(精品)结核分枝杆菌与实验室生物安全
二级生物安全实验室涉及主要菌种及样本
二级生物安全实验室涉及主要菌种及样本
二级生物安全实验室是研究和操作较高级别生物材料的实验室，拥有更严格的安全措施和操作规范。
在二级生物安全实验室中，主要涉及以下菌种和样本：
1. 流感病毒：包括甲型流感病毒和乙型流感病毒等。
这些病毒是引起流感的主要病原体。
2. 结核分枝杆菌：结核分枝杆菌是引起肺结核的病原体，具有较高的传染性和致病性。
3. 空肠弯曲菌：空肠弯曲菌是引起食物中毒和胃肠炎的主要病原微生物之一。
4. 传染性单核细胞增多症病毒：也称为巨细胞病毒，是一种引起多种感染性疾病的病原体。
5. 慢性乙型肝炎病毒：这是一种引起慢性乙型肝炎的病毒，具有较高的传染性和病原性。
6. 肺炎支原体：肺炎支原体是引起肺炎的主要病原菌之一，可引起呼吸道感染。
在二级生物安全实验室中，使用以上菌种和样本时要严格遵守操作规程，确保实验过程的安全性和有效性。
分枝杆菌分离培养的实验室生物安全
投稿邮箱：sjzxyx88@·医学检验·（下转第114页）0 引言由于分枝杆菌有较强的传染性，操作结核分枝杆菌的实验室人员结核病发病率比其他人群高3倍，因此在进行分枝杆菌分离培养时实验室安全问题已经成为结核病防治机构实验室必须关注的问题[1]。
就更好地保障实验室的生物安全问题，本人根据多年的工作经验，总结一些粗浅的看法。
分枝杆菌分离培养实验室的生物安全工作的开展，应严格遵循科学合理、安全第一、严格管理、远离病原、预防为主、简便易行的原则[2]，具体实施如下。
1 实验室要配备必须的安全设施（1）有独立的实验室，室内有上下水，分区与布局符合生物安全防护的基本要求；（2）实验室出口处应设专用洗手池，应设紧急洗眼设施；（3）实验室的墙壁、天花板和地面要平整，易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防 滑；（4）实验室门应带锁可自动关闭，并有可视窗；（5）实验室应设实验操作间和准备间，具有足够的空间进行实验和放置物品；（6）实验室所在建筑内应配备高压蒸气灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求；（7）实验室内应配备Ⅱ级生物安全柜，紫外线灯，废物桶，感应水龙头；（8）实验室必需有可靠的电力供应和应急照明，重要设备如生物安全柜、培养箱、冰箱等宜用设备电源；（9）实验室出入口应有在黑暗中明确辨认的标识。
2 要做好个人防护实验室工作人员要配备专用防护服，进入实验室应使用专用防护服，操作时应戴一次性N95口罩、一次性帽子、鞋套和一次性乳胶手套。
3 操作环节中严格遵守相关操作规程实验前首先要用生物安全柜内及实验室内紫外线照射1h，工作人员进入实验室前必须穿好防护服，戴上口罩、帽子、手套、鞋套，并检查有无破损，女检验员头发装束在帽内；操作人员在操作时应严格遵守实验室安全操作规程和标准化操作程序（SOP）；操作过程中警惕分枝杆菌气溶胶的产生，禁止一切与实验无关的活动，保证聚精会神完成操作，实验过程中禁止吸烟、饮食及用嘴湿润铅笔或标签等，也不要以手抚摩头、面部等。
病理实验室建设中的生物安全级别与操作规范
病理实验室建设中的生物安全级别与操作规范在病理实验室建设中，生物安全级别和操作规范是非常重要的考虑因素。
这些措施可以保护实验室工作人员和环境免受病原体和有害物质的影响。
本文将详细探讨在病理实验室建设中应采取的生物安全级别和操作规范。
1. 生物安全级别生物安全级别（BioSafety Level，简称BSL）是根据病原体的危险性和传播途径来划分不同级别的。
根据世界卫生组织（WHO）和美国疾病控制与预防中心（CDC）的指南，通常将实验室分为以下四个生物安全级别：BSL-1级实验室适用于处理低危害的微生物，如大肠杆菌等。
这些实验室通常拥有基本的实验室设施，如安全柜和生物废弃物处理设备。
BSL-2级实验室用于处理中等风险的病原体，如结核分枝杆菌和流感病毒。
