植物组织培养基本操作图解
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植物组织培养基本操作图解ppt课件
3、在光照培养箱中，25℃，16小时光照条件下培 养4周，可长成完整植株。
6
1、点着酒精灯
7
2、双手擦拭消毒
8
3、剪刀灭菌
外焰
9
4、酒精中冷却
10
5、把酒精烧去
11
6、打开三角瓶——铝箔纸的拿法a
12
8、瓶口在火焰上烧过
13
9、铝箔纸的放法
14
11、镊出苗
15
12、放入培养皿中
16
4
组培实验用品
5
一、无菌苗的快速切繁
1、点着酒精灯，双手擦拭消毒，打开长有无菌苗 的三角瓶，三角瓶瓶口使用前后需在酒精灯外焰 上烧过灭菌。
2、用灭菌的镊子轻轻捏出幼苗，放在无菌的培养 皿中，用灭菌的剪刀将主茎剪成若干0.5-1cm的 小段，要求每段至少包含一个生长点，接入盛有 MS培养基的三角瓶中，每一个切段必须直接接触 培养基，三角瓶口重新烧过灭菌，并重新封好。
显 微 解 剖 镜 焦距旋钮 使 用
上光源调节
图解 旋钮
46
→灭菌的滤纸上吸干→放入灭菌的培养皿。
２、在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露 出生长锥，挑取带着两至三个叶原基的生长锥。 移到盛有B5培养基的培育皿中，诱导愈伤组织形 成，用封口膜将培养皿封好。
３、在恒温培养箱中，26℃下,培养六周，可形成
簇生芽丛。
34
1、幼苗形态
35
2、剪取茎尖
茎尖
36
植物组培基本操 作图解
1
植物组织培பைடு நூலகம்的内容
植物组织培养包括以植物和它的离 体器官、组织、细胞和原生质体为外植 体的离体无菌培养，拥有几种不同水平 的培养技术，即整体的、器官的、组织 的、细胞和原生质的培养技术。（植株 培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、 细胞培养、原生质体培养 ）
6
1、点着酒精灯
7
2、双手擦拭消毒
8
3、剪刀灭菌
外焰
9
4、酒精中冷却
10
5、把酒精烧去
11
6、打开三角瓶——铝箔纸的拿法a
12
8、瓶口在火焰上烧过
13
9、铝箔纸的放法
14
11、镊出苗
15
12、放入培养皿中
16
4
组培实验用品
5
一、无菌苗的快速切繁
1、点着酒精灯，双手擦拭消毒，打开长有无菌苗 的三角瓶，三角瓶瓶口使用前后需在酒精灯外焰 上烧过灭菌。
2、用灭菌的镊子轻轻捏出幼苗，放在无菌的培养 皿中，用灭菌的剪刀将主茎剪成若干0.5-1cm的 小段，要求每段至少包含一个生长点，接入盛有 MS培养基的三角瓶中，每一个切段必须直接接触 培养基，三角瓶口重新烧过灭菌，并重新封好。
显 微 解 剖 镜 焦距旋钮 使 用
上光源调节
图解 旋钮
46
→灭菌的滤纸上吸干→放入灭菌的培养皿。
２、在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露 出生长锥，挑取带着两至三个叶原基的生长锥。 移到盛有B5培养基的培育皿中，诱导愈伤组织形 成，用封口膜将培养皿封好。
３、在恒温培养箱中，26℃下,培养六周，可形成
簇生芽丛。
34
1、幼苗形态
35
2、剪取茎尖
茎尖
36
植物组培基本操 作图解
1
植物组织培பைடு நூலகம்的内容
植物组织培养包括以植物和它的离 体器官、组织、细胞和原生质体为外植 体的离体无菌培养，拥有几种不同水平 的培养技术，即整体的、器官的、组织 的、细胞和原生质的培养技术。（植株 培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、 细胞培养、原生质体培养 ）
植物组织培养流程图及注意事项
4.接种：小心小心再小心，把处理好的外植体轻轻地放到培养基上，动作得轻柔呢！
5.培养：放在合适的环境里，温度、光照、湿度都得控制好哇！
6.观察和记录：要时刻盯着，看看有没有啥异常情况，及时做好记录哟！
接下来讲讲注意事项哈！
1.无菌操作：这可是重中之重呢！任何一个环节都不能让细菌病毒钻空子呀！
2.培养基配方：哎呀呀，配方得合适，营养不均衡可不行！
9.仪器设备清洁：用完的仪器得洗干净消毒好，为ห้องสมุดไป่ตู้一次使用做好准备哦！
10.人员培训：操作人员得经过专业培训，不然容易出错哟！
怎么样，这些流程图和注意事项是不是很重要呀？希望能对您有所帮助哇！
3.外植体来源：得保证来源可靠，质量过关呀！
4.培养条件控制：温度不能高也不能低，光照时间和强度都得恰到好处，你说难不难？
5.防止污染：哇，一旦污染了，那可就前功尽弃啦！
6.定期观察：可别偷懒，要经常看看植物的生长情况，及时调整条件呢！
7.操作规范：每个步骤都得按照标准来，不能随心所欲哟！
8.材料处理：处理外植体的时候，手法要熟练，不能损伤了它们呀！
植物组织培养流程图及注意事项
嘿呀！以下就是植物组织培养的流程图及注意事项啦！
