔。这样，来自 焦平面的光，可以会聚在探测孔范围之内，而来自焦平面上 方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。以激光 逐点扫描样品，探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光 点的共聚焦图像，转为数字信号传输至计算机，最终在屏幕 上聚合成清晰的整个焦平面的共聚焦图像。
片; 6. 激光扫描共聚焦显微镜观察。
五、注意事项
注意染色时间 注意避光
六、作业与思考题：
试述激光扫描共聚焦显微镜成像基本原理，并 描述实验中所观察的现象
思考题：激光扫描共聚焦显微镜观察到的图象为什
么比普通的荧光显微镜的清晰度、层次感要强许多？
通过特殊的暗视野聚光器，使照明光线改 变途径，不直接进入物镜，而是倾斜地照 射到样品上，由样品表面的绕射光线入射 到物镜内，产生样品的衍射图象。
三、试剂与器材
青蛙、洋葱、人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片 （HE染色）
甲醇、1‰ 丫啶橙、滤纸、吸管、载玻片 荧光显微镜、暗视野显微镜、普通光学显微镜
四、实验内容和实验步骤
激发波长 372 350 365 490 490 470 552 541 530
发射波长 456 450 465 520 590 550 565 572 615
荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用
显微镜的种类及其使用方法
显微镜的种类及其使用方法一、光学显微镜光学显微镜是一种精密的光学仪器。
当前使用的显微镜由一套透镜配合，因而可选择不同的放大倍数对物体的细微结构进行放大观察。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500～2000倍(最大的分辨力为0.2μm)。
（一）光学显微镜的基本结构（附图-1）1．光学部分包括目镜、物镜、聚光器和光源等。
（1）目镜：通常由两组透镜组成，上端的一组又称为“接目镜”，下端的则称为“场镜”。
两者之间或在场镜的下方装有视场光阑（金属环状装置），经物镜放大后的中间像就落在视场光阑平面上，所以其上可加置目镜测微尺。
在目镜上方刻有放大倍数，如10×、20×等。
按照视场的大小，目镜可分为普通目镜和广角目镜。
有些显微镜的目镜上还附有视度调节机构，操作者可以对左右眼分别进行视度调整。
另有照相目镜(NFK)可用于拍摄。
（2）物镜：由数组透镜组成，安装于转换器上，又称接物镜。
通常每台显微镜配备一套不同倍数的物镜，包括：①低倍物镜：指1×～6×；②中倍物镜：指6×～25×；③高倍物镜：指25×～63×；④油浸物镜：指90×～100×。
其中油浸物镜使用时需在物镜的下表面和盖玻片的上表面之间填充折射率为1.5左右的液体（如香柏油等），它能显著地提高显微观察的分辨率。
其他物镜则直接使用。
观察过程中物镜的选择一般遵循由低到高的顺序，因为低倍镜的视野大，便于查找待检的具体部位。
显微镜的放大倍数，可粗略视为目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。
（3）聚光器：由聚光透镜和虹彩光圈组成，位于在载物台下方。
聚光透镜的功能是将光线聚焦于视场范围内；透镜组下方的虹彩光圈可开大缩小，以控制聚光器的通光范围，调节光的强度，影响成像的分辨力和反差。
使用时应根据观察目的，配合光源强度加以调节，得到最佳成像效果。
（4）光源：较早的普通光学显微镜借助镜座上的反光镜，将自然光或灯光反射到聚光器透镜的中央作为镜检光源。
显微镜的使用实验报告
显微镜的使用实验报告引言：显微镜是现代生命科学和医学研究中不可或缺的工具之一。
通过放大样本细胞和组织的细微结构，显微镜能够帮助科学家观察微观世界，揭示细胞结构和功能的奥秘。
本篇实验报告将介绍显微镜的使用及其在生物学实验中的作用。
一、仪器说明：在实验中，我们使用了一台光学显微镜。
该显微镜具有高放大倍率和清晰的成像质量。
显微镜主要由以下部分组成：物镜、目镜、台面、可调焦距装置和光源。
物镜是与样本直接接触的部分，通过不同倍数物镜可以调整放大倍率。
目镜则用于观察物镜放大后的图像。
调焦距装置可以帮助调整物镜和目镜之间的距离，以获得清晰的图像。
光源则提供充足的光线，确保样本被照明，使其细节能够清晰可见。
二、实验步骤：1. 准备样本：在实验中，我们选择了一片洋葱表皮作为显微镜观察的样本。
洋葱表皮具有简单的细胞结构，适合初学者使用。
