医学培训资料—丝状真菌的鉴定

丝状真菌的鉴定

北京大学第一医院皮肤科

主讲人：余进

⏹北京大学第一医院

⏹教授、博士生导师

⏹中国微生物学会临床微生物学委

员会青年委员会副主任委员及真

菌学组副组长

⏹中国微生物学会医学微生物学与

免疫学专委会真菌学组副组长余进

主任医师

01

0504 02

03

目录

丝状真菌形态鉴定

丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定丝状真菌DNA测序鉴定

常见丝状真菌鉴定

总结

丝状真菌形态鉴定01

⏹培养基、培养时间、温度

⏹菌落：平皿培养

颜色：正面、背面、产色素

质地：粉末状、颗粒状、羊毛样、天鹅绒样、棉毛样、绒毛样等 生长：限制性生长、扩展性生长

双相真菌

⏹菌丝

有隔菌丝、无隔菌丝、透明菌丝、暗色菌丝

螺旋菌丝、结节状菌丝、鹿角样菌丝

⏹孢子

无性期孢子：大分生孢子、小分生孢子、关节孢子、孢囊孢子、厚壁孢子

有性期孢子：子囊孢子、接合孢子

⏹孢子发生

产孢结构、孢子排列

如何观察显微镜下形态

⏹选择易于产孢的培养基：皮肤癣菌（SDA或OA）、子囊菌（OA)、其他真菌（PDA）

⏹制作可供观察的玻片

挑片法

胶带法

小培养法

⏹染色：乳酸酚棉兰染色

丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定02

直接转移法

甲酸提取法—推荐

⏹数据库

商业数据库

补充数据库

⏹其他影响因素

黑色素抑制

沙氏葡萄糖液体培养基旋转培养

使用布鲁克丝状真菌库

v1.0

联合布鲁克和BMU数据库鉴定得分≥2.0≥1.7＜1.7错误≥2.0≥1.7＜1.7错误

数量及

百分比(%)

55

(49.5)

67

(60.4)

37

(33.3)

7

(6.3)

90

(81.1)

104

(93.7)

(0)

7

(6.3)

111株毛霉：根霉属(48)，毛霉属(41)，横梗霉属(11)，根毛霉属(4)，小

克银汉霉属(5)，共头霉属(2)

Shao J, Wan Z, Li R, Yu J. J Clin Microbiol. 2018, 26;56(4): e01886-17.

MALDI-TOF MS-

毛霉目真菌的鉴定

03

丝状真菌DNA测序鉴定

核糖体基因SSU 5.8S ITS2LSU ITS1D1/D2IGS2IGS1

5S -通用基因-不编码蛋白质，无进化压力，相对保守

-多拷贝-无基因家族-具有可变区和保守区

•rRNA(rDNA)gene -Small Subunit (SSU) rDNA (18S)-Large Subunit (LSU) rDNA (26S, 28S)-Internal Transcribed Spacer (ITS)-Intergenic Spacer (IGS)

常选用的目的基因

多基因（位点）分析

⏹ITS

⏹18s or 28srDNA D1/D2

⏹β-tubulin (β-TUB)

⏹elongation factor (EF-1α)

⏹calmodulin ( CAL)

⏹RNA polymerase II second largest subunit (RPB2)⏹actin

⏹IGS

数据库

•GenBank(hppt://)

•European Molecular Biology Laoratory nucleotide sequence database

( hppt:///embl/)•Centraalbureau voor Schimmelcultures

(hppt://www.cbs.knaw.nl)

常见丝状真菌鉴定04

曲霉-直接镜检

曲霉-分生孢子头

分生孢子

瓶梗

顶囊

分生孢子柄

足细胞

梗基

烟曲霉Aspergillus fumigatus