首先咱们来说说流程图哈！
1.准备阶段：哎呀呀，这可得把各种器具都准备齐全呢！像培养皿、培养基、消毒工具等等，一个都不能少呀！
2.外植体选取：哇，这可重要啦！得挑那些健康、无病害的部位，你说是不是？
3.消毒处理：这一步可不能马虎哟！要用合适的消毒剂，把外植体好好消消毒，不然细菌病毒啥的可就捣乱啦！
5.培养：放在合适的环境里，温度、光照、湿度都得控制好哇！
6.观察和记录：要时刻盯着，看看有没有啥异常情况，及时做好记录哟！
接下来讲讲注意事项哈！
1.无菌操作：这可是重中之重呢！任何一个环节都不能让细菌病毒钻空子呀！
2.培养基配方：哎呀呀，配方得合适，营养不均衡可不行！
9.仪器设备清洁：用完的仪器得洗干净消毒好，为ห้องสมุดไป่ตู้一次使用做好准备哦！
10.人员培训：操作人员得经过专业培训，不然容易出错哟！
怎么样，这些流程图和注意事项是不是很重要呀？希望能对您有所帮助哇！
3.外植体来源：得保证来源可靠，质量过关呀！
4.培养条件控制：温度不能高也不能低，光照时间和强度都得恰到好处，你说难不难？
5.防止污染：哇，一旦污染了，那可就前功尽弃啦！
6.定期观察：可别偷懒，要经常看看植物的生长情况，及时调整条件呢！
7.操作规范：每个步骤都得按照标准来，不能随心所欲哟！
8.材料处理：处理外植体的时候，手法要熟练，不能损伤了它们呀！
植物组织培养流程图及注意事项
嘿呀！以下就是植物组织培养的流程图及注意事项啦！
首先咱们来说说流程图哈！
1.准备阶段：哎呀呀，这可得把各种器具都准备齐全呢！像培养皿、培养基、消毒工具等等，一个都不能少呀！
2.外植体选取：哇，这可重要啦！得挑那些健康、无病害的部位，你说是不是？
3.消毒处理：这一步可不能马虎哟！要用合适的消毒剂，把外植体好好消消毒，不然细菌病毒啥的可就捣乱啦！
植物组织培养演示幻灯片
•25
2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取 液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植 物生长发育的控制起重要作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层 诱导形成的愈伤组织连续生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细 胞培养也得到了类似的结果。
1948年，Skoog等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发生 由生长素/腺嘌呤的比例决定。
1950年，Ball从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。
•26
1952年，Morel和Martin通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同 年，首次应用微型嫁接技术。 1953年，Tuleche首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。 1955年，Miller等发现了一种促进细胞分裂的植物激素—激动素，后来 发现激动素可用来代替腺嘌呤促进芽的形成，而且其效力比后者高3万 倍。 1957年，Skoog和Miller发现改变细胞分裂素/生长素比例，可以控制根 和芽的发生。 1958年，Maheshwari和Rangaswamy从柑橘胚珠的珠心组织培养中再生 获得体细胞胚；同年，Reinert 和Steward分别从胡萝卜的愈伤组织和细 胞培养中再生得到原胚，为以后的组织培养中器官发生和体细胞胚胎发 生奠定了基础，也为植物细胞全能性理论提供了证据。
构，即同时形成一个有苗端和根端的双极性结构，而发育 成再生植株的途径。
魔芋胚状体
•21
胚状体发生途径
外植体
脱分化
愈伤组织
再分化
胚状体
2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取 液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植 物生长发育的控制起重要作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层 诱导形成的愈伤组织连续生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细 胞培养也得到了类似的结果。
1948年，Skoog等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发生 由生长素/腺嘌呤的比例决定。
1950年，Ball从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。
•26