首先，用镊子取下洋葱表皮，将其放置在显微镜的台面上。
2. 调整物镜和目镜：打开光源，调整物镜为10倍放大，并选择合适的目镜。
然后，将显微镜镜筒上升到最高位置。
使用调焦距装置，调整物镜和目镜之间的距离，直到目标图像清晰可见。
3. 将样本放入显微镜：将洋葱表皮样本放入显微镜的台面上，并轻轻地旋转调焦控制旋钮，使样本位于物镜下方。
同时，观察显微镜镜筒内的图像，调整焦距，直到样本图像清晰可见。
4. 调整放大倍数：通过旋转物镜转轮，逐渐增加物镜的放大倍数，观察到更高分辨率的细胞细节，例如细胞核和细胞壁。
5. 记录实验结果：使用显微镜配备的目镜望远镜，仔细观察洋葱表皮样本的细胞结构，并记录所见的细胞形态和组织排列方式。
三、观察结果：通过显微镜观察，我们发现洋葱表皮细胞呈现出长方形的形状，并且细胞之间有一定的间隔。
在细胞内部，我们可以清晰看到细胞核的存在，通常呈圆形或椭圆形。
此外，细胞壁也可以被观察到，呈现出透明且有一定厚度的结构。
四、实验意义：显微镜在生物学研究中具有重要的意义。
通过显微镜的使用，科学家们能够深入观察和研究细胞的结构和功能，从而理解生命的本质。
普通和几种特殊光学显微镜的结构及使用
二、荧光显微镜的两种滤光片各起什么作用?
主要用于观察具有荧光特性的细胞结构或被荧光染料着色的 细胞结构和化学成分。
结构特点：普通光学显微镜加上一些附件 荧光光源 （超高压汞灯） 激发滤片 阻断滤片
按光路分两种： 1．透射式荧光显微镜 2．落射式荧光显微镜
（二）使用方法
1．打开灯源，预热几分钟。 2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤
轻擦拭，切勿用手指、手帕和绸布等擦摸。机械部分可用布 擦拭。
5. 显微镜使用完毕后，转动粗调上升镜筒或下降载物台，取下
标本，转动转换器使物镜离开通光孔，下降镜筒或上升载物 台，使接近物镜，垂直反光镜，下降集光器，关闭虹彩光阑
二、暗视野显微镜 (一) 原理和结构特点
原理:利用光学上的丁达尔现象设计的。 结构特点:
荧光显微镜照片（微管呈绿色、DNA蓝色）
五、倒置显微镜
光学原理与普通光学显微镜原理基本相同，主要差别是 倒置显微镜的光源安装在标本的上方，物镜装在标本的 下方，因此可以用来观察生长在培养皿底部的细胞状态。 它与相差装置配合，可以用来观察培养的活细胞。
倒置相差显微镜观察人脐静脉内皮细胞
[作业]
（二）显微镜的使用方法 显微镜在使用前，应先检查一下它的各个部件是否
完整和正常，并进行必要的清洁工作，然后将显微镜放置 在自己左肩前方的实验台上，离桌子边缘3—6cm为宜，以 便观察。
1. 低倍镜的使用方法
1）对光 2）放置玻片标本 3）调节焦距
2.高倍镜的使用方法
1）一定要先在低倍镜下找到要观察的标本物像后，再把需要放 大的部分移至视野正中，并把物像调节到最清晰的程度。
实验二细胞的超微结构—透射电镜下的细胞器
实验二细胞的超微结构—透射电镜下的细胞器实验目的：通过使用透射电子显微镜观察和研究细胞的超微结构，了解细胞器的形态和组织，以及其在细胞功能中的作用。
实验原理：透射电子显微镜是一种利用电子束通过样品的原理进行显微观察的仪器。
相比传统光学显微镜，透射电子显微镜具有更高的分辨率和放大倍数。
实验步骤：1.准备样品：使用透射电子显微镜需要制备薄片样品。
将细胞或组织固定、切片和上染色剂等。
2.调整放大倍数：根据需要观察的细胞器，调整透射电子显微镜的放大倍数。
3.开始观察：将样品放入透射电子显微镜中，调整焦距和对比度，开始观察细胞超微结构。
4.记录结果：使用电子显微镜拍摄或记录所见到的细胞器的图像和形态。
根据观察结果，对细胞器的结构和功能进行分析和讨论。
实验结果：观察细胞的超微结构可以看到许多细胞器，如细胞核、线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等。
细胞核是细胞的控制中心，一般位于细胞的中央。
在透射电镜下观察，可以看到核膜（由内核膜和外核膜组成）、核孔、核仁等结构。
核膜通过核孔与细胞质相连，核仁是RNA合成的地方。
线粒体是细胞的能量中心，通过细胞呼吸产生ATP。
在透射电镜下观察，线粒体呈棒状或梭形，内部含有许多内膜，并形成一系列被称为嵴（cristae）的褶层。
嵴上含有许多氧化酶，参与细胞呼吸。
内质网是细胞的重要细胞器之一，两个片层之间的空腔称为内质网腔。
内质网膜上覆盖着许多小颗粒，称为核糖体。
内质网分为粗面内质网和平滑内质网，前者存在核糖体，用于蛋白质合成，后者没有核糖体，参与脂质代谢和钙离子存储。
