11种木霉菌对葡萄灰霉病菌的拮抗作用

霉（Ｔ．１０ｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、康氏木霉（Ｔ．ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、拟康氏 木霉（Ｔ．ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ）、顶孢木霉（Ｔ．ｆｅｒｔｉｌｅ）、黄绿木霉 （ｚｍ胛铡沉如）、深绿木霉（Ｔ．ａｔｒｏｖｉｒ／ｄｅ）、钩状木霉（Ｚ ｈａｍａｔｕｍ）以及两种未知名木霉种Ｔ．ｓｐｌ和Ｔ．ｓｐ２（可能 为新种）。 １．３木霉菌的拮抗作用测定
中图分类号：￥４７６ 文献标识码：Ａ
Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｆ Ｅｌｅｖｅｎ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ Ｓｐｅｃｉｅｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ Ｃｉｎｅｒｅａ ｉｎ Ｇｒａｐｅ
Ｋａｎｇ Ｐｉｎｇｚｈｉ，Ｚｈａｎｇ Ｌｉｒｏｎｇ，Ｓｈｅｎｇ Ｒｕｉｑｉｎｇ
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＰｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｎｉｎｇ池Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
２．１．２对峙培养观察结果及拈抗系数测定木霉菌与葡
萄灰霉菌的对峙培养结果（表２）表明：各木霉菌种对 葡萄灰霉菌均有不同程度的抑制作用，在木霉菌接种 后５ｄ时所测对病原菌的抑菌率在３１．６％尸７７．６％之间， 其中哈茨木霉、康氏木霉、绿色木霉、长枝木霉的抑制 作用尤为显著，抑菌率分别达７７．６％、６４．５％、６１．８％、
ｈｕｎｄｒｅｄ ｓｅｖｅｎｔｙ ｓａｍｐｌｅｓ
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｏｒｋ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ
ｔｈａｔ ｔｈｅｙ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ ｎｉｎｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｔｒ／ｃｈｏｄｅｒｍａ ａｎｄ ｔｗｏ ｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ Ｔｒ／ｃｈｏｄｅｒｍａ ｓｐｅｃｉｅｓ，ｎａｍｅｌｙ Ｔｒｉ－ ｃｈｏｄｅｒｍａ
１．３．１木霉菌的竞争作用测定采用生长速度法。从培
养３～５ｄ的木霉菌种及葡萄灰霉菌菌落边缘用无菌打
孔器打成０．Ｓｃｍ的菌片，分别接入已制备好的ＰＤＡ平
板中央，放入２６℃恒温箱中培养，每处理重复３次，从
６１．８％。定期观察发现：当术霉菌接种后２ｄ（比葡萄灰
霉菌迟３ｄ接种），二者菌丝相接触；３ｄ时各木霉菌将 病原菌全部包围，使之几乎不再生长；５ｄ时对峙培养 的大部分病原菌长势被削弱，菌落变稀疏，且边缘塌
。
表２木霉菌对葡萄灰霉病菌的抑制作用
葡萄灰霉菌（
ｃ
Ｒ坩．）
木霉菌种‘撇ｂ如～妒ｊ———丐鬲磊鬲ｉ石荔＿————————荪Ｂ吾ｏｔｒ辜ｙｔ／ｉｓ厂ｉｒＷ—ｒ—ｅａ——————磊磊；磊磊石ｊｉ—＿Ｊ
注：木霉菌侵入病原菌覆盖程度：＋＋＋＋：１００％；＋＋＋：６０９６以上；＋＋：３嘶以上Ｉ＋：１０％以上；－－：０（无侵入）．
木霉菌落指向病原菌的半径、病原菌落指向木霉菌的 半径以及对照病原菌半径，３ｄ后计算木霉对病原菌的 抑菌率唧。当两菌落接触相交后，观察记载木霉对病原
万方数据
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｖ０１．２３