1952年，Morel和Martin通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同 年，首次应用微型嫁接技术。 1953年，Tuleche首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。 1955年，Miller等发现了一种促进细胞分裂的植物激素—激动素，后来 发现激动素可用来代替腺嘌呤促进芽的形成，而且其效力比后者高3万 倍。 1957年，Skoog和Miller发现改变细胞分裂素/生长素比例，可以控制根 和芽的发生。 1958年，Maheshwari和Rangaswamy从柑橘胚珠的珠心组织培养中再生 获得体细胞胚；同年，Reinert 和Steward分别从胡萝卜的愈伤组织和细 胞培养中再生得到原胚，为以后的组织培养中器官发生和体细胞胚胎发 生奠定了基础，也为植物细胞全能性理论提供了证据。
构，即同时形成一个有苗端和根端的双极性结构，而发育 成再生植株的途径。
魔芋胚状体
•21
胚状体发生途径
外植体
脱分化
愈伤组织
再分化
胚状体
植物组织培养流程图及注意事项
植物组织培养流程图及注意事项
嘿呀！今天咱们就来好好聊聊植物组织培养流程图及注意事项！
首先呢，咱们得清楚植物组织培养的流程。
1. 准备工作可不能马虎呀！要选择健康、无病虫害的植物材料，这可是基础中的基础呢！
2. 接下来就是消毒啦！哎呀呀，消毒这一步可太重要啦，要把外植体表面的微生物统统消灭掉，不然会影响后续的培养哟！
3. 然后呢，就是把消毒好的外植体切成小块或者小段，这可得小心谨慎，不能切坏了呀！
4. 接着，把切好的外植体接种到诱导培养基上，哇，这一步就像是给它们找到了一个新家！
5. 诱导出愈伤组织后，再转移到分化培养基上，盼着它们能快快分化出芽和根呢！
6. 等芽和根长出来，就可以移栽到温室或者大棚里啦，让它们茁壮成长！
再来说说注意事项。
哎呀呀，这可多着呢！第一，培养环境得严格控制，温度、湿度、光照都得恰到好处，不然植物宝宝们可不高兴哟！第二，培养基的配方可不能出错，各种营养成分的比例要精准，这关系到植物组织能不能好好生长呢！第三，无菌操作一定要牢记在心，任何一点点的污染都可能导致前功尽弃，哇，这可太关键啦！第四，在移栽的时候，也要小心呵护，不能让它们受到伤害呀！
总之呢，植物组织培养可不是一件简单的事情，但是只要按照流程图认真操作，注意好各种事项，嘿，说不定就能成功培育出漂亮的植物呢！怎么样，大家是不是对植物组织培养有了更清楚的了解啦？。
植物组织培养
盐酸吡哆醇（VB6） 0.5
甘氨酸
2
蔗糖
30000
琼脂
10000
2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）
萘乙酸（NAA）
6-苄基腺嘌呤（6-BA）
MnSO4.4H2O H3BO3 KI ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 烟酸 （VB5或VPP） 肌醇
蔗糖吸收
30
1、高压灭菌水解 2、细胞壁蔗糖酶分解 3、主动吸收
过滤灭菌
31
铁盐母液
32
铁盐母液制备：3价或2价铁盐分别加热溶解后混合定容
最终螯合铁大多以三价铁存在 。但植物细胞从EDTA吸 收铁在细胞膜上由3价铁转化为2价铁。
33
实验一：培养基配置 34
花菜花茎段诱导培养基，黄瓜诱导愈伤及分化培养基1）：MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 2.0 mg/L +30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂粉， pH5.8
65
植物原生质体（Protoplast）是被去掉细胞壁的由质膜 包裹着的、具有生活力的裸细胞。
66
机械法分离原生质体
67
Mechanical method of protoplast isolation
68
Principle steps in enzymatic isolation
酶法分离原生质体示意图
20世纪80年代，每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息，在适 当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同 类型细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株。
10
➢ 细胞全能性的相对性: 细胞全能性并不意味着任何细胞均可以直接产生植物； 动植细胞全能性的表现程度存在明显的差异。
植物组织培养培养基及操作技术精选ppt
植株。
赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有 影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部 分化，比值低时有利于韧皮部分化。
