抗体的人源化
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三、抗体融合蛋白
抗体融合蛋白：从广义讲应属于双功能抗体范畴 （1）配基—配基型融合蛋白，如 CD4-Fcγ. （2）配基—Ig型嵌合抗体，如 IL-2-Ig （3）配基—FV型嵌合蛋白，如 CD4-FVCD3 (4) 受体—FV型融合蛋白
（5）酶—抗体型融合蛋白（abeneyme,抗体酶）
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小分子抗体有很多优点:
可以用细菌发酵生产，成本低;
分子小，穿透力强; 不含Fc，没有Fc带来的效应; 在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出; 易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒 素或酶标抗体等。
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Fab
单区抗体
最小识别单位
将鼠单抗可变区表面暴露的骨架区氨基酸残基中 改成人源的，就成为了镶面抗体
3. 表位印迹选择
表位印迹选择是一种与高效筛选噬菌体抗体库技术 相结合的人源化抗体的方法，可以通过数轮筛选得 到完全人源的抗体
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小分子抗体
小分子抗体是完整免疫球蛋白的一部分，分子量比 较小。 小分子抗体包括 Fab 、 Fv 或 ScFv 、单域抗体及最小 识别单位等几种。
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五、单域抗体和分子识别单位
（1）单域抗体:由VH(VL)单个可变区组成的，只有 抗体分子的1/12，而且表面疏水性强，与抗原非特 异结合能力也强。
（2）分子识别单位（MRU）:是由单个CDR区构成的 小分子抗体，亲和力较低。
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多功能抗体及其制备
一、双功能抗体
二、多功能抗体 三、抗体融合蛋白
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Ig分子的结构模式图
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原理： 抗体同抗原结合的功能：决定于抗体分子的可变区 （V） 同种性免疫源性：决定于抗体分子的稳定区（C）。
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一、人—鼠嵌合抗体（chimeric antibody）
在基因水平上将鼠源单 克隆抗体可变区和人抗 体恒定区连接起来并在 合适的宿主细胞中表达， 这种抗体称为人－鼠嵌 合抗体
Fv
ScFv
连接肽
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四、单链抗体（single chain antibody SCA 或single chain FV,SCFV）
单链抗体：具有有分子量小、穿透力强、免疫原性 小特点，可与效应分子相连接构建新功能的抗体分 子，是构建免疫毒素和双特异抗体的理想元件。
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一条链针对抗原，一条针对免疫球蛋白，可与Ig 结合，恢复抗体的全部功能。 （2）免疫诊断：
例：全血凝集试剂
免疫阻断抗体、细胞免疫组化抗体
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二、多功能抗体
在单链抗体（ScFv）基础上发展了结合性能良好的 多聚体：二聚体、三聚体和四聚体等。 优点： 克服了ScFv在体内清除过快的不足 高亲和性能，可同时与细胞膜上相邻的两个或多个 靶抗原结合
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一、双功能抗体
双功能抗体就是双特异性抗体（biospecific antibody，bisFvs） 一种非天然性的抗体，其结合抗原的两个臂具有不 同的特异性。具有与两种抗原位点结合的能力。
VLA-linker-VHB
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应用：
（1）治疗作用：
Fv
ScFv
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三、Fab和Fv抗体
（1）Fab
由完整的轻链和Fd组成，大小为完整分子的1/3。 把Fab与细菌的前导肽相连，在前导肽的作用 下Fab进入质周腔，装配折叠后，它具有结合抗 原的活性。
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（2）Fv 或 ScFv Fv、ScFv的大小约为全分子的1/6。
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抗体工程
抗体研究进展的三个阶段：
1890年Behring发现白喉抗毒素为代表，特点：用 抗原免疫动物来获得多克隆抗体
