咔唑比色法测定造纸法再造烟叶中的果胶含量_杨海健

［ 5］ 徐志强，陈 开 波，蔡 （ 9 ） ： 26
［ 6］ 吴玉萍，杨光宇，王东丹． 光谱实验室， 2004 ， （ 1） ： 183 ［ 7］ Schaffler K． J AOAC Int， 2003 ， 85 （ 1 ） ： 95 ［ 8］ GB / T 10742 造纸原料 果胶含量的测定
度 A。在咔唑无水乙醇溶液用量为 0. 2 ～ 0. 4 mL 范围时吸光度较大， 故本实验选择 0. 15% 咔唑无 水乙醇溶液用量为 0. 2 mL。 2. 3. 2 显色温度的影响 按实验方法， 在不同温度 下显色， 测其吸光度 A。温度对显色结果没有太大影 。 响 故本实验选择在室温下（ 25 ℃ 左右） 显色。 2. 3. 3 按实验方法， 取不同显 色时间测定体系的吸光度。可看出显色时间 2h 即 显色时间的影响 基本达到最大吸光度， 故选用显色时间为 2 h。 吸 光度达最大值后有 30 min 左右时间吸光度几乎不 变， 说明在这段时间内是稳定的， 时间再延长， 吸光 度明显下降， 说明体系不稳定。 因此， 显色完全后 必须在 30 min 内测定。 综上所述， 测定半乳糖醛酸含量的适宜显色条 件为： 0. 15% 咔唑无水乙醇溶液用量 0. 2 mL， 显色 温度 25 ℃ ， 显色时间 2h。 2. 4 方法精密度 使用本测定方法测定了本公司生产的造纸法 再造烟叶（ 型号： ZY － 01 ） 中的果胶含量， 结果见表 1 。测定结果表明本方法精密度良好， 其相对标准 偏差为 4% 以内。
加标回收实验
ห้องสมุดไป่ตู้
Results of spike recovery 测定值 m / mg 36. 2 45. 3 55. 7 45. 2 54. 8 65. 1 回收率 /% 94 93 96 91 93 96 兵，等． 烟 草 科 技，2005 ， 93 94 平均回收率 /%
参考文献
［ 1］ 王瑞新， 2003 烟草化学． 北京： 中国农业出版社， ［ 2］ 闫克玉， 2005 ， 10 ： 6 闫洪洋， 李兴波， 等． 烟草科技， ［ 3］ 周正红， 1997 （ 2 ） ： 22 高孔荣， 张水华． 烟草科技， ［ 4］ 张槐苓， 葛翠英， 穆怀静， 等编． 烟草分析与检验． 郑 1994 州： 河南科学技术出版社（ 第一版） ，
3+
样品编号 1 2 4. 96 4. 83 4. 85 5. 15 5. 10 5. 36
5. 21 5. 20
4. 95 4. 98
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Chinese Journal of Analysis Laboratory 2012 － 6 2. 5 加标回收实验 取造纸法再造烟叶样品 2 种， 每种取 3 份按照 前述的处理和分析方法， 测定其半乳糖醛酸含量。
Chinese Journal of Analysis Laboratory 2012 － 6
第 31 卷第 6 期 2012 年 6 月
分析试验室
Vol. 31． No． 6
咔唑比色法测定造纸法再造烟叶中的果胶含量
中图分类号： O657. 3 文献标识码： A 文章编号： 1000-0720 （ 2012 ） 06-100-03
果胶质是植物细胞壁物质的重要组成部分 ， 成 分子结构尚未完全清楚， 通常认为是 分比较复杂， 由 D － 半乳糖醛酸和 D － 半乳糖醛酸甲酯以 α － 1， 4 苷键连成的直链。 果胶在各等级烟叶中的含 量约为 6% ～ 11%
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图1 Fig. 1
标准曲线
Standard Curve
定容， 摇匀， 过滤， 收集滤液即得总果胶提取液。 取果胶提取液， 用水稀释到适当浓度 （ 含半乳 糖醛酸 10 ～ 70 mg / L） 。取 1 mL 稀释液于试管中， 按制作标准曲线的方法操作， 测定吸光度并从标准 曲线上查出半乳糖醛酸浓度。 2 结果与讨论 2. 1 测定波长的选择 按实验方法， 作参比液和半乳糖醛酸水解物的
