GBS核酸检测
实时荧光PCR技术检测妊娠晚期孕妇B族链球菌(GBS)感染的临床效能
实时荧光PCR技术检测妊娠晚期孕妇B族链球菌(GBS)感染的临床效能江平【期刊名称】《《世界复合医学》》【年(卷),期】2019(005)010【总页数】3页(P58-60)【关键词】实时荧光PCR技术; 妊娠晚期; B族链球菌感染; 检测; 效能【作者】江平【作者单位】江苏省连云港市妇幼保健院中心实验室江苏连云港222002【正文语种】中文【中图分类】R446当前临床对于B 族链球菌 (group B streptococcus，GBS)的筛查主要有实时荧光PCR、细菌培养、核酸探针检测、特异性抗原或抗体测定几种方法，其中细菌培养法一直被视为金标准，不过该检查所需时间很长，同时孕妇生殖系统中细菌种类多，普通培养基中会抑制GBS 的生长，出现漏诊情况[1-2]。
另外选择抗原检测或者抗体检测虽然可以迅速得到检测结果，不过存在比较明显的假阳性或假阴性率[3]。
针对部分孕期没有筛查GBS 的临产孕妇，在短时间内获得准确的筛查结果非常重要，PCR 检测所需时间短，检测结果具备良好灵敏度，被视作筛查GBS 的有效方法[4-5]。
该研究具体以2017 年10 月—2018 年12 月该院6 710 例妊娠晚期孕妇为对象，分析实时荧光PCR 技术对于GBS 感染的筛查价值，现报道如下。
1 对象与方法1.1 研究对象以该院6 710 例妊娠晚期孕妇为对象，年龄：20～43岁之间，年龄平均（32.66±10.09）岁。
孕妇孕周在35～37 周之间，均为单胎妊娠。
全部孕妇均排除剖宫产分娩；参与研究前1 个月有感染性疾病史；以往有抗菌素全身使用或者局部使用史。
该研究孕妇均对研究内容知情同意，签订同意书，且研究获得医院伦理委员会批准。
1.2 方法仪器试剂：B 族链球菌核酸检测试剂盒；PCR 分析仪；微生物鉴定系统；GBS-DNA 提取试剂和扩增试剂盒；API菌种鉴定系统；全自动血培养系统。
采集标本：选择1 无菌拭子深入肛门中，在括约肌上2～3 cm 的位置进行轻轻旋转，收集孕妇直肠部位的分泌物，同样采集2 次，装入1 个无菌套管中，视作1 份标本，进行密封保存。
B族链球菌(GBS)介绍
B族链球菌（GBS）介绍一、简介B族链球菌（group B streptococcus，GBS）是革兰阳性球菌，也称无乳链球菌（S. agalactiae），常定植于成人下生殖道及胃肠道，同时也可定植于婴幼儿上呼吸道，是新生儿感染和死亡的主要原因。
GBS是围产期严重感染性疾病的主要致病菌之一，大约25%～40%孕妇的产道携带这种细菌，其中40%～70%在分娩过程中会传递给新生儿，大约有1%～3%的新生儿会出现早期侵入性感染，其中有5%会导致死亡。
二、适用人群：1．对所有孕妇于妊娠35～37周进行GBS筛查a)中华医学会妇产科学分会产科学组在《孕前和孕期保健指南（第1版）》中已将妊娠35～37周GBS筛查作为一个备查项目b)美国疾病预防控制中心在《围产期GBS预防指南》中已将GBS筛查定为普查项目2．对出现以下情况的新生儿进行GBS检测a)新生儿出现类似早发型GBS感染症状，如呼吸困难、发热等败血症迹象b)母亲在产前未做过GBS筛查的新生儿c)母亲在产前GBS筛查结果阳性的新生儿三、如何采样1.采样工具：一次性无菌拭子2.采样步骤1）在抗生素使用前取样①孕妇采样：a)生殖道分泌物采样：先拭去阴道过多的分泌物，用一支无菌拭子插入阴道至内1/3处，沿阴道壁轻轻旋转取得分泌物；b)直肠分泌物采样：用另一支无菌拭子插入肛门，在肛门括约肌以上约2.5cm处，沿肠壁轻轻旋转取得标本；c)将两支无菌拭子分别放入无菌套管中，密闭送检；（注意：“保妇康栓”等栓剂药物会对检测造成较大影响，因此建议避免在用药期采样，如无法避免，则仅单独采直肠分泌物样本送检即可）。
②新生儿取材：可在鼻孔、腋下、腹股沟和脐周等处随机采样，用一支无菌拭子旋转1周，放入无菌套管中，密闭送检。
2）无菌管标识：在相应的无菌管管壁上填写样本采集位置（孕妇生殖道/孕妇直肠/新生儿）、采样时间等。
3.样本运输：2-8℃冷藏运输，3天内送达。
四、结果解读（需要让赵翠写个专业的）1．B族链球菌核酸检测为“阴性”或测定值<1.0E+3 copies/ml：说明本次送检样品带菌量低于本试剂盒的检测限值，不需治疗，随时观察。
B族链球菌核酸检测试剂盒(PCR荧光探针法)
B族链球菌核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）B族链球菌（GBS）核酸检测试剂盒样本要求1.样本采集：采用藻酸钙、普通棉拭子或涤纶拭子采集生殖道或直肠等部位带上皮细胞的分泌物标本。
2．标本存放：待测样本在2-8℃保存不应超过24小时；-18℃以下保存不超过4天。
样品冻融6次以内无影响，但应尽量避免反复冻融。
3．标本的运输条件：冷冻4天内无影响，冷藏2天内无影响。
4.含血样本无法正常检测应避免。
5.研究显示，常用栓剂药物会对试剂检测盒造成较大影响，因此取样前应避免该药物的使用。
检验方法1.DNA提取（在样品处理区操作）（1）妊娠34―37周孕妇生殖道或直肠分泌物：取含有分泌物的生理盐水1ml，13000rpm离心10min，弃上清液，沉淀，加无菌生理盐水1ml混匀，13000rpm离心5min，弃上清。
沉淀加入50μlDNA提取液充分混匀，99℃―100℃加热处理10min，13000rpm离心10min，吸取上清至1.5ml离心管中保存，DNA提取完毕。
（2） GBS阳性对照品提取：取50μl GBS阳性对照品加入1.5ml离心管中，13000rpm离心10min，沉淀加入50μlDNA提取液充分混匀，99℃―100℃加热处理10min，13000rpm离心10min，吸取上清至1.5ml离心管中保存，DNA提取完毕。
（3）空白对照品提取：同GBS阳性对照品提取。
2.GBS PCR反应液配制（在试剂准备区进行）解冻试剂，在打开盖子之前振荡并短暂离心个试剂管。
按标本数量分装GBS PCR反应液。