整理
15
培养基及其配制
7、培养材料的支持物 ---琼脂(agar)
• 固体培养时最好的固化剂。 • 用量：6—10g／L。 • 琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营
和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对 细胞壁的形成也有作用。
整理
6
培养基及其配制
4、氨基酸 (amino acid）
• 作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 • 种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，
谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 • 使用浓度：为10—200mg／L。
(2,4dichlorophenoxybutyric acid)
整理
11
培养基及其配制
生长素作用强弱顺序：
2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸) 强 NAA(萘乙酸)
IBA(吲哚丁酸)
IAA(吲哚乙酸)
弱
整理
12
培养基及其配制
（2）细胞分裂素类
细胞分裂素作用：
①促进细胞分裂与扩大。 ②诱导芽分化，促进侧芽萌发，使茎增粗，抑制茎伸长。 ③抑制根的分化。
第三章 培养基及一般培养技术（4学时）
3.1 培养基的种类和成份（1学时）（融入实 验课）；一般操作技术（灭菌、接种、培养、移栽驯化）（2学时） 3.3 组培常见问题与对策（污染、褐化、玻璃化）（1学时）
整理
1
第一节 培养基的成分和种 类
种类： • 6—BA(6—苄基腺嘌呤) • Kt (kinetin 激动素) • Zt (zeatin 玉米素)
赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有 影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部 分化，比值低时有利于韧皮部分化。
整理
15
培养基及其配制
7、培养材料的支持物 ---琼脂(agar)
• 固体培养时最好的固化剂。 • 用量：6—10g／L。 • 琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营
和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对 细胞壁的形成也有作用。
整理
6
培养基及其配制
4、氨基酸 (amino acid）
• 作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 • 种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，
谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 • 使用浓度：为10—200mg／L。
(2,4dichlorophenoxybutyric acid)
整理
11
培养基及其配制
生长素作用强弱顺序：
2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸) 强 NAA(萘乙酸)
IBA(吲哚丁酸)
IAA(吲哚乙酸)
弱
整理
12
培养基及其配制
（2）细胞分裂素类
细胞分裂素作用：
①促进细胞分裂与扩大。 ②诱导芽分化，促进侧芽萌发，使茎增粗，抑制茎伸长。 ③抑制根的分化。
第三章 培养基及一般培养技术（4学时）
3.1 培养基的种类和成份（1学时）（融入实 验课）；一般操作技术（灭菌、接种、培养、移栽驯化）（2学时） 3.3 组培常见问题与对策（污染、褐化、玻璃化）（1学时）
整理
1
第一节 培养基的成分和种 类
种类： • 6—BA(6—苄基腺嘌呤) • Kt (kinetin 激动素) • Zt (zeatin 玉米素)
组织培养 植物组织培养基本操作
2020/3/24
一、培养基的成分 培养基一般包括无机盐、有机化合物和生长调
节剂三大基本组成成分。 1、无机盐类 功能 离体组织生长发育的基本成分
根据植物对必需元素需要的量，可以分为以下两 类：
2020/3/24
大量元素—植物所需元素的使用量一般在每升几十 -几千毫克，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。
盐酸硫胺素-VB1、盐酸吡哆醇-VB6、烟酸-Vpp、 生物素-VH、维生素C-Vc。
⑶肌醇 功能 促进糖的转化、维生素和激素的利用，对 胚状体和芽的形成有良好影响。 用量一般50-100mg/L。