该级别实验室要求工作人员使用个人防护设备，如实验手套和防护眼镜，并在操作中遵循严格的清洁和消毒程序。
BSL-3级实验室适用于处理高危害的病原体，如沙门氏菌和艾滋病病毒。
这些实验室需要具备更高级别的生物安全设施，如病原体实验室柜和负压空气系统，以最大程度地降低病原体的泄露风险。
BSL-4级实验室只用于处理最严重的致命病原体，如埃博拉病毒。
这些实验室需要最高级别的生物安全设施和严格的工作程序，以确保工作人员和环境的最大安全。
在病理实验室建设中，应根据实验室工作的特性和所处理病原体的危险性选择适当的生物安全级别。
建议在项目初期就进行合理的风险评估，并咨询专业机构的建议。
2. 操作规范除了生物安全级别，病理实验室还应制定严格的操作规范，以确保实验室工作的安全和可靠性。
以下是一些常见的操作规范：个人防护措施：实验室工作人员必须穿戴适当的个人防护装备，如实验服、手套、防护眼镜和口罩等。
这些措施旨在减少病原体对皮肤和黏膜的接触，防止可能的感染。
实验室设施和设备：病理实验室应配备必要的实验设备，如生物安全柜、负压空气系统和自动化实验台。
这些设备有助于最小化病原体的扩散和泄露。
生物实验室安全培训试题
生物实验室安全培训试题选择题1、乙型肝炎病毒，按危害程度分类，属于第几类病原微生物?( )A、第一类B、第二类C、第三类D、第四类2、结核分枝杆菌，按危害程度分类，属于第几类病原微生物？ ( ）A、第一类B、第二类C、第三类D、第四类3、根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将生物安全的防护水平分为四级,哪一级的防护水平最低？（）A、I 级B、II级C、III级D、IV级4、下列不属于实验室一级防护屏障的是： ( )A、生物安全柜 B 、防护服 C、口罩D、缓冲间5、下列哪项措施不是减少气溶胶产生的有效方法：（）A、规范操作B、戴眼罩C、加强人员培训D、改进操作技术6、二级生物安全实验室必须配备的设备是 ( ）A、生物安全柜、培养箱B、生物安全柜和水浴箱C、生物安全柜和高压灭菌器D、离心机和高压灭菌器7、PCR实验室要求严格分区，一般分为以下四区（）A、主实验区、样本置备区、产物扩增区、产物分析区B、试剂准备区、样本置备区、产物扩增区、产物分析区C、主实验区、样本置备区、产物扩增区、试剂准备区D、主实验区、试剂准备区、产物扩增区、产物分析区8、作为甲类传染病的霍乱进行大量活菌的实验操作应该在哪种级别的实验室？（）A、BSL- 1B、BSL—2C、BSL-3D、BSL—49、实验记录本的封面被细菌污染,适宜的消毒方法是: （）A、干烤B、高压蒸汽灭菌法C、75％酒精浸泡D、紫外线照射10、脱卸个人防护装备的顺序是( )A、外层手套→防护眼镜→防护服→口罩帽子→内层手套B、防护眼镜→外层手套→口罩帽子→防护服→内层手套C、防护服→防护眼镜→口罩帽子→外层手套→内层手套D、口罩帽子→外层手套→防护眼镜→内层手套→防护服判断题1、生物安全Ⅱ级实验室的建造、使用和管理无需参照生物安全Ⅰ级实验室的有关要求.( )2、在生物安全Ⅱ级实验室中工作人员应当穿工作服，戴防护眼镜。
（√）3、任何单位和个人都有责任对违反生物安全规定的问题提出批评和建议。
h37rv标准菌株 实验室等级
h37rv标准菌株实验室等级
H37Rv是结核分枝杆菌的一个常用菌株，它最初是从一个患有肺结核的患者中分离出来的。
在实验室中，结核分枝杆菌通常被分为三个生物安全等级，BSL-2、BSL-3和BSL-4，具体的实验室等级取决于研究人员处理的具体菌株以及实验室内的安全措施。
对于H37Rv这种常见的结核分枝杆菌菌株，一般情况下可以在BSL-2级别的实验室中处理。
BSL-2级别的实验室要求具有较高的生物安全标准，包括实验室内部设施的要求、操作规程、个人防护装备等，以确保研究人员和周围环境的安全。
然而，对于某些特定实验操作或者研究项目，可能需要将结核分枝杆菌处理在更高级别的实验室，比如BSL-3级别。