按每管35μl分装至0.2mlPCR反应管中，转入样品处理区。
3.加样（在样品处理区进行）分装好的各反应管加入处理好的DNA样本5μl，阳性对照品5μl及阴性对照品5μl，短暂离心使所有试剂集中到反应管底部，确定盖好管盖或封膜后，立即进行PCR扩增反应。
4.PCR扩增（在PCR检测区进行）（1）UNG反应：50℃2min （2）预变性：95℃5min（3）PCR：45个循环；60℃时分别检测FAM和HEX通道荧光信号，选择反应体系40μl. 5.阈值测定阈值设定在空白对照正常扩增区线下方，基线设定可选择3-5个循环，一般选择5.00，若是最高浓度Ct值小于5.00，则在3-5之间按照低于最高浓度Ct值设定；这类标本应稀释后再进行检测。
完整word版,B族链球菌(GBS)介绍
B族链球菌（GBS）介绍一、简介B族链球菌（group B streptococcus，GBS）是革兰阳性球菌，也称无乳链球菌（S. agalactiae），常定植于成人下生殖道及胃肠道，同时也可定植于婴幼儿上呼吸道，是新生儿感染和死亡的主要原因。
GBS是围产期严重感染性疾病的主要致病菌之一，大约25%～40%孕妇的产道携带这种细菌，其中40%～70%在分娩过程中会传递给新生儿，大约有1%～3%的新生儿会出现早期侵入性感染，其中有5%会导致死亡。
二、适用人群：1．对所有孕妇于妊娠35～37周进行GBS筛查a)中华医学会妇产科学分会产科学组在《孕前和孕期保健指南（第1版）》中已将妊娠35～37周GBS筛查作为一个备查项目b)美国疾病预防控制中心在《围产期GBS预防指南》中已将GBS筛查定为普查项目2．对出现以下情况的新生儿进行GBS检测a)新生儿出现类似早发型GBS感染症状，如呼吸困难、发热等败血症迹象b)母亲在产前未做过GBS筛查的新生儿c)母亲在产前GBS筛查结果阳性的新生儿三、如何采样1.采样工具：一次性无菌拭子2.采样步骤1）在抗生素使用前取样①孕妇采样：a)生殖道分泌物采样：先拭去阴道过多的分泌物，用一支无菌拭子插入阴道至内1/3处，沿阴道壁轻轻旋转取得分泌物；b)直肠分泌物采样：用另一支无菌拭子插入肛门，在肛门括约肌以上约2.5cm处，沿肠壁轻轻旋转取得标本；c)将两支无菌拭子分别放入无菌套管中，密闭送检；（注意：“保妇康栓”等栓剂药物会对检测造成较大影响，因此建议避免在用药期采样，如无法避免，则仅单独采直肠分泌物样本送检即可）。
②新生儿取材：可在鼻孔、腋下、腹股沟和脐周等处随机采样，用一支无菌拭子旋转1周，放入无菌套管中，密闭送检。
2）无菌管标识：在相应的无菌管管壁上填写样本采集位置（孕妇生殖道/孕妇直肠/新生儿）、采样时间等。
3.样本运输：2-8℃冷藏运输，3天内送达。
四、结果解读（需要让赵翠写个专业的）1．B族链球菌核酸检测为“阴性”或测定值<1.0E+3 copies/ml：说明本次送检样品带菌量低于本试剂盒的检测限值，不需治疗，随时观察。
《GBS核酸检测》课件
样本处理
样本保存
采集后的样本应立即送往实验室 进行检测，或低温保存不超过一
周。
样本处理
在实验室中，将采集的样本进行充 分的混匀，以保证检测的准确性。
去除干扰物质
处理过程中需去除样本中的杂质和 干扰物质，避免对检测结果产生干 扰。
核酸提取
核酸提取方法
采用核酸提取试剂盒或自动化提 取仪进行核酸提取。
饮食与药物
检测前应避免进食过多难以消 化的食物，并告知医生最近服
用的药物情况。
检测中的配合
保持冷静
检测过程中保持冷静， 避免因紧张导致肌肉收
缩，影响检测结果。
配合医生指导
按照医生的指示正确摆 放体位，确保检测部位 暴露充分，便于医生进
行采样。
避免咳嗽和吞咽
在医生进行采样时，尽 量避免咳嗽和吞咽动作 ，以免影响样本质量。
控制疫情
及时发现GBS携带者，采 取有效措施控制疫情扩散 。
GBS的检测意义
保障母婴健康
GBS感染对母婴健康具有 较大危害，通过检测可有 效预防新生儿感染，降低 母婴并发症和死亡率。
提高人口素质
预防新生儿GBS感染有助 于提高人口素质，减少疾 病对儿童生长发育的影响 。
促进公共卫生发展
GBS检测有助于完善公共 卫生体系，提高疾病预防 和控制能力，减少传染病 的传播。
及时告知不适
如感觉不适或出现任何 异常情况，应及时告知
医生。
检测后的注意事项
01
02
03
04
遵守取样时间
按照医生告知的时间取报告， 如有特殊情况需及时告知工作
人员。
保持采样部位清洁
检测后保持采样部位清洁干燥 ，避免感染。
《GBS核酸检测》课件
样本采集
从患者体内采集样本，如尿液、血液等。
PCR扩增
通过聚合酶链反应(PCR)扩增核酸，以增 加检测灵检测PCR反应过程中的荧 光信号变化，实时监测样本中 的GBS核酸含量。
质子核磁共振法
利用磁共振技术检测样本中的 GBS核酸特征，以高准确性判 断是否感染。
2 指导妇科疾病治疗
通过GBS核酸检测，可以了解妇科疾病是否与GBS感染有关，为医生提供治疗方案。
3 研究GBS病原学特性
通过GBS核酸检测，可以深入了解GBS病原体，加深对其特性、传播及致病机制的认识。
GBS核酸检测流程
1
核酸提取
2
提取样本中的核酸，以便进行检测。
3
结果分析
4
对PCR扩增产物进行分析，判断是否存 在GBS感染。
电化学法
利用电化学方法对样本进行检 测，快速准确地判断GBS感染。
GBS核酸检测结果解读
1 阳性
2 阴性
3 无效
说明样本中存在GBS核酸， 患者可能感染了GBS。
说明样本中未检测到GBS 核酸，患者未感染GBS。
说明样本处理、提取、扩 增等步骤有误，需要重新 检测。
GBS核酸检测的应用领域
妇产科
优势
• 快速、准确 • 非侵入性 • 高灵敏度 • 应用广泛
限制
• 设备要求高 • 操作技术要求高 • 可能出现假阴性结果 • 样本处理要求严格
结论与展望
GBS核酸检测以其优势在临床和科研中大放异彩。随着技术的不断进步，我们对GBS感染的认识将更加深入， 为其预防和治疗提供更多理论和实践依据。
《GBS核酸检测》PPT课 件