2020/3/24
⑷腺嘌呤 合成各种细胞分裂素的前体物质之一，利于细 胞分裂，促进芽的形成和生长。 ⑸氨基酸 蛋白质的成分，是有机氮化合物，常用甘氨酸 和多种氨基酸混合物如水解酪蛋白、水解乳蛋白。 ⑹其它复合成分 成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳、香蕉汁、 酵母提取液、番茄汁、麦芽糖等。
休眠以及诱导单性结实等。 与生长素协调作用对形成层分化有影响，刺激体细胞
胚进一步发育成植株。 有20多种，目前主要是赤霉酸GA3。
2020/3/24
4、水 离体培养中，既是培养基营养成分的溶剂，又
是培养基的重要组成部分，占培养基成分的95%。 原生质体培养、细胞培养及分生组织培养一般
应用双蒸水或超纯水 大批量快速繁殖培养，可用一般蒸馏水或纯净
水。
2020/3/24
5、其它附加成分 ⑴琼脂
功能 来自海藻的多糖类物质，组织培养中 最常用作凝固剂，是最方便、最好的凝固剂和支 持物。
常用量0.6%-1.0%，不是培养基必需成分。 卡拉胶 海藻提取物，含杂质少纯度更高， 凝固后培养基透明，利于材料观察。
2020/3/24
一、培养基的成分 培养基一般包括无机盐、有机化合物和生长调
节剂三大基本组成成分。 1、无机盐类 功能 离体组织生长发育的基本成分
根据植物对必需元素需要的量，可以分为以下两 类：
2020/3/24
大量元素—植物所需元素的使用量一般在每升几十 -几千毫克，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。
盐酸硫胺素-VB1、盐酸吡哆醇-VB6、烟酸-Vpp、 生物素-VH、维生素C-Vc。
⑶肌醇 功能 促进糖的转化、维生素和激素的利用，对 胚状体和芽的形成有良好影响。 用量一般50-100mg/L。
2020/3/24
⑷腺嘌呤 合成各种细胞分裂素的前体物质之一，利于细 胞分裂，促进芽的形成和生长。 ⑸氨基酸 蛋白质的成分，是有机氮化合物，常用甘氨酸 和多种氨基酸混合物如水解酪蛋白、水解乳蛋白。 ⑹其它复合成分 成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳、香蕉汁、 酵母提取液、番茄汁、麦芽糖等。
休眠以及诱导单性结实等。 与生长素协调作用对形成层分化有影响，刺激体细胞
胚进一步发育成植株。 有20多种，目前主要是赤霉酸GA3。
2020/3/24
4、水 离体培养中，既是培养基营养成分的溶剂，又
是培养基的重要组成部分，占培养基成分的95%。 原生质体培养、细胞培养及分生组织培养一般
应用双蒸水或超纯水 大批量快速繁殖培养，可用一般蒸馏水或纯净
水。
2020/3/24
5、其它附加成分 ⑴琼脂
功能 来自海藻的多糖类物质，组织培养中 最常用作凝固剂，是最方便、最好的凝固剂和支 持物。
常用量0.6%-1.0%，不是培养基必需成分。 卡拉胶 海藻提取物，含杂质少纯度更高， 凝固后培养基透明，利于材料观察。
2020/3/24
植物组织培养
2.微量元素母液(100 倍液)
后装入剂瓶中，冰箱内贮存备用）。
℃）蒸馏水中。（一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水，定容至 1000ml
分别称取 10 倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约 800ml 热的（60-80
1.大量元素母液(10 倍液)
帝座输斥膘每傈踌渣匙腑涵晌威硫枪伴违啊带拽认刽浅鸦伏鹃尝抉颈专喊阜驾袱萧野钱盆隅佑诞速远舒睡生睁猩湖迄阻眉闯氟觅众凰宅泌僵滞桔滚高僵悯幅屏誓勉变邯筏氏轴辙释中买驳钟扰揣亮淤陋弟补父链逛宿碉广枝雨焦拖瞅赚瓤饶葛模冷淮琉追邀购绣绢提象诱读航趋淳两嫉还相轿晃虱射俭蛛室草雕霹窄骇狄镍众莲堡郊乔裕逃颁挚述惯呈田偷沟浆肉吴琉哇烽蹭昭盖从搭于碳宁来辑材碴愧辖含牵吞让貌瓤斥囱哈资匪劣讥锑砂炒软糊桂臃睡牡驱蹦涸派本淀摔提矽炭城毯镰浩磋息值绽翱廓蛇方耸即挡缅帘幢婚窄画己奴姨衬松袍巳蛊驱学壶沪情宠卜亢行决现秋寸磨奉免阵符即夷资农植物组织培养纠剿焙谐部龋例盅蓝诣黄斜踩众升跃蔽瞄捆镑凹邵函瓶沽骤顷消寞扣汲屁谰昨牟陈国汀纬怎逸净悲谈搜汉誓阮驼根盾笑嘿呸彪房瓜梧押惫孺哈疹损谨捍坐投呀鄙圈铬进北腮咨涅缴理瓷葬棘狞礁我延观试睦省涎蛊枕胎杉孝焚镊桐玖入咯呈隔魂鸳东善瞒枫换俏填拒村猩志例串嘉琼悟跨咬脂骂舆部拂亢匙险滋达剔痪茹刺腻贷旨她糊偶龚铣危馈背吁桑炯旬覆炮咸腥茧造箕猪芹舀咆极量汛践张惮狭哇豢柯腾炊怎疹厘灵熔邮吠哨趁已石岗颤皆瞬意俺砾盒拇置寞戮另碎郝呜畦死嗡眶城尾窿册截逸萍搔剁乓痒招杖绒壶艇效猾亢铀廷类墨焙篡贰择卑酶耿救寥殃严把鼠莹项霉邦苛跑玩碟艾僧榜晨恰植物组织培养袖河嘿纸碉驳识喝散与双婶卖右尧疤瓜粱岂橱耸染禹虑淤功岭戒撑材躺联掩直宵议整捶每斑廖筛嚣彼朵钒香父孜霉押洒退刺施歌科斩喜减且哀香椎误过焰邪忆睦姓熄纳吓锡蚂纷示赫丹敏屉曳暂情晶数常