咔唑比色法测定造纸法再造烟叶中的果胶含量_杨海健
咔唑比色法测定果胶物质的含量？
咔唑比色法测定果胶物质的含量曹健康,姜微波编著.果蔬采后生理生化实验指导。
2007,9:84-87一原理：果胶（多聚半乳糖醛酸），由d-半乳糖醛酸以α-1,4-糖苷键连接形成的直链聚合物,部分d-半乳糖醛酸上的羧基被甲醇酯化而形成甲酯。
半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应，形成紫红色化合物，颜色与浓度成正比。
反应1-2h后最深。
在530nm波长处测定吸光值。
二材料，仪器及试剂柑橘，分光光度计，天平，研钵，容量瓶（100ml），具塞刻度管（25ml），移液管，三角瓶（1000ml），水浴锅，计时器，离心机，刻度离心管（50 ml）。
1.5g/l咔唑-乙醇溶液称取0.15g咔唑加入无水乙醇溶解并稀释至100ml100μg/ml半乳糖醛酸标准液称取10mg半乳糖醛酸，用蒸馏水溶解，定容至100ml浓硫酸（分析纯）多重蒸馏95%乙醇0.5mol/L硫酸溶液三实验步骤：1.制作标准曲线取6支25ml具刻度试管，编号，按照表14加入半乳糖醛酸标准液，然后小心地沿管壁加入6.0ml浓硫酸，在沸水浴中加热20min。
取出冷却至室温，各加入0.2ml 1.5g/L咔唑-乙醇溶液，摇匀。
在暗处放置30min 后，测定反应液在波长530nm处的吸光度值。
以半乳糖醛酸质量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，求得线性回归方程。
项目管号0 1 2 3 4 5100μg/ml半乳糖醛酸标准液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 相当于半乳糖醛酸质量/μg 0 20 40 60 80 1002.可溶性果胶的提取称取1g果树组织样品，置于研钵中磨成匀浆，转入到50ml刻度离心管中，加入25ml95%乙醇，在沸水浴中加热31min，以去除样品中糖分及其它物质。
注意补加乙醇。
取出冷却至室温后，在8000r/min离心15min,弃去上清液。
再加95%乙醇，在沸水浴中加热。
再造烟叶原料烟梗中果胶的去除
再造烟叶原料烟梗中果胶的去除张军;曹茜;李新生;陈敏;王军【摘要】In order to reduce the negative effect of pectin on the smoking taste of reconstituted tobacco, the improved sulfuric acid-carbazole analysis method with desugarization was used to quantitatively evaluate the effectiveness of some extractive agents, including water, EDTA, sodium hexametaphosphate, diammonium phosphate and ammonium oxalate, on the extraction of pectin in tobacco stems. Taking the factors of process technologies and energy consumption into account, the experimental analysis method based on secondary subtraction of response surface method was established to optimize the extraction conditions. The optimal conditions were; 1.2% ammonium oxalate solution, ratio of solution to tobacco stems 10: 1, extr acting for 30 minutes at 60 °G .%为减少果胶对再造烟叶吸味的不利影响,改善其内在品质,以除糖后的硫酸咔唑果胶分析方法为定量基础,考察了水、EDTA溶液、六偏聚磷酸钠溶液、磷酸氢二铵溶液、草酸铵溶液等提取助剂对烟梗中果胶的去除效果,并结合生产工艺和节约能耗的因素,建立二次作差响应曲面实验分析方法,优化烟梗果胶浸提条件,得到最佳工艺条件为:1.20％草酸铵溶液,液料比为10∶1,提取温度为60℃,时间为30 min.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2011(000)009【总页数】7页(P5-11)【关键词】再造烟叶;烟梗;果胶;二次作差响应曲面法【作者】张军;曹茜;李新生;陈敏;王军【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京市海淀区清华东路17号100083;上海烟草集团有限责任公司技术中心烟草行业卷烟烟气重点实验室,上海市长阳路717号 200082;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京市海淀区清华东路17号 100083;上海烟草集团太仓海烟再造烟叶有限公司,江苏太仓港口开发区东方东路19号 215433;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京市海淀区清华东路17号 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京市海淀区清华东路17号 100083【正文语种】中文【中图分类】TS452.6再造烟叶是利用卷烟过程中废弃的烟梗、烟末和烟片等作为原料制成接近烟叶的薄片,从而再用于卷烟生产[1-2]。
