葡萄糖-6-磷酸脱氢酶检测试剂盒(简易比色法)
牛葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)elisa试剂盒说明书
牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒说明书牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒说明书elisa试剂盒常见组成部分：1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶为HRP和ALP。
2）抗体：在ELISA中应用的抗体可分为多克隆抗体(多抗)和单克隆抗体(单抗)。
3）抗原：在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。
主要有三类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。
4 人E选择素(ESelectin/CD62E)检测试剂盒包被：将免疫活性物质(抗原或抗体)结合于固相载体上的过程称为包被。
常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素生物素间接包被法5）固相载体：固相载体是ELISA中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段，应与各种免疫活性物质有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。
常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。
牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒样本实验前准备：ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清室温血液自然凝固1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：用无菌管收集。
离心20分钟左右（20003000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（20003000转/分）。
仔细收集上清。
（5）培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.27.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变检测国家参考品的建立
M. λDNA/HindⅢ Marker 1. 兔睾丸（rabbit testis） 2. 小鼠睾丸（micetestis） 3. 大鼠睾丸（rat testis） 4. 貂睾丸（mink testis） 5. 狗睾丸（dog testis） 6. 羊睾丸（sheep testis） 7. 猪睾丸（pig testis）图1 基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图Fig. 1 Genomic DNA agarose gel electrophoresis2.2 基因组DNA的浓度与纯度基因组DNA经 3 次平均测定，A260 /A280值均在1.7~1.9之间，浓度在 100~400 ng·μL-1之间（表2）。
药物分析杂志ChineseM. 100 bp DNA Ladder 1. 阳性对照品（positive control） 2. 兔睾丸（鲜）［rabbit testis （fresh）］ 3. 兔睾丸（干）［rabbit testis （dry）］ 4. 小鼠睾丸（mice testis） 5. 大鼠睾丸（rat testis） 6. 貂睾丸（mink testis）7. 狗睾丸（dog testis） 8. 羊睾丸（sheep testis） 9. 猪睾丸（pig testis）10.空白对照（blank control） 退火温度（annealing temperature）：A. 58 ℃ B. 59 ℃ C. 60 ℃图2 兔睾丸 DNA PCR 特异性扩增图谱Fig. 2 PCR specific amplification map of rabbit testis DNA2.4 克隆结果及序列比对结果经过分子克隆蓝-白斑筛选，可见氨苄阴性平皿长满了细菌，氨苄阳性平皿出现蓝-白菌落（图3）。
挑取白色菌落培养后，提取质粒 DNA，在 59 ℃的退火温度下进行 PCR 扩增，琼脂糖凝胶电泳结果显示，克隆鉴定结果与预期目的条带位置一致，在 326 bp 出现1条特异性 兔睾丸 DNA 分子克隆蓝—白斑筛选图Fig. 3 Rabbit testis DNA molecular cloning blue-white spot screeningM. 100 bp DNA Ladder 1. 兔睾丸阳性对照品克隆（rabbit testis positive control clone） 2、3. 兔睾丸克隆（rabbit testis clone） 兔睾丸质粒 DNA PCR 扩增图谱Fig. 4 PCR amplification map of rabbit testis plasmid DNA图5 克隆目的基因序列与靶基因序列 BLAST 结果Fig. 5 Cloning of the target gene sequence and target gene sequence BLASTJournal of Pharmaceutical Analysis 药物分析杂志ChineseM、1~10. 同图 2（same as Fig. 2）图 6 引物特异性电泳结果Fig. 6 Primer-specific electrophoresis results2.5.2 稳定性 随机抽取1盒试剂盒，将其放入-20 ℃冰箱中冷冻，取出融化；如此反复冻融5、10、15、20次，在 59 ℃的退火温度下进行 PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳结果显示，兔睾丸阳性对照品和正品兔睾丸均在 326 bp 处出现1条特异性扩增条带，空白对照未出现扩增条带，结果稳定（图 7）。
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明
葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒使用说明分光光度法货号：BC0930规格：50管/48样产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体47.5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；试剂四：液体×1支，-20℃保存；产品说明：葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本的前处理：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周；2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。
3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC2100规格:50T/48S产品内容：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。
；产品说明：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。
此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤：一、样本的处理称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。
二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。
3.加样表：在比色皿中依次加入试剂名称（μL）测定管（μL）空白管（μL）样本100-蒸馏水-100试剂一700700试剂二100100试剂三100100于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。
记△A测定=A2测定-A1测定，△A空白=A2空白-A1空白。
三、6PGDH活性计算：1）按蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg pr）。
6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T=536×(△A测定-△A空白)÷Cpr（2）按样本鲜重计算活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg prot）。
115462例新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查及基因突变分析
·115JOURNAL OF RARE AND UNCOMMON DISEASES, FEB. 2024,Vol.31, No.2, Total No.175【第一作者】张禾璇，女，副主任技师，主要研究方向：新生儿疾病筛查、产前筛查。
Email:******************【通讯作者】张禾璇·论著·115462例新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查及基因突变分析*张禾璇* 杨 雪 王侣金 李林洁 张晓怡 刘兴宇 余 蕾贵州省贵阳市妇幼保健院优生遗传科 (贵州 贵阳 550003)【摘要】目的 了解贵阳地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD)缺乏症发病情况和基因突变特点，为贵阳地区G6PD缺乏症的防治提供科学参考。
方法 募集该地区2020年8月至2023年1月出生的新生儿，应用荧光分析法对其血斑样本进行G6PD酶活性筛查，召回初筛阳性儿，完成G6PD酶活性诊断及多色探针荧光 PCR 熔解曲线法(Multicolor probe melting curve analysis method ,MMCA)基因突变分析。
结果 共募集115462例新生儿，G6PD酶活性筛查血斑样本共筛出阳性1606例，筛查阳性率为1.39%(1606/115462)，其中男性为1.83%(1130/61801)、女性0.89%(476/53661)，男女新生儿G6PD酶活性初筛阳性率差异有统计学意义(P <0.01)；召回初筛阳性患儿，G6PD基因突变检出率87.07%(909/1044)，其中男性为90.09%(764/848)，女性为73.98%(145/196)，男女间G6PD基因突变检出率差异有统计学意义(P < 0.01)。
本研究共检出 13种类型G6PD 基因单一突变型(c.1024 G > T、c.1388 G > A、c.95 A > G、c.1376 G > T、c.592C > T、c.871 G > A、c.519 C > T、c.392G > T、c.493 A > G、c.1004C > A、c.1360C > T、c.383T > C、c.517T > C)和6种复合突变型(c.1376 G>T杂合复合c.95A>G杂合突变、c.1024 G>T杂合复合c.95A>G杂合突变、c.1024 C>T杂合复合c.1388 G>A杂合突变、c.1024 C>T杂合复合 c.519C>T杂合突变、c.1376 G>T杂合复合c.1024 C>T杂合突变、c.95A>G杂合复合c.1388 G>A杂合突变)。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性浓度检测法的初步研究
法 及 简 易 快 速 高 铁 血 红 蛋 白还 原 试 验 检 测 法 的 检测 结 果 具 有 高 度 一 致 性 。Ｇ－６一ＰＤ 活 性 浓 度 检 测 法 可 用 不 洗 涤 红
细 胞 ，其 检 测 试 剂 及 检 测 方 法 具 有 良好 的 重 复 性 。制 备 溶 血 液 时 吸 样 量 从 ７～ １３ ｌ的 Ｇ－６一ＰＤ 活 性 浓 度 检 测 结 果
出 Ｇ－６一ＰＤ 在 Ｈｂ中 的 活 性浓 度 （Ｕ／ｇ Ｈｂ），对 同 一 标 本 用 简 易 快 速 高 铁 血 红 蛋 白还 原 试 验 、Ｇ－６一Ｐ／６一ＧＰ 比值 法 进
行 对 比试 验 。结 果 Ｇ－６一ＰＤ 活 性 浓 度 的参 考 范 围 为 ≥ ５．０ Ｕ／ｇ Ｈｂ，Ｇ－６一ＰＤ 活 性 浓 度 检 测 法 与 Ｇ－６一Ｐ／６一ＧＰ 比值
检 验 医学 与 临 床 ２００８年 １月 第 ５卷 第 ２期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ６一磷 酸脱 氢 酶 活 性 浓 度 检 测 法 的初 步 研 究