高尔基体是细胞的分泌细胞器，具有分泌蛋白质、糖蛋白质和磷脂等功能。
高尔基体由多个平面被膜囊构成，形成一系列被称为囊泡的结构。
在透射电镜下可以看到高尔基体具有一层由囊泡组成的堆叠结构。
溶酶体是细胞的消化系统，其内部含有多种水解酶。
溶酶体呈球状或椭圆形，在透射电镜下可以看到其内部含有酶泡。
溶酶体参与细胞内的废物降解和吞噬体的形成。
实验一特殊显微镜的使用方法
细胞生物学实验
Ground State
细胞生物学实验
基本设置
落射式照明光路
细胞生物学实验
自发荧光的观察
枫叶叶柄，红色：自发荧光；绿色：外加荧光
细胞生物学实验
外加荧光的观察
荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）
细胞生物学实验
使用方法 1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。 2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激 发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。 3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调 整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。 4．放置标本片，调焦后即可观察。
人大脑神经胶质细胞
a.明视野显微镜 b.相差显微镜
使用方法 (1)相差装置的调换安装 (2)调焦 (3)合铀调整
细胞生物学实验
荧光显微镜
工作原理 基本装置及光路 适用于荧光显微镜的样品 使用方法
细胞生物学实验
Higher excited state Lower excited state
细胞生物学实验
位相差（Phase Shift (Φ)）等于 Φ= 2πΔ/λ
明视野下的相位差
细胞生物学实验
细胞生物学实验
相差显微镜如何提高影像的对比程度
针对样品本体产生光强度对比的不足，相差显微镜將背景光 与散射光行进路径分开，并分別做不同的处理，以便加大两 者的相位差，足以发生完全相长干涉或完全相消干涉；同时 削弱背景波的振幅，凸显干涉的效果。
细胞生物学实验
暗视野显微镜工作原理示意
细胞生物学实验
暗视野聚光器
细胞生物学实验
物镜的放大倍率
2X 4X 10X 20X 20X 40X
实验1特殊显微镜的使用
相差显微镜光路图
14
荧光显微镜：利用一个高发 光效率的点光源，经过滤色 系统发出一定波长的光(如紫 外光365nm或紫蓝光420nm) 作为激发光，激发标本内的 荧光物质发射出各种不同颜 色的荧光后，再通过物镜和 目镜的放大进行观察。这样 在强烈的对衬背景下，即使 荧光很微弱也易辨认，敏感 性高。 用途：主要用于细胞结构和 功能以及化学成分等的研究。
倒 置 相 差 显 微 镜
7
1m=103mm=106μm=109nm
0.1nm
OM
1nm 10nm 100nm 1μm 10μm 100μm
光学显微镜
电子显微镜
扫描隧道显微镜
SEM
1mm
1cm
肉眼分辨0.2mm
分辨极限0.2 μm 放大倍数10×40倍 分辨极限0.2 nm 放大倍数 数万倍
TEM
8
扫描隧道显微镜
用STM拍下的DNA
用STM拍下的血细胞
9
实验内容：
一、暗视野显微镜的使用 二、荧光相差显微镜的使用
实验目的： 了解暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显
微镜的工作原理和使用方法。
10
1 暗视野显微镜
+ 根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背 景条件下观察被检物体的显微镜
+ 观察到明场看不到的极其微小的物体 + 最高分辨率可达0.004微米
人血细胞（40 × ）
人血细胞（40 × ）
显微镜的原理和使用方法
显微镜的原理和使用方法Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT显微镜的原理和使用方法-装片的制作显微镜的结构和使用（2）显微镜的成像①光源（天然光或人工光源）→反光镜→光圈→物体→物镜（凸透镜）→在镜筒内形成物体放大的实像→目镜→把经物镜形成放大的实像进一步放大②显微镜放大倍数=物镜放大倍数×目镜放大倍数（3）高倍显微镜的使用①用低倍显微镜观察取镜与安放：a.右手握镜臂，左手托镜座。
b.显微镜放在实验台的前方稍偏左。