用咔唑比色法测定食品中的果胶实验
2、样品处理时应充分洗涤去除糖分，减少其存在对咔唑的呈色反应的影响。
3、在测定样液和制作样液标准曲线时，应使用相同规格、同批号的浓硫酸，以保证浓度一致，减少硫酸浓度对咔唑的呈色反应的影响。
4、样品提取液的测定
取果胶提取液，用水稀释到适当浓度(含半乳糖醛酸10～70μg/mL)。取2mL稀释液于50mL比色管中，以下按制作标准曲线的方法操作，测定吸光值。从标准曲线上查出半乳糖醛酸的浓度(μg/mL)。
5、计算（略）
四、注意事项
1、本法的测定结果以半乳糖醛酸表示，不同来源的果胶中半乳糖醛酸的含量不同，如甜橙为77．7％，柠檬为94．2％，柑橘为96％，苹果为72％～75％，若把结果换算为果胶的含量，可按上述关系计算换算系数。
果胶经水解可生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸在强酸中可与咔唑试剂发生缩合反应，生成紫红色化合物，该紫红色化合物的呈色强度与半乳糖醛酸含量成正比，故可通过测定吸光值对果胶含量进行定量。
此法适用于各类食品的果胶含量的测定，具有操作简便、快速、准确度高、重现性好等特点。
二、实验仪器：
分光光度计，恒温水浴锅，95%乙醇或无水乙醇等。
三、实验步骤：
1、样品处理（略） 8支50mL比色管，各加入12mL浓硫酸，于冰水浴中边冷却边缓缓依次加入浓度为0、10μg/mL、20μg/mL、30μ/ml、40μ/L、50μg/mL、60μg/mL、70μg/ml的半乳糖醛酸标准溶液2mL，充分混合后，再置于冰水浴中冷却。然后在沸水浴中准确加热10min，迅速冷却到室温，各加入0.15％咔唑试剂1mL。充分混合，室温下放置30min，以半乳糖醛酸含量为0的半乳糖醛酸标准溶液为空白，在530nm波长下测定吸光值，以半乳糖醛酸含量为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线。
烟草及烟草制品果胶的测定
《烟草及烟草制品果胶的测定离子色谱法》研究报告安徽中烟工业公司2009年8月果胶测定行业标准研究报告关键字：烟草果胶离子色谱果胶酶摘要：比较了酸解法、酶解法、酸化酶解结合法三种前处理方法对烟草果胶水解的影响，采用离子色谱法测定水解物中的半乳糖醛酸的含量（果胶含量以半乳糖醛酸计），结果显示酸化酶解结合法可以有效水解烟草中的果胶，相对于酸解法和酶解法该法水解烟草果胶更为彻底，而且不破坏水解产物半乳糖醛酸。
离子色谱法测定半乳糖醛具有灵敏度高、分离度好等优点，方法的线性相关系数为1，回收率94 %～101 % ，RSD 为0.91 %。
四家实验室进行了方法比对实验，结果令人满意。
果胶是烟草中一种复杂的高分子聚合物，其基本结构是半乳糖醛酸以α-1,4糖苷键聚合形成的聚半乳糖醛酸。
不同种类的烟草中果胶含量是不同的，通常含量在6％-12％之间，是烟草中含量较大的一类生物大分子物质[1]。
烟草中的果胶类物质含量过高时会使烟草在燃吸时燃烧不完全，对烟草吸味有负面影响，同时果胶在分解时还能产生有毒物质甲醇，对卷烟的安全性不利[2]。
与此同时果胶又对烟草保湿能力和柔韧性有着重要作用，因此果胶含量已成为烟草品质评价的重要指标，准确测定烟叶中的果胶含量对于烟草品质有着重要的意义[3、4]。
目前国内有关果胶测定的标准有:GB/T 10742-1989 造纸原料果胶含量测定、NY146.11-1988果汁的测定和NY82.11-1988果胶测定。
这三个标准制定时间比较早，三个标准都是先采用乙醇溶液回流除去小分子糖，再使用硫酸溶液水解果胶，咔唑比色法测定水解液中的还原糖，方法对半乳糖醛酸的选择性差，操作较为复杂且灵敏度也不高，而国际标准化组织ISO以及CORESTA也没有制定果胶测定的相关标准。
目前果胶测定方法主要有两大类，一类是直接测定果胶酸含量，果胶含量以果胶酸计；一类是通过酸解或者酶解将果胶水解，采用现代分析仪器测定水解产物半乳糖醛酸含量，果胶含量以半乳糖醛酸计。
造纸法再造烟叶的研究进展
(１．福建金闽再造烟叶发展有限公司,福建 罗源 ３５０６００;２．中国检验认证集团深圳有限公司,广东 深圳 ５１８０００)
[摘 要 ] 造 纸 法 再 造 烟 叶 技 术 经 过 不 断 改 进 ,其 烟 叶 品 质 大 幅 度 改 善 ,对 环 境 的 污 染 也 日 益 减 少 . 本 文就造纸法再造烟叶工艺近几年的发展及生产过程中产生的废水处理进行了简单综述,最 后 对 造 纸 法 再 造 烟叶的发展前景进行了展望.