贾璋林 ，杨发 达 ，谭桂彩 ，孙 威 （广 州 中医药大学 附属 南海妇产 儿童 医院检验科 ，广 东佛 山 ５２８２００）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｓｉｍｐｌｅ，ｑｕｉｃｋ ａｎｄ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅ－６一ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（Ｇ－６一ＰＤ）ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｔｈｅ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｇ－６一ＰＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔ ｂｙ Ｈｉｔａｃｈｉ一
ｖａｌｕｅ ｍ ｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｅａｓｙ ｍ ｅｔｈｅｍ ｏｇｌｏｂｉｎ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ．Ｕ ｎｗａｓｈｅｄ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ Ｇ－６一ＰＤ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ． Ｔ ｈｅｒｅ ｗ ａｓ ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅａｇｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍ ｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｇ－６一ＰＤ ａｃ— ｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ． Ｔｈｅｒｅ ｗ ａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇ －６一ＰＤ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓａｍ ｐｌｅ ｖｏｌｕｍｅ ｆｒｏｍ ７ ｔＡ ｔｏ １ ３ ｔＡ ｉｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆ ｈｅｍｏｌｙｓａｔｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ６一ＰＤ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅ— ｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＡＣＤ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｂｙ ｐａｃｋｅｄ ｒｅｄ ｃｅｌｌｓ（Ｐ￣ Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍ ｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｇ－６一ＰＤ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｓ ａ ｓｉｍ ｐｌｅ，ｑｕｉｃｋ ａｎｄ ａｕｔｏｍ ａｔｅｄ ｍ ｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ ｒｅｐｒｏｄｕｃｍ ｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｇ－６一ＰＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ．
小鼠葡萄糖 6磷酸脱氢酶 (G6PD) 酶联免疫分析试剂盒 使用说明书
小鼠葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号：E0716m10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
11. 覆膜：5张12. 使用说明书：1份自备物品1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2. 微量加液器及吸头，EP管3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本的采集及保存1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液50μl，余孔分别加标准品或待测样品50μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 立即在每个孔中加入检测溶液A工作液50μl（在使用前半小时内配制），轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 弃去液体，甩干，洗板3次。
每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)简介：葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ，G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。
Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD 被还原成NADPH ，其反应公式如下：G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。
在上述偶联反应中，NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比，通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度上升速率(ΔA /min)，上升速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，直接计算酶的活性单位。