对光：a.转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。
b.选一较大的光圈对准通光孔，左眼注视目境，转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内，通过目镜，可能看到自亮的视野。
低倍镜观察：a.把所要观察的玻片标本放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。
b.转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（此时实验者的眼睛应当看物镜镜头与标本之间，以免物镜与标本相撞）。
c.左眼看目镜内，同时反向缓缓转动粗准焦螺旋，使镜筒上升，直到看到物像为止，再稍稍转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。
②高倍镜观察a.移动装片，在低倍镜下使需要放大观察的部分移动到视野中央。
b.转动转换器，移走低倍物镜，转换为高倍物镜。
c.调节光圈，使视野亮度适宜。
d.缓缓调节细准焦螺旋，使物像清晰③注意事项a.使用显微镜一定要严格按照取镜→安放→对光→压片→观察的程序进行。
b.下降镜筒时，一定要用双眼从侧面注视物镜，使之接近装片，但又要防止镜头触及装片。
否则会压碎装片和损坏物镜（l0x物镜的工作距离为-1 cm）。
c.有必要使用高倍物镜时，必须先在低倍物镜下将目标移到视野的中心，然后换用高倍物镜。
因为在低倍物镜下看到的物像放大倍数小，但看到的标本实际面积大，容易找到目标；与低倍物镜相比，高倍物镜下看到的物像人，同样的视野面积看到的标本的实际面积小，在装片不动的情况下，高倍物镜看到的只是低倍物镜视野的中心部分。
相差显微镜和荧光显微镜使用教程
4．高压汞灯关闭后不能立即重新打开， 需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定， 影响汞灯寿命。
五、用途 1 观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或 标记的细胞和结构 2 标本中的荧光物质在紫外线激发下产生各种颜 色的荧光，借以研究该荧光物质在细胞和组织内 的分布。组织中的自发性荧光物质如神经细胞和 心肌细胞等内的脂褐素呈棕黄色荧光，肝贮脂细 胞和视网膜色素上皮细胞内的维生素A呈绿色荧 光，某些神经内分泌细胞和神经纤维内的单胺类 物质（儿茶酚胺、5－羟色胺、组胺等）在甲醛 作用下呈不同颜色的荧光，组织内含有的奎宁、 四环素等药物也呈现一定的荧光。
二、荧光显微镜的种类： 透射式 落射式
三、荧光显微镜主要部件
透射式
落射式
汞灯光源 激发滤色镜 吸收滤色镜 暗场聚光镜
汞灯光源 激发滤色镜 分色镜 吸收滤色镜
透射荧光显微镜光路图
落射荧光显微镜光路图
双重染色标本的单色和双色观察
WU WIB DUAL BAND
DAPI+FITC
相差附件
2.3使用方法 （1）相差装置的调换安装 卸下普通显微镜使用的聚光器，将环状光阑装 在聚光器支架上，把绿色滤光片放在上面，它可吸 收红色和蓝色光，使波长范围小的单色光线进行照 明，并有吸热作用，能使相差观察获得良好的效果。 再从转换器上旋下普通物镜，换上相差物镜。 （2）调焦 打开光源，旋转集光器转盘，将“0”对准标示孔， 使普通聚光器部分进入光路。先使用低倍相差物镜， 按普通显微镜操作方法进行对光和调焦。 旋转环状 光阑，使光阑的直径和孔宽与所使用的相差物镜相 适应，如相差物镜为40X时应用40X标示孔的光阑。
四、使用方法． 1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达 到最亮点。 2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装 上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应 的阻断滤片。 落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所 要求的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的 插块。 3．放置标本片，调焦后即可观察。 使用中应 注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引 起眼的损伤；