BSL-3级别的实验室通常用于处理能够引起严重疾病的病原体，要求更严格的操作规程和实验室设施，以及更高级别的个人防护装备。
总的来说，对于H37Rv这种常见的结核分枝杆菌菌株，一般可以在BSL-2级别的实验室中进行处理。
但具体的实验室等级还是要根据研究项目的具体要求和实验室的安全标准来确定。
病原微生物实验室的了解(生物安全)及安全防护SICOLAB
病原微生物实验室的了解（生物安全）及安全防护SICOLAB病原微生物学是一门重要的以实验为基础的基础医学课程，和细胞生物学，免疫学，分子生物学等学科都有交汇，由于在工作过程中会接触到许多致病微生物，为了安全操作病原微生物，所以我们除了掌握必要的科研素质，基本操作技能的同时，特别需要学习实验室的生物安全.1实验室的生物安全分级世界卫生组织（WHO）早就认识到安全,特别是生物安全,是一个重要的国际性问题,因此早在1983年就出版了《实验室生物安全手册》（Laborato—ry Biosafety Manual）第1版。
该手册倡导各国接受和执行生物安全的基本概念，并鼓励针对本国实验室如何安全处理致病微生物制订操作规范。
自1983年以来，已经有很多国家利用该手册来指导本国的病原微生物实验室的生物安全。
世界卫生组织根据操作微生物的危险度等级、生物因子、生物安全水平等将实验室分四级：基础实验室—-—一级生物安全水平、基础实验室——-二级生物安全水平、防护实验室———三级生物安全水平和最高防护实验室——-四级生物安全水平。
而我国生物安全分级则相反,一级最强，二级次之，四级最末。
一级生物安全水平实验室一般没有或存在极低的个体和群体危险,不太可能引起人或动物致病的微生物，供基础的教学、科研使用，房间必须具备基本的开放实验台，只能进行普通的实验，如细胞培养室（必须具有独自的房间，避免交叉污染）、分子生物学实验室等.二级生物安全水平实验室个体危险中等,群体危险低，病原体能够对人或动物致病,但对实验室工作人员、社区、牲畜或环境不易导致严重危害。
实验室必标明：生物危害安全标志、化学毒物危害标注、放射性危害标志。
进入实验室必须做好个人防护，操作致病微生物必须有生物安全柜。
三级生物安全水平个体危险高，群体危险低，病原体通常能引起人或动物的严重疾病，但一般不会发生感染个体向其他个体的传播。
要求实验室必须有严格的管理制度，实验室门口设置门禁，实验室系统必须保证负压环境，定向气流，出口淋浴以及污染物品的特殊处理。
抗酸杆菌痰涂片检验的实验室生物安全
抗酸杆菌痰涂片检验的实验室生物安全抗酸杆菌痰涂片检验作为对传染性肺结核的诊断手段比X线诊断准确性高；作为实验方法，技术相对简单，容易标准化和完成操作；其投入设备少、成本低；从收到标本到报告结果的时间短，能够及时、准确地评价涂阳患者的治疗效果，被我国设为结核病控制项目的主要实验室检验方法。
但结核分枝杆菌（抗酸杆菌）为二类高致病性病原菌，其自身的生物学特性使其容易在实验室造成对工作人员及相关人员的感染和环境的污染，形成对公众的伤害，操作结核分枝杆菌的实验室人员结核病发病率比其他人群高三倍，因此抗酸杆菌痰涂片检验的实验室安全问题已经成为当前结核病防治机构实验室必须关注的问题目前，在市、县、乡级结核病防治机构没有建立BSL-2实验室的情况下，就更好地保障实验室的生物安全问题，本人根据多年的工作经验，谈一些粗浅的看法。
实验室的生物安全工作的开展应遵循科学合理、安全首位、软件在先、严格管理、远离病原、预防为主、使用方便、厉行节约的原则，具体实施如下：实验室首先要配备必须的安全设施：1）有独立的实验室，室内有上下水，通风良好；2）室内设通风柜、高压灭菌器、紫外线灯、废物桶、感应水龙头；3）标本的收集、涂片、染色、镜检、登记和涂片的储存应在各自独立的区域；4）设有独立生物咳痰室，内设紫外线灯（按1.5W每立方米计算），每个病人咳痰后必须打开紫外线灯灭菌，如果没有此设施，要叮嘱病人在远离人群的开放空间留取标本，防止肺结核病人咳漱产生的结核杆菌气溶胶造成对人的传播及对环境的污染。
其次要做好个人防护，实验室工作人员要配备一次性聚氯乙烯手套、一次性帽子、口罩、鞋套和防护服。