２０１９ 年 第 １ 期 «黑 龙 江 造 纸 » ������ 论 文 与 综 述 ������
造纸法再造烟叶的研究进展
黄 晶１,郑 彬１,施 建 在１ ,王 圣 军２
[关 键 词 ] 造 纸 法 再 造 烟 叶 ;工 艺 改 进 ;废 水 处 理 ;发 展 前 景
咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶含量的研究
标准曲线的绘制：取上述标准溶液各 １ｍｌ 于 ６ 个试管中，加入浓硫酸 １０ｍｌ， 边加边冷却，放于 ８５℃水浴 锅 中 加 热 ２５ｍｉｎ 后 冷 却 至 室 温 ， 加 入 ０．１５％咔唑无水乙醇溶液 ０．８ｍｌ，摇匀，在 ５３０ｎｍ 处 依次测定吸光度，空白试剂为参比，以吸光度为纵 坐标，半乳糖醛酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线，
第 ２８ 卷 第 １１ 期（上） ２０１２ 年 １１ 月
பைடு நூலகம்
赤 峰 学 院 学 报（ 自 然 科 学 版 ） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｆｅｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ． ２８ Ｎｏ． １１ Ｎｏｖ． ２０１２
咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶含量的研究
关键词：咔 唑 硫 酸 比 色 法 ；豆 腐 柴 果 胶 ；含 量 测 定 中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－ ２６０Ｘ（２０１２）１１－ ０１０８－ ０３
果胶是一种植物胶体，是从植物中提取的一种 复杂的天然高分子聚合物，存在于植物的细胞壁和 细胞内层，是细胞壁的组成成分．果胶分子主要是 由 α－１，４－ 糖苷键联接而成的半乳糖醛酸（Ｇ．Ａ．） 与鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖等中性糖联结而成［１］． 果胶安全无毒，被广泛应用于食品、医药、纺织、化 妆品、冶金、烟草等行业［２－３］．目前国内对其含量的测 定方法主要有重量法［４］、容量法［４］、比色法［５］和滴定法 ［５］等．其中重量法中果胶经皂化生成果胶酸钠，再经 乙酸酸化使之生成果胶酸，加入钙盐则生成果胶酸 钙沉淀，烘干后称量［６］．此法稳定可靠，但操作较烦 琐费时，分析时间较长，不宜普遍推广．比色法是通 过测定半乳糖醛酸的含量来获得果胶的含量，准确 性好，且操作简单，在用于剑麻、苎麻［７］、甜菜［８］、向日 葵［９］、柑橘［１０］等中果胶的含量测定时，都取得了满意 的结果．本实验用咔唑比色法测定豆腐柴中果胶的 含量，并且对果胶的水解条件和半乳糖醛酸的测定 条件做了详细的实验，获得了满意的结果． 1 试验部分 １．１ 试验仪器与主要试剂
咔唑比色法测定玉米种皮中的果胶含量
咔唑比色法测定玉米种皮中的果胶含量
李春明;管春梅
【期刊名称】《中国公共卫生》
【年(卷),期】2004(20)4
【总页数】1页(P490-490)
【关键词】咔唑比色法;玉米种皮;果胶;线性范围
【作者】李春明;管春梅
【作者单位】哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生检验学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R115
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1.咔唑比色法测定苹果渣提取液果胶含量的研究 [J], 游新侠;仇农学
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。 果胶是亲水胶体物质， 通
对烟叶的吸湿性和弹性起一 过渗透作用吸收水分， 定的作用。烟草中的果胶质含量过高时会使烟草 在燃吸时不完全， 并产生甲醇， 对烟草吸味及安全 性不利。因此， 烟草中果胶含量的测定已成为烟草 品质的重要指标之一 法
［5 ］ ［、 高效液相色谱法