欢迎来到《GBS核酸检测》PPT课件。在本课程中，我们将探讨GBS核酸检 测的作用与意义，流程，方法，结果解读，应用领域，以及优势与限制。让 我们一起进入这个令人兴奋的主题。
检测GBS的临床意义
GBS感染对新生儿的影响
• GBS也是导致新生儿败血症和脑膜炎最常见的原因之一
GBS感染对新生儿的危害
GBS感染对新生儿的危害
发生时间 主要传播途径
主要表现
早发型感染EOD
发生在生后7 d内，一般在出生后 24~48 h发病
垂直传播 大多数新生儿GBS感染发生在产程 中或胎膜破裂时，GBS可上行入侵 宫腔，胎儿可能吸入GBS至肺部而 发生感染。
• ► 对所有孕妇于妊娠35-37周进行GBS筛查，结果阳性者进行预防性治疗。 • ► 以下情况，应进行GBS检查和预防性治疗： • ① 本次妊娠有GBS菌尿； • ② 上次新生儿GBS感染史； • ③ 在妊娠37周之前分娩； • ④ 胎膜早破； • ⑤ 分娩温度超过38℃； • ⑥ GBS阳性孕妇新生儿出生以后； • ⑦ 产程中发生宫内感染的产妇及新生儿；
10 GBS核酸检测试剂盒适用标本类型
11 GBS-PCR检测取材方法
GBS的携带规律
1、带菌方式有：一过性、间歇 性、慢性带菌三种形式。故同 一孕妇妊娠期不同阶段GBS的 检测结果可能不同。 2、常与念珠菌合并感染，发展 到泌尿生殖道。 3、健康妇女带菌率15%--35%。 4、北京地区孕妇阴道带菌率 13%。
• 水平传播是指病毒在传播中1.通过粘膜传播 许多病毒都是经粘膜感染而致 病的；2.通过皮肤传播 有些病毒可通过昆虫叮咬或动物咬伤、注射或机械 损伤的皮肤侵入机体而引起感染；3.医源性传播 有些病毒也可经注射、输 血、拔牙、手术、器官移植引起传播。
7 GBS的携带规律
C 目录 ONTENTS
8 GBS的常用检测方法 9 我院GBS检测方法
我国GBS产前筛检现状
• 长期以来我国对GBS的感染现状重视不够，然而近期国内报道了一些GBS 感染导致死亡的病例，邓江红等对北京儿童医院234例感染肺炎死亡的新生 儿肺部组织石蜡标本进行了GBS检测，其检出率为65%，该结果显示新生 儿肺炎死亡病例中，GBS是第一位的致病菌。
B 族链球菌核酸检测试剂(荧光 PCR 法) 标准说明书
ICS11.100C 44YY 中华人民共和国医药行业标准YY/T XXXX—XXXXB族链球菌核酸检测试剂(荧光PCR法) Group B Streptococcus DNA detection kit (fluorescent PCR)（征求意见稿）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施目次前言.................................................................................................................................................................... I I 1范围.. (1)2规范性引用文件 (1)3要求 (1)4试验方法 (2)5 标签和说明书 (2)6 包装、运输、贮存 (3)附录A（资料性附录） (4)参考文献 (5)前言本标准按照GB/T1.1-2009 《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由国家食品药品监督管理总局提出。
本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会(SAC/TC 136)归口。
本标准起草单位：本标准主要起草人：B族链球菌核酸检测试剂（荧光PCR法）1 范围本标准规定了B族链球菌核酸检测试剂盒的要求、实验方法、标识、标签、使用说明书、包装、运输和贮存。
本标准适用于通过荧光PCR法原理，定性检测新生儿特定部位或女性阴道、直肠分泌物及其培养物中的B族链球菌，以快速检出B族链球菌核酸的诊断试剂盒。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T191 包装储运图示标志（ISO 780）YY/T 0466.1医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分：通用要求（ISO 15223-1）GB/T 29791.1 体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第1部分：术语、定义和通用要求3 要求3.1 外观外包装应符合制造商的要求。
GBS核酸检测
PCR介绍
什么是PCR……
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是 一种分子生物学技术，用于放大扩增特定的DNA片段；可看作 生物体外的特殊DNA复制。
PCR原理
PCR一般由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂， 形成单链DNA 。 ②退火 ：（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形 成局部双链。 ③延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，以dNTP为原料，从引物 的3′端→5′端延伸，合成与模板互补的DNA链。 每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍;2～3小时就能 将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
以上要求需在同一次实验中同时满足
结果分析
阴性：样品的FAM通道无Ct值显示, HEX通道Ct≤35.00 阳性： 样品的FAM通道 Ct≤38.00， HEX通道Ct≤35.00 备注：若样品的FAM通道 38.00<Ct≤45.00，建议重新检测该样本， 若重检结果仍为38.00<Ct≤45.00或Ct≤38.00，判定为阳性； 若Ct不显示且HEX通道Ct≤35.00，判定为阴性。
