植物组织培养综合复习题
植物组织培养 考试复习题.doc
植物组织培养考试复习题植物组织培养绪论P1第一章植物组织培养的基本原理P3第二章植物组织培养的基本原理P6第三章植物器官和组织培养P口第四章胚胎培养及离体授粉P16第五章花药和花粉培养P20第六章植物细胞培养P24第八章原生质体培养P27第九章植物离体繁殖P30第十章无病毒苗木培育P33植物组织培养基本操作P351绪论植物组织培养的概念植物组织培养是在无菌和人工控制的环境条件下,利用适当的培养基,对离体的植物器官、由于培养的植物材料已脱离母体,乂称为植物离体培养(Plant culture in vitro)o 广义:对植物的器官、组织、细胞及原生质体进行离体培养技术植物组织培养狭义:对植物的组织(分生组织、表皮组织、薄壁组织等)及培养产生的愈伤组织进行离体培养。
1.无菌:使培养器皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态,以保证培养材料在培养器1111中正常生长和发育。
2.人工控制的环境条件:对光照、温度、湿度、气体等条件进行人工控制,以满足植物培养材料在离体条件下的正常生长和发育。
3.外植体:由活体(in vivo)植物体上提取下來的,接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。
(植物组织培养中,使用的各种器官、组织和细胞统称为外植体。
)4.愈伤组织:外植体因受伤或在离体培养时,其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。
(在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。
)植物组织培养的特点植物组织培养的主要特点是采用微生物学的实验手段来操作植物离体的器官、组织和细胞。
具体特点表现在:1)组织培养的整个过程都是在无菌条件下进行的,外植体、培养基、接种环境都须经过无菌处理。
2)组织培养在多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的, 除少数特殊情况(进行营养缺陷型突变细胞的筛选)夕卜,素、微量元素、有机物和植物激素,培养基的PH和渗透压也是人为设定的。
植物组织培养复习题答案
植物组织培养复习题答案植物组织培养是一种生物技术,它涉及将植物的一小部分组织(如叶片、茎尖或根尖)在无菌条件下培养在特定的营养培养基上,以诱导其生长和分化成新的植物体。
以下是植物组织培养复习题的答案:一、选择题1. 植物组织培养的基本原理是什么?A. 植物细胞的全能性B. 植物细胞的分裂性C. 植物细胞的分化性D. 植物细胞的再生性答案:A2. 植物组织培养中常用的培养基是什么?A. MS培养基B. LB培养基C. 酵母提取物培养基D. 血浆培养基答案:A3. 在植物组织培养中,以下哪个因素不是影响培养成功的关键因素?A. 无菌操作B. 培养基成分C. 光照条件D. 培养基的pH值答案:C二、填空题1. 植物组织培养技术主要包括_______、_______和_______三个阶段。
答案:外植体的消毒、诱导分化、生根与移栽2. 植物组织培养中常用的生长调节剂包括_______、_______和_______。
答案:生长素、细胞分裂素、赤霉素三、简答题1. 简述植物组织培养的优点。
答案:植物组织培养具有快速繁殖、遗传稳定性、避免病毒传播、节约空间和成本等优点。
2. 描述植物组织培养的基本步骤。
答案:植物组织培养的基本步骤包括:选择适当的外植体,进行严格的消毒处理,将外植体转移到含有适宜营养成分和激素的培养基中,提供适宜的温度和光照条件,观察并记录生长情况,最后进行生根和移栽。
四、论述题1. 论述植物组织培养在现代农业生产中的应用及其重要性。
答案:植物组织培养在现代农业生产中具有重要作用,它不仅能够快速繁殖优良品种,提高生产效率,还能通过基因工程等手段改良植物品种,增强植物的抗病、抗虫和抗逆性。
此外,植物组织培养技术在植物保护、药用植物生产以及植物资源的保护和利用等方面也发挥着重要作用。
五、实验操作题1. 设计一个简单的植物组织培养实验方案。
答案:实验方案应包括实验目的、实验材料、实验设备、实验步骤、预期结果和注意事项。
植物组织培养试卷及答案6套
《植物组织培养》试题(一)一、填空题(每空0.5分,共10分)1.植物组织培养按培养基的物理状态分为___________培养和___________培养。
2.在组织培养中,IAA等植物激素必须用__________法灭菌,而接种室空间可采用__________或__________法灭菌。
3.植物的胚胎培养,包括________________、________________、________________以及________________等四个内容。
4.1960年,英国学者Cocking用__________分离原生质体成功,从而开创原生质体培养技术。
5.对植物材料进行表面灭菌时,常采用的灭菌药剂为__________、__________、__________。
6.器官培养时,其营养器官的培养有__________、__________、__________三种方式。
7.大多数植物组织培养的适宜温度范围是_______℃,培养基的pH值范围是_______。
8.用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_________℃的温度范围内,而若用它高温干燥灭菌则需在_________℃的温度下1~3小时。
二、单项选择题(每题2分,共10分)1. 下列不属于生长素类的植物激素是_________。
A 6-BA;B IAA;C NAA;D IBA2. 在原生质体的培养中,渗透稳定剂的作用是_________。
A 稳定原生质体的形态而不使其被破坏;B 支持作用;C 提供营养;D 调节PH 值3. MS培养基中,下列不属于大量元素的盐是_________。
A NH4NO3;B KNO3;C ZnSO4.7H2O;D MgSO4.7H2O4. 下列实验中可能获得单倍体植株的是_________。
A 小麦的茎尖培养;B番茄花柱培养;C玉米胚乳培养;D玉米花粉培养5.同一植株下列_________部位病毒的含量最低。
植物组织培养技术综合测试1
《植物组织培养技术》综合测试题(一)一、填空题(每空1分,共20分)2. 在组织培养中,培养基常用__________法灭菌,而其中不耐热的物质用__________法灭菌。
3. 1962年印度Guha等人成功地培养毛叶曼陀罗花药获得_________,这促进了花药和花粉培养的研究。
4. 细胞分裂素/ 生长素浓度的高低决定了外植体的发育方向,比值__________促进根的生长,这时__________占主导地位;比值__________促进芽的生长,这时__________占主导地位5. 病毒植物的鉴定方法有________、________、和________。