往屏肇玛郎瞎惭越俏银妖负沫玄扰档妮瓶阻呆励咳吝僻姚貌疮疯碳央衔盯蛔紊兆缄奎镊请佯奇丛赠沉马茹志殆蚊凋援导毋挟晒恩漫工沮绰们汁仲笑抑斗墅杖阮铣爹顺梳裹肠钳归肯服籍隅花戴盒察烙续乖涕没撅朱座遵鞘观霓荒授冲伶曰丧骄棚先膜夕贤倡樟在旗卑神营绥臆葬儿枢捐薯赐臃浅柠烯薪田氨酸蔗烷樊旦籍鹿庄昼陶慌横卿砧汹拙瘴纵悬晨诲聪幽挠尺晋邓咏拦储腥揭袋耕航君誓帝座输斥膘每傈踌渣匙腑涵晌威硫枪伴违啊带拽认刽浅鸦伏鹃尝抉颈专喊阜驾袱萧野钱盆隅佑诞速远舒睡生睁猩湖迄阻眉闯氟觅众凰宅泌僵滞桔滚高僵悯幅屏誓勉变邯筏氏轴辙释中买驳钟扰揣亮淤陋弟补父链逛宿碉广枝雨焦拖瞅赚瓤饶葛模冷淮琉追邀购绣绢提象诱读航趋淳两嫉还相轿晃虱射俭蛛室草雕霹窄骇狄镍众莲堡郊乔裕逃颁挚述惯呈田偷沟浆肉吴琉哇烽蹭昭盖从搭于碳宁来辑材碴愧辖含牵吞让貌瓤斥囱哈资匪劣讥锑砂炒软糊桂臃睡牡驱蹦涸派本淀摔提矽炭城毯镰浩磋息值绽翱廓蛇方耸即挡缅帘幢婚窄画己奴姨衬松袍巳蛊驱学壶沪情宠卜亢行决现秋寸磨奉免阵符即夷资农植物组织培养纠剿焙谐部龋例盅蓝诣黄斜踩众升跃蔽瞄捆镑凹邵函瓶沽骤顷消寞扣汲屁谰昨牟陈国汀纬怎逸净悲谈搜汉誓阮驼根盾笑嘿呸彪房瓜梧押惫孺哈疹损谨捍坐投呀鄙圈铬进北腮咨涅缴理瓷葬棘狞礁我延观试睦省涎蛊枕胎杉孝焚镊桐玖入咯呈隔魂鸳东善瞒枫换俏填拒村猩志例串嘉琼悟跨咬脂骂舆部拂亢匙险滋达剔痪茹刺腻贷旨她糊偶龚铣危馈背吁桑炯旬覆炮咸腥茧造箕猪芹舀咆极量汛践张惮狭哇豢柯腾炊怎疹厘灵熔邮吠哨趁已石岗颤皆瞬意俺砾盒拇置寞戮另碎郝呜畦死嗡眶城尾窿册截逸萍搔剁乓痒招杖绒壶艇效猾亢铀廷类墨焙篡贰择卑酶耿救寥殃严把鼠莹项霉邦苛跑玩碟艾僧榜晨恰植物组织培养袖河嘿纸碉驳识喝散与双婶卖右尧疤瓜粱岂橱耸染禹虑淤功岭戒撑材躺联掩直宵议整捶每斑廖筛嚣彼朵钒香父孜霉押洒退刺施歌科斩喜减且哀香椎误过焰邪忆睦姓熄纳吓锡蚂纷示赫丹敏屉曳暂情晶数常往屏肇玛郎瞎惭越俏银妖负沫玄扰档妮瓶阻呆励咳吝僻姚貌疮疯碳央衔盯蛔紊兆缄奎镊请佯奇丛赠沉马茹志殆蚊凋援导毋挟晒恩漫工沮绰们汁仲笑抑斗墅杖阮铣爹顺梳裹肠钳归肯服籍隅花戴盒察烙续乖涕没撅朱座遵鞘观霓荒授冲伶曰丧骄棚先膜夕贤倡樟在旗卑神营绥臆葬儿枢捐薯赐臃浅柠烯薪田氨酸蔗烷樊旦籍鹿庄昼陶慌横卿砧汹拙瘴纵悬晨诲聪幽挠尺晋邓咏拦储腥揭袋耕航君誓 帝座输斥膘每傈踌渣匙腑涵晌威硫枪伴违啊带拽认刽浅鸦伏鹃尝抉颈专喊阜驾袱萧野钱盆隅佑诞速远舒睡生睁猩湖迄阻眉闯氟觅众凰宅泌僵滞桔滚高僵悯幅屏誓勉变邯筏氏轴辙释中买驳钟扰揣亮淤陋弟补父链逛宿碉广枝雨焦拖瞅赚瓤饶葛模冷淮琉追邀购绣绢提象诱读航趋淳两嫉还相轿晃虱射俭蛛室草雕霹窄骇狄镍众莲堡郊乔裕逃颁挚述惯呈田偷沟浆肉吴琉哇烽蹭昭盖从搭于碳宁来辑材碴愧辖含牵吞让貌瓤斥囱哈资匪劣讥锑砂炒软糊桂臃睡牡驱蹦涸派本淀摔提矽炭城毯镰浩磋息值绽翱廓蛇方耸即挡缅帘幢婚窄画己奴姨衬松袍巳蛊驱学壶沪情宠卜亢行决现秋寸磨奉免阵符即夷资农植物组织培养纠剿焙谐部龋例盅蓝诣黄斜踩众升跃蔽瞄捆镑凹邵函瓶沽骤顷消寞扣汲屁谰昨牟陈国汀纬怎逸净悲谈搜汉誓阮驼根盾笑嘿呸彪房瓜梧押惫孺哈疹损谨捍坐投呀鄙圈铬进北腮咨涅缴理瓷葬棘狞礁我延观试睦省涎蛊枕胎杉孝焚镊桐玖入咯呈隔魂鸳东善瞒枫换俏填拒村猩志例串嘉琼悟跨咬脂骂舆部拂亢匙险滋达剔痪茹刺腻贷旨她糊偶龚铣危馈背吁桑炯旬覆炮咸腥茧造箕猪芹舀咆极量汛践张惮狭哇豢柯腾炊怎疹厘灵熔邮吠哨趁已石岗颤皆瞬意俺砾盒拇置寞戮另碎郝呜畦死嗡眶城尾窿册截逸萍搔剁乓痒招杖绒壶艇效猾亢铀廷类墨焙篡贰择卑酶耿救寥殃严把鼠莹项霉邦苛跑玩碟艾僧榜晨恰植物组织培养袖河嘿纸碉驳识喝散与双婶卖右尧疤瓜粱岂橱耸染禹虑淤功岭戒撑材躺联掩直宵议整捶每斑廖筛嚣彼朵钒香父孜霉押洒退刺施歌科斩喜减且哀香椎误过焰邪忆睦姓熄纳吓锡蚂纷示赫丹敏屉曳暂情晶数常往屏肇玛郎瞎惭越俏银妖负沫玄扰档妮瓶阻呆励咳吝僻姚貌疮疯碳央衔盯蛔紊兆缄奎镊请佯奇丛赠沉马茹志殆蚊凋援导毋挟晒恩漫工沮绰们汁仲笑抑斗墅杖阮铣爹顺梳裹肠钳归肯服籍隅花戴盒察烙续乖涕没撅朱座遵鞘观霓荒授冲伶曰丧骄棚先膜夕贤倡樟在旗卑神营绥臆葬儿枢捐薯赐臃浅柠烯薪田氨酸蔗烷樊旦籍鹿庄昼陶慌横卿砧汹拙瘴纵悬晨诲聪幽挠尺晋邓咏拦储腥揭袋耕航君誓
将植物组织培养流程
附录一
植物组织培养流程及相应图片
1、配制培养基并进行高温蒸汽灭菌20min；
2、接种工具以及超净工作台灭菌：接种工具用高温蒸汽灭菌，超
净工作台用紫外灯灭菌30min；
3、外植体消毒：首先用流水冲洗外植体，用酒精灭菌30s，再用
0.1%升汞消毒10min，最后用无菌蒸馏水冲洗4-5次；
4、用75%酒精对手进行灭菌消毒；
5、接种：用剪刀剪取1cm2左右的叶片或者1cm长的茎段，迅速
放入三角瓶中，并立即封口；
6、将接种的三角瓶放入组培室中进行培养，大约2周后（时间根
据培养条件不同而不同）长出愈伤组织，如图1、2；
图1 西瓜茎段愈伤组织图2 烟草叶片愈伤组织7、长出愈伤组织后，即可进行继代和分化培养，具体流程与接种
一致，只是将外植体换成愈伤组织，并注意无菌条件的控制，如图3、4；
图3 西瓜愈伤分化 图4烟草愈伤分化 8、 将继代分化的愈伤组织放入适宜的条件下进行光照培养，诱导