其它成份
酶
一般为Taq酶
模板
待扩增DNA链
PCR扩增仪
PCR温度循环至关重要，PCR扩增仪各参数必须准确。 现已有几十家不同的厂家在国内外生产和销售PCR扩增仪。 国外厂家：Bio-Rad，ABI, Roche …… 国内厂家：杭州朗基 ，杭州博日……
PCR反应特点
特异性强：引物与模板DNA特异正确结合 ，碱基配对原则 ，Taq DNA 聚合酶忠实性扩增 灵敏度高 ：PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克 (pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=10-6）水平 简便快速：一般在1～4 小时完成扩增反应
真菌、B连HPV1303142
分型200多种
与生殖道肿瘤相关 高危型 与宫颈癌及宫颈病变密切相关， 如16、18、31、33、35、39、45、51、52、 56、58、59、68、73、82等 疑似高危型 与宫颈癌有一定相关性，但由 于在人群中的分布频率较低或相关研究数 据较少，需进一步研究，如26、53、66等
低危型 常引起外生殖道湿疣等良性病 变，如6、11、40、42、43、44、54 、61、70、72、81、candHPV89等
心包液培养
•
随着新型抗真菌药物的应用白色念 珠菌感染减少，而非白念珠菌（光滑 念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、 季也蒙念珠菌、近平滑念珠菌、挪威 念珠菌、溶脂念珠菌、都柏林念珠 菌）增多。
培养染色
某医院真菌检测种类 分布情况
念珠菌易感人群
高龄且住院时间长的患者
皮肤黏膜屏障功能减弱，免疫及其调节功 能降低，体内生态环境容易失调
危害机制
抑制乳酸杆菌生长，导致生殖道pH值 改变--念球菌的生长。 对绒毛膜的吸附力及穿透力最强，是宫内 感染的主要原因。 引起胎膜早破，上行感染导致羊膜腔感 染，是早产、晚期先兆流产的重要原因。
• 引起胎膜早破，上行感染导致羊膜腔 感染，是早产、晚期先兆流产的重要 原因。
对新生儿的危害
B链、念珠菌核酸检测及HPV基因分 型的意义
四川省临床检验中心 杜 琼
B 链
B链？
¾ B族链球菌学名无乳链球菌(S.agalactiae)，为革兰氏阳性球 菌，正常寄居于阴道和直肠，属于条件致病菌。
GBS ¾ 在20世纪70年代，GBS已被证实为围产期母婴感染的主要致 病菌之一，在围产医学中占有不可忽视的地位。 NhomakorabeaBS流行病学
¾ 15-35%
GBS-DNA核酸扩增 (2)
GBS-DNA核酸扩增标准操作规程
1.目的
规范B族链球菌核酸DNA定性检测的核酸扩增操作
2.范围
B族链球菌核酸检测实验的核酸扩增操作
3.操作人员
PCR室在岗工作人员。
4. 操作步骤
4.1 PCR 扩增
4.1.1 PCR 扩增前准备：先打开电脑，将Mx3000P左后方电源开关打开。
4.1.2 打开电脑上的Mx PRO控制软件，在里，选择需要的样本孔，在Well type中设定NTC、NPC、unkown（样品）；双击所选孔，自动跳出 Well Information窗口,在Name框中输入样本号,在Comments框中输入GBS，点击就能显示样品编号，编号结束选中样本孔，使之呈现浅蓝色，选择荧光通道FAM和HEX。
4.1.3 打开扩增程序：点击，点击版面右上方的，点击我的电脑，打开D盘，双击date，选择上一次所做的GBS文件，打开，核对扩增程序。
4.1.3.1 GBS扩增程序为：
Stage 1：37℃,2min；
Stage 2：94℃,2min；
Stage 3：94℃,15sec→55℃,45sec，40循环
荧光信号收集时设定为55℃，FAM荧光素。
反应体系为50μL。
B族链球菌核酸检测在产前筛查中的应用
周 ｆ３６．５７±０．１４）周 ；５７例 经产 妇 ，４３例 初产 妇 。阳性 组 年 １．４ 统计学 方法 采用 ＳＰＳＳ１７．０统计学软件处 理数据 。计
龄最 小 ２３岁 ，最 大 ４８岁 ，平 均年 龄 （４０．３３±２．５６）岁 ；孕 周 量资料以均数 ４－标准差 （ ４－ｓ）表示 ，采用 ｔ检验 ；计数资料
主张加 强对孕周为 ３５～３７周的孕产妇 的产前 检测 ，通 过给予 之后于离心管 内将拭子浸泡液 １ ｍｌ倒 人其 中 ，而后再次对其
孕产妇早期 ＧＢＳ产前检查干预 ，能够较好地 降低新生 儿早 期 进行混合均匀处 理 ，并对其进 行 ５ ｍｉｎ １３０００ ｒ离心 ，将上清
感染风 险 以及产 褥病发生 风险 ，从 而有效提 高预防效率 ，最 弃掉之后 液重悬采用 ５Ｏ“ｌ拭子进行浸 泡处理 。采用 一管对
的 阳性 检 出率 以及 阴性组 、阳性组 母 婴并 发 症发 生 情况 。 ＧＢＳ阳性评定标准 ：荧光信号存在 显著的 Ｓ形扩增 曲线 ，ＣＴ 值 ＜３３ ｌ４ Ｊ，ＴｅｘａｓＲｅｄ（内参 ）ｃＴ值 ＜４０。母 婴并发症发 生情况
大 ４８岁 ，平均年龄 （４０．１３±２．６２）岁 ；孕周 ３５～３７周 ，平均孕 包括胎膜早 破 、产后 出血 、早产 、败血症 、窒息 、感 染等。
【关键 词 】 Ｂ族链 球菌核酸检测 ；产前筛查 ；临床应用
ＤＯＩ：１０．１４１６３６．ｅｎｋｉ．１１－５５４７＆．２０１８．２３．０３１
ＧＢＳ是一种常见 的细菌 ，是导致胎膜早破 、新生儿感染 、 选取可疑 的灰 白色细菌或 圆形细菌 ，培养 时间 ：１６—１８ ｈ。对
脑 膜炎 等严 重并 发症 发 生的重 要致 病 菌。ＧＢＳ感染 后存 活 细 菌种类进 行检测 、鉴 别 ，采用 细菌鉴定 仪进行 操作处理 。
B族链球菌核酸检测应用于产前筛查中的价值评价
B族链球菌核酸检测应用于产前筛查中的价值评价摘要：目的探究B族链球菌核酸检测应用于产前筛查中的价值。