Study on pectin content in papermaking reconstituted tobacco with carbazole spectrophotometric determination method YANG Haijian，DING Hongying，YU Guodong，LI Huayu and WANG Wenling * （ Henan Cigarette Industry Tobacco Sheet Co． Ltd． ，Xuchang 461100 ） ， Fenxi Shiyanshi， 2012 ， 31 （ 6 ） ： 100 ～ 102 Abstract ： A method was described for the determination of pectin content in papermaking reconstituted tobacco by carbazole and sulphuric acid spectrophotometric method． With the systemic experimental investigation and optimization，the optimized conditions were determined as follows： 6． 0 mL of sulphuric acid， 85 ℃ and 15 min for the hydrolytic process， 0． 2 mL of 0. 15% carbazole ethanol solution， 25 ℃ and 2h for the reaction process． The precision and spike recovery of the method were also investigated and good results were obtained． The method can be applied successfully to the determination of actual samples． Keywords： Pectin； Papermaking reconstituted tobacco； Carbazole； Spectrophotometry
［1 ， 2 ］
N 电子分析天平 （ 梅特勒 仪器仪表公司 ） ； AB204－ 托利多仪器（ 上海） 公司） 。 1. 2 实验方法 标准曲线的制作 准确称取半乳糖醛酸 0. 0991 g， 用蒸馏水溶解后定容于 100 mL 容量瓶中， 2. 0， 4. 0， 6. 0， 8. 0， 10. 0 mL 于 6 个 100 分别移取此液 0， 1. 2. 1 mL 容量瓶中， 加蒸馏水定容， 得标准稀释液。分别移 取标准稀释液 1. 0 mL 于 6 支试管中， 加 6 mL 浓 H2 SO4 ， 摇匀， 在 85 ℃ 水浴中加热 15 min， 取出冷却， 加入 0. 15% 咔唑无水乙醇溶液 0. 2 mL， 摇匀， 在室温 下暗处放置， 在 530nm 波长下显色 2h， 用 lcm 比色皿， 以空白试剂做参比， 测定吸光度（ A） ， 绘制吸光度 － 浓 度标准曲线（ 图 1） 。 1. 2. 2 样品的处理与测定 取本公司生产的造纸 法再造烟叶样品（ 型号： ZY － 01 ） 于 80 ℃ 下烘 2h， 研碎， 过 250 μm 筛， 称取 5 ～ 10 g （ 精确到 0. 001 g） 样品于烧杯中， 加入热的 70% 乙醇， 充分搅拌以 提取糖类， 过滤， 反复操作至滤液不呈糖的反应。 99% 残渣用 乙醇洗涤， 再用乙醚洗涤， 风干乙醚。 用 150 mL 加热至沸的 0. 05 mol / L HCl 溶液把漏斗 中残渣移入 250 mL 锥形瓶中， 装上冷凝器， 于沸水 浴中加热回流 1h， 冷却后移入 250 mL 容量瓶中， 加甲基红指示剂 2 滴， 加 0. 5 mol / L NaOH 中和后，
杨海健， 丁红营， 于国东， 李华雨， 王文领
*
（ 河南卷烟工业烟草薄片有限公司 ， 许昌 461100 ） 要： 采用咔唑分光光度法对造纸法再造烟叶中的果胶含量进行了测定 ， 通过 实验对测定条件进行了优化。 得到了最优的水解条件 （ H2 SO4 加入量 6 mL、 摘 85 ℃ 水解 15 min） 和显色条件（ 咔唑乙醇溶液用量 0. 2 mL、 25 ℃ 显色 2h ） 。 稳 定性、 精密度和加标回收实验均表明该法在造纸法再造烟叶果胶含量的测定中 可以得到满意的结果。 关键词： 果胶； 造纸法再造烟叶； 咔唑； 分光光度法
