CLSI血培养推荐指南
血培养的原则和流程之消毒篇
样本采集和运输
• 血培养采集部位
• 血培养应被采集自静脉而非动脉 • 采自静脉植入装置如留置导管或留置口的血培养会伴有高的 污染率 • 如果血培养是通过静脉植入管道采集的，则不必
• 弃去起始部分的血液，或 • 使用生理盐水冲洗管道以去除残留的肝素或其他抗凝剂
• 在皮肤消毒前，血培养瓶的橡皮塞需使用70%异丙基酒精消 毒并干燥 • 采血部位皮肤消毒步骤：
抽取血培养的数量
• • • 最佳的血培养数量是不确定的，但是只抽单瓶的血培养是不够的 多套的血培养可以帮助区别血培养假阳性（如皮肤污染等） 建议：对于可能的心内膜炎患者，起始采集3套血培养，如果在24小时内 仍报告为阴性，则继续采集2套血培养，全部培养一共为5套。
方法和步骤 –影响血液标本中病原菌检出率的重要因素
• 先使用70%异丙基酒精消毒并干燥 • 再进行正式消毒步骤 • 整个过程严格遵从无菌操作，不允许在消毒后按压静脉，除非带 有无菌手套
• 许多研究表明采血和接种是否需要换针头并无明显的污染率 差异，更换针头会增加针刺伤的风险
定义：污染：血培养中生长的细菌是在样本采集或操作过程中被带入培养的，而非来 自病人的血液
样本采集和运输 • 血培养的数量
• 研究表明，采用全自动的血培养系统每套血 培养采血20ml时
• 一套检出率：65% • 二套检出率：80% • 三套检出率：96%
血培养操作指南
血培养操作指南血培养是一种常见的实验技术，用于检测病原微生物在血液中的生长。
它可以帮助诊断生物样本中的病原微生物感染，并确定其对不同抗生素的敏感性。
本文将介绍血培养的操作指南，包括准备工作、操作步骤和结果解读等内容。
一、准备工作1. 清洁操作区域：确保操作区域干净整洁，避免细菌的交叉污染。
可以使用70%酒精或其他消毒剂对操作台面进行消毒。
2. 准备培养基和试剂：血培养通常使用含有富营养物质的寒天培养基，如血琼脂（Blood agar）或巧克力琼脂（Chocolate agar）。
此外，还需要溶血素试剂用于检测细菌的溶血能力。
3. 样本采集器具：准备血液采集器具，如一次性血管采血器、针头和注射器等，确保采集的血液样本干净无菌。
4. 实验器具消毒：对使用的实验器具进行彻底消毒，如培养皿、注射针、试管等。
二、操作步骤1. 血液样本采集：选择合适的采集部位和采集方法，确保血液样本的质量。
常见的采集部位包括静脉、手指或动脉，具体采集方法请按照医学标准操作。
2. 分配样本：使用无菌的技术将采集的血液样本分配到不同的培养皿中。
常见的分配量为每个培养皿2-5毫升。
3. 涂布培养基：使用无菌的匀涂棒或玻璃棒，将血液均匀涂布在准备好的血琼脂或巧克力琼脂培养基上。
4. 培养条件设置：将涂有血液的培养皿放入恒温培养箱中，设置适当的温度和培养时间。
一般情况下，37℃是最常用的培养温度。
5. 观察培养结果：在培养箱中观察培养皿的生长情况。
如果有细菌或真菌的生长，会在琼脂表面形成菌落。
通常需要培养24小时以上才能获得可靠的结果。
6. 溶血试验：将生长的培养物用溶血素试剂滴于琼脂表面，观察是否有细菌对血细胞进行溶血作用。
7. 结果解读：根据生长的菌落形态和溶血试验的结果，可以初步判断感染的病原菌种类和性质。
进一步的鉴定和确认需要进行进一步的实验和检测。
三、注意事项1. 严格遵守无菌操作：整个实验过程中应遵守严格的无菌操作，防止细菌和真菌的污染。
临床微生物血培养操作指南最新版
临床微生物血培养操作指南最新版下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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(优选)临床血培养的指导原则
皮肤和血培养瓶的消毒方法
美国CLSI推荐皮肤的消毒方法为：
感染性心内膜炎采血方法
血培养采血套数及血量
• CLSI要求每次采集2-3套标本,每套应包括一个需氧培养瓶,一个厌氧 培养瓶
• 一个静脉穿刺点只能采集1套血培养，采集第2套血培养应该选择第2 个静脉穿刺点
• 成年病人不能只采1瓶血培养标本，采血量不足和只做1套血培养所 得得结果是很难正确解释的
Cockrill2004年报告:163位病人,血培养仪
How reliable is a negative blood culture result?