方法选取2017年3月至2018年2月在我院门诊进行产前检查的1000例孕妇，对其阴道及肛门分泌物进行采集，并分别采用细菌培养法及PCR技术对B族链球菌（GBS）进行检测，比较两种检测方法阳性率，并对GBS阳性及阴性组孕妇分娩方式及产后母婴并发症进行比较。
结果采用PCR检测法阳性率为6.10%，采用细菌培养法阳性率为4.50%，且两种检测方法阳性患者均被确诊为GBS阳性。
PCR检测法准确率为96.83%，显著高于细菌培养法的71.43%（P＜0.05）。
且两组孕妇分娩方式无显著差异（P＞0.05），比较其并发症情况显示，GBS阳性组孕妇出现早产、产后出血、胎膜早破等情况及新生儿出现感染、窒息及败血症等情况发生几率均显著高于阴性组。
结论采用PCR技术能够在产前对GBS进行有效检测，且早期对GSB进行治疗，消除其感染症状，能够有效避免母婴并发症的发生。
关键词：B族链球菌核酸；产前筛查；价值Evaluation of nucleic acid detection of group B Streptococcus in prenatal screening [Abstract：] Objective To explore the value of nucleic acid detection of group B Streptococcus in prenatal screening.Method 1000 pregnant women who were in the outpatient department of our hospital from March 2017 to February 2018 were selected to collect the vaginal and anal exudates，and the bacteria culture and PCR techniques were used to detect B Streptococcus（GBS），and the positive rates ofthe two methods were compared.The delivery mode and production of the pregnant women with GBS positive and negative groups were compared.The complications ofthe posterior mother and infant were compared.Result The positive rate of PCR detection was 6.10%，the positive rate of bacterial culture was 4.50%，and two positive patients were diagnosed as GBS positive.The accuracy rate of PCR assay was 96.83%，which was significantly higher than that of bacterial culture 71.43%（P<0.05）.And there was no significant difference between the two groups of pregnant women（P>0.05）.Compared with the complications，the incidence of preterm birth，postpartum hemorrhage，premature rupture of membranes，infection，asphyxia and septicemia in the GBS positive group were significantly higher than those in the negative group.Conclusion PCR technology can be used to effectively detect GBS before birth，and the early treatment of GSB to eliminate the symptomsof infection can effectively avoid the occurrence of maternal and infant complications. Keywords group B Streptococcus nucleic acid；prenatal screening；valueB族链球菌（GBS）为革兰阳性球菌的一种，主要在人体阴道及直肠部位寄生，是全部围产期感染患者中的主要致病菌，感染后可导致孕妇出现泌尿道感染。
博尔诚集团GBS核酸检测样本采集运输方案
博尔诚（北京）科技有限公司博尔诚GBS 核酸检测样本采集运输方案一 需准备的试剂耗材一次性无菌采样管(规格5ml)和普通无菌拭子（棉拭子、藻酸钙拭子、涤纶拭子）、或套装细菌采集管及拭子，无菌生理盐水二 采样（一） 普通拭子采样1取一个一次性无菌采样管(规格5ml)，加入1ml 无菌生理盐水备用。
2 拭子采样1） 取两个无菌拭子，分别用于生殖道采样和直肠采样，具体操作见下图：2）采样结束后，将两个已采好样本的拭子放入同一个已加入1ml 无菌生理盐水的采样管中，拭子在生理盐水中轻晃洗涤3-5次；折断拭子，拭子头浸于生理盐水中，盖紧管盖，送检。
（二）套装细菌采集管拭子采样1取两个套装采集管及拭子，分别在管内加入1ml 无菌生理盐水备用。
2 拭子采样1） 取两个无菌拭子，分别用于生殖道采样和直肠采样，具体操作同上。
2） 采样结束后，将两个已采好样本的拭子分别放入已加入1ml 无菌生理盐水的配套管中，拭子在生理盐水中轻晃洗涤3-5次；盖紧管盖，送检。
三 样本保存和运输1.院内检测：样本采集后，应尽快送至检测实验室。
若当天检测，可在室温或2-8℃保存；当天不能完成检测的样本，2-8℃保存不应超过24小时；若24小时内不能完成检测，则应在-18℃以下保存，保存时间不应超过4天。