‘
Ｎｏ．８
２００７ Ａｕｇｕｓｔ
．３９４．
・
・
ｎｐ：／／ｗｗｗ・ｃ鹕ｂ・ｏｒｇ．ｃｎ＋曙硪踅压瞄旧 ｌ醴幽ｌ莲激葺叠嗣
方法鉴定出９种木霉菌以及２种未知名茵种，它们分别为哈茨木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、绿色木霉 （Ｔ．ｖｉｒｉｄｅ）、长枝木霉（Ｔ．１０ｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、康氏木霉（Ｔ．ｋｏｎｉｎｇｉｉ）、拟康氏木霉（Ｔ．ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ）、顶孢木 霉（Ｔ．ｆｅｒｔｉｌｅ）、黄绿木霉（Ｔ．ａｕｒｅｏｖｉｒｉｄｅ）、深绿木霉（Ｔ．ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）、钩状木霉（Ｔ．ｈａｍａｔｕｍ）以及Ｔ．ｓｐｌ和Ｔ．
的木霉菌菌块，继续置于２６℃人工气候箱中进行培
２．２木霉菌对葡萄灰霉菌重寄生作用机制显微观察 在对峙培养试验中发现：葡萄灰霉菌的生长明显 受到抑制，其菌落生长半径明显低于对照半径，二者相
接触后，病原菌菌落不再扩展，与木霉菌处于僵持状态 或逐渐萎缩。 在两菌交界处挑取混合菌丝在光学显微镜下镜检
养，逐日观察木霉菌和病原菌的生长情况，并分别测量
ｓｐ２。竞争及对峙培养结果表明：１１种木霉茵种对葡萄灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｍａ屁乃．）均有不同程度的 拮抗作用，尤其前四种木霉茵表现出了很强的竞争优势，在对峙培养中对葡萄灰霉菌的拮抗系数为Ｉ 一Ⅱ，抑菌率达６１．８％～７７．６％。在光学显微镜下可观察到木霉菌或缠绕或穿入葡萄灰霉菌菌丝生长，并 发生茵丝断裂、消解以及细胞原生质浓缩等现象。 关键词：木霉；葡萄灰霉病菌；拮抗作用
ｈａｒｚｉａｎｕｍ，Ｔ．ｖｉｒｉｄｅ，Ｔ．１０ｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ，Ｔ．ｋｏｎｉｎｇｉｉ，Ｔ．ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ、Ｔｆｅｒｔｉｌｅ、Ｚａｕｒｅｏｖｉｒｉｄｅ、Ｚａ－
ｔｒｏｖｉｒｉｄｅ、Ｔ．ｈａｍａｔｕｍ、Ｔ．ｓｐｌ ａｎｄ Ｔ．ｓｐ２．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｆａｃｅ—ｔｏ－ｆａｃｅ－ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ
发现：木霉菌菌丝缠绕在葡萄灰霉菌菌丝体上或穿入 葡萄灰霉菌菌丝体内寄生生长，吸取内部养分，使病原 菌菌丝变细，发生断裂、消解及原生质浓缩等现象（表
３）。另挑取对峙培养中距界面较远处病原菌菌丝镜检， 发现有大量的木霉菌孢子存在。 ３结论与讨论 ３．１对峙培养结果表明：１１种木霉菌对葡萄灰霉病菌 均具有较明显的拮抗作用，但不同木霉种之间抑菌效 果存在差异，其中哈茨木霉、绿色木霉、康氏木霉、长枝 木霉的拮抗作用尤为显著，抑菌率高达６１．８０／ｏ－－，７７．６％， 是具有潜力的防治葡萄灰霉病的生防菌株。
ｏｒ ｒｅ－
ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ
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ｐｅｎｅｔｒａｔｅｄ Ｂｏｔｒｙｔ／ｓ ｃｉｎｅｍａ’ｓ ｈｙｐｈａｅ，ａｎｄ
ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｐｌＳｉｌｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ
ｗｏｒｄｓ：Ｔｒ／ｃｈｏｄｅ嗍Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ，Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ
陷，部分木霉菌种已有较多菌丝侵入病原菌内部；在对
峙培养７一ｌＯｄ时，木霉菌菌丝向病原菌内部扩展数量 迅速增加，对病原菌的拮抗系数表现为Ｉ一Ⅲ，其中哈 茨木霉、康氏木霉、绿色木霉、长枝木霉对葡萄灰霉菌 的抑制作用较强，其拮抗系数为Ｉ一Ⅱ，覆盖程度达 ６０％以上。
平皿取出，分别在另一侧使用同样方法接入同质等量
（Ｔｒ／ｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚ／ａｎｕｍ）、绿色木霉（Ｚｖｉｒ／ｄｅ）、长枝木
快，其速度比病原菌平均快２．叫．２倍，３ｄ时木霉菌落
几乎布满平皿，而葡萄灰霉病菌５ｄ时才长满，显示出
了木霉菌极强的竞争优势，其中以哈茨木霉（Ｚ
ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、绿色木霉（Ｔ．ｖｉｒｉｄｅ）、长枝木霉（Ｚ ｌｏｎ＃ｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、康氏木霉（Ｚｋｏｎｉｎｇｉｉ）的生长速度为 最快。
菌具有生长、繁殖速度快，能迅速占领营养空间，可产
生抗菌素等多种特点，因而是应用潜力很大的生防菌。 目前有关木霉菌在土传病害方面的研究报道很多，而 在其对于植物叶部病害生物防治方面仅限于番茄灰霉 病等少数几种病害的研究Ｉ，国。此试验主要针对宁夏葡 萄灰霉病的发生现状，通过木霉菌对葡萄灰霉病菌的 拮抗作用测定，旨在为筛选对病原菌具有较强拮抗作 用的生防木霉菌，从而为葡萄灰霉病的生物防治提供 重要证据。 １材料与方法 １．１供试病原茵菌株 灰葡萄孢菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ １．２供试木霉茵株
ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｌｅｖｅｎ Ｔｒ／ｃｈｏｄｅｒｍａ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｍａ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ，ｉｎｈｉ—
ｂｉｆｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ、Ｚｖｉｒｉｄｅ、Ｚｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ ａｎｄ Ｔ．ｋｏｎｉｎｇｉｉ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ．Ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉ— ｂｉｆｉｏｎ ｉｎｄｅｘ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｒｅｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｒｅａｃｈｅｄ Ｉ—ｌＩ ａｎｄ ６１．８％－７７．６％．Ｂｙ ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．ｉｔ ｗａｓ ｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｈｙｐｈａｅ ｏｆ Ｔｒ／ｃｈｏｄｅｒｍａ ｓｐｅｃｉｅｓ ｌｅａｄ ｔｏ ｉｔｓ ｈｙｐｈａｅ ｂｒｅａｋｉｎｇ
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｖ０１．２３ Ｎｏ．８ ・３９２・ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｓｈ．ｏｒｇ．ｃｎ
２００７ Ａｕｇｕｓｔ
１
１种木霉菌对葡萄灰霉病菌的拮抗作用
康萍芝，张丽荣，沈瑞清
（宁夏农林科学院植物保护研究所，银川７５０００２）
摘要：对采自宁夏１４个市县的１７０份土样及其它材料进行分离，得到９６株木霉菌株，采用形态分类