100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、生理盐水2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、预备溶血液：取新奇抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤，每次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存备用。
临用前，以样本稀释液稀释，即为溶血液。
4℃保存10h ，编号名称TE0085 100TStorage试剂(A): 样本稀释液100ml -20℃ 避光试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支-20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液10mlRT 使用说明书1份-20℃保存48h。
一种简易检测6-磷酸葡萄糖的方法
Ｎｕｔｒ，２０１３，６７（１）：６４－７０．
ＩｍｐｒｏｖｅｄＭｅｔｈｏｄｓＢａｓｅｄｏｎＡＳＴＭ Ｅ２１９７－１１［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＰｕｂｌｉｃ
［１６］梅四卫，朱涵珍．大蒜研究进展［Ｊ］．中国农学 通报，２００９，２５
Ｈｅａｌｔｈ，２０１８，６：１８．
（８）：１５４－１５８．
［２２］ＲｅｎＨ，ＳｕＹ Ｔ，ＧｕｏＸ Ｈ．Ｒａｐｉｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
仪（ＦＴ－ＩＲ），ＡＰＰＬＩＥＤＳＹＳＴＥＭＳ公司的 ＤｕｒａｓａｍｐｌＩＲ衰减
收稿日期：２０１８－０１－０８ 基金项目：国家自然科学基金（编号：３１３７０２８７）。 作者简介：徐 婷（１９９２—），女，安徽马鞍山人，硕士研究生，主要从
事油脂代谢分子生物学和生物化学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：１２０９２５０５１８＠ ｑｑ．ｃｏｍ。 通信作者：陈钰佩，硕士，主 要 从 事 油 脂 代 谢 分 子 生 物 学 和 生 物 化 学 研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｕｉｗｅｉｐｅｉ２０１４＠１６３．ｃｏｍ。
江苏农业科学 ２０１９年第 ４７卷第 １０期
徐 婷，薛金?，陈亚东，等．一种简易检测 ６－磷酸葡萄糖的方法［Ｊ］．江苏农业科学，２０１９，４７（１０）：２０９－２１２． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１９．１０．０４７
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一种简易检测 ６－磷酸葡萄糖的方法
徐 婷，薛金?，陈亚东，刘 华，陈钰佩
６－磷酸葡萄糖（Ｇ６Ｐ）是细胞内一种常见的化合物，它由 （Ｇ６ＰＤ）的作用生成 Ｇ６Ｐ，同时伴随着 ＮＡＤＰＨ和中间产物的
葡萄糖在己糖激酶的作用下生成，在细胞内主要参与 ３种代 谢途径：（１）进入糖酵解途径，为生物合成提供细胞能量或碳
葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 产品说明书
葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine法)产品编号 产品名称包装 S0201S 葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 200次 S0201M葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法)1000次产品简介：葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) (Glucose Assay Kit with O-toluidine)是一种基于葡萄糖与邻甲苯胺的显色反应，通过比色法超高灵敏度、超宽线性范围检测血清、血浆、尿液、细胞或组织裂解液、饮料等溶液中葡萄糖含量的试剂盒。
本试剂盒灵敏度高、线性范围极宽、使用便捷。
本试剂盒对于在5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)范围的葡萄糖内有良好线性，并且具有操作便捷、显色稳定、无需煮沸、成本低、适合高通量检测等优点。
本试剂盒检测下限可以达到5mg/dl (20µl 样品)，相当于50ng/ml 或278µM ；检测上限可以达到2000mg/dl (5µl 样品)或10,000mg/dl (1µl 样品)，相当于20mg/ml (约111mM)或100mg/ml (约555mM)。
本试剂盒既可以轻松检测正常血样中的葡萄糖浓度，也可以检测高血糖血样品。
市售常见血糖仪的葡萄糖浓度检测范围约为1-30mM ，相当于约20-600mg/dl ，在检测一些过高血糖或过低血糖样品时会存在困难，而本试剂盒提供了5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)极宽的葡萄糖浓度检测范围。
本试剂盒所需样品体积小。
本试剂盒推荐的样品用量为5-20µl ，也可以使用如1-2µl 或更小体积的样品。
本试剂盒特异性好。
与常用的葡萄糖氧化酶-过氧化酶偶联(GOD-POD)法相比，由于邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，且不受其它还原性物质的影响，本试剂盒非常适合血清、尿液等溶液中葡萄糖浓度的检测。
葡萄糖(glucose)，也被称为dextrose 或grape sugar ，被认为是自然界中分布最广且最为重要的一种单糖。
赣州市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺失症筛查分析
赣州市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺失症筛查分析发布时间：2022-03-10T06:01:38.876Z 来源：《医师在线》2021年11月22期作者：刘聪邹翠翠李小玉张丽琴肖德俊唐金凤[导读]刘聪邹翠翠李小玉张丽琴肖德俊唐金凤（赣州市人民医院检验科分子遗传室；江西赣州341000）[摘要] 目的对赣州市新生儿葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PD）缺失症的基因测序结果进行分析。
方法收集赣州市2018年11月至2019年11月出生的共计1000例新生儿标本，采用酶法进行G6PD活性筛查，并对筛查阳性者进行基因测序分析。