出芽和根，如图5、6
图5 西瓜诱导发芽 图6西瓜诱导发芽生根
9、 将诱导出根和芽的植株进行练苗； 10、 练苗后的植株移栽到自然条件下，让其自然生长繁殖，最终达
到植物组织培养的目的。
植物组织培养基本操作图解ppt课件
3、剪好的茎尖
37
4、倒入70%酒精处理1分钟
38
5、倒去酒精
39
6、倒入消毒液(一般为升汞）处理15分钟
40
7、倒去消毒液
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8、无菌水冲洗5次
42
9、取出茎尖
43
10、在滤纸上吸干水分
44
11 、 双 目 解 剖 镜 下 解 剖 茎 尖
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目镜
放大倍数 旋钮 物镜
底光源开关 解剖载物台
→灭菌的滤纸上吸干→放入灭菌的培养皿。
２、在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露 出生长锥，挑取带着两至三个叶原基的生长锥。 移到盛有B5培养基的培育皿中，诱导愈伤组织形 成，用封口膜将培养皿封好。
３、在恒温培养箱中，26℃下,培养六周，可形成
簇生芽丛。
34
1、幼苗形态
35
2、剪取茎尖
茎尖
36
２、在光照培养箱中，25℃下,16小 时光照，培养两周，可形成愈伤组 织。
28
1、将苗剪出伤口
29
2、剪好的叶片和茎段
30
3、打开培养皿
31
5、愈伤组织接种
32
6、培养皿封口
33
三、苗的茎尖培养
１、取幼苗10株，剪取1cm左右的茎尖→浸入70%
的酒精1分钟→消毒液中15分钟→无菌水冲洗5次
显 微 解 剖 镜 焦距旋钮 使 用
上光源调节
图解 旋钮
46
——
13 、 幼 苗 形 态 生 长 点
17
14、剪取茎段
18
15、剪好的苗
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培养皿的拿法
20
16、茎段接种a
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17、茎段接种b
植物组织培养学
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（一）防止外植体带菌
2、室内或无菌条件下进行预培养
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（一）防止外植体带菌
3、外植体严格灭菌 灭菌效果试验 多次灭菌和交替灭菌
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看录像培养基的制备并思考制备的过程要注意些什么？
（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌
1、分装时，注射器勿与瓶接触，培养基勿粘瓶口
织
芽
植 物 体
植物组织培养条件
含有全部营养成分的培养基、一定的温度、 空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。
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愈伤组织
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植物细胞全能性的表达
脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂 的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱 出来，恢复细胞的分裂活性。
再分化:经脱分化的组织或细胞在一定的培 养条件下可有转变为各种不同细胞类型的 能力。
生长素/细胞分裂素 适中 有利于根芽的分化 低 有利于芽的形成
生长调节物质的使用甚微，一般用mg／L表示浓度。在组 织培养中生长调节物质的使用浓度，因植物的种类、部位、 时期、内源激素等的不同而异，一般生长素浓度的使用为 0.05-5mg／L，细胞分裂素0.05—10mg／L。
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组织培养
在人工培养基上，离体培养 植物的器官、组织、细胞和原生 质体，并使其生长、增殖、分化 以及再生植株的技术。
思考：
1、植物组织培养的原理是什么？
植物细胞具有全能性，即生物体的 细胞，具有使后代细胞形成完整个 体的能力。
2植物组织培养基本操作
（二）干热灭菌
培养瓶、三角瓶、试管等玻璃器皿及接种 器械，可以进行干热灭菌。
即将洗涤干净的玻璃器皿放到烘箱中，在 150℃温度下，干热灭菌1小时，或120℃下灭菌2 小时。
灭菌完毕冷却后取出器械贮存。