Australia, 2007
• Adequate blood culture volume
• < 1 month: ≥ 0.5 mL • 1 month – 36 months: ≥ 1.0 mL • ≥ 36 months: ≥ 4.0 mL
采血套数及血量
1套(20ml)
2套(40ml)
检出率
65%
80%
3套(60ml) 96%
血培养在需氧瓶和厌氧瓶中的分配及血量
• CLSI建议常规的血培养应该包括至少一个需氧培养瓶和一个厌氧 培养瓶（称“一套”）
• 最近的研究表明：用需氧瓶加厌氧瓶的组合检测出的葡萄球菌， 肠杆菌科菌中某些菌和苛氧菌比一对需氧瓶多。
•
对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的1％
体重kg
<=1 1.1-2 2.1-12.7 12.8-36.3 >=36.3
总血量ml
50-99 100-200 >200 >800 >2200
第一套取血量ml（ 第二套取血量ml 占全身血量％）
微生物CLSI文件集锦（你想要的都在这里）
微生物CLSI文件集锦（你想要的都在这里）说起临床微生物的CLSI文件，大家首先想到的就是CLSI M100S——《抗微生物药物敏感性试验的执行标准》。
但是其实，与临床微生物相关的CLSI文件很多，截至2017年7月，已多达43个。
下面，小编就给您简单介绍一下吧。
1、M02-A12:Approved Standard中文：抗菌药敏试验的性能标准英文：Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests内容与解释：介绍药物纸片扩散法的质量控制标准和最新折点标准。
2、M06-A2: Approved Standard中文：脱水MH琼脂的评估程序英文：Protocols for Evaluating Dehydrated Mueller-Hinton Agar内容与解释：略3、M07-A10:Approved Standard中文：需氧菌稀释法抗菌药物敏感性试验英文：Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility T ests for Bacteria That Grow Aerobically内容与解释：描述了肉汤稀释法和琼脂稀释法，而且还包含这些方法的标准化操作流程和CLSI推荐方法的性能，局限性，适应性。
4、M11-A8:Approved Standard中文：厌氧菌抗菌药物敏感性试验英文：Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria内容与解释：在过去的几年内，大部分厌氧菌的耐药表型都发生了很大的改变，导致了许多菌种的经验用药的面临很大的挑战。
对于厌氧菌，琼脂稀释法仍然是参考方法，对于调查研究和科研同样都适用。
而且其他的方法的对比标准也进行了说明，肉汤稀释法也应用于临床实验室，但是现在对脆弱拟杆菌和一些抗生素没有标准。
ICU：CRBSI与血培养(全版)
皮下囊感染：
指完全植入血管内装置皮下囊内有感染性积液；常有外表皮肤组织触痛、红斑 和/或硬结；自发的破裂或引流，或外表皮肤的坏死。可伴或不伴有血行感染
CRBSI发病机制
微生物引起导管感染的方式有以下三种：
〔1〕皮肤外表的细菌在穿刺时或之后，通过皮下致导管皮内段至导 管尖端的细菌定植，随后引起局部或全身感染；
Journal of Hospital Infection 〔2007〕 65〔S2〕 171–173
2009- 2010 年上海市65所医院ICU导管相关性感染 目标性监测分析〔复旦大学附属中山医院〕
CRBSI的常见病原菌
国外报道引起CRBSI的病原菌主要是凝固酶阴 性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和念珠菌。
导管留置时间
CRBSI的危险因素
2、操作相关因素
穿刺部位: 股静脉>颈内静脉>锁骨下静脉
无菌操作标准性: 操作人员和患者皮肤上的表皮葡萄球菌是最主要的病原 菌来源。维护时消毒不严格可将细菌带入管腔
置管的熟练程度: 置管的熟练程度与感染发生率成反比 研究说明放置锁骨下静脉导管<50根的医生导管脓毒症的 风险大于熟练医生的2倍以上
CRBSI送检方法:
首先判断导管是否仍有保存的必要性 按导管保存与否分别采用不同的送检方法
如需保存导管:
采取至少2套血培养，其中 至少1套来自外周静脉，并 做好标志，另外的1套则从 导管中心或硅酮隔膜无菌 采获，两个来源的采血时 间必须接近〔≯5min〕， 各自做好标记。
如无需保存导管:
ICU各类病原菌导致BSI的发病率及死亡率
导管相关性血流感染
血培养操作规程
血培养检测规范化操作（世上最全基本操作流程）2016-08-22来源:南方检验医学网阅读: 1291次【字号：大中小】导读：一、血培养检测采血指征：对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征时可作为采集血培养的重要指征： 1．发热（38℃）或低温（36℃）。
2．寒战。
3．白细胞增多（1010 9/L，特别有核左移未成熟的或带状的白细胞一、血培养检测采血指征：对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征时可作为采集血培养的重要指征：1．发热（≥38℃）或低温（≤36℃）。
2．寒战。
3．白细胞增多（>10×10 9/L，特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多。