结果初筛检出50例阳性，初筛阳性率为2.0%，其中男性 44例，女性6例；通过对50例阳性患者进行基因测序分析。
结论总体赣州市新生儿G6PD突变率较低，其中以G1388A为主，G1376T次之，A95G较少见，采用G6PD酶活性检测有利于提高女性杂合子表型存在差异的患者的检测率。
[关键词] 新生儿；葡萄糖-6磷酸脱氢酶缺乏症；酶法；实时荧光定量法Screening and analysis of neonatal glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in Ganzhou [Abstract] Objective To investigate the distribution of glucose-6 phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency in newborns in Ganzhou city. Methods A total of 1,000 specimens of newborns born in Ganzhou City from November 2018 to November 2019 were collected, and G6PD activity was screened by the enzymatic method, and gene sequencing analysis was performed on those who were screened positive. Result Preliminary screening detected 50 positive cases, with a positive rate of 2.0%, including 44 male cases and 6 female cases. Gene sequencing was performed in 50 positive patients. Conclusion Overall, the neonatal rate of G6PD mutation rate is low, among which G1388A is followed by G1376T and A95G is rare. The detection of G6PD enzyme activity is conducive to improve the detection rate of female patients with different heterozygous phenotypes [Keywords] The newborn; Glucose-6 phosphate dehydrogenase deficiency; Enzym-atic; Real-time fluorescence quantification葡萄糖-6磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase,G-6PD）缺乏症是人类常见的酶缺陷遗传病之一，该酶是磷酸戊糖旁路途径的第一个限速酶，伴有X染色体不完全显性，其发病率存在地区与种族差异[1]，迄今全球有近4亿人发病[2]。
6- 酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒使用说明
6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒产品简介：6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP还原为NADPH，以供生物合成及维持细胞内的还原状态，因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH能使NADP还原成NADPH，6-磷酸葡萄糖+NADP→6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH；在一定反应时间内其活性高低与反应前后生成物浓度的变化呈线性关系。
本测试盒通过在340nm下测定NADPH增加速率来反应G6PDH活性的大小，NADPH浓度升高越多则G6PDH 活力越大。
试验中所需的仪器和试剂：紫外可见分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、蒸馏水产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：储备液50mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275µL双蒸水充分溶解备用；试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275µL双蒸水充分溶解备用。
操作步骤：一、样品测定的准备：(1)细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400µL提取液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞。
8000g离心10分钟，取上清，置冰上待测。
组织：称取100mg组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表：测定管对照管试剂一（µL）750750试剂二（µL）1010试剂三（µL）1010样本（µL）30蒸馏水（µL）30将上述试剂按顺序加入1mL石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃或25℃水浴中（哺乳动物用37℃，非哺乳动物用25℃），准确反应5分钟。
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性测定试剂盒说明书
货号：MS1106 规格：100管/96样6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6PGDH依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。
此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
测定原理：6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。
