实验五 细菌的荚膜染色

实验五细菌的荚膜染色
生物112 周泓兆1102040226
一、目的
学习并掌握荚膜染色的原理及方法。

二、原理
荚膜的主要成分为多糖类，不宜着色，而且含水量高达90%以上，易变形，因此荚膜染色通常采用负染法，将菌体和背景分别着色，从而把不透明的荚膜衬托出来。

三、材料
1.菌种：钾细菌（Bacillus mucilaginous），点接于阿须贝平板上，26℃-28℃培养三天。

2.染色剂：石炭酸复红，墨汁（使用前必须用滤纸过滤，除去墨汁中的杂质）
3.其它：载玻片，无菌水，洗瓶，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，酒精棉球，接种环，酒精灯，镊子。

四、实验步骤
1.制片：在洁净载玻片上左右两侧各滴加一滴无菌水，取少许培养72小时的钾细菌制成涂片，空气中风干；
2.染色：用石炭酸复红与孔雀绿，分别在两涂片处染色1-2分钟，水洗，稍风干；
3.在载玻片的一侧滴加半滴到一滴墨汁，左手持此玻片，右手另拿一干净玻片做推片用，将推片边缘平整的一端与墨汁成30°角接触，顺势将墨汁推开，使其涂成一薄层，并在空气中充分自然干燥；
4.镜检：玻片自然干燥后，滴加香柏油，置于油镜下观察，菌体为红色（石炭酸复红染色）或绿色（孔雀绿染色），荚膜无色，背景黑色；
5.清理：用二甲苯与干净擦镜纸擦净镜头，将涂片和直接固体垃圾置入垃圾桶，液体垃圾倒入废液缸，无腐蚀性毒性液体可倒入下水道，用酒精棉球擦洗器材将溅出的染料擦除。

五、结果与讨论：
这个实验成功率较低，主要问题出现在以下几个方面：①如果取菌过少在镜检时会很难找到菌体，而如果取菌过多则涂片很难涂匀，会看到菌体形成菌胶团，无法观察到荚膜形状。

②染色时间不能太短，否则无法看清菌体。

而染色如果过长则会导致荚膜也被染上颜色。

③尽可能挑取边缘的菌种，而且涂抹的时间不宜过长，否则会发现许多菌体破裂，影响观察。

④涂抹墨汁的时候要求墨汁量少，而且要尽可能涂的均匀，才能明显看到荚膜形状。

六、思考题
1.简单染色能否观察细菌荚膜？请解释原因。

答：不能。

荚膜主要成分为多糖，很难着色，通过简单染色无法染出荚膜，导致荚膜和背景均为透明的，因此无法观察到荚膜。

2.细菌的荚膜有何特点？在对其染色观察结果时应注意什么？
答：细菌的荚膜含水量高达90%，在风干和染色过程中不应使其遇热。

涂墨后风干时间也不宜过长，否则荚膜也会失水变形。