Study on pectin content in papermaking reconstituted tobacco with carbazole spectrophotometric determination method YANG Haijian，DING Hongying，YU Guodong，LI Huayu and WANG Wenling * （ Henan Cigarette Industry Tobacco Sheet Co． Ltd． ，Xuchang 461100 ） ， Fenxi Shiyanshi， 2012 ， 31 （ 6 ） ： 100 ～ 102 Abstract ： A method was described for the determination of pectin content in papermaking reconstituted tobacco by carbazole and sulphuric acid spectrophotometric method． With the systemic experimental investigation and optimization，the optimized conditions were determined as follows： 6． 0 mL of sulphuric acid， 85 ℃ and 15 min for the hydrolytic process， 0． 2 mL of 0. 15% carbazole ethanol solution， 25 ℃ and 2h for the reaction process． The precision and spike recovery of the method were also investigated and good results were obtained． The method can be applied successfully to the determination of actual samples． Keywords： Pectin； Papermaking reconstituted tobacco； Carbazole； Spectrophotometry
加标回收实验
Results of spike recovery 测定值 m / mg 36. 2 45. 3 55. 7 45. 2 54. 8 65. 1 回收率 /% 94 93 96 91 93 96 兵，等． 烟 草 科 技，2005 ， 93 94 平均回收率 /%
参考文献
［ 1］ 王瑞新， 2003 烟草化学． 北京： 中国农业出版社， ［ 2］ 闫克玉， 2005 ， 10 ： 6 闫洪洋， 李兴波， 等． 烟草科技， ［ 3］ 周正红， 1997 （ 2 ） ： 22 高孔荣， 张水华． 烟草科技， ［ 4］ 张槐苓， 葛翠英， 穆怀静， 等编． 烟草分析与检验． 郑 1994 州： 河南科学技术出版社（ 第一版） ，
［1 ， 2 ］
N 电子分析天平 （ 梅特勒 仪器仪表公司 ） ； AB204－ 托利多仪器（ 上海） 公司） 。 1. 2 实验方法 标准曲线的制作 准确称取半乳糖醛酸 0. 0991 g， 用蒸馏水溶解后定容于 100 mL 容量瓶中， 2. 0， 4. 0， 6. 0， 8. 0， 10. 0 mL 于 6 个 100 分别移取此液 0， 1. 2. 1 mL 容量瓶中， 加蒸馏水定容， 得标准稀释液。分别移 取标准稀释液 1. 0 mL 于 6 支试管中， 加 6 mL 浓 H2 SO4 ， 摇匀， 在 85 ℃ 水浴中加热 15 min， 取出冷却， 加入 0. 15% 咔唑无水乙醇溶液 0. 2 mL， 摇匀， 在室温 下暗处放置， 在 530nm 波长下显色 2h， 用 lcm 比色皿， 以空白试剂做参比， 测定吸光度（ A） ， 绘制吸光度 － 浓 度标准曲线（ 图 1） 。 1. 2. 2 样品的处理与测定 取本公司生产的造纸 法再造烟叶样品（ 型号： ZY － 01 ） 于 80 ℃ 下烘 2h， 研碎， 过 250 μm 筛， 称取 5 ～ 10 g （ 精确到 0. 001 g） 样品于烧杯中， 加入热的 70% 乙醇， 充分搅拌以 提取糖类， 过滤， 反复操作至滤液不呈糖的反应。 99% 残渣用 乙醇洗涤， 再用乙醚洗涤， 风干乙醚。 用 150 mL 加热至沸的 0. 05 mol / L HCl 溶液把漏斗 中残渣移入 250 mL 锥形瓶中， 装上冷凝器， 于沸水 浴中加热回流 1h， 冷却后移入 250 mL 容量瓶中， 加甲基红指示剂 2 滴， 加 0. 5 mol / L NaOH 中和后，
［ 5］ 徐志强，陈 开 波，蔡 （ 9 ） ： 26
［ 6］ 吴玉萍，杨光宇，王东丹． 光谱实验室， 2004 ， （ 1） ： 183 ［ 7］ Schaffler K． J AOAC Int， 2003 ， 85 （ 1 ） ： 95 ［ 8］ GB / T 10742 造纸原料 果胶含量的测定
Chinese Journal of Analysis Laboratory 2012 － 6
第 31 卷第 6 期 2012 年 6 月
分析试验室
Vol. 31． No． 6