自备实验用品及仪器：低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前配制，加入2mL试剂一，混匀。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前配制，加入2mL试剂一，混匀。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清、培养液等液体：直接测定。
测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一置于25℃或者37℃水浴预热30 min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL蒸馏水，20μL试剂二，140μL试剂一，20μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。
新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶定量测定(实验注意事项)
Neo-G6PD定量测定试剂盒实验步骤及注意事项1. 试剂的准备G6PD底物试剂(复溶后+2～+8℃稳定一月)：在每个冻干的G6PD底物试剂小瓶中加入11ml G6PD复溶缓冲液（配制后的溶液为1个96微孔板用量），轻轻混匀。
2. 将所需数量的空白反应条（白色不透明板）置室温平衡( 23-28℃，30分钟)。
注意事项及建议：本实验受温度影响，在一定范围内随温度的提高，反应加快。
平衡温度可保证实验反应的均一性3. 用打孔器轧下校准品、质控品和待测样品的滤纸干血片（每片直径3.0 mm左右），按顺序放入微孔反应条小孔中，然后各孔加入100 μl 复溶G6PD底物试剂，盖上封片，室温慢速振动孵育30分钟。
注意事项及建议：（a）用自动打孔器轧下滤纸干血片取样时，应尽量向中间靠拢，避免取边缘血片而造成检测时CV值增大（血片中心到边缘的1/2以内区域是检测的最佳部位）。
每个校准品滤纸干血片打孔最好不要多于4个；（b）尽量避免手接触血片，以免造成血片污染4. 每孔加铜试剂200 μl，并加贴封条，室温无振动孵育。
注意事项及建议：加铜试剂时，吸头应悬空，避免因吸头碰到小孔边缘或其中试剂而造成铜试剂污染5. 15～20分钟内，在激发波长355nm，发射波长460nm时测定荧光值。
注意事项及建议：（a）血片漂浮对G6PD测定将造成影响，测定荧光值前请用小镊子或者大头针将漂浮血片挑出后再检测，以免造成假阳性结果；（b）质控品在受控范围内，反之，则该次实验无效，应重复实验；（b）务必在15～20分钟内检测完毕，否则曲线会漂移。
其他：（1）不同批号的试剂盒不要混用。
（2）本试剂盒各组分只能一次性使用，不能重复使用（3）为了避免样本中任何潜在的生物危险，检测样本应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和粘膜。
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3、 生化分析仪检测：按照下表设置主要参数。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用
量或适当稀释后再进行测定。
波长
340nm
反应温度
37℃
孵育时间
90s
比色杯光径
1.0cm
系数
8040
待测样品
6μl
检测工作液
264μl
G-6-P 工作液
33μl
计算： 分光光度计计算公式：G6PD(U/L)=Δ A/min×(106/62 20)×(1000/ 20)=Δ A/min×8040
组成：
名称 试剂(A): 样本稀释液 试剂(B): G6PD assay buffer 试剂(C): NADP 试剂(D): G-6-P 试剂(E): G-6-P 稀释液 使用说明书
编号 TE00 85
Storage
100ml -20℃ 避光 100ml 4℃ 9mg -20℃
1 支 -20℃ 10ml RT
加入物
空白管 测定管
检测工作液(μl)
880
880
G6PD assay buffer (μl)20－溶血液(μl)
－
20
混匀，孵育。
G-6-P 工作液(μl)
100
100
混匀，孵育，在 340nm 处 1-3min 各管吸光度变化，计
算各管ΔA/min。
北京雷根生物技术有限公司
生化分析仪计算公式：G6PD(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(303/6)=ΔA/min×8040
参考范围：
成年健康人红细胞 G6PD：8-18U/g Hb
注意事项：
1、 血清中 G6PD 活性在室温可以保存 2 天，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 个月。 2、 严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。 3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备溶血液：取新鲜抗凝血，离心取上清及白细胞层，用 4℃预冷的生理盐水洗涤 2 次， 每次取上清 时，务必 去除剩余 的白细胞 层，再加 预冷的生 理盐水配 成含红细 胞压积为 30%的红细胞悬液，4℃保存备用。临用前，以样本稀释液稀释 25 倍，即为溶血液。
2、 分光光度计检测：按照下表设置空白管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避 免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
北京雷根生物技术有限公司
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)
简介：
葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase，G-6-PD 或 G6PD)是糖 酵解途径、 柠檬酸循 环以外的 另一个葡 萄糖分解 途径的磷 酸葡萄糖 酸途径(磷 酸戊糖途 径) 中的第一个酶(EC1.1.1.49)。Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色 法)其检测原理是红细胞 G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者徆快氧化成 6-磷酸 葡萄糖酸(6-PGA)，同时 NAPD 被还原成 NADPH，其反应公式如下.100T 该试剂盒试剂 可以检测 50 次样本，该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。