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鼠源性单克隆抗体
优点：鼠单抗对人而言有较强得免疫原性，可以产 生较强的人抗鼠抗体（HAMA）反应
缺点：生产成本比较高，难以大规模普及应用
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改造鼠源性单克隆抗体的目的：
一是降低免疫原性 二是降低相对分子量，增加组织通透性
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构建嵌合抗体的大致过程是，将鼠源单抗的可变区 基因克隆出来，连到包含有人抗体恒定区基因及表 达所需的其它元件(如启动子、增强子、选择标记 等)的表达载体上，在哺乳动物细胞(如骨髓瘤细胞、 CHO细胞)构中表达。
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二、改形抗体(Reshaping antibody)
将 鼠 单 抗 的 CDR 区 移 植 到人单抗的骨架区，就 可能使人单抗获得同鼠 一样的抗体特异性，并 可以最大限度地降低鼠 单抗的异源性，这样就 得到了改行抗体。这种 改 造 过 的 抗 体 也 称 CDR 移植抗体
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鼠单抗可变区人源化抗体
1. 改形抗体
2. 表面氨基酸残基的人源化――镶面抗体
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其中较为成熟的是配基-Ig型嵌合蛋白 而酶-抗体型融合蛋白（即抗体酶，abeneyme）在 药物治疗中应用前景广阔。它可在靶向位置上将前 体药物转化成有效的药物，避免对正常组织的伤害， 此法称为抗体介导的酶前体药物治疗。抗体和酶的 融合蛋白定位在肿瘤部位后再给予前体药物，提高 了肿瘤区域药物的浓度，降低了对正常细胞的毒性。
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基因工程抗体优点
降低抗体的免疫原性。通过基因工程改造技术，可 以最大程度地降低抗体的鼠源性，降低甚至是消除 人体对抗体的排斥反应 穿透力强。基因工程抗体分子一般比较小，更容 易到达病灶的核心部位 可以根据需要，制备多用途的新型抗体 成本降低。可采用原核细胞、低等真核细胞和植 物等多种系统表达
抗体的人源化
基因工程抗体
基因工程抗体是以基因工程技术等高新生物技术为 平台，制备的生物药物总称。 由于目前制备的抗体均为鼠源性，临床应用时，对 人是异种抗原，重复注射可使人产生抗鼠抗体，从 而减弱或失去疗效，并增加了超敏反应的发生，因 此，在 80 年代早期，人们开始利用基因工程制备 抗体，以降低鼠源抗体的免疫原性及其功能。
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三、抗体融合蛋白
抗体融合蛋白：从广义讲应属于双功能抗体范畴 （1）配基—配基型融合蛋白，如 CD4-Fcγ. （2）配基—Ig型嵌合抗体，如 IL-2-Ig （3）配基—FV型嵌合蛋白，如 CD4-FVCD3 (4) 受体—FV型融合蛋白
（5）酶—抗体型融合蛋白（abeneyme,抗体酶）
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小分子抗体有很多优点:
可以用细菌发酵生产，成本低;
分子小，穿透力强; 不含Fc，没有Fc带来的效应; 在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出; 易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒 素或酶标抗体等。
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Fab
单区抗体
最小识别单位
将鼠单抗可变区表面暴露的骨架区氨基酸残基中 改成人源的，就成为了镶面抗体
3. 表位印迹选择
表位印迹选择是一种与高效筛选噬菌体抗体库技术 相结合的人源化抗体的方法，可以通过数轮筛选得 到完全人源的抗体
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小分子抗体
小分子抗体是完整免疫球蛋白的一部分，分子量比 较小。 小分子抗体包括 Fab 、 Fv 或 ScFv 、单域抗体及最小 识别单位等几种。
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五、单域抗体和分子识别单位
（1）单域抗体:由VH(VL)单个可变区组成的，只有 抗体分子的1/12，而且表面疏水性强，与抗原非特 异结合能力也强。
（2）分子识别单位（MRU）:是由单个CDR区构成的 小分子抗体，亲和力较低。
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多功能抗体及其制备
一、双功能抗体
二、多功能抗体 三、抗体融合蛋白
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原理： 抗体同抗原结合的功能：决定于抗体分子的可变区 （V） 同种性免疫源性：决定于抗体分子的稳定区（C）。
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一、人—鼠嵌合抗体（chimeric antibody）