咔唑比色法测定造纸法再造烟叶中的果胶含量
中图分类号： O657. 3 文献标识码： A 文章编号： 1000-0720 （ 2012 ） 06-100-03
果胶质是植物细胞壁物质的重要组成部分 ， 成 分子结构尚未完全清楚， 通常认为是 分比较复杂， 由 D － 半乳糖醛酸和 D － 半乳糖醛酸甲酯以 α － 1， 4 苷键连成的直链。 果胶在各等级烟叶中的含 量约为 6% ～ 11%
度 A。在咔唑无水乙醇溶液用量为 0. 2 ～ 0. 4 mL 范围时吸光度较大， 故本实验选择 0. 15% 咔唑无 水乙醇溶液用量为 0. 2 mL。 2. 3. 2 显色温度的影响 按实验方法， 在不同温度 下显色， 测其吸光度 A。温度对显色结果没有太大影 。 响 故本实验选择在室温下（ 25 ℃ 左右） 显色。 2. 3. 3 按实验方法， 取不同显 色时间测定体系的吸光度。可看出显色时间 2h 即 显色时间的影响 基本达到最大吸光度， 故选用显色时间为 2 h。 吸 光度达最大值后有 30 min 左右时间吸光度几乎不 变， 说明在这段时间内是稳定的， 时间再延长， 吸光 度明显下降， 说明体系不稳定。 因此， 显色完全后 必须在 30 min 内测定。 综上所述， 测定半乳糖醛酸含量的适宜显色条 件为： 0. 15% 咔唑无水乙醇溶液用量 0. 2 mL， 显色 温度 25 ℃ ， 显色时间 2h。 2. 4 方法精密度 使用本测定方法测定了本公司生产的造纸法 再造烟叶（ 型号： ZY － 01 ） 中的果胶含量， 结果见表 1 。测定结果表明本方法精密度良好， 其相对标准 偏差为 4% 以内。
3+
样品编号 1 2 4. 96 4. 83 4. 85 5. 15 5. 10 5. 36
5. 21 5. 20
4. 95 4. 98
— 101 —
Chinese Journal of Analysis Laboratory 2012 － 6 2. 5 加标回收实验 取造纸法再造烟叶样品 2 种， 每种取 3 份按照 前述的处理和分析方法， 测定其半乳糖醛酸含量。
杨海健， 丁红营， 于国东， 李华雨， 王文领
*
（ 河南卷烟工业烟草薄片有限公司 ， 许昌 461100 ） 要： 采用咔唑分光光度法对造纸法再造烟叶中的果胶含量进行了测定 ， 通过 实验对测定条件进行了优化。 得到了最优的水解条件 （ H2 SO4 加入量 6 mL、 摘 85 ℃ 水解 15 min） 和显色条件（ 咔唑乙醇溶液用量 0. 2 mL、 25 ℃ 显色 2h ） 。 稳 定性、 精密度和加标回收实验均表明该法在造纸法再造烟叶果胶含量的测定中 可以得到满意的结果。 关键词： 果胶； 造纸法再造烟叶； 咔唑； 分光光度法
［8 ］ ［6 ］
、 流动分析 等。 本文
、 气相色谱法
［7 ］
将咔唑比色法
应用于造纸法再造烟叶果胶含量
通过对各操作条件进行实验考察， 确定最 的测定， 佳测定条件。 1 1. 1 实验部分 试剂和仪器 D － 半乳糖醛酸（ AR， Sigma 公司 ） ； 咔唑 （ AR， 国药集团化学试剂公司 ） ； 无水乙醇 （ AR， 开封东 ） ； （ ， 大化工公司试剂厂 浓硫酸 优级纯 洛阳昊华化 学试剂公司） 。 Agilent8453 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 （ Agilent） ； DZKW 型电子恒温水浴锅 （ 余姚市亚星
Tab. 1 表 1 精密度实验结果 Results of precision experiment 实测值 / % 平均值 / % 5. 02 5. 02 5. 16 4. 76 5. 32 5. 13 5. 07 5. 05 RSD / % 3. 1 3. 9
吸收 曲 线。 由 结 果 可 知， 水 解 物 在 420nm 和 530nm 处各有一个明显的吸收峰， 其中 530nm 处 的吸收峰较强， 因此本实验选择 λmax = 530 nm 作 为最佳测定波长。 2. 2 水解条件的选择 在温度 85 ℃ ， 加热时间 15 min 下分别对加酸量为 2. 0 ～ 12. 0 mL 的半乳糖 2. 2. 1 加酸量的影响 醛酸溶液进行水解并显色， 结果表明加酸量为 6. 0 ～ 10. 0 mL 时吸光度较大且基本不变， 故选用加酸 量为 6. 0 mL 浓硫酸。 实验中发 现 浓 硫 酸 中 Fe 含 量 对 测 定 有 干 3+ －5 扰， 当 C （ Fe ） ＞ 2. 00 × 10 mol / L 时， 加显色剂 后测量液中出现深绿色， 会干扰紫红色或掩盖紫红 色， 此时应考虑硫酸的纯度。本试验中采用了特定 厂家生产的浓硫酸（ 优级纯 ） 进行半乳糖醛酸的水 3+ 解， 从而避免了 Fe 对测定的干扰。