样本冻融6次以内无影响，但应尽量避免冻融。
2.院外检测：样本保存条件同上；运输过程中推荐使用冰皇（冰袋）或干冰运输，干冰运输4天内无影响，冰皇（冰袋）运输2天内无影响。
四 检测前处理1.取出采样管待其平衡至室温，-18℃以下冻存的样本要待其完全解冻。
2.普通拭子采集的样本，将样本管在震荡器上震荡混匀。
将全部样本混合液转移到1个1.5ml 离心管中；套装细菌采集管采集的样本，将样本管在震荡器上震荡混匀，先将一个样本管内的全部样本混合液转移到1个1.5ml 离心管中，13000rpm/min 离心10min ，弃上清，再将另一个样本管内的全部样本混合液转移到该1.5ml 离心管中。
gbs检查怎样取样本
gbs检查怎样取样本GBS 检查怎样取样本GBS 检查，全称 B 族链球菌检查，对于孕妇和新生儿的健康有着重要的意义。
那这项检查到底是怎样取样本的呢？下面咱们就来详细说一说。
首先，在进行 GBS 检查之前，需要做好一些准备工作。
孕妇需要提前清洁外阴，保持局部的干净和卫生。
通常，建议在检查前一天避免性生活、避免使用阴道栓剂或洗液，以免影响检查结果的准确性。
GBS 检查取样的时间一般是在孕 35 37 周左右。
之所以选择这个时间段，是因为此时检测结果对于分娩时的处理具有较好的指导意义。
接下来就是关键的取样过程了。
目前，常见的 GBS 取样部位主要有两个：阴道和直肠。
先说阴道取样。
医生会使用无菌的拭子，轻轻插入孕妇的阴道，通常在阴道下 1/3 处，靠近宫颈口的位置旋转拭子，以采集足够的分泌物样本。
这个过程中，孕妇可能会感到一些轻微的不适，但通常都是可以忍受的。
再来说直肠取样。
同样使用无菌拭子，在肛门括约肌上方约 2 5 厘米处轻轻旋转拭子进行取样。
整个取样过程通常很快，一般几分钟就能完成。
但为了保证取样的准确性和安全性，医生会严格遵循无菌操作的原则。
在取样完成后，拭子会被立即放入专门的保存液中，并尽快送往实验室进行检测。
实验室会通过培养、核酸检测等方法来确定是否存在B 族链球菌。
需要注意的是，GBS 检查的结果并不是一成不变的。
如果在临近分娩时，孕妇出现了胎膜早破、发热等异常情况，可能还需要再次进行GBS 检查，以便及时调整分娩时的处理方案。
那为什么要进行 GBS 检查呢？这是因为 B 族链球菌在孕妇体内可能没有明显症状，但在分娩过程中，如果新生儿接触到了被感染的产道分泌物，就有可能引发新生儿肺炎、败血症等严重疾病。
通过提前检查并采取相应的预防措施，可以大大降低这些风险。
对于孕妇来说，了解 GBS 检查的取样过程，有助于减轻焦虑和紧张情绪。
在检查时，积极配合医生的操作，能够确保检查的顺利进行和结果的准确性。
B族链球菌
国内围产期GBS 感染的预防工作可以借鉴美国CDC2010年发布的GBS 预防指南，对于怀孕35-37周的孕妇进行阴道和直肠的GBS 筛检，这样能够提高预防效率，节省资源，同时能够大量减少不必要的抗生素使用。
泰普GBS筛检方案4GBS 的现代分子生物学检测GBS 筛检方法对比实时荧光PCR 技术实时荧光PCR 一般流程：快捷的操作流程：3小时实时荧光PCR 技术，是指在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR 进程，最后通过扩增曲线对模板进行分析的方法。
随着实时荧光PCR 技术与相关PCR 仪的出现，彻底改变了以往利用末端法对基因进行检测的方法。
这种实时荧光PCR 技术较传统的方法有如下的优势：1）缩短实验时间，不需要进行PCR 后的电泳跑胶鉴定；2）由于数据的采集与分析都由仪器完成，不再依靠肉眼观察电泳的结果，所以检测的灵敏度与重复性大大提高；3）由于实时荧光PCR后无需开盖，所以可以非常好地防止污染的发生。
国外研究也显示，实时荧光PCR检测方法与标准的细菌培养方法在GBS检测的敏感性和特异性方面均达90%以上，达到筛检标准，已经得到美国食品和药品管理局（FDA）的批准并应用于临床。
因此，在国内采用实时荧光PCR技术进行GBS筛检是最快速、可靠的方法。
5泰普生物GBS核酸检测试剂盒产品预期用途本试剂盒基于实时荧光PCR技术平台，采用分子信标（Molecular Beacons）探针技术和特异引物技术，适用于临床样品中GBS的快速检测，可用于GBS感染的辅助诊断及疗效监控。
产品特点国内独家、技术领先；自主研发、专利技术；灵敏性高、特异性强；简便快捷、重复性好；闭管操作、避免污染。
GBS感染的防治预防GBS感染主要集中于从母婴双方消除GBS带菌状态(药物预防)着手或给新生儿保护性免疫(主/被动）。
药物预防及治疗青霉素一直以来作为预防治疗GBS感染的首选药物，目前最常用的预防及治疗方法是用青霉素G首剂500万单位静脉注射，每4—6小时250万单位；或氨苄青霉素首剂2g静脉注射，每4—6小时1g，直至分娩。
S核酸检测
检测流程（ ＜ 2 h ）
DNA 提取
PCR反应体系配制 PCR扩增及结果分析
标本 GBS阳性对照品 空白对照品
分装GBS PCR反应液
加DNA模板
PCR扩增 结果分析
35 min
5 min
1h 10min
DNA提取
1mL标本
13,000 rpm 10 min
沉淀 +1mL生 理盐水
灵敏度高 ：PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克 (pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=10-6）水平
简便快速：一般在1～4 小时完成扩增反应
模板纯度要求低 ：不需要分离病毒/细菌/培养细胞，DNA 粗制品及 RNA均可作为扩增模板
实时荧光PCR技术：是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光 信号的积累实时监测整个PCR进程，最后通过扩增曲线对模板进行分 析的方法。
GBS的筛查与预防
孕35-37周取阴道和直肠拭子作GBS检测
阳性(+)
抗生素预防
阴性(－)