表2 Tab. 2 样品 样品含量 m / mg 26. 8 1# 26. 8 26. 8 31. 5 2# 31. 5 31. 5 加入量 m / mg 10 20 30 15 25 35
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并往其中加入一定量的半乳糖醛酸标准样品 ， 按照 前述的处理和分析方法， 测定其半乳糖醛酸含量。 结果见表 2 。
［8 ］ ［6 ］
、 流动分析 等。 本文
、 气相色谱法
［7 ］
将咔唑比色法
应用于造纸法再造烟叶果胶含量
通过对各操作条件进行实验考察， 确定最 的测定， 佳测定条件。 1 1. 1 实验部分 试剂和仪器 D － 半乳糖醛酸（ AR， Sigma 公司 ） ； 咔唑 （ AR， 国药集团化学试剂公司 ） ； 无水乙醇 （ AR， 开封东 ） ； （ ， 大化工公司试剂厂 浓硫酸 优级纯 洛阳昊华化 学试剂公司） 。 Agilent8453 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 （ Agilent） ； DZKW 型电子恒温水浴锅 （ 余姚市亚星
1202 ； 修订日期： 20111226 收稿日期： 2011基金项目： 河南中烟科技创新项目（ 2010029 ） 资助
mail： bpyanghj@ hatic． com 作者简介： 杨海健（ 1981 － ） ， 男， 博士； E-
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Chinese Journal of Analysis Laboratory 2012 － 6 2. 2. 2 水解温度的影响 在加酸量为 6 mL， 加热 时间 15 min 下分别对温度为 45 ～ 95 ℃ 的半乳糖醛 酸溶液进行水解并显色， 结果可看出， 在 80 ～ 95 ℃ 间吸光度基本不变， 故选择 85 ℃ 为水解温度。 2. 2. 3 水解时间的影响 在加酸量为 6. 0 mL， 温度 为 85 ℃ 下分别以不同加热时间对半乳糖醛酸溶液进 行水解并显色。在加热时间 15 ～ 20 min 时吸光度最 20 min 后 下 降 明 显， 大， 本实验选择水解时间为 15 min。 综上所述， 半乳糖醛酸水解的适宜条件为： 加入 水 解 温 度 85 ℃ ， 水解时间 浓硫 酸 量 为 6. 0 mL， 15 min。 2. 3 2. 3. 1 显色条件 咔唑无水乙醇溶液用量的影响 按实验方 法， 改变 0. 15% 咔唑无水乙醇溶液用量， 测其吸光
。 果胶是亲水胶体物质， 通
对烟叶的吸湿性和弹性起一 过渗透作用吸收水分， 定的作用。烟草中的果胶质含量过高时会使烟草 在燃吸时不完全， 并产生甲醇， 对烟草吸味及安全 性不利。因此， 烟草中果胶含量的测定已成为烟草 品质的重要指标之一 法
［5 ］ ［3 ］
。
［4 ］
果胶的测定方法主要有重量法 、 高效液相色谱法
Tab. 1 表 1 精密度实验结果 Results of precision experiment 实测值 / % 平均值 / % 5. 02 5. 02 5. 16 4. 76 5. 32 5. 13 5. 07 5. 05 RSD / % 3. 1 3. 9
吸收 曲 线。 由 结 果 可 知， 水 解 物 在 420nm 和 530nm 处各有一个明显的吸收峰， 其中 530nm 处 的吸收峰较强， 因此本实验选择 λmax = 530 nm 作 为最佳测定波长。 2. 2 水解条件的选择 在温度 85 ℃ ， 加热时间 15 min 下分别对加酸量为 2. 0 ～ 12. 0 mL 的半乳糖 2. 2. 1 加酸量的影响 醛酸溶液进行水解并显色， 结果表明加酸量为 6. 0 ～ 10. 0 mL 时吸光度较大且基本不变， 故选用加酸 量为 6. 0 mL 浓硫酸。 实验中发 现 浓 硫 酸 中 Fe 含 量 对 测 定 有 干 3+ －5 扰， 当 C （ Fe ） ＞ 2. 00 × 10 mol / L 时， 加显色剂 后测量液中出现深绿色， 会干扰紫红色或掩盖紫红 色， 此时应考虑硫酸的纯度。本试验中采用了特定 厂家生产的浓硫酸（ 优级纯 ） 进行半乳糖醛酸的水 3+ 解， 从而避免了 Fe 对测定的干扰。