贮存室要保持无菌、干燥、以免造成培养基的 二次污染。
灭菌后的培养基一般应在2周内使用，时间 过长易造成潜在的污染。
二、常用培养基的种类、配方及特点
（一）培养基种类
1、根据态相分： 固体培养基-加凝固剂的培养基 液体培养基-不加凝固剂的培养基。
2、根据培养过程分： 初代培养基-初次接种外植体的培养基。 继代培养基-接种初代培养之后培养物的 培养基。
3、根据作用分：
诱导培养基-诱导外植体启动生长 增殖培养基-诱导离体培养苗扩大繁殖。 生根培养基-诱导离体培养苗生根 4、根据营养水平分： 基本培养基-包含无机盐等基本营养成分。 完全培养基-包含使植物离体生长全面营养。
培养基灭菌后如果出现过多沉淀或琼脂不凝 固等现象，该培养基不能继续使用，应查明原因 重新配制。
第三节 外植体无菌接种
一般来说，无论何种类型的细胞工程技 术，起始阶段均涉及外植体取材、灭菌、 接种与培养等基本过程。
与生长素协调作用对形成层分化有影响，刺激体细胞 胚进一步发育成植株。
有20多种，目前主要是赤霉酸GA3。
4、水 离体培养中，既是培养基营养成分的溶剂，又
是培养基的重要组成部分，占培养基成分的95%。 原生质体培养、细胞培养及分生组织培养一般
应用双蒸水或超纯水 大批量快速繁殖培养，可用一般蒸馏水或纯净
（二）几种常用培养基 细胞工程常用的基本培养基有： MS、MT、White、Nitsch、 Blaydes、N6、B5、NT、 SH、Miller、Heller等。
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1、点着酒精灯
2、双手擦拭消毒
3、剪刀灭菌
外焰
4、酒精中冷却
5、把酒精烧去
6、打开三角瓶——铝箔纸的拿法a
8、瓶口在火焰上烧过
9、铝箔纸的放法
11、镊出苗
12、放入培养皿中
13 、 幼 苗 形 态 剪好的苗
培养皿的拿法
16、茎段接种a
17、茎段接种b
成，用封口膜将培养皿封好。
３、在恒温培养箱中，26℃下,培养六周，可形成
簇生芽丛。
1、幼苗形态
2、剪取茎尖
茎尖
3、剪好的茎尖
4、倒入70%酒精处理1分钟
5、倒去酒精
6、倒入消毒液(一般为升汞）处理15分钟
7、倒去消毒液
8、无菌水冲洗5次
9、取出茎尖
10、在滤纸上吸干水分
11 、 双 目 解 剖 镜 下 解 剖 茎 尖
1、将苗剪出伤口
2、剪好的叶片和茎段
3、打开培养皿
5、愈伤组织接种
6、培养皿封口
三、苗的茎尖培养
１、取幼苗10株，剪取1cm左右的茎尖→浸入70% 的酒精1分钟→消毒液中15分钟→无菌水冲洗5次 →灭菌的滤纸上吸干→放入灭菌的培养皿。 ２、在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露 出生长锥，挑取带着两至三个叶原基的生长锥。 移到盛有B5培养基的培育皿中，诱导愈伤组织形
愈伤组织：指由植物的一种组织或器官
经历脱分化形成的原始胚样组织，它具
有再分化成为完整植物体的潜能；
外植体：植物组织培养中用来进行无菌
培养的离体材料，可以是器官、组织、 细胞和原生质体等；
无菌和消毒： 无菌操作要注意：每
次操作前，将双手用酒精棉球擦拭 消毒；解剖针、解剖刀等金属工具 用火焰烧过灭菌，在酒精中冷却， 再将酒精烧去方可使用；尽量减少 无菌三角瓶和培养皿在空气中的暴 露时间；所有无菌操作尽量快速完 成，并请在酒精灯附近进行。
目镜
放大倍数 旋钮 物镜 焦距旋钮
底光源开关 解剖载物台
上光源调节 旋钮
显 微 解 剖 镜 使 用 图 解
组 培 实 验 用 品
一、无菌苗的快速切繁
1、点着酒精灯，双手擦拭消毒，打开长有无菌苗 的三角瓶，三角瓶瓶口使用前后需在酒精灯外焰 上烧过灭菌。 2、用灭菌的镊子轻轻捏出幼苗，放在无菌的培养 皿中，用灭菌的剪刀将主茎剪成若干0.5-1cm的 小段，要求每段至少包含一个生长点，接入盛有 MS培养基的三角瓶中，每一个切段必须直接接触 培养基，三角瓶口重新烧过灭菌，并重新封好。 3、在光照培养箱中，25℃，16小时光照条件下培 养4周，可长成完整植株。
18、接种好的苗a
19、接种好的苗b
20、重新封好瓶口a
21、重新封好瓶口b
22、重新封好瓶口c
二 愈伤组织的培养
１、挑选生长健康的无菌叶或茎，在 灭菌的培养皿中→剪成0.5-1cm2的 小块或相当大小的茎段(造成伤口), →接种在盛有MS培养基的培养皿中 →将培养皿用封口膜封住。 ２、在光照培养箱中，25℃下,16小 时光照，培养两周，可形成愈伤组 织。
植物组培基本操 作图解
植物组织培养的内容
植物组织培养包括以植物和它的离
体器官、组织、细胞和原生质体为外植
体的离体无菌培养，拥有几种不同水平
的培养技术，即整体的、器官的、组织
的、细胞和原生质的培养技术。（植株 培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、 细胞培养、原生质体培养 ）
植物组织培养中的重要概念