兔巴氏杆菌病的诊断及防控措施

兔巴氏杆菌病的诊断及防控措施

王文杰 1 段巨刚 1 石刚2

（1.河北东光县农业局，河北沧州 061600；

2. 河北东光县职业技术教育中心，河北沧州 061600）

摘要：兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的各种兔病的总称。临床症状表现以全身败血病、传染性鼻炎、流行性肺炎而多见，是严重危害养兔业重要的传染病之一。本文从该病的病原、流行病学特点、症状与病变、诊断与防控方面进行阐述，旨在为兔场科学防治巴氏杆菌病提供参考。

关键词：兔巴氏杆菌病；诊断；防控措施

兔巴氏杆菌病（Pasteurellosis）又名出血性败血症，是由多杀性巴氏杆菌引起的一种多型性、散发性或地方流行性、细菌性传染病【1,2】。由于病菌的毒力、感染途径以及病程长短不同，其临床症状和病理变化也不同。主要有全身败血病、传染性鼻炎、、地方流行性肺炎、结膜炎、中耳炎、生殖器官感染和脓肿。【3,4】家兔对多杀性巴氏杆菌十分敏感，发病率高达60%以上，若不及时采取有效措施，易引起大量发病和死亡，【5】郭永刚【6】等、李佳丽【7】等对兔巴氏杆菌的诊断进行了报道，一致认为本病是严重危害养兔业的重要传染病之一；随着养兔生产高度集约化，本病发生呈上升趋势，另外由该病引发兔只死亡、生长缓慢、饲料报酬降低及药物防治费用增加等，给养兔业造成了严重经济损失，应引起广大养殖户及有关部门的足够重视。

1病原

兔巴氏杆菌病的病原为多杀性巴氏杆菌，呈革兰氏阴性、两端钝圆、细小、卵圆形的短杆状菌，大小为（1-1.5）×（0.25-0.5）μm。单个存在，有时成双排列。用瑞氏染色或亚甲蓝染色呈典型两级染色。无鞭毛，不形成芽孢，新分离的强度菌株有荚膜，但经培养后荚膜迅速消失。本菌为需氧或兼性厌氧菌。

该病菌存在于病兔的血液、内脏器官、病变局部和一些外表健康的家兔的上呼吸道粘膜及扁桃体内。

该病菌对外界环境因素的抵抗力不强，在眼光下暴晒10min，或56℃加热15min ，或60℃加热10min可被杀死。在干燥空气中2-3d死亡，在厩舍及粪便中能存活一个月左右，在尸体内能存活三个月。一般常用的消毒药都能将其杀灭。1%福尔马林、1%石碳酸、1%漂白粉、01%升汞等溶液，经3-5min即能杀死。对青霉素、链毒素、四环素、土霉素、磺胺类及许多新的抗菌药物敏感。

该菌在鲜血和血清培养基上生长良好，但在普通培养基上不能生长，由于巴氏杆菌毒力强弱不同，呈三种菌落形态。从败血型死亡的兔子新分离的毒力强大的菌株，在血清琼脂表面上培养24h后长出菌落，在折射光下有荧光、圆整、半透明、细小。在肉汤内一致浑浊，称光滑型（S型）。从慢性病例或带菌者所分离的菌株，中心多半为不透明的粘性大菌落，无荧光。在肉汤内一致浑浊，称粘液型（M型）。从带菌者分离的菌株，常出现粗糙而干燥的菌落。在肉汤内产生颗粒状沉淀物，称粗糙型（R型）【8】。

2诊断

根据流行病学、临床症状与病变特点，可作出初步诊断，进一步确诊需进行实验室检查。败血型和肺炎型可从心血、脾、肝或体腔惨出物等取病料做细菌学检查，其他病例主要从病变部位、脓汁、渗出物和呼吸道、阴道分泌物中检查病原。对慢性病例和健康带菌的家兔可采取血清学方法进行诊断【9】。

2.1涂片镜检

无菌取病兔心血肝脾等有病变组织作涂片，自然干燥，火焰固定，分别瑞氏及革兰氏染色、镜检。可见到单个或多个短杆菌散在排列。瑞氏染色细菌呈蓝色的短小杆菌，两极着色，周边有淡红色的荚膜；革兰氏染色呈两极着色的阴性短杆菌。