4．粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×10 9/L）。
5．血小板减少。
6．皮肤粘膜出血。
7．昏迷。
8．多器官衰竭。
或同时具备上述几种体征时应采血培养。
在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。
肺炎链球菌与流感嗜血杆菌菌血症的患儿（特别是2岁以下的幼儿）一般多见于门诊，常伴有明显发热（≥38.5℃）和白细胞增多（≥20×109/L）。
老年菌血症患者，可能不发热或不低热，如伴有身体不适，肌痛或中风可能是感染性心内膜炎的重要指征。
血培养检测皮肤消毒程序：血培养为防止皮肤寄生菌污染，可使用消毒剂（碘酊或碘伏）对皮肤进行严格仔细的消毒处理，最大限度地减低皮肤污染。
感染性心内膜炎，特别是心脏瓣膜修复术的感染，可能由皮肤寄生的微生物引起（例如：表皮葡萄球菌或棒杆菌属）。
因此，在采集过程中血培养的污染一定要减小至最低程度。
用做培养的血液均不应该在静脉或动脉的导管中抽取，除非静脉穿刺无法得到血液或用来评价与导管感染相关性指标。
如果抽取了导管血，也应同时在其他部位穿刺获取非导管内静脉血液进行血培养。
皮肤消毒严格按以下步骤进行：1．首先用70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上。
血培养原则(CLSI)
血培养的时机
菌血症的菌量
寒颤
血培养
体温
0
30
60
时间(分)
血培养的数量
• 2004年Cockerill’s研究表明：当每套血培养采血20 mL ，且使用自动 化血培养系统时
• 一套检出率：65％ • 二套检出率：80％ • 三套检出率：96％ • 感染性心内膜炎第一套检出率90％ ％ • 血培养的数量 • 目前的指南推荐采集2-3套血培养 • 成年病人单一套的血培养从不被建议操作，因为这是不合适的数量， • 培养结果将很难做出临床解释 • 在采取血培养后的2-5天内，不需要再重复采取血培养，因为进行治 • 疗后的2-5天血液中的感染细菌不会马上消失 • 大部份细菌或真菌血症感染的移除，是以临床的症状表现来评估， • 唯有两个例外 • 感染性心内膜炎 • 金葡感染菌血症但非感染性心内膜炎相关
• 碘酊、次氯酸和洗必太的消毒效果要优于碘伏 • 碘酊和洗必太的消毒效果大致相当 • 碘酊需作用30秒以发挥杀菌效能
• 碘伏需作用1.5-2分钟以发挥杀菌效能 • 洗必太发挥杀菌效能的作用时间和碘酊一样， • 但是由于没有伴随的过敏反应，所以使用后不 必擦去；但不能被用于小于2个月的婴儿皮肤消毒
血培养采集部位
采血量在需氧和厌氧瓶中的分配
• 对于常规的血培养，建议采取包括需氧 和厌氧的一套血培养瓶；将采集的血液 等量分配于需氧和厌氧血培养瓶中
• 当采血量不能满足推荐的血培养瓶需求 血量时，首先应进行接种需氧血培养瓶， 其余血量再接种厌氧血培养瓶
• 菌血症病源菌常见为需氧菌及兼性厌氧菌
血培养之皮肤消毒和污染的预防
因为该商业化培养基中添加其他成分以结合或去活化血液中抑制物质的作用多种商业化的肉汤培养基配方可用于人工及自动化血培养系统遵循clsim22指南血培养用培养基添加剂菌与酵母菌的检出?血培养的孵育条件阴性的血培养常规或盲传于是?必要的血培养的培养方法压?变化真菌和分枝杆菌血培养方法动血培养系统血培养的特殊话题crbsi导管相关性血?感染crbsi3少见细菌及苛养菌婴幼儿血培养儿童的采血?为?超过总血容?的1导管相关性血?感染crbsi1如果两套血培养为阴性而导管末梢培养为阴性?是crbsi导管相关性血?感染crbsi2如果两套血培养为阴性?是crbsi导管相关性血?感染crbsi3如果两套血培养为阴性而导管末梢培养为阴性?是crbsi感染性心内膜炎阴性则继续采集2套血培养全部培养一共5套已接受抗生素治疗的病人目前的研究表明接受抗生素治疗后的血培养检出?会有所下?也有研究表明在血培养瓶中添加的树脂或活性碳可以吸附或中和抗生素检出?比标准血培养瓶会有所提升但是在血培养瓶中添加的树脂或活性碳时污染菌的分离?亦会增加产品?贵少见细菌及苛养菌弯曲菌campylobacter转种时需微嗜氧环境孵育至少48小时才可见菌落少见细菌及苛养菌慢生长转种需要用支原体培养基sp4葡萄?培养基ph45结果报告药敏试验结果报告阳性血液培养的早期报告使用适当抗微生物制剂治疗避免抗药性菌株产生及?低病患死亡?提供适当次培养培养基及孵育环境结果报告其他结果报告初步报告结果与最终结果?吻合必须在书面报告上注明并提供详情污染问题对于有疑问的培养结果的临床意义判读如果是没有第二套同一个病人的血培养中发现同样的细菌判断血培养污染其它辅助检查的情况阳性血培养的判断真性菌血症truebacteremia
血流感染诊断的金标准正确的血培养
鲍曼不动杆菌 39%
N=51例
70%的患者在入住ICU时已入院≥48h 患者在入住ICU时取鼻腔、口腔、直肠拭子培养，≥1个部位细菌培养阳性为定植
痰培养出的不动杆菌可能为定植菌
*
1.汪复等.实用抗感染治疗学.人民卫生出版社.2005年第一版 9.陈丽丹等.中华医院感染学杂志.2010 ; 20 (8 ):1091-1093
存在中心静脉插管(CVC):中心静脉及外周血管同时取血
无CVC：2个不同部位取血 若患者体重<40kg，采血体积应<总血容量的1%（一般人体血容量为70ml/kg）
CLSI指南对血培养次数及采血体积的推荐 CLSI指南推荐： 菌血症的患者行4次血培养，且每次采血量为10ml，可获得90-95%的阳性检出率 当血培养次数增加到6次时，阳性率可增加至95-99%
采血量是影响灵敏度最关键因素
要采集多少血液?