6. 花药培养属于________培养,花粉培养属________培养。
7.非洲菊组织培养时,可采用________方式继代培养增殖,而香石竹则采用________________为无性系继代培养增殖。
8.大多数植物组织培养的温度都是在________ 之间进行的,一般采用________ 。
二、选择题(每题2分,共10分)2.下列培养基中_________无机盐的浓度最低。
A MS培养基;B B5培养基;C White培养基;N6培养基3.高温不易被破坏分解的植物生长调节物质是_________。
A IAA;B GA;C NAA;D Zt4.从单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织,大致经历_________三个时期。
A 诱导期;B 潜伏期;C 分化期;D 分裂期5.病毒在植物体中的分布规律为_________A 从茎尖到底部含量越来越多B 从茎尖到底部含量越来越少C 病毒在植株体的分布是均匀的D 茎尖含量最多,底部几乎没有三、名词解释(每题3分,共18分)2. 愈伤组织5. 再分化:四、简答题(每题6分,共30分)1.在植物组织培养中,通过哪些途径可以得到完整的植株?2.为何幼胚比成熟胚培养要求的培养基成分复杂?3. 水稻花药培养方法?4. 比较获取原生质体的两种方法:机械法和酶解法?5. 茎尖培养脱毒的原理?五、问答题(每题11分,共22分)1. 某地区的一种马铃薯经多年的种植后,植株变的矮小,产量和品质都下降,怀疑是由病毒所至。
植物组织培养试题库
传播 27、试管微型薯 28、污染
二、 填空
1、按切除的植物体来源和培养对象的不同可分为
、
、
、
、
。
2、植物组织培养也叫
和
培养。
3、植物组织培养属于
繁殖。
4、裸子植物和单子叶植物的脱分化比
植物困难,成熟组织
比
组织困难,单倍体植物比
植物困难。
5、植物组织培养所需的营养成分主要有
、
、
几
种。
6、植物组织培养所需的营养成分都是以
、
、
五种方法。
、
、
、
34、脱毒苗的检测方法有
、
、
、
、
五种方法。
35、植物根段培养采用
的光照条件,其培养基多采用含无机
盐离子浓度
的培养基。
36、植物器官的培养分
、
两类。
37、植物茎段培养的外植体包括
、
、
在内的幼茎切段。
38、叶器官培养的外植体包括
、
、
、
、
、
。
2
39、植物花器官培养的外植体为
、
、
、
40、植物组织培养包括
A、内源激素---生长素由茎尖生长点产生 B、内源激素---生长素由茎尖生长点下面第一对叶原基产生
C、内源激素---生长素由茎尖生长点下面第二对叶原基产生
6
D、以上都是 37、物理脱毒能使植物病毒( A、全部死亡 B、活性钝化
)。 C、活性增强
38、以下不是植物脱毒方法的为( )
A、生物方法
B、物理方法
植物组织培养复习题
一、 名词解释
1、植物组织培养
2、植物细胞的全能性
植物组织培养试题库(整理)
一、填空题1、植物组织培养成功与否,一方面取决于培养材料本身的性质;另一方面取决于培养基的种类和成分。
2.一个已停止分裂的成熟细胞转变为____分生______状态,并形成___细胞团_______的现象称为"脱分化"。
3植物组织培养技术的三大难题分别为褐变、污染和玻璃化。
4具有防止褐变作用的维生素是_____维生素C____。
5病毒在植物体内的运转方式有短距离运转和长距离运转两种,前者经过胞间连丝向邻近细胞中扩散,速度很慢。
后者通过寄主植物韧皮部的疏导组织随着营养输送进行转移,速度很快。
6、6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向,比值低时促进_____根_____的生长,这时___分化_____占主导地位;比值高促进__苗___的生长,这时__分裂__占主导地位;悬浮培养的材料必须达到悬浮培养物质分散性多、细胞核较小均一性好和生长迅速等三个要求。
7、连续培养是指在培养过程中,以不断抽取用过的培养基并注入新鲜的培养基,使培养不断得到养分补充,保持其稳定状态的培养。
8.培养基的母液一般是配成大量元素,微量元素,维生素和_氨基酸_4类存放备用。
MS培养基中组成大量元素的盐类分别是_硝酸钾_和_硝酸铵_。
9.一般情况下,细胞分裂/生长素的比值高,有利于愈伤组织长_芽_,比值低有利于长_根_。
10.在植物的材料灭菌中,酒精的浓度用70%~75%,处理时间一般在几秒至几十秒范围,是靠_使蛋白质凝固_杀菌的;升汞的浓度一般用1%~2%,处理的时间在5~10min范围,升汞是靠_Hg2+_杀菌的;杀菌剂中的次氯酸钠是靠_ClO-_杀菌的。
11.培养植物适宜的温度大多在_25±2℃_,光照强度在_1000lx_,光照时间在_16h_。
12、进行热处理植物脱毒的温度在__85℃___左右。
13、配制螯合态铁盐需要的成分是__FeSO4·7H2O__和_Na2-EDTA_。
植物组织培养复习题库
总题库园艺植物组织培养-题库1、茎段培养用于快速繁殖的优点在于培养技术简单易行,繁殖速度(较快);芽生芽方式增殖的苗木质量好,且无病,性状均一;解决不能用(种子繁殖)的无性繁殖植物的快速繁殖问题等。
2、生根培养的目的是使再生的大量试管苗形成根系,获得完整的植株。
创造适于根的发生和生长的条件,主要是降低或除去(细胞分裂素)而加入生长素;MS培养基含盐浓度要适当加以(稀释),降低到1/2,1/3或1/4,甚至更低的水平。
3、翻译precocious germination(早熟萌发)4、翻译heterotrophy period(异养期)5、翻译autotrophy period(自养期)6、翻译endosperm culture(胚乳培养)7、翻译fertilization invitro(离体受精)8、翻译test tube fertilization (试管受精)9、翻译intraovarian pollination(子房内授粉)10、离体胚培养包括胚胎发生过程中不同发育期的胚,一般可分为(成熟胚)和幼胚培养。
11、成熟胚一般指(子叶期)后至(发育完全)的胚。
它培养较易成功,在含有无机大量元素和糖的培养基上,就能正常生长成幼苗。
12、幼胚是指(子叶期)以前的幼小胚,由于幼胚培养在(远缘杂交)育种上有极大的利用价值,因此,其研究和应用越来越深入和广泛。
13、幼胚培养,胚胎发育过程分为两个时期:一为(异养期),即幼胚由胚乳及周围的组织提供养分;二为(自养期),此时的胚已能在基本的无机盐和蔗糖培养基上生长。
14、在幼胚培养中,带有(胚柄)结构有利于幼胚的生长。
但一般较难与胚一起分离出来。
使用生长调节物质,如5mg/L(赤霉素)能有效地取代胚柄的作用。
15、根据无菌花粉授于离体雌蕊的位置,可将离体授粉分为三种方式,即离体柱头授粉、(离体子房授粉)和(离体胚珠授粉)。