未检测
临产后GBS检测
阴性( － ) 且无产时高危因素
阳性(+)
或产时高危因素：早产，产时发热 ≥38 ℃，胎膜早破≥18小时
抗生素预防
不需要抗生素预防
预防GBS疾病的抗生素使用方案举例:
➢ 《围产期GBS预防指南》指出：
✓ 是指怀孕28 周到产后一周这一分娩前后的重要时期 ✓ 围产期保健是指产前、产时和产后的一段时间内，对母亲、胎儿和
新生儿进行一系列的保健工作，使母亲健康和胎儿、新生儿的成长发育 得到很好的保护。
人群GBS带菌率
国外研究表明 ，不同地区、不同种族的妊娠晚期妇女GBS带菌率 约为6.5％～36.0％，国内报道的妊娠妇女GBS带菌率为3.5%～32.4 ％，新生儿体表带菌率与母体带菌率相似。在一些特殊人群，如肥胖 、糖耐量异常、多次妊娠以及性生活活跃的妇女中带菌率较高。
Y YT B族链球菌核酸检测试剂(荧光PCR法) (2)
Y YT B族链球菌核酸检测试剂(荧光PCR法)
Y YT B族链球菌核酸检测试剂（荧光PCR法）是一种用于检测B族链球菌（Streptococcus agalactiae，简称GBS）核酸的试剂。
B族链球菌是一种常见的致病菌，可引起新生儿感染、妇科感染等多种疾病。
该试剂采用荧光PCR法，通过检测GBS的核酸序列来确定样本中是否存在GBS。
荧光PCR法结合了聚合酶链反应（PCR）和荧光探针技术，能够在特定条件下扩增并定量检测GBS的核酸。
使用Y YT B族链球菌核酸检测试剂进行检测时，首先将待
检样品中的GBS核酸提取出来，然后将提取的核酸与试剂
中的PCR反应试剂混合，在PCR仪器中进行一系列的温度循环反应。
反应过程中，如果样品中存在GBS核酸，PCR
反应将产生荧光信号。
通过检测荧光信号的强度，可以判
断样品中GBS的存在与否。
Y YT B族链球菌核酸检测试剂的使用方便、快速，具有灵敏度高、特异性强等优点，可用于临床实验室中GBS感染的早期筛查和诊断。
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乳胶微粒凝集试验、协 由于B族链球菌血清型 同凝集试验、对流免疫 操 作 比 培 养 法简 便 ， 成 细菌抗原检 测 较多，容易造成漏检， 电泳试验及酶联免疫试 本低。 灵敏度相对较低。 验等。
采用的是所有B族链球菌 cfb 基因保守序列，所有 荧光 PCR 方法 荧光探针， PCR 法扩增 需 要 专 门 的 PCR 实 验 GBS 都存 在； 灵敏度最 检测 核酸。 室及荧光PCR仪。 高，出结果快（<2h）， 操作简单。
其它成份
酶
一般为Taq酶
模板
待扩增DNA链
PCR扩增仪
PCR温度循环至关重要，PCR扩增仪各参数必须准确。 现已有几十家不同的厂家在国内外生产和销售PCR扩增仪。 国外厂家：Bio-Rad，ABI, Roche …… 国内厂家：杭州朗基 ，杭州博日……
PCR反应特点
特异性强：引物与模板DNA特异正确结合 ，碱基配对原则 ，Taq DNA 聚合酶忠实性扩增 灵敏度高 ：PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克 (pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=10-6）水平 简便快速：一般在1～4 小时完成扩增反应
40 μL 体系：35 μL PCR反应液 + 5 μL DNA模板
PCR扩增
程序： 50℃ 2min 95℃ 5min
（ 95℃ 15s
60℃ 35s ） 45 cycles
实时监测PCR扩增过程
FAM 通道
HEX通道
结果有效性判定
FAM通道检测结果：分析样本，空白对照品： Ct值不显示；阳性对照品： Ct<30.00； HEX通道检测结果： 分析内参照基因，Ct≤35.00
产品优势二
公司GBS、 UU (解脲脲原体)、NG（淋球菌）、CT（沙眼衣原体） 四 个核酸检测试剂盒检测样本类型，DNA提取步骤和PCR扩增程序相 同，结果阈值线的设定也相同；四个病原体可以同时依次进行DNA提 取、PCR扩增步骤，区别只是所用试剂不同。如果客户四个检测项目 全部使用公司产品，会节省时间和工作量，符合客户操作简便的要求。
产品优势一
灵敏度高：采用PCR方法检测DNA，试剂与国际领先试剂性能相同 特异性强：不与临床常见其它各类病原体产生交叉反应 稳定性好：样本DNA提取质量高，阳性对照品、空白对照品内参基因扩 增曲线高度吻合，试剂稳定
无污染：全封闭PCR体系，避免实验室其它PCR产物污染
易操作：操作简便，采用预制PCR反应液，无需额外加入内参照基因、 酶等 速度快：检测周期短，从核酸提取到PCR结束实验过程不到2小时
PCR原理
变性，退火，延伸 二次循环 三次循环
一次循环
PCR反应体系
PCR反应体系中的主要试剂有：
缓冲液 dNTP 引物 一般酶试剂会有配套缓冲液，通常含有Mg2+ 通常包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP 与待扩增DNA链互补的DNA片段
纯化水
水的纯度要求很高，最好只有水分子，不含
标本保存
待测样本在2-8℃保存不应超过24小时；-18℃以下保存不超过4天。
检测流程（ ＜ 2 h ）
DNA 提取
PCR反应体系配制
PCR扩增及结果分析
标本 GBS阳性对照品 空白对照品
分装GBS PCR反应液
PCR扩增
加DNA模板
结果分析
35 min
5 min
1h 10min
DNA提取
GBS核酸检测
GBS概述
GBS概述
B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS) 学名无乳链球菌，革兰氏阳性链球菌，正常寄 居于阴道和直肠，属于条件致病菌。
在20世纪70年代，GBS已被证实为围产 期母婴感染的主要致病菌之一，在围产医学中 占有不可忽视的地位。
什么是围产期……
谢谢
新生儿进行一系列的保健工作，使母亲健康和胎儿、新生儿的成长发育 得到很好的保护。