采血量（ml）与检出率的关系
Overall/Mayo
培养皿孵化时间越长，血培养阳性率越高
5.F. R. Cockerill III et al. Clinical Infectious Diseases 2004; 38:1724–30
研究显示，血培养时培养皿的孵化时间为72h时，可获得96%的阳性率；当孵化时间延长至5-6天时，可获得100%的阳性率
痰标本易受口咽部菌群的污染1
对ICU患者鲍曼不动杆菌分布的调查结果显示，体表定植鲍曼不动杆菌的患者中，73.7%痰培养结果显示为鲍曼不动杆菌阳性9 该研究认为同一患者在同一部位两次分离到同一细菌则为定植, 患者4 个体表部位(鼻前庭、额头、腋窝、腹股沟)任1 个有定植均认为有定植
01
02
判断不动杆菌定植抑或感染的思路
静脉血标本采集顺序
C L S I推荐的静脉血标本采集顺序下图为美国临床及实验室标准研究院(CLSI)[原美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）]推荐采血顺序，在实际工作中，如患者静脉条件较差，有可能采血不足，则应首先考虑凝血1（蓝帽）和血沉（黑帽）检测管，因为这两种样本对血量要求最严格。
血液标本的采集1.静脉血标本静脉血标本是医护人员采用一次性注射器（推荐使用真空采血技术），从患者肘静脉或其它部位的静脉取血。
在取得静脉血标本时应注意：●●在肌肉注射或静脉输含有葡萄糖或电解质（含钾、钠、氯离子）的液体时，建议3小时以后采集静脉血标本进行这些项目的检验，以防止上述检验项目因输液引起的假性升高。
如因抢救等原因需要在输液同时采血的，一定要在输液对侧采集标本，医生应正确评价检测结果。
禁止从中心静脉插管、肝素帽等保留的治疗通道中采集血液标本。
●●止血带使用时间应少于1分钟（建议在针头穿刺进入血管后即放松止血带），以免引起血液淤滞，局部组织缺氧，造成血液某些成分的改变，特别是测定乳酸时不可使用止血带，否则结果偏高。
●●血标本应防止溶血。
引起溶血的原因有①注射器采血时抽吸力太大；②血液与抗凝剂比例失调；③混匀标本时过度振荡；④注射器或盛血容器带水或容器污染；⑤全血放置时间长或突然受冷或受热；⑥注射器中的血沫注入试管；⑦真空采血时如未采满至相应刻度，可由于残存负压造成红细胞破裂；⑧不拔针头直接注入采血管；⑨标本离心时离心力过大等等。
因血液中红细胞内外成分有很大差异，溶血可造成红细胞内的物质向细胞外转移，如K+、Mg2＋和某些酶类（LD、AST、ALT、ACP）；另外，溶血还可干扰某些化学项目（如TBil、DBil、TC等）的测定，严重影响结果的准确性。
●●正确选择采血管。
通常情况下临床检验多采用血清为标本（不抗凝），但一些特殊检验项目需要使用抗凝剂时，应注意选择合适的抗凝剂并注意抗凝剂与血液的比例，以防止标本凝血或红细胞形态的改变；抗凝血标本采集后立即轻轻摇匀（上下颠倒8次），以防凝血发生。
clsi血培养推荐指南教学课件ppt
06
clsi血培养的临床应用
1
临床应用概述
2
3
CLSI血培养临床应用旨在提供准确、快速、有效的检测方法，以帮助医生早期诊断和治疗血流感染（BSI）。
BSI是一种严重的感染性疾病，具有较高的死亡率和并发症发生率，而血培养是诊断BSI的金标准。
CLSI血培养临床应用在提高检测准确性和缩短检测时间方面具有重要优势，有利于医生及时做出诊断和制定治疗方案。
一名患者因持续发热和白细胞计数升高入院，医生采集血液样本进行CLSI血培养检测。检测结果显示，患者感染了革兰氏阴性杆菌，医生根据检测结果制定了相应的治疗方案，患者的病情得到了有效控制。
案例一
CLSI血培养推荐指南旨在为实验室提供有关血培养检测的标准化和优化方法，提高检测质量和患者诊治水平。
指南涵盖了血培养采样、实验室检测、结果解读和报告等方面的推荐意见。
指南概览
1
指南细节
2
3
针对不同年龄段、病情的疑似感染患者，建议最佳的采样时机和采血量。
采样指征
详细规定了样品处理、增菌培养、自动化检测和手工操作等步骤的标准化操作流程。
clsi血培养常见问题及解决方案
血培养操作不规范
采样方法不当，培养基选择不当
血培养采样不当
采样前未充分准备，采样量不足或过多
血培养结果不准确
培养基污染，培养过程中出现假阳性或假阴性
常见问题分析
充分准备，适量采样，注意采样方法和时间
血培养采样改进
血培养操作优化
血培养结果验证
选择合适的培养基和采样方法，规范操作流程
02
与传统血培养方法相比，CLSI血培养的临床应用可提高检出率、减少假阳性率、缩短检测时间，并降低漏检率。
血培养的原则和规程;批准指南的解读
中国医科大学附属盛京医院 孙继梅
内容提纲
抗菌药物临床应用国家新政策 血培养批准指南的引用 临床微生物检验 血培养采集指征 血培养的原则和规程
合理应用抗菌药物
全球细菌耐药现状 我国细菌耐药现状 国家的法律法规 临床抗菌药物应用指导原则 抗菌药物临床应用专项整治活动 抗菌药物临床应用管理办法