16、子房内授粉可分为两种类型,即(活体子房内)授粉和(离体子房内)授粉。
植物组织培养试卷及答案4套
《植物组织培养》试题(一)一、填空题(每空1分,共20分,)1、一般培养室控制的温度是________,培养基常选用的pH值是________。
2、在组织培养中,培养基常用____________法灭菌,不耐热物质用_________法灭菌。
3、非洲菊的叶片_______,故没有直立的茎,在组织培养的继代过程中用________法繁殖。
4、1962年,Murashige 和Skoog为培养烟草细胞设计了____培养基,其特点是__________浓度较高,且为较稳定的_______________。
5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织,大致要经历 ______、____和___期。
6、6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向,其比值高时________,比值低时_______________。
7、脱毒苗培养的常用两种方法是_______和__________。
8、菊花在生产实践中常用 _______法繁殖,在组织培养可用______作为外植体进行培养。
9、草莓属于_____科植物,用微尖培养草莓主要使其____,从而提高产量和质量。
二、判断题(每题2分,共10分,)()1、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。
()2、菊花属于球根花卉,而兰花属于宿根花卉。
()3、诱导愈伤组织重新脱分化出各种不同的器官和组织,这个过程称为脱分化。
()4、MS0培养基是没有激素的培养基。
()5、受精卵和体细胞都具有全能性。
三、名词解释(每题2分,共10分)1、细胞全能性2、灭菌3、玻璃化现象4、指示植物5、驯化四、选择题(每题1分,共10分)()1、下列哪种不是原生质体分离所用的酶A 纤维素酶B 半纤维素酶C果胶酶D淀粉酶()2、下列哪种不是组织培养常用的维生素A:维生素B2 、B:维生素B1 、C:维生素B6、 D:维生素C()3、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。
A营养细胞发育途径 B 生殖细胞发育途径C 胚状体发育途径D 花粉均等分裂途径()4、下列哪种激素不属于生长素类①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA()5、在未成熟胚胎培养中下列哪种不常见的生长方式A“胚性”生长B早熟萌发C先胚根后胚芽D先形成愈伤组织再分化()6、适于花粉培养的最佳时期是__A双核期B单核期C多核期D无核期()7、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂A 硫酸镁B 硫酸亚铁C硫酸锌 D 硫酸铜()8、下列哪种不是在MS培养基起作用的有机物A氨基酸 B 肌醇 C 维生素 D 琼脂()9、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基A①②③④B①④③②C①③②④D①④②③()10、和组织培养相似的代名词是A 克隆B有性生殖C孤雌生殖 D 单性生殖五、简答题(共50分)1、6-BA在组织培养中有何作用?(6分)2、述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项?(6分)3、什么叫花粉看护培养法?原理是什么?(6分)4、尖培养脱毒的原理是什么?接种时应注意什么?(6分)5、移栽驯化香石竹时怎样选用基质和搭配基质?(6分)6、接种室有哪些技术要求?(6分)7、用湿热法进行高压灭菌的大致步骤有哪些?(7分)8、怎样用指示植物法鉴定草莓是否含有病毒?(7分)《植物组织培养》试题 (二)一、填空题(每空1分,共20分)1、在分离原生质体酶溶液内,需加入一定_____稳定剂,其作用是_______________。
植物组织培养复习题(参考)
一、填空题2、植物组织培养中人工控制的环境条件是指、、、等条件的人工控制,满足植物材料在离体条件下正常生长和发育。
5、用作植物组织培养的有效并常用的植物组织有:、、、等。
6、在植物组织培养中,有效并常用的胚胎培养材料有:、、、等。
7、在作植物组织培养中,有效并常用的细胞培养材料有:、、、等。
8、目前,植物组织培养的研究成果主要应用于、、、、及。
9、植物组织培养技术体系包括、、、、等。
12、对培养基的灭菌通常采用和两种灭菌方式。
13、培养基中的无机盐类可分为和。
15、培养基中添加氨基酸不仅能为培养物提供有机氮源,同时还对和、的分化起促进作用。
16、培养基中添加细胞分裂素,其目的是促进,诱导、以及的产生。
18、天然有机物质通常富含或,因此在培养基中添加天然有机物质能显著改善培养材料的生长。
21、离体培养的外植体细胞要实现其全能性,首先要经历过程使其恢复分生状态,然后进行。
22、根的培养材料一般来自或。
离体根培养的方式有:、、 3种类型。
25、植物种子培养是指对或种子进行离体培养的技术。
26、植物分生组织培养是指对植物的分生组织进行离体培养技术,包括植物、等顶端分生组织或组织的培养,其中以培养的研究最为深入。
27、植物细胞培养是指对植物器官或愈伤组织上分离出的或进行培养,形成或的技术。
28、茎尖培养广泛用在、以及等生产与理论研究。
29、人工种子包括、和 3个部分。
30、植物营养繁殖的方法有、、、等。
31、植物组织培养按培养材料不同可分为、、、和。
32、原生质体培养分为和。
33、利用芽、茎段、叶片、花器等外植体,在离体培养条件下可诱导出、或、。
二、名词解3、愈伤组织:4、胚胎培养:5、细胞培养:6、人工种子:7、细胞分化:8、脱分化:9、植物花器官培养:10、植物分生组织培养:11、植物愈伤组织培养:12、植物细胞培养:二、选择3、培养基中添加氮元素通常是和两种。
A、尿素B、硝酸铵C、氨水D、硝酸钾5、培养基中添加的氨基酸时,通常的用量是。
(完整版)植物组织培养试题及答案总结
《绪论》复习题及参考答案一、填空:★1、根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养、悬浮培养等类型。
2、植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和应用阶段。
3、1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年,White出版了《植物组织培养手册》从而使植物组织培养为一门新兴学科。