第三要使用以下消毒剂：5%的苯酚溶液、75%的酒精、甲醛、2%的戊二醛及2%的乙醛溶液。
在操作环节上，严格遵守以下方法和措施：实验前首先要用紫外线灯将操作台面及室内照射一小时，工作人员进入实验室前必须穿好防护服、戴上口罩、手套、鞋套，病检查有无破损；女检验员长发束在帽内；操作人员在操作时应严格遵守实验室安全操作规程和标准化操作程序（SOP)；在实验过程中，禁止一切与实验无关的活动，保证集中精力完成操作；在操作过程中，要警惕分枝杆菌气溶胶的产生，涂片操作要小心谨慎，动作轻缓，固定和染色操作时产生气溶胶的几率较大，Allen Bw实验结果表明，样品热固定不能杀灭所有涂片标本中的结核杆菌，若涂片长时间暴露在高温中，残留活菌减少，并仅见于涂片厚的部分，从而提高热固定时痰液对细菌的保护作用，新鲜痰液粘滞度越大，加热固定时对细菌的保护作用越强，为避免此风险，操作人员要做到双手伸入操作台操作，面部通过通风柜的玻璃与操作台面隔开（在操作过程只利用通风柜的屏障功能）；完成涂片后立即染色，若不能及时染色涂片，应浸泡在2%乙醛溶液中，不可以将涂片暴露在空气中，涂片在空气中暴露的时间越长，感染的机会越大，这是操作者尤其需要注意的问题；另外涂片不能涂抹太厚尤其是新鲜痰液；经过染色的结核分枝杆菌已不能存活。
微生物安全等级分类四级
微生物安全等级分类四级
微生物安全等级分类四级（Biosafety Level 4, BSL-4）是最高级别的生物安全实验室，用于处理最危险的病原体，包括那些对人类健康和环境造成重大威胁的病原体。
BSL-4实验室通常采用高度密闭的设计和高级别的防护措施，以防止病原体的泄露和传播。
实验室内的工作人员必须穿着特殊的防护服和手套，并在实验室内采取严格的卫生和安全措施，以确保实验室内的安全。
BSL-4实验室通常用于研究和处理以下病原体：
1. 高度传染性的病原体，如埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉萨热病毒等。
2. 能够引起严重疾病的病原体，如结核分枝杆菌、鼠疫杆菌等。
3. 其他对人类和环境造成严重威胁的病原体，如霍乱弧菌、沙门氏菌等。
BSL-4实验室的建设和运行需要高度的技术和管理支持，以确保实验室内的安全和有效的生物安全措施。
结核病实验室要求
一、实验室生物安全实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。
实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合相关的标准和要求。
实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，格按照标准化、规化的操作程序进行各项实验室操作。
菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。
废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应格按照《中华人民国传染病防治法》和《中华人民国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。
（一）痰涂片镜检实验室基本要求1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。
医院实验室生物安全考核试题