实验室与临床沟通是关键
医生
检验 人员
护士
微生物与临床密不可分
抗感染之路任重道远
抗菌药物敏感试验方法
纸片扩散法 抑菌圈直径 稀释法 最小抑菌浓度（MIC） 肉汤稀释法（常量、微量） 琼脂稀释法 E-test法 仪器法 肉汤稀释法 优点：操作简便、快速，结果准确、灵敏 专家系统：罕见耐药表型的提示 缺点：阈值药敏，流行病学调查和比较
明确抗菌药物临床应用管理责任制 开展抗菌药物临床应用基本情况调查 建立完善抗菌药物临床应用技术支撑体系 严格落实抗菌药物分级管理制度 建立抗菌药物遴选和定期评估制度，加强抗菌 药物购用管理 加大抗菌药物临床应用相关指标控制力度 定期开展抗菌药物临床应用监测与评估
专项整治动重点内容
加强临床微生物标本检测和细菌耐药监测
正确评价细菌培养结果
引起人类感染的微生物种类繁多，生物学特性 各异 没有一种检测方法能检测所有的微生物，更没 有一种培养基能解决临床所有问题 主动了解患者病史，根据临床症状和初步诊断 选择适当的检测方法，才能更好地为临床提供 服务 检验与临床的合作和交流非常重要! 根据药敏试验结果合理选择抗菌药物
正确评价细菌培养结果
北京协和医院参考CLSI(H3-A6)制定静脉血推荐采集顺序
管，也就是无添加剂管的采样顺序。目前，白帽采 血管 （ 无任何添加剂 ，也可是采血管制造商推荐 的
时，如果第一管是 凝血项 目管 ，在其 之前应首先
采集 “ 丢弃管” ， “ 丢弃管 ”可 以是 无添加剂管 （ 目前本实验室内采用的是 白帽管） 或凝血项 目管， “ 丢弃 管” 无需采 满 ，其 目的是避 免血 量不 准 ，造 成抗凝剂和血液 比 例不恰当。因为蝶翼采血针有一
一
指南中虽未特别提及蝶翼采血针适用 范围，但 对蝶 翼采血针 安全 使用 提 出 了非常高 的要 求 ，这 其 中 包括 了应使用安全设备防锐器损伤，使用 中必须
连接持针器等。但笔者更关注的在综合 医院中凝血
项目 检测频次高，且在实际操作 中很少将血培养与 其他管 同时抽，所以按上述推荐顺序凝血管 多为第 管 ，而此时如果使用蝶翼针则必然要求抽 “ 丢弃
酸钠 。
二、北京协和 医院检验科推荐静脉血采集顺序
与Ｈ３ Ａ６ 指 南 的不Fra bibliotek同点 管前加 了１ 支血 清管，也是基于符合老版Ｈ ３ ，考虑 将穿刺过程的影响 “ 引流”在这支 “ 丢弃管”中； 同时 由于考虑促凝剂不会立刻溶解 ，故携带污染
可 能不 明显 ，这在 当时是权 宜之 计 。从Ｈ３ ． Ａ５ 版 本
段软连接管 （ 图２ ），管 中的空气在真空采血的过程 中会消耗真空采血管中的负压 ，俗称 “ 死腔”，而 最终造成采血体积不准。
clsi血培养推荐指南
clsi血培养推荐指南汇报人：日期:•引言•血培养概述•clsi血培养指南•clsi血培养指南应用及效果•clsi血培养指南与临床实践•clsi血培养指南未来发展及展望01引言目的背景目的和背景适用对象适用范围指南范围02血培养概述血培养是一种实验室检测方法，用于检测血液中的微生物，以帮助诊断感染性疾病。
血培养可以检测出导致感染的细菌、真菌或寄生虫等微生物。
血培养的定义血培养的采集血培养的采集通常是通过静脉采血进行的。
采血前需要了解患者的病史和用药情况，以确定是否需要采集多个样本或更改采集方法。
采血时需要使用无菌技术，以避免污染样本。
血培养的常见问题血培养结果需要结合患者的临床表现和其他实验室检查结果进行综合分析，以确定感染的病原体种类和感染部位。
血培养结果阴性不能排除感染的存在，需要结合其他检查结果进行综合判断。
血培养的阳性率受到多种因素的影响，如患者用药情况、采血时机、培养基质量等。
03clsi血培养指南对于儿童患者，推荐使用单培养瓶进行血培养，以减少采血量应根据儿童的年龄和体重进行适当调整，以避免特殊情况下血培养指南对于免疫抑制患者，如接受化疗或器官移植的患者，建议使用双培养瓶进行血培养，以增加病原菌的检出率。
对于接受抗菌药物治疗的患者，建议在更换新抗菌药物前采集血液样本，以监测病原菌是否对当前抗菌药物产生耐药性。
对于疑似血流感染的患者，建议在患者发热期间或使用抗菌药物前采集血液样本，以增加病原菌的检出率。
04clsi血培养指南应用及效果指南应用临床应用实验室人员可以根据该指南进行血培养的实验操作，确保实验过程的标准化和规范化，提高实验结果的可靠性。
实验室应用科研应用实验室效果该指南的应用有助于规范实验室操作，提高实验结果的可靠性，为实验室人员提供了更科学的实验指导。
临床效果该指南的应用有助于提高血培养的阳性率和准确性，为临床医生提供了更可靠的诊断依据，有助于提高诊断准确性和治疗效果。
科研效果该指南的应用为科研人员提供了更科学的研究设计和实施方案，有助于推动相关领域的研究发展，为医学进步做出贡献。
建议血培养使用双瓶
建议血培养使用双瓶What is a classic? It takes about 100 years to become a classic.