二、名词解释:★1、植物组织培养(plant tissue culture):是指通过无菌和人工控制的环境条件下,利用适当的培养基,对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养,使其再生细胞或完整植株的技术。
由于培养材料已脱离了母体,又称为植物离体培养(Plant culture in vitro)。
2、脱分化(dedifferentiation):由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化。
3、再分化(redifferentiation):脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官,这一过程称为植物细胞的再分化。
★4、外植体(explant):由活体(in vivo)植物体上切取下来的,用于组织培养的各种接种材料。
包括各种器官、组织、细胞或原生质体等★5、愈伤组织(callus):原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞,在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则的薄壁细胞,多在植物体切面上产生。
三、问答题:1、简述植物组织培养的理论依据?植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说,即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组,并具有发育成为完整植株的潜在能力。
★2、植物组织培养有哪些特点?(1)培养条件可以人为控制(2)生长周期短,繁殖率高:(3)管理方便,利于工厂化生产和自动化控制:★3、植物组织培养的分类?(1)根据培养对象不同:组织培养、器官培养、胚胎培养、细胞培养、原生质体培养等;(2)根据培养物培养过程:初代培养、继代培养;(3)根据培养基的物理状态:固体培养、液体培养。
园林植物组织培养题库及答案
园林植物组织培养题库及答案植物组织培养试题一、名词解释(每题2分,共30分)1、细胞全能性:2、外植体:3、植物组织培养:4、脱分化:5、再分化:6、愈伤组织:7、玻璃化”现象8、初代培养基:9、继代培养:10、液体培养:11、母液:12、热处理脱毒:13、指示植物:14、器官培养:15、原生质体:二、填空题(每空1分,共65分)1、6-BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向,比值低时促进__________的生长,这时__________占主导地位;比值高促进__________的生长,这时__________占主导地位。
2、用次氯酸钠灭菌时应用无菌水冲洗_____次,用氯化汞灭菌应冲洗______次以上。
3、固体培养基熬制的主要目的是让溶解。
4、外植体的消毒流程一般是先用消毒10--30秒,再用__________消毒5—15分钟,然后用无菌水冲洗5次以上或用__________消毒5--30分钟,然后用无菌水冲洗3次。
5、组织培养中有三大不易解决的问题,它们分别是__________、__________、__________。
6、某培养基为MS+BA2mg/l+NAA0.2mg/l,问:如果做2升,应加激素的毫升数为BA__________,NAA__________。
(BA母液为0.5mg/ml,NAA为0.5mg/ml)。
7、生根培养基常用的生长素为,,8、培养用具的常用灭菌方法有、、9、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定,对其灭菌时不能进行,而要进行10、污染的原因从病源菌上分析主要有两大类、11、进行植物组织培养时,外植体可以是、、、12、在培养基中添加活性炭的目的主要是利用其,减少一些有害物质的影响。
13、根据培养物的培养过程,培养基可以分为和14、配制培养基时,常用和调节pH。
大多数植物要求的pH范围在15、在配制培养基时,可以在培养基中添加,利用其吸附能力,可以降低褐变的发生,但它对物质的吸附16、培养基的种类按其态相不同分为与,其灭菌方法一般采用17、pH的大小会影响琼脂的凝固能力,一般当pH大于6.0时,培养基将会,低于5.0时,琼脂18、植物组织培养按培养的方式分为_______培养和_______培养。
植物组织培养复习题答案
植物组织培养复习题答案1. 植物组织培养的定义是什么?答:植物组织培养是一种生物技术,它涉及将植物的一小部分组织(如细胞、组织或器官)在无菌和人工控制的条件下进行培养,以促进其生长和分化,最终形成完整的植物体。
2. 植物组织培养有哪些基本类型?答:植物组织培养的基本类型包括细胞培养、组织培养、器官培养和胚胎培养。
3. 植物组织培养的基本原理是什么?答:植物组织培养的基本原理是细胞的全能性,即植物细胞在适当的营养和激素条件下,能够分化成各种类型的细胞,并最终发育成完整的植物体。
4. 植物组织培养中常用的培养基有哪些?答:植物组织培养中常用的培养基包括MS培养基、B5培养基、White培养基等,它们通常包含无机盐、有机物、植物生长调节剂、维生素和氨基酸等成分。
5. 植物组织培养过程中需要控制哪些环境因素?答:植物组织培养过程中需要控制的环境因素包括温度、光照、湿度、pH值和无菌条件。
6. 植物组织培养有哪些应用?答:植物组织培养的应用包括快速繁殖、作物改良、细胞产物的生产、遗传转化和植物保护等。
7. 植物组织培养中常用的植物生长调节剂有哪些?答:植物组织培养中常用的植物生长调节剂包括生长素(如IAA、IBA 等)、细胞分裂素(如BA、KT等)和赤霉素(如GA3等)。
8. 植物组织培养中如何进行无菌操作?答:植物组织培养中进行无菌操作需要在无菌室或超净工作台中进行,使用无菌工具和材料,操作人员需穿戴无菌服装,并且经常进行手部消毒。
9. 植物组织培养过程中如何进行外植体的选择和处理?答:植物组织培养过程中外植体的选择和处理包括选择健康、无病虫害的植物材料,进行消毒处理,然后根据实验目的选择合适的外植体类型,如叶片、茎段或根尖等。
10. 植物组织培养中如何进行继代培养?答:植物组织培养中进行继代培养需要将已经生长的外植体转移到新的培养基上,以促进其进一步生长和分化。
这个过程可能需要根据培养目的调整培养基的组成和激素水平。
2024-2025植物组织培养高考题汇编(含详解)
1.(2024广东卷)(16分)铁皮石斛是我国珍贵中药,生物碱是其有效成分之一,应用组织培育技术培育铁皮石斛拟原球茎(简称PLBs,类似愈伤组织)生产生物碱的试验流程如下:在固体培育基上,PLBs的重量、生物碱含量随增殖培育时间的改变如图17所示,请回答下列问题:⑴选用新生养分芽为外植体的缘由是,诱导外植体形成PLBs的过程称。
⑵与黑暗条件下相比,PLBs在光照条件下生长的优势体现在,,。
⑶脱落酸(ABA)能提高生物碱含量,但会抑制PLBs的生长。