GBS对孕妇的影响
GBS感染是胎膜早破的重要发病因素 GBS对绒毛膜有较强吸附能力和穿透能力，接种2小时内即可 吸附于母体组织，继而侵入绒毛膜，通过炎症细胞的吞噬作用 及细菌产生的蛋白水解酶的直接侵袭，使胎膜局部张力减低， 从而导致胎膜早破 。 GBS生殖道感染是导致早产的重要因素 GBS引起泌尿生殖道感染时，会引起磷脂酶A2和前列腺素及 细胞因子的释放，刺激子宫收缩导致早产。 GBS是造成产褥感染的主要致病菌之一 产褥感染是指分娩时及产褥期生殖道受病原体感染，引起局部 和全身的炎性应化。产褥感染发病率为1%～7.2%，是产妇死 亡的原因之一 。
在我国，2011年，中华医学会妇产科学分会产科学组在《孕前和 孕期保健指南(第1版)》中已将B族链球菌筛查作为一个备查项目。
《围产期GBS预防指南》指出
对所有孕妇于妊娠35～37 周进行GBS筛查，结果阳性者进行预防性治疗
以下情况应进行预防性治疗 ： 本次妊娠有GBS 菌尿 上次新生儿GBS 感染史 在妊娠37 周之前分娩 破膜时间超过18小时 分娩体温超过38.0度
有无青霉素过敏 否
青霉素G，首次剂量500万单位 （静脉注射）然后每4小时250〜 300万单位，直至分娩或者氨苄青 霉素，首次剂量2g（静脉注射）， 然后每4个小时1g，直到分娩 否 头孢唑啉，首次剂量 2G，然后每8个小时 1g，直到分娩 否
《围产期GBS预防指南》
是 病人在接受青霉素或 头孢菌素时有无出现 下列任一症状？ 过敏症、血管性水肿、 呼吸窘迫、荨麻疹 是 红霉素和克 林霉素治疗 是否有效 是 克林霉素每8小时900mg （静脉注射）直至分娩
GBS的筛查与预防
阳性(+) 孕35-37周取阴道和直肠拭子作GBS检测
抗生素预防
未检测
阳性(+)
阴性(－) 临产后GBS检测 或产时高危因素：早产，产时发热 ≥38 ℃，胎膜早破≥18小时 阴性( － ) 且无产时高危因素 抗生素预防
不需要抗生素预防
预防GBS疾病的抗生素使用方案举例:
《围产期GBS预防指南》指出：
GBS核酸检测产品
荧光PCR检测B族链球菌（GBS）
B族链球菌(GBS)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
产品特点
Taqman 探针实时PCR技术 选择B族链球菌基因组特异且无高频SNP位点的序列区域cAMP因子， 设计特异性引物和探针 内参照系统排除PCR反应过程中可能的假阴性结果 UNG酶避免扩增污染物造成的假阳性 适用仪器：Roche LightCycler 480，ABI 7500，Bioer Line-Gene K 等多色荧光PCR仪
以上要求需在同一次实验中同时满足
结果分析
阴性：样品的FAM通道无Ct值显示, HEX通道Ct≤35.00 阳性： 样品的FAM通道 Ct≤38.00， HEX通道Ct≤35.00 备注：若样品的FAM通道 38.00<Ct≤45.00，建议重新检测该样本， 若重检结果仍为38.00<Ct≤45.00或Ct≤38.00，判定为阳性； 若Ct不显示且HEX通道Ct≤35.00，判定为阴性。
试剂盒介绍
规格：20人份/盒
有效期：－18 ℃以下避光保存6个月 试剂：DNA提取液、GBS PCR反应液、GBS阳性对照品，空白对照品
标本类型：生殖道/直肠等部位带上皮细胞的分泌物标本
标本要求
溶血样本、保妇康栓、皮炎平对检测结果有显著影响，应尽量避免 这些样本的检测。 其他常见干扰物质（粘液和脓液）以及常用药物（青霉素G、阿奇 霉素、强力霉素及氧氟沙星、聚甲酚磺醛溶液、洁尔阴洗液、黄硝呋太 尔制霉素阴道软胶囊、肛泰软膏、开塞露）均无明显影响。
PCR介绍
什么是PCR……
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是 一种分子生物学技术，用于放大扩增特定的DNA片段；可看作 生物体外的特殊DNA复制。
PCR原理
PCR一般由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂， 形成单链DNA 。 ②退火 ：（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形 成局部双链。 ③延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，以dNTP为原料，从引物 的3′端→5′端延伸，合成与模板互补的DNA链。 每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍;2～3小时就能 将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
GBS对新生儿的影响
GBS感染是新生儿感染的主要原因 早发型感染 多见于出生后1周内。 母婴垂直传播是其主要传播途径。 主要临床表现为败血症（80%）、肺炎（7%）、脑膜炎（6%）；若治 疗不及时，可引发远期后遗症，如智力发育迟缓、视觉听觉丧失等。
晚发型感染 多发生于出生1周后。 主要为水平传播：可能与院内感染或家庭接触有关。 常呈隐匿性发病，其特征表现为脑膜炎；1/3的晚 发型疾病出现脑膜炎，故这些生存下来的新生儿中更 易发生神经系统后遗症。
GBS的传播与感染
感染GBS产妇
30~6生儿
97% 无症状
1%~3%
早发性疾病：败血症，肺炎 或脑膜炎
5%会导致死亡
国内外GBS筛查现状
美国疾病控制中心(CDC) 制定了《围产期GBS预防指南》 该指南已经获得以下认可： 美国妇产科学院 美国儿科学会 美国护士助产士协会 美国家庭医生协会 美国微生物学会 美国流行病学会 美国药理学会
模板纯度要求低 ：不需要分离病毒/细菌/培养细胞，DNA 粗制品及 RNA均可作为扩增模板
实时荧光PCR技术：是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光 信号的积累实时监测整个PCR进程，最后通过扩增曲线对模板进行分 析的方法。