建议血培养使用双瓶需氧/厌氧培养
血流感染严重威胁人类生命,其中绝大多数致病菌都是兼性厌氧菌,坚持需氧和厌氧双瓶培养,不仅可以获得双倍的培养血量,还可以增加兼性厌氧菌的检出率.且一些细菌在厌氧环境更早报告阳性或只在厌氧瓶中生长.建议临床科室常规血培养使用配对需氧/厌氧血培养瓶.
以下为血培养应重视的一些关键环节.
1.适应诊断的临床疾病
血流感染；
感染性心内膜炎；
临床不明原因感染；
假体植入后感染；
导管相关血流感染；
关节炎；
细菌性肺炎.
2.最佳采血时间
尽可能在抗菌药物使用前或下次用药前采集；
尽可能在寒战和发热初起时；
一旦怀疑感染性心内膜炎,宜立即采集,采用间隔式采血法.
3.标本的采集和运送
推荐常规血培养包括配对的需氧/厌氧血培养瓶；
CLSI要求每次采集2～3套标本,每套包括一个需氧培养瓶和一个厌氧培养瓶；
成人血培养量8～10ml/瓶,婴幼儿2～8ml/瓶；
2小时内送检,常温保存,无须冷藏.
4.采集注意事项
皮肤消毒；
医务人员手消毒预防血培养污染；
多次采血从不同部位采集静脉血；
除非无法做静脉穿刺取血,否则不应从留置导管内取血；留置导管取血仅为怀疑导管相关血流感染时；
从静脉植入管取血,不要弃用初段血,不用抗凝剂.。
血培养最佳采血时机
血培养最佳采血时机对入院的危重病人未进行系统性抗生素治疗前,应及时进行血液培养发热初期研究表明细菌通常在寒战和发烧前1 小时入血, 此时为采集血培养标本进行病原菌培养的最佳时机;病人出现以下临床表现时也可作为采集血培养的重要指征; 1.发热38℃或低温36℃和寒战初起时 2.白细胞增多>10×10^9/L,特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多或粒细胞减少成熟的多核白细胞<1×10^9/L 3.血小板减少或皮肤、粘膜出血 4.心内膜炎持续性血流感染,5昏迷,6.多器官衰竭,7.血压降低,8.呼吸加快.皮肤消毒严格按以下三步法进行:1、70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上;2、用一根碘酊或碘伏棉签消毒皮肤l%~2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒,从肘上静脉穿刺点向外以1.5cm~2cm 直径画圈进行消毒;3、70%酒精脱碘;严格执行三步消毒后,可行静脉穿刺采血;注意对碘过敏的患者,只能用 70%酒精消毒,消毒60秒钟,待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血;培养瓶消毒程序：培养瓶消毒程序严格按以下三步法进行:1、用70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子;2、酒精作用待60秒;3、在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液;采血套数及血量CLSI要求每次采集2-3套标本,每套应包括一个需氧培养瓶灰白色瓶盖和一个厌氧培养瓶蓝紫色瓶盖,一个静脉穿刺点只能采集1套血培养,采集第2套血培养应该选择第2个静脉穿刺点,成人病人决不能只采1瓶血培养标本,采血量不足和只做1套血培养所得结果是不易正确解释的;每瓶采血8-10毫升,采血方法及要求第一种：消毒工作完毕后,用一次性使用血样采集针蝶翼型见回血后再刺进到血培养瓶橡胶塞里,该瓶有负压血液自动流入,瓶子旁边有每格5毫升刻度值,以便观察流入的血量第二种：用20毫升的注射器和21G的针头,使用注射器采集20毫升血液的标本,把足量的标本尽快分别注入厌氧瓶和需氧瓶中;请在瓶签上标注好采血时间和采血位置,不要在瓶子上的条形码写画任何内容,否则仪器无法识别;标本储存及运送血培养瓶常温保存,无须冷藏；接种标本后请立即送到东院区门诊楼五楼505微生物室上机检测,如果是夜班采集标本,可以放室温保存≤24小时不要冷藏或放到孵箱内,第二天交班请立即送到东院区;微生物室作息时间：周一至周日,上午8：00-12:00下午2:00-5:30;血培养瓶在总院区门诊楼三楼内分泌实验室或在东院区门诊楼五楼微生物实验室病人或家属持记账单都可以领取到;报告发放程序血培养阴性两天发出初步报告五天发出最终报告;血培养阳性立即电话报告医生危机值,3-4天再电话报告和书面报告药敏实验结果;血培养开立步骤医生工作站→医嘱开立→检查/检验单→‘检验’文件夹→微生物测定申请单→无菌体液培养及鉴定指血液,脑脊液,胸水,腹水等记账编码元标本类型请选择“血液”开立一套血培养“需氧+厌氧”,请记账两次无菌体液培养及鉴定 240元 ,如开立两套血培养,请记账四次无菌体液培养及鉴定 480元以此类推;微生物室蒋志涛。