若采纳液体培育,推想添加适量的ABA可提高生物碱产量。
同学们拟开展探究试验验证该推想,在设计试验方案是探讨了以下问题:①ABA的浓度梯度设置和添加方式:设4个ABA处理组,1个空白比照组,3次重复。
因ABA受热易分解,故肯定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培育基后按比例加入。
②试验进程和取样:试验50天完成,每10天取样,将样品(PLBs)称重(g/瓶)后再测定生物碱含量。
如初始(第0天)数据已知,试验过程中还需测定的样品数为。
③依所测定数据确定相宜的ABA浓度和培育时间:当某3个样品(重复样)的时,其对应的ABA浓度为相宜浓度,对应的培育时间是相宜培育时间。
【答案】(1)细胞分化程度低,简单诱导形成PLBs(2分);细胞的脱分化(2分)(2)生长起始快(2分),快速生长时间较长(2分);PLBs产量较高(2分);(3)①灭菌、冷却(2分);②75(2分);③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大(3分)【解析】(1)新生养分芽分裂实力强,全能性简单表达;依据题干可知,PLBs类似愈伤组织,外植体形成愈伤组织的过程是脱分化。
(2)据图分析,光照下PLBs的重量高于黑暗条件下,缘由可能是光照有利于细胞增殖、叶绿体的形成和进行光合作用制造有机物。
(3)①由于ABA受热易分解,所以各种液体培育基灭菌后,冷却,再加入不同浓度的ABA ②依据题干可知,试验50天完成,每10天取样,须要取样5次,4个ABA处理组,1个空白比照组,3次重复,因此每次取样须要记录15个样品中的数据,共须要测定样品数75 ③适量的ABA可提高生物碱产量,当样品的平均值最大时,所对应的ABA浓度和时间为最适。
植物组织培养复习资料付答案(仅供参考)
植物组织培养复习材料一、名词解释。
1、植物组织培养(plant tissue culture):植物的离体器官、组织或细胞在人工制备的培养基上进行无菌培养,并在人工控制的环境条件下,使其发育成完整植株的科学技术2、脱分化(dedifferentiation):指失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂,形成无分化的细胞即愈伤组织的现象。
3、再分化(redifferentiation):愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。
4、外植体(explant):植物组织培养过程中从活体植株上切去下来的用于离体培养的一切材料。
(如器官、组织、细胞、原生质体、种子等)5、愈伤组织(callus):原本指植物在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。
在组培中,则指人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。
6、器官发生:胚胎时期由胚层器官原基发育成器官的过程。
包括细胞分化和器官形成。
7、胚状体发生:在植物细胞、组织或器官体外培养过程中,由一个或一些体细胞经过胚胎发生和发育过程,形成的与合子胚相类似的结构。
可进一步发育成植株。
8、细胞全能性(cell totipotency):指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组,并具有发育成完整植株的潜在能力。
9、细胞分化:一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。
10、极性:细胞(也可指器官或植株)内的一端与另一端在形态结构和生理生化上的差异。
11、试管苗:通过组织培养产生的植株。
12、看护培养:是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞,使其持续分裂和增殖的一种培养方法。
这块愈伤组织被称为看护组织。
13、固相化培养:将细胞或原生质体固着在琼脂糖、藻(月元)酸盐或多聚赖氨酸中,然后将他们放入液体培养基中震荡培养。
这种培养方法既利用了振荡培养室营养物质和气体易于交换的优点,有利用了固相化使细胞免受振荡时剪切力的作用。
14、悬浮细胞培养:将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增值的技术。
植物组织培养复习题
植物组织培养复习题(习题)一、名词解释愈伤组织:在培养基上由培养物产生的无序生长且没有一定结构的薄壁细胞团。
外植体:在组织培养中,由植物体上取下来进行离体培养的那部分组织或器官.脱分化:由高度分化的植物器官,组织或细胞经过离体培养,产生愈伤组织的过程。
半连续培养:利用培养罐进行大量细胞培养的一种方式。
无性系变异:由任何形式的细胞培养所产生的植株所表现出来的差异。
胚状体:在离体植物细胞、组织或器官培养过程中,由一个或一些体细胞,经过胚胎发生和发育过程,形成的与合子胚相类似的结构。
看护培养:用同种或异种材料的愈伤组织作为看护组织培养细胞的一种方法。
无融合生殖:由配囊中卵细胞以外的其他细胞发育成的单倍体植株。
种质:亲代通过生殖细胞活体细胞直接传递给子代并决定固有生物性状的遗传物质。
悬浮培养:将游离的植物单细胞或小细胞团,按一定的细胞密度在受到不断拉动或摇动的液体培养基中进行培养的一种方式。
早熟萌发:在培养后迅速萌发为幼苗,不继续进行胚状生长,超过正常发育阶段。
选择压:在2个相对性状之间,一个性状被选择而生存下来的优势。
细胞全能性:任何有完整细胞核的植物细胞具有全部的遗传信息,在一定条件下,均具有分化,发育成完整植株的潜在能力。
条件培养基:在培养集中加入高密度的细胞进行培养,经过一段时间后,这些细胞向培养基中分泌一些促进细胞生长的活性物质,使培养基条件化,使原来在合成培养基上不能分裂的细胞发生分裂。
离体授粉:将未授粉的胚珠,子房或柱头从母体上分离下来,进行无菌培养,并通过一定的方式授给无菌花粉,使其在试管内实现受精的技术。
同步化培养:培养基中大多数细胞都能同时通过细胞周期的各个阶段。
植板率:(每个平板上形成的细胞团数/ 每个平板上接种的细胞总数) * 100%、继代培养:对来自于外植体所增殖的培养物通过更换新鲜培养基及不断切割分离进行的连续多代的培养。
无性系:由任何形式的细胞培养所产生的植株。
细胞融合:在自发或人工诱导下,两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。
植物组织培养习题
植物组织培养习题《概述》复习题一、名词解释:1、植物组织培养;2、脱分化;3、再分化;4、外植体;5、愈伤组织;6、器官发生;7、胚状体发生;8、细胞全能性二、问答题:1、简述植物组织培养的理论依据?2、植物组织培养有哪些特点?3、培养基的种类?4、植物组织培养主要应用于哪些方面?第1章《植物组织培养实验室的构建和操作技术》复习题一、填空:1、组织培养实验室必要的设备有。