医院实验室生物安全考核试题一、单选题（每题5分，共50分）1.国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，并依照实验室生物安全国家标准的规定，将实验室分为四级，其中生物安全防护水平最高的是：（）一级二级三级四级(正确答案)2.根据危害程度将病原微生物分为4类，危险程度最高的是：（）A.第一类(正确答案)B.第二类C.第三类D.第四类3.二级生物安全实验室必须配备的设备是（）A.生物安全柜和培养箱B.洗眼装置和超净工作台C.生物安全柜和消毒灭菌设备（如高压灭菌器）(正确答案)D.离心机和生物安全柜4.我国第十三届全国人民代表大会常务委员会第二十二次会议通过且于2021年4月1 5日起施行的是：（）中华人民共和国生物安全法(正确答案)病原微生物实验室生物安全管理条例医疗废物管理条例危险化学品安全管理条例5.艾滋病毒抗体检测所需最低的生物安全实验室级别为（）A.BSL-1B.BSL-2(正确答案)C.BSL-3D.BSL-46.下列哪类属于病理性医疗废物（）A.废弃的血液标本B.医学影像科废弃的化学试剂C.外科手术切除的患者组织标本(正确答案)D.医用针头7.盛装的医疗废物达到包装物或者容器的（）时，应当使用有效的封口方式，使包装物或者容器的封口紧实、严密。
A.1/2B.2/3C.3/4(正确答案)D.4/58. 用过的针头，应该放入：（）A.医疗废物专用包装袋B.锐器盒(正确答案)C.直接放入周转箱D.三种都可以9.剧毒化学品以及储存数量构成重大危险源的其他危险化学品，应当在专用仓库内单独存放，并实行以下哪种制度：（）双人收发、双人保管(正确答案)单人收发、双人保管双人收发、单人保管单人收发、单人保管10.既能保护操作者又能保护操作对象的是：（）通风橱超净工作台Ⅱ级生物安全柜(正确答案)Ⅰ级生物安全柜二、多选题（至少有一个正确选项，每题5分，共20分）1.医疗废物分类：（）A.感染性废物(正确答案)B.病理性废物(正确答案)C.损伤性废物(正确答案)D.药物性废物(正确答案)E.化学性废物(正确答案)2.以下哪些属于感染性废弃物：（）使用后废弃的一次性使用医疗器械(正确答案)病原微生物实验室废弃的病原体培养基、标本(正确答案)隔离传染病患者或者疑似传染病患者产生的废弃物(正确答案)废弃的血液制品居民日常生活中废弃的一次性口罩3.以下哪些属于二类病原微生物：（）艾滋病毒(正确答案)结核分枝杆菌(正确答案)霍乱弧菌(正确答案)甲型流感病毒埃博拉病毒4.以下属于危险化学品的是：（）甲醇(正确答案)异丙醇(正确答案)甲醛(正确答案)无水乙醇(正确答案)苯酚(正确答案)三、判断题（每题5分，共30分）1.超净工作台仅保护样品安全而不保护操作者安全。
实验室安全考试
实验室安全考试78分1.(单选题)结核分枝杆菌，按危害程度分类，属于第几类病原微生物?A.第一类B.第四类C.第三类D.第二类正确答案是D,2.(是非题)灭菌是指用物理或化学的手段将病原微生物全部清除或杀灭A.对B.错正确答案是A,3.(复选题)如何安置、处理实验服？A.离开实验室时，防护服必须脱下并留在实验室内。
B.实验服不得穿着外出，更不能携带回家。
C.用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。
正确答案是A,B,C,您的答案是A,B,C.4.(是非题)生物实验室里可以烹煮食物、聚餐，学生可以在实验室留宿。
A.对B.错正确答案是B,您的答案是B5.(单选题)紫外线消毒方便实用，紫外灯可以是固定式，也可以是活动式的，但离被照射物不应超过：A.3.2mB.1.2mC.2.2mD.2m正确答案是B,您的答案是B.6.(是非题)湿热灭菌是利用热的作用来杀菌，通常在高压蒸汽灭菌器中进行。
A.对B.错正确答案是A,您的答案是A7.(是非题)生物安全柜使用过程中，为了实验方便，柜内的设备和物品应尽量多放些。
A.对B.错正确答案是B,您的答案是B.8.(是非题)可见光能复活生物体中的光复活酶，使形成的二聚体拆开复原。
所以采用紫外光灭菌时，不能同时开启日光灯和紫外灯。
A.对B.错正确答案是A,您的答案是A.回答正确.9.(单选题)三级、四级实验室应当通过实验室国家认可，颁发相应级别的生物安全实验室证书，证书有效期为()年A.6年B.4年C.3年D.5年正确答案是D,您的答案是D.回答正确.收藏试题分类:生物医学B试题解析:10.(复选题)关于紫外线消毒，下列说法正确的有:A.它可以是固定式的，也可以是活动式的，但距离被照射物不超过1.2m为宜B.紫外线消毒方便实用，但不能彻底灭菌，特别是对细菌的芽孢杀灭效果较差C.紫外线对人体有伤害作用，不可直视，更不能在开着的紫外灯光下工作D.可见光能复活生物体中的光复活酶，使形成的二聚体拆开复原，所以不能同时开启日光灯和紫外灯正确答案是A,B,C,D,您的答案是A,B,C,D.回答正确.收藏试题分类:生物医学B试题解析:11.(是非题)开动离心机时启动要快，快速拨动速度旋钮，调到所需转数。