在基因水平上将鼠源单 克隆抗体可变区和人抗 体恒定区连接起来并在 合适的宿主细胞中表达， 这种抗体称为人－鼠嵌 合抗体
Fv
ScFv
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四、单链抗体（single chain antibody SCA 或single chain FV,SCFV）
单链抗体：具有有分子量小、穿透力强、免疫原性 小特点，可与效应分子相连接构建新功能的抗体分 子，是构建免疫毒素和双特异抗体的理想元件。
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一条链针对抗原，一条针对免疫球蛋白，可与Ig 结合，恢复抗体的全部功能。 （2）免疫诊断：
例：全血凝集试剂
免疫阻断抗体、细胞免疫组化抗体
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二、多功能抗体
在单链抗体（ScFv）基础上发展了结合性能良好的 多聚体：二聚体、三聚体和四聚体等。 优点： 克服了ScFv在体内清除过快的不足 高亲和性能，可同时与细胞膜上相邻的两个或多个 靶抗原结合
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一、双功能抗体
双功能抗体就是双特异性抗体（biospecific antibody，bisFvs） 一种非天然性的抗体，其结合抗原的两个臂具有不 同的特异性。具有与两种抗原位点结合的能力。
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（1）治疗作用：
Fv
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三、Fab和Fv抗体
（1）Fab
由完整的轻链和Fd组成，大小为完整分子的1/3。 把Fab与细菌的前导肽相连，在前导肽的作用 下Fab进入质周腔，装配折叠后，它具有结合抗 原的活性。
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（2）Fv 或 ScFv Fv、ScFv的大小约为全分子的1/6。
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抗体工程
抗体研究进展的三个阶段：
1890年Behring发现白喉抗毒素为代表，特点：用 抗原免疫动物来获得多克隆抗体
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鼠源性单克隆抗体
优点：鼠单抗对人而言有较强得免疫原性，可以产 生较强的人抗鼠抗体（HAMA）反应
缺点：生产成本比较高，难以大规模普及应用
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改造鼠源性单克隆抗体的目的：
一是降低免疫原性 二是降低相对分子量，增加组织通透性
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构建嵌合抗体的大致过程是，将鼠源单抗的可变区 基因克隆出来，连到包含有人抗体恒定区基因及表 达所需的其它元件(如启动子、增强子、选择标记 等)的表达载体上，在哺乳动物细胞(如骨髓瘤细胞、 CHO细胞)构中表达。
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二、改形抗体(Reshaping antibody)
将 鼠 单 抗 的 CDR 区 移 植 到人单抗的骨架区，就 可能使人单抗获得同鼠 一样的抗体特异性，并 可以最大限度地降低鼠 单抗的异源性，这样就 得到了改行抗体。这种 改 造 过 的 抗 体 也 称 CDR 移植抗体
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鼠单抗可变区人源化抗体
1. 改形抗体
2. 表面氨基酸残基的人源化――镶面抗体
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其中较为成熟的是配基-Ig型嵌合蛋白 而酶-抗体型融合蛋白（即抗体酶，abeneyme）在 药物治疗中应用前景广阔。它可在靶向位置上将前 体药物转化成有效的药物，避免对正常组织的伤害， 此法称为抗体介导的酶前体药物治疗。抗体和酶的 融合蛋白定位在肿瘤部位后再给予前体药物，提高 了肿瘤区域药物的浓度，降低了对正常细胞的毒性。
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基因工程抗体优点
降低抗体的免疫原性。通过基因工程改造技术，可 以最大程度地降低抗体的鼠源性，降低甚至是消除 人体对抗体的排斥反应 穿透力强。基因工程抗体分子一般比较小，更容 易到达病灶的核心部位 可以根据需要，制备多用途的新型抗体 成本降低。可采用原核细胞、低等真核细胞和植 物等多种系统表达
抗体的人源化
基因工程抗体
基因工程抗体是以基因工程技术等高新生物技术为 平台，制备的生物药物总称。 由于目前制备的抗体均为鼠源性，临床应用时，对 人是异种抗原，重复注射可使人产生抗鼠抗体，从 而减弱或失去疗效，并增加了超敏反应的发生，因 此，在 80 年代早期，人们开始利用基因工程制备 抗体，以降低鼠源抗体的免疫原性及其功能。