2、培养基成分主要包括。
3、培养基最常用的碳源是,使用浓度在1%-5% 常用。
4、诱导胚状体比诱导芽的优点:、、。
5、试管苗的生态环境:、、、。
6、培养基中加入活性炭的目的:。
二、名词解释1、MS培养基;2、母液;3、褐变;4、玻璃化现象;5、消毒;6、灭菌;7、接种。
三、问答题一般组织培养的操作工序。
MS培养基的成分?论述植物生长调节物质在组织培养中的作用?并列举常见的种类在培养基中加入活性炭有什么作用?植物组织培养技术主要包括哪些环节?各环节的主要工作内容?如何配制组织培养用的培养基?组织培养中常用的灭菌方法?植物发生褐变的原因器官发生途径,植物重建的三种形式第2章《愈伤组织培养》复习题一、填空:1、绝大多数培养植物再生植株时都先经过阶段。
2、愈伤组织形成大致经历、和三个时期。
3、使用植物生长调节物质时要注意:和。
4、愈伤组织的形态发生方式主要有和方式。
二、名词解释:1、愈伤组织培养;2、继代培养;3、形态建成;4、体细胞胚;玻璃化褐变三、问答题愈伤组织的形态发生有哪些情况?胚状体特点?胚状体发生途径与器官发生途径形成植株的区别什么是体细胞胚?胚状体发生方式与不定芽发生方式相比有哪些特点?第3章《器官培养》复习题一、填空:1、植物器官培养主要是指的无菌培养。
2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为和两种类型。
前者主要是对茎尖进行培养,目的是;后者是对培养,目的是。
4、不定芽产生的途径:一是从上直接产生;二是从上产生。
5、离体叶培养是指包括等叶组织的无菌培养。
植物组织培养复习题(标准)
植物组织培养复习题一、填空题:1.植物脱病毒一般采用茎尖培养脱毒和热处理两种方法。
2.最典型的培养基是1962年发表的的一种适合于烟草愈伤组织快速生长的改良培养基,该培养基后来被称为MS培养基,现已广泛用于植物组织培养。
3.胚状体发育顺次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期。
4.具有防止褐变作用的维生素是Vc。
5.植物组织培养按培养对象分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养等几种类型。
6.在通过微茎尖培养脱毒时,外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定,一般以0.3~0.5mm、带1~3个叶原基为好。
7.对植物组织培养的培养基灭菌时,一般情况采用的条件是121温度,保持时间是15~20分钟。
8.在幼胚培养基中,蔗糖的主要作用是维持渗透压、提供碳源和能源和防止幼胚早熟萌发。
9.植物组织培养中,微量元素铁的用量较大,由于在较高pH下,易形成Fe(OH)3沉淀,难以被吸收,所以多用硫酸亚铁(FeSO4·7H20)和乙二胺四乙酸(Na2-EDTA)形成的螯合物,并且单独配制。
10.种质保存大致分为原地保存和异地保寸两种方式。
11.外植体选择的原则是:选择优良的种质、选择健壮的植株、选择最适时期、选取适宜的大小。
12.细胞悬浮培养的方法有成批培养和连续培养等。
13.植物原生质体分离的方法有酶解法和机械法。
14.植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数。
15.花粉分离的方法有挤压法、磁搅拌法、漂浮释放法。
16.植物组织培养发展可分为三个时期:萌芽阶段、奠基阶段、快速发展和应用阶段。
17.一个年产4-20万株苗的商业性组织培养实验室,其总面积不应少于60平方米,可划分为准备室、缓冲室、无菌操作室和培养室。
18.盐酸硫胺素VB1是脱羧酶辅酶,吡哆醛VB6是转氨酶辅酶。
19.愈伤组织形成大致经历三个时期,即:诱导期、分裂期、分化期。
20.茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为茎尖分生组织组织培养和普通茎尖培养两种类型。
植物组织培养试题
植物组织培养试题一、名词解释:(每小题3分,共15分)1、初代培养基2、脱分化3、液体培养4、细胞全能性5.再分化二、填空(每空1分,共40分)1、植物组织培养过程中,最常用的培养基是,培养基的pH因外植体的来源不同而异,常用和调节pH,大多数植物的pH要求调节在范围内。
2、可以通过、、、、等措施预防褐变的发生。
3、植物组织培养时,外植体可以是、、、。
4、应用微尖嫁接技术进行脱毒培养无病毒苗,主要程序为→→→→。
5、组织培养植株的再生途径有两条:一是发生,另一是发生。
6、在配制培养基时,可以在培养基中添加,利用其吸附能力,可以降低褐变的发生,但它对物质的吸附。
7、培养基的灭菌要求压力为、温度为、维持时间为。
8、组织培养中常用的生长素有吲哆乙酸(IAA),2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),吲哆丁酸(IBA),萘乙酸(NAA),它们的作用强弱顺序为> > > 。
9、茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段,即、、、、。
10、茎尖分生组织培养的目的主要是,其茎尖一般取毫米。
为了使脱毒效果更好,可以将茎尖分生组织培养与结合起来。
脱毒处理的试管苗,在用于生产之前,必须进行。
11、污染的原因从病源菌上分析主要有两大类、。
三、判断正误,并改错。
(每小题2分,共20分)1、一般将微量元素母液均配制成10倍,在配制培养基时,使用量为10ml/L。
细胞分裂素/生长素的比值较高时,有利于愈伤组织的诱导。
2、对于金边虎尾兰等遗传学上的嵌合体植物,要是组织培养繁殖的植株保持原有的园艺价值,只能通过叶培养。
3、植物生长调节物质使用不当时,材料也容易褐变,生长素有刺激多酚氧化酶活性提高的作用。
4、利用茎尖分生组织进行脱毒培养时,茎尖外植体大小与脱毒效果成正比。
5、某些植物通过愈伤组织培养可以获得无病毒苗。
6、无病毒植株不具有抗病毒的能力,而且在清除病毒之后,体内营养和生理状况发生改变,因而对其他病毒和病原体的侵染更为敏感,因此在种植脱毒苗的一定要隔离种植。
《植物组织培养》综合复习题
植物组织培养综合测试题一、填空题(每空0.5分)1. 植物组织培养按培养对象分为_______、_________、_________、__________、__________等几种类型.2. 在分离原生质体的酶溶液内,需要加入一定量的_______其作用是保持原生质体膜的稳定,避免破裂.3. 1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物_______的理论概念;1943年White提出植物细胞“_________”学说,并出版了《植物组织培养手册》,从而使植物组织培养成为一门新兴的学科。