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暗视野显微镜 相差显微镜
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1
一、实验目的
1.学习暗视野显微镜的原理、了解其构造 2.练习暗视野显微镜的使用
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2
二 暗视野显微镜的原理及构造
根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条 件下观察被检物体的显微镜
观察到明场看不到的极其微小的物体 最高分辨率可达0.004微米
(3)视场光圈如不在视野中央，可利用聚光 镜外侧两个调节螺丝进行调整，再将其 开大到相应位置。
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自己动手制作暗视野显微镜
暗视野光挡 (左：金属片或厚卡纸制成; 右：透明滤色镜贴黑纸制成)
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9
三、实验用品
1.材料：口腔黏膜上皮细胞、洋葱内表皮细胞 2.试剂：生理盐水、蒸馏水 3.器材和仪器：载玻片、盖玻片、显微镜、擦
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4
暗视野显微镜原理
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2.3 成像特点及优缺点
在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射 光图像，并非物体本身，所以只能看到物体的 存在和运动，不能辨清物体的细微结构。但被 检物体为非均质时，并大于1／2波长，则各级 衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察 物体的构造。
一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结 构，但却可分辨0.004um以上的微粒的存在和 运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2um) 所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和 细胞内微粒的运动等。
调轴望远镜是用来进行合铀调节的。相差显微 镜在使用时，聚光镜下面环状光阑的中心与物 镜光轴要完全在一直线上，必需调节光阑的亮 环和相板的环状圈重合（共轭重合），才能发 挥相差显微镜的效能。否则直射光或衍射光的 光路紊乱，应被吸收的光不能吸收，该推迟相 位的光波不能推迟，就失去了相差显微镜的作 用。
使普通聚光器部分进入光路。先使用低倍相差物镜，
按普通显微镜操作方法进行对光和调焦。 旋转环状
光阑，使光阑的直径和孔宽与所使用的相差物镜相
适应，如相差物镜为40X时应用40X标示孔的光阑。
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（3）合铀调整
拔出目镜，插入合铀望远镜，一边从望远 镜向内观察，并用左手固定其外筒；一边用右 手转动望远镜内筒使其上升，当对准焦点就能 看到环状光阑的亮环和相板的暗环，此时可将 望远镜固定住。再升降集光器并调节其下的螺 旋使亮环的大小与暗环一致，然后左右前后调 节环状光阑聚光器上的调节钮，使两环完全重 合。
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使用方法
（1）相差装置的调换安装
卸下普通显微镜使用的聚光器，将环状光阑装 在聚光器支架上，把绿色滤光片放在上面，它可吸 收红色和蓝色光，使波长范围小的单色光线进行照 明，并有吸热作用，能使相差观察获得良好的效果。 再从转换器上旋下普通物镜，换上相差物镜。
（2）调焦
打开光源，旋转集光器转盘，将“0”对准标示孔，
可编辑版Βιβλιοθήκη 32.1 原理丁达尔现象：在日常生活中，室内飞扬的微粒 灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束 光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这就 是微粒发光。
暗视野显微镜就是利用微粒发光原理设计的。