2.2细菌分离培养

①无菌取病兔心血和肝脾，接种于鲜血琼脂平板和麦康凯平板上，37℃培养24h，结果麦康凯平板上无任何菌落，而鲜血琼脂平板上则可见许多淡灰色、圆形湿润、露珠样的小菌落，菌落周围不溶血。取典型菌落做革兰氏染色，镜检，可见该菌为革兰氏阴性，两极浓染，两端钝圆，有荚膜的短杆菌。然后，挑取镜检后的菌落进行纯培养，制得分离菌株

②将分离菌株接种到普通琼脂上生长出菌落形态为灰白色、针尖大小的菌落或不生长。

③将分离菌株划线接种于血清琼脂平板和麦康凯平板，37℃培养24h，可长成淡灰色，表面光滑闪光、边缘整齐、露珠样小菌落，直径约2-3mm，有臭味，将该血清平板放于显微镜下，于45。折光观察，可见菌落呈蓝绿色带金光，边缘有窄的红黄光带，为Fg型菌落。

④将分离培养菌株接种于肉汤，37℃培养24h，培养物呈轻度混浊，于管底部生成黏稠沉淀，表面灰白色形成菌环。

⑤将分离菌株接种到三糖铁培养基上37℃恒温培养24h，其底部变黄。

2.3生化试验

将所分离的菌株分别接种于各种生化培养基，做鉴定培养，结果；该菌株能分解葡萄糖、蔗糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇，不发酵乳糖、木糖、鼠李糖、山梨醇、枸橼三钠；靛基质反应、硝酸盐还原反应、吲哚试验、接触酶试验、血浆凝固酶试验、氧化酶实验、产酸、产生H2S和氨均为阳性（也有试验不产气，可能是由于菌株间的差异造成的）：MR、VP

试验均为阴性；尿素酶试验为阴性；不液化明胶，石蕊牛乳无变化，三糖铁可生长，底部变黄[11]。

2.4动物回归试验

2.4.1小鼠感染试验

取新分离菌株纯培养，制成细菌纯培养液（获取病兔的肝组织，用生理盐水做成1:10的混悬液），接种小鼠5只，每只腹腔注射细菌纯培养液（或混悬液）0.2ml，24-48h全部死亡。解剖该死亡小鼠，临床症状、病理变化均与自然发病兔相同。去心血、肝组织进行接种培养，可见典型菌落，经染色，镜检，可见革兰氏阴性两极浓染的小杆菌。

2.4.2家兔回归试验

取新分离菌株纯培养，制成细菌纯培养液（或取病兔的肝组织，用生理盐水作成1:10的混悬液），接种家兔2只，每只皮下注射细菌纯培养液（或混悬液）0.2 ml，24-48h全部死亡。解剖该死亡兔，临床症状、病例变化均与自然发病兔相同。取心血、肝组织进行接种培养，可见典型菌落，经染色，镜检，可见革兰氏阴性两级浓染的小杆菌[12]。

2.5药敏试验

选用14种抗菌药敏纸片，按照美国NCCLS药敏试验纸片扩散法规，检测分离菌对这些抗菌药物的敏感性。结果分离菌株高敏的药物为：乙酰螺旋霉素、氨苄青霉素、链霉素、复方新诺明、庆大霉素、氟苯尼考；对分离菌株中敏的药物是：丁胺卡那、红霉素，对分离菌株不敏感的药物是：四环素、强力霉素、羟苄青霉素、痢特灵、多粘菌素及丙氟哌酸。2.6血清学试验

试管法：将待检兔的血清做成不同稀释度，加入等量诊断抗原。凝集价在1：40以上者均为阳性反应。

玻片法：取被检血清0.1 ml加于玻片上，随后加入等量抗原，于15-20℃温度下进行摇动玻片使抗原与被检血清均匀混合。阳性反应在1-3min内，出现絮状物，液体透明[13]。

３防控措施

3.1预防

3.1.1建立无多杀性巴氏杆菌种兔群是防治本病的最好办法。这种兔群是通过选择无鼻炎临床症状，并经常对鼻腔连续进行细菌学检查，多次的血清抗体检测，选留无多杀性巴氏杆菌的种兔建立起来的。有条件的兔场用剖腹取胎，或自然分娩后，立即将仔兔隔离进行人工喂养的方法，建立无特定病原体兔群则更为理想。

3.1.2坚持自繁自养原则，不从疫区引种或购买商品兔，引种兔时要严格检疫并隔离观察30天，无鼻炎临床症状，进行细菌学和血清学检查，确定无病后方可并群。

3.1.3加强饲养管理，增强机体的抗病能力。家兔是草食动物，应以青粗饲料为主，精料为