菌的抑制、包围、侵人并占领病原菌营养空间的过程。 拮抗系数的分级标准（５级）：Ｉ木霉菌丝占平皿 的１００％；Ⅱ木霉菌丝占平皿的＞２／３；Ⅲ木霉菌丝占平 皿的＜２／３，＞ｌ／３：ＩＶ木霉菌丝占平皿的＜１／３；Ｖ病原菌 丝占平皿的１００％。 抑菌率％＝【（病原菌对照菌落半径一病原菌落指 向木霉菌的半径）／病原菌对照菌落半径］ｘ１００ １．４木霉茵重寄生作用机制显微观察嗍 将采用对峙培养法培养的两两相对的木霉菌和葡 萄灰霉菌在２６℃恒温下培养，并逐日观察，待两菌落 相交时，挑取交界处病菌菌丝在光学显微镜下观测二 者的相互作用。 ２结果与分析
症状，最终引致成熟期果实腐烂或裂果，严重发生时造 成产量损失达３０％以上，对葡萄产量影响极大。 目前，对于葡萄灰霉病的防治，生产上仍主要以化 学防治为主，这无疑会造成农药抗药性、果实农药残留 严重和环境污染以及对人们的健康极为不利等问题。
ｃｉｎｅｒｅａ
宁夏贺兰山东麓自大面积发展酿酒葡萄以来，随 着葡萄树龄的延长，由灰葡萄孢菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ Ｐｅｒｓ．１引起的葡萄灰霉病日趋严重，首次成为宁夏酿酒 葡萄上的主要病害之一。据调查，宁夏葡萄灰霉病的发
生自２００１年以来呈上升趋势，尤其２００４年发生较重， 其发病品种主要为霞多丽、赤霞珠等。此病主要在葡萄
花前期或开花期侵染，７月中旬开始在田间表现明显
因此，通过大量筛选和利用抗灰霉有益微生物及其代
谢物，使生物防治日益成为葡萄灰霉病控制中的一条
基金项目：宁夏回族自治区自然科学基金项目“宁夏木霉菌多样性及其生防菌研究”部分内容（ＮＺ０６４３）． 第一作者简介：康萍芝，女，１９７２年出生，宁夏中宁人，硕士，助理研究员，主要从事植物病害及其生物防治方面的研究工作。通信地址：７５０００２宁夏银
ｃｉｎｅｒｃａ
Ｐｅｒｓ．）２００６年从宁夏
２．１木霉菌拮抗作用测定结果
２．１．１竞争作用测定木霉菌体外竞争作用测定结果 （表１）表明：木霉菌与葡萄灰霉病菌相比，生长速度很
贺兰山东麓酿酒葡萄基地葡萄灰霉病株上分离得到。
．
２００６年对采自宁夏１４个市县的１７０份土样及其 它材料进行分离，得到９６株木霉菌株，采用形态分类 方法鉴定出９种木霉菌０，４１，分别为哈茨木霉
wenku.baidu.com
川市金风区黄河东路５９０号宁夏农科院植保所，Ｅ－－ｍｉｌ：ｋａｎｇｐｉｎｇｚｈｉ＠１６３．ＣＯｌｌｌ。
收稿日期：２００７－０４－０１，修回日期：２００７－－０４—２８。
万方数据
中回垂学ｃｉＩ报第２３卷第８期２００７年８月
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｏａｓｂ．ｏｒｇ．ｃｌｒｉ ・３９３・
重要而有效的途径是势在必行的。木霉菌是一种对多 种植物病原菌都有较强拮抗作用的生防菌，由于此类
第２４ｈ开始，每天１次定时测量各菌落直径，并计算其
生长速度。
１．３．２木霉菌的对峙培养观察及拮抗系数测定咖采
用对峙培养法。将已保存的各木霉菌种和葡萄灰霉菌 分别单独接入ＰＤＡ平板，在２６。Ｃ人工气候箱中培养 ３￣５ｄ后取出，然后用ｄ＝０．５ｃｍ的无菌打孔器切取病原 菌菌块，接种于ＰＤＡ平板一侧距离中心２ｃｍ处，每处 理重复３次ｊ并设只接种病原菌为对照，培养３天后将
ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ
ｏｎｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ ７５０００２） ｏｆ ｓｏｉｌ ａｎｄ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｉｎｅｔｙ－ｓｉｘ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｔｒ／ｃｈｏｄｅｒｍａ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｆｏｕｒｔｅｅｎ ｒｅｇｉｏｎｓ ｉｎ Ｎｉｎｇｘｉａ．Ｔｈｅ