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新生儿
• • • • B群链球菌 大肠杆菌 凝固酶阴性葡萄球菌 酵母菌
陈民钧
11
方法和操作步骤
导管相关性的血流感染的血培养 • CRBSI是医院相关性最常见的原因 • 美国每年有25万病人发生 • 死亡率12-35%
陈民钧
12
导管相关性菌血症
(CRBSI)
– 取两套血培养有助于医生鉴别真假阳性
• 3-5套血培养为好 • 若阴性，要怀疑、重新考虑此诊断
陈民钧
31
HPA BSOP 3715建议的诊断
菌血症和真菌血症的诊断依赖于： • 优质血培养仪
• 优质的实验室操作
• 优质的信息传递
陈民钧
32
HPA BSOP 3715建议的诊断
• 优质血培养仪
– 培养基质量好－少量苛氧菌均可长出 – 能中和抗菌药和血中抗菌物质 – 污染机会少 – 报警迅速 不同的全自动产品各有其优缺点 厌氧瓶最好要培养出细菌、酵母菌 成人用需氧瓶和厌氧瓶 儿童只用需氧瓶
南
陈民钧
1
CLSI及总结了 30年来工作
• 不包括寄生虫,病毒,生物战、及分 枝杆菌
• 不提名任何商业血培养系统 • 明确血培养的临床意义 • 标本的收集和运送 • 最佳的培养基和操作程序 • 自动化血培养仪的评估
英国血培养研究和操作程序
展为心内膜炎
• 常见菌：口腔链球菌、金葡、肠球、牛链等
陈民钧 26
方法和操作步骤
感染性心内膜炎（IE）的血流感染
Native瓣膜心内膜炎 • 真菌心内膜炎
– 很少见 – 抗菌药不正确使用 – 严重的基础病
Native瓣膜心内膜炎 • HACEK 菌群心内膜炎
– Haemophilus aphrophilus – Actinobacillus actinomycetemcomitans – Cardiobacterium hominis – Eikenella corrodens – Kingella kingae – 艾滋病病人的Bartonella spp.
培养
*导管尖片段MAKI法
导管Maki法 ＋ 注解 是否 菌落数 CRBSI？ 是
需15
1或2 套阳性
2套阴性 2套阴性
陈民钧
－
＋ －
不论多 少
否
否 否
金葡、念珠菌 时不能否认
导管定置菌
20
方法和操作步骤
导管相关性的血流感染(CRBSI) 现有诊断方法
• 1997年文献 确认导管尖片断的定量培养是最准确的， • 但需要拔管或更换导管，并需同时采静脉血做血培养。 • 已经证实当评估一次新的发热、需作血培养时时，大约75％－85％ 的导管是不需要拔掉的。
CLSI血培养的原则和操作程 序推荐（Proposed）指南
•
英国HPA 的血培养的研究 及操作程序
2005-09-08出版：BSOP 37 Issue 5
• 2006年10月出版：M47-P
• 只是协商后的推荐稿 （consensus proposed）
•
•
/pdf_sops.asp
导管相关性的血流感染(CRBSI) 现有第2种方法
短期外周导管的方法
• 用静脉采血法采集2套外周血作血培养，
•
用Maki半定量培养法对导管尖片段进行培养（即查导
管表面的定植菌引起的感染）
陈民钧
19
方法和操作步骤
导管相关性的血流感染(CRBSI) 现有第2种方法
• 结果解释： 血培养 1或2 套阳性
Pseudobacteraemia： • 病原菌来源于病人血流之 外
– 不正确采血 – 实验室操作 – 可产生暴发性，消毒液被菌 污染
• 仪器问题
– 白细胞过多 – 过量的血量 – 其它
陈民钧
8
血培养瓶可疑污染菌
细菌室如何分析研究污染瓶
没收到
48小时内又收 到第2套否？ 收到了 生长菌是同一 菌？ 是同一菌 草绿色链球菌？ 是病原菌
BSOP 3715
• 多次一过性菌血症（intermittent）
– 未引流的腹腔脓肿 – 肺炎球菌肺炎
• 持续性菌血症（Continuoys）
– 感染性心内膜炎 – 化脓性 凝血性脉管炎 – 防御低下的严重感染
陈民钧
6
明确血培养的临床意义 其它菌血症的分类 BSOP 3715
• Sepsis：具有全身反应，如发热、心动过速， 的感染 • Sepsis syndrome：Sepsis 加任何一器官功能 不正常，加以下症状之一：血乳酸盐升高，尿 少，意识障碍，动脉压低 (hypoxia) • Sepsis shock: Sepsis syndrome 加低血压
• • • • • • • • • 大肠 肺链 金葡 肠杆菌科菌 脑膜炎奈瑟菌 乙链 伤寒杆菌 布氏杆菌 淋球菌