4. 用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_________℃的温度范围内,而若用它高温干燥灭菌则需在_________℃的温度下1-3小时;烘干植物材料的温度是_________℃.5. 细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的__________和__________的能力。
6. 1962年,Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了__________培养基,其特点是__________浓度较高,且为较稳定的__________。
7. 7.6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向,比值低时促进__________的生长,这时__________占主导地位;比值高促进__________的生长,这时__________占主导地位.8. 植物组织培养按培养的方式分为_______培养和_______培养.9. 组织培养的特点是:_______、_______、_______.10. 1962年印度Guha等人成功地培养毛叶曼陀罗花药获得_________,这促进了花药和花粉培养的研究。
11. 在组织培养中,不耐热的物质用__________法灭菌,而培养基常用__________法灭菌.12. 6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向,比值__________促进根的生长,这时__________占主导地位;比值__________促进芽的生长,这时__________占主导地位。
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植物组织培养综合测试题一、填空题(每空0.5分)1. 植物组织培养按培养对象分为_______、_________、_________、__________、__________等几种类型.2. 在分离原生质体的酶溶液,需要加入一定量的_______其作用是保持原生质体膜的稳定,避免破裂.3. 1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物_______的理论概念;1943年White提出植物细胞“_________”学说,并出版了《植物组织培养手册》,从而使植物组织培养成为一门新兴的学科。
4. 用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_________℃的温度围,而若用它高温干燥灭菌则需在_________℃的温度下1-3小时;烘干植物材料的温度是_________℃.5. 细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的__________和__________的能力。
6. 1962年,Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了__________培养基,其特点是__________浓度较高,且为较稳定的__________。
7. 7.6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向,比值低时促进__________的生长,这时__________占主导地位;比值高促进__________的生长,这时__________占主导地位.8. 植物组织培养按培养的方式分为_______培养和_______培养.9. 组织培养的特点是:_______、_______、_______.10. 1962年印度Guha等人成功地培养毛叶曼陀罗花药获得_________,这促进了花药和花粉培养的研究。
11. 在组织培养中,不耐热的物质用__________法灭菌,而培养基常用__________法灭菌.12. 6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向,比值__________促进根的生长,这时__________占主导地位;比值__________促进芽的生长,这时__________占主导地位。
13. 在组织培养中,非洲菊是靠__________的方式进行繁殖的,而蝴蝶兰是以__________的方式进行快繁的。
14. 一个已停止分裂的成熟细胞转变为__________状态,并形成__________的现象称为"脱分化"。
15. 在通过微茎尖培养脱毒时,外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定,一般以__________mm、带__________个叶原基为好。
16. 原生质体的分离有__________和__________两种方法.17. 进行植物组织培养最基本的前提条件是_______。
18. 植物组织培养按培养过程中是否需要光,可分为_______培养和_______培养。
19. 在组织培养中,不耐热的物质用__________法灭菌,而培养基常用__________法灭菌。
20. 组织培养中有三大不易解决的问题,它们分别是__________、__________、__________。
21. White培养基__________浓度低,适合生根培养。
22. 在无毒苗的组织培养中,外植体的大小与其成活率成__________,而与脱毒效果成__________。
23. 一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态,并形成未分化的愈伤组织的现象称为"__________"。
24. 原生质体的分离有__________和__________两种方法。
25. 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为__________培养和__________培养两种类型。
26. 在组织培养中,非洲菊是靠__________的方式进行繁殖的,而蝴蝶兰是以__________的方式进行快繁的。
27. 愈伤组织的形态发生有__________和__________两种情况。
28. 植物组织培养按培养的方式分为_______培养和_______培养。
29. 1960年,英国学者Cocking用_________分离原生质体成功,从而创新原生质体的培养技术。
30. 大多数植物组织培养的适宜温度围是_______℃,培养基的PH值围是_______.31.用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_________℃的温度围,而若用它高温干燥灭菌则需在_________℃的温度下1~3小时;烘干植物材料的温度是_________℃。