2.2 结构特点
使用中央遮光板或暗视野聚光器（常用的是抛 物面聚光器），使光源的中央光束被阻挡。不能 由下而上地通过标本进入物镜。从而使光线改变 途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发 生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整 个视野是黑暗的。
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一、实验目的
1.学习相差显微镜的原理、了解其构造
2.练习相差显微镜的使用
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二 实验原理
光波有振幅（亮度）、波长（颜色）及相位(指 在某一时间上光的波动所能达到的位置)的不同。
当光通过物体时，如波长和振幅发生变化，人们 的眼睛才能观察到，这就是普通显微镜下能够观察 到染色标本的道理。而活细胞和未经染色的生物标 本，因细胞各部微细结构的折射率和厚度略有不同， 光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位有 变化(相应发生的差异即相位差)，而这种微小的变 化，人眼是无法加以鉴别的，故在普通显微镜下难 以观察到。
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相差显微镜能够改变直射光或衍射光的相位， 并且利用光的衍射和干涉现象，把相位差变成 振幅差(明暗差)，同时它还吸收部分直射光线， 以增大其明暗的反差。因此可用以观察活细胞
或未染色标本。
结构特点
相差显微镜与普通显微镜的主要不同之处是： 用环状光阑代替可变光阑，用带相位板的物镜 代替普通物镜，并带有一个合轴调节用的望远 镜。
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2.4 应用：微小粒子、细菌形态、细菌记数，透 明标本观察等。
2.5 暗场显微镜的要求 • 要求载玻片和盖玻片必须无疵痕和灰尘 • 物镜前透镜必须清洁无尘 • 载玻片和盖玻片厚度必须绝对符合要求
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1.6 暗场观察方式调节
(1)换上暗场聚光镜。
(2)将视场光阑适当缩小，用10X物镜找到 被检物体，同时在视场中看到视场光圈 的轮廓象。上下缓慢调整聚光镜，使视 场光圈像清晰可见。
镜纸等
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四、实验内容
1、口腔黏膜上皮细胞和洋葱内表皮细胞装片 制作
2、用暗视野显微镜观察样品
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五、作 业
绘制暗视野内的口腔黏膜上皮细胞和洋葱内 表皮细胞图（3-5个细胞）。
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（二）相差显微镜
相差显微镜（phasecontrast microscope）由荷 兰物理学家泽尔尼克(Frits Zernike ,1898-1966),于 1932年发明，并因此获1953年诺贝尔物理奖。
环状光阑是由大小不同的环状孔形成的光阑， 它们的直径和孔宽是与不同的物镜相匹配的。
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相差显微镜的特殊构造与光路
相差显微镜的可特编辑殊版构造与光路
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相差显微可镜编辑的版 光路
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相位板安装在物镜的后焦面处，相板装有吸收 光线的吸收膜和推迟相位的相位膜。它除能推 迟直射光线或衍射光的相位以外，还有吸收光 使亮度发生变化的作用。
（4）观察
换回目镜，按常规要领进行观察。在更换 不同倍率的相差物镜时，每一次都要使用相匹 配的环状光阑。
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用途
用于观察组织培养中活细胞形态结构。 活细胞无色透明，一般光镜下不易分辨 细胞轮廓及其结构，组织培养研究常用 的是倒置相差显微镜。