医院获得性菌血症
• 凝固酶阴性葡萄球菌 • 大肠、 • 金葡、 • 肠杆菌科菌、 • 绿脓杆菌、 • 肠球菌 • 厌氧菌 • 肺链、 • 酵母菌
10
陈民钧
明确血培养的临床意义 儿童菌血症的分类 BSOP 3715 儿童：
33
• • • •
陈民钧
HPA BSOP 3715建议的标本收集
优质的实验室操作
• 取血合适的时间
– 尽可能抗菌药使用前 – 寒颤和发热初起；心内膜炎（持续性菌血症）例外
• 标本类型和取血方法
– 不要和测血气及血沉的取血同时进行（或在先） – 穿刺点消毒： 以醇类、洗必泰为好
陈民钧
34
优质的实验室操作
静脉血 A套 静脉血 B套 同一菌
导管血 菌量
导管血 时间早
其它部 位感染 特征
CRBSI
1
2 3 4 5
＋
＋ ＋ ＋ －
－ 重作
＋
＋ ＋ ＋ －
－ 重作
是
是 ＋ ＋ 是 5倍 ＋
金葡菌、 定量培 加Maki 养 法证明 念珠菌
无
120
‘
是
是 可能
无
120‘
无
是 定置菌
6
陈民钧
无
是？
15
方法和操作步骤
BSOP 3715 （IVCBSI）
• 导管种类：非隧道式长期放置导管、隧道式短期放置 导管
• 很难确诊：缺少诊断标准
– 局部无迹象， – 常常是皮肤正常菌及假菌血症常见的菌
• 诊断依据：
– – – –
陈民钧
血、导管留置部位、IVCJ尖是同一菌 Sepsis、对抗菌药无反应、拔管即好了 有不同的定量培养数（静脉血:导管血＝1:10） 有不同的阳性报警时间 （ 2h ）
13
方法和操作步骤 导管相关性的血流感染诊断方法之一
对非隧道式、隧道式的中心静脉导管、静脉留置口(VAP） 可疑有CRBSI的患者推荐的培养方法： 至少2套血培养 • 经外周静脉穿刺 采血1套 • 从导管中心或静脉留置口隔膜采血1套 • 二者的采血时间应该接近（建议 5分钟）
陈民钧
14
方法和操作步骤 导管相关性的血流感染诊断方法之一
陈民钧
27
方法和操作步骤
感染性心内膜炎（IE）的血流感染
人工瓣膜心内膜炎（PVE）
– – – – 人工瓣膜病人的2%得PVE 占全体心内膜炎病人的20% PVE多见于人工主动脉瓣 PVE手术后的任何时间均可发 生，越后越少，细菌种类也不 同 – 早期PVE（几个月内）死亡率高于 晚期PVE （几年后） – 多为医院感染耐药株
血标本的收集 1. 从静脉取血 2. 不宜从静脉导管或静脉留置口取血 3. 若导管设施取血*，必需同时静脉取血，以求对比和解 释
*不要弃去初段血，不用抗凝剂冲洗
4.不推荐静脉血直接入瓶 5.不主张换针头入瓶 6.有血的培养瓶不可放入冰箱和冻箱保存
陈民钧
35
标本的收集和运送 瓶数及血量
• Cockrill 2004年报告：163位病人，血培养仪
INVESTIGATION OF BLOOD CULTURES (FOR ORGANISMS OTHER THAN MYCOBACTERIUM SPESIES)
• 收集来自全球的评论和建议
• 收集截止日期：2007年1月29日 • 下一步要出版投票通过的试行指
• 参编单位：
• 医学微生物协会, 临床微生物协会 苏格兰微生物协会, IBMS, Welsh 微生物协会 • 统一由卫生防护署 （Health Protection Agency）领导
• 第2种方法适于已决定要拔出导管的病人
陈民钧
24
方法和操作步骤
HPA BSOP 3715
感染性心内膜炎（IE）的血流感染
• 原因：易感的心内膜病灶或先天缺损部位，血流紊乱， 进而心内膜表面损坏，微生物驻扎，形成赘生物，并 常进入血流，治疗困难 • 急性：正常的心瓣膜被病原菌驻扎导致瓣膜快速损坏、 小病灶播散、心衰、快速死亡 • 亚急性：不正常的瓣膜被少数的几种病原菌感染。小
• 健康人能在几分钟内将血中菌消失 • 病人则不能将病原菌控制在原发部位 • 医生未能将病原菌，如：
– 清除失败 – 引流不成功
• 死亡率与病原菌、药敏谱、基础病相关，亦即提供了 预后信息
陈民钧
5
明确血培养的临床意义
按出现时间特点的菌血症的分类
• 一过性菌血症（transient）：持续仅数分钟
– 感染组织、粘膜表面‘、管定居的微生物 – [钻牙、导尿、挤压毛囊]、 – 通过植入、手术进入
陈民钧
7
明确血培养的临床意义 其它菌血症的分类 BSOP 3715
污染瓶： • 约2%
• 这些菌（阳性杆菌、棒状杆菌、 丙酸杆菌、气球菌、凝固酶－葡 萄球菌、微球菌）也引起全身感 染 • 污染瓶只见于一套瓶中的1-2瓶 • 只有第二套来鉴别 • 不作药敏 • 保留此瓶几天，等待第2套结果 • JCM 2002：40：2437－2444 如何减少污染瓶