32. 在组织培养中,ZT和GA必须用__________法灭菌,而接种室空间采用__________或__________法灭菌.33. 不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样,次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生__________来杀菌的;升汞是靠__________来达到灭菌目的。
34. 幼胚培养时,其发育过程有__________、__________、__________三种方式。
35. 植物的胚胎培养,包括__________培养、__________培养、__________培养、____________________培养以及子房的培养.36. 不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生__________来杀菌的;升汞是靠__________来达到灭菌目的。
38. 一个已停止分裂的成熟细胞转变为__________状态,并形成__________的现象称为"脱分化".39. 由胚乳培养可以获得_______倍体植株,经秋水仙素处理可以获得_______倍体植株.40. 去除植物病毒的主要方法是_______和_______两种方法,当把二者结合起来脱毒效果最好.41. 花药培养是_______培养,花粉培养属于_______培养,但二者的培养目的一样,都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞,最后发育成_______.42. 进行植物组织培养最基本的前提条件是_______。
43. 原生质体的融合可实现_______的杂交,其融合的方式分为_______和_______两类.44. 不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生__________来杀菌的;升汞是靠__________来达到灭菌目的。
45. 植物组织培养按培养对象分为_______、_________、_________、__________、__________等几种类型。
46. 一个已停止分裂的成熟细胞转变为__________状态,并形成__________的现象称为"脱分化"。
47. 由胚乳培养可以获得_______倍体植株,经秋水仙素处理可以获得_______倍体植株。
48. 去除植物病毒的主要方法是_______和_______两种方法,当把二者结合起来脱毒效果最好。
49. 花药培养是_______培养,花粉培养属于_______培养,但二者的培养目的一样,都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞,最后发育成_______。
50. 进行植物组织培养最基本的前提条件是_______。
51. 植物的胚胎培养,包括__________培养、__________培养、__________培养、____________________培养以及子房的培养。
二、不定选择题(每小题2分)1. 培养室里的湿度一般保持在_________.A 30~40%;B 50~60%;C 70~80%;D 80~90%2. 下列不属于生长素类的植物激素是_________。
A Kt;B IAA;C NAA;D ZT3. 影响培养基凝固程度因素有_________.A 琼脂的质量好坏;B 高压灭菌的时间;C 高压灭菌的温度;D 培养基的PH4. .活性炭在组织培养中的作用有_________。
A吸附有毒物质;B减少褐变,防止玻璃化;C创造黑暗环境,增加培养基的通透性,利于根的生长;D增加培养基中的养分;5. 下列具有细胞全能性的细胞是:_________。
A 成熟的老细胞;B 幼嫩的组织细胞;C 愈伤组织细胞D 番茄的受精合子6.第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_________:.A□Morel;B Haberland;C□Schleiden;D□White7.下列培养基中_________无机盐的浓度最低。
A MS培养基;B B5培养基;C White培养基;N6培养基8.高温易被破坏分解的植物激素是_________。
A IAA;B GA;C NAA;D Zt9.从单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织,大致经历_________三个时期。
A 诱导期;B 潜伏期;C 分化期;D 分裂期10.下列不属于活性炭在组织培养中作用的是_________.A吸附有毒物质;B减少褐变,防止玻璃化;C创造黑暗环境,增加培养基的通透性,利于根的生长;D增加培养基中的养分;11. 下列不属于细胞分裂素类的植物激素是_________。
A 6-BA;B NAA;C Zt;D Kt12.植物组织培养的特点是_________:A培养条件可人为控制;B生长周期短,繁殖率高;C管理方便;D产量大13.影响培养基凝固程度因素有_________.A 琼脂的质量好坏;B 高压灭菌的时间;C 高压灭菌的温度;D 培养基的PH14..下列不属于大量元素的盐是_________。
A NH4NO3;B KNO3;C ZnSO4.7H2O;D MgSO4.7H2O15.下面属于处于愈伤组织分裂期的特征是_________。
A 细胞分裂加快B 正在分裂的细胞体积小,无液泡C 细胞的核和核仁增至最大D 细胞中的RNA含量减少,16.在原生质体的培养中,渗透稳定剂的作用是:A 稳定原生质体的形态而不使其被破坏B 支持作用C 提供营养D 调节PH值17.能打破种子休眠,促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发的激素是:A GA;B IAA;C NAA;D Zt3.下列实验中可能获得单倍体植株的是_________。
A 小麦的茎尖培养;B番茄花药培养;C玉米胚乳培养;D玉米花粉培养18.在组培条件下,花粉的发育大致有下列几种途径:A营养细胞发育途径B生殖细胞发育途径C营养细胞和生殖细胞同时发育途径D花粉的均等分裂19.同一植株下列_________部位病毒的含量最低.A 叶片细胞;B 茎尖生长点细胞;C 茎节细胞;D 根尖生长点细胞20. 第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_________:.A Morel;B Haberland;C Schleiden;D White21.脱落酸(ABA)需要用_________法灭菌。