结核病实验室生物安全
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31
操作完毕后用消毒 液擦拭安全柜内面
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32
生物安全柜内发生意外应急处理
•用蘸取消毒液的纱布或纸巾覆盖溅出物，静置使消毒 液和溅出物接触至少15分钟
•用适当的消毒液擦拭溅出物周围表面或其他容器表面
•换新手套，净化安全柜几分钟
•将污染物高压灭菌
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33
生物安全柜外发生意外应急处理
让生物安全柜工作区排气几分钟之后再开始工 作
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27
生物安全柜的使用
操作：
消毒桌面（75%酒精，使用紫外线作为表面消毒 的效果不一定能完全无菌）
安全柜内只放本次实验所需的物品。所有物品 离前窗至少15cm，即在隔栅之后，所有污染性 的操作尽量远离工作区域的后部。
大物体之间要保持一定距离。
的类型 正确的使用方法 使用前应仔细检查，不使用标志不清、破
损或泄漏的防护用品
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个人防护
出实验室前，一定要洗手！
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废弃物处理
传染性废弃物对实验员和环境危险性极大. 在废弃物离开实验室前必须高压灭菌或去
污染处理.
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结核菌污染物品灭菌
结核分枝杆菌对湿热敏感 100℃煮沸5min可杀死痰中结核杆菌。 121℃压力蒸汽30min，可杀灭动物脏器、痰 或培养基中的结核分枝杆菌。
结核病实验室生物安全
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1
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2
什么是生物安全
生物安全是指对由现代生物技术的开发和应 用过程中可能产生的负面影响，所采取的有
效预防和控制措施.
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生物安全的目的
保护人（实验人员、同事、实验室辅助人 员）
结核病实验室要求内容
一、实验室生物安全实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR 核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。
实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合国家相关的标准和要求。
实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，严格按照标准化、规范化的操作程序进行各项实验室操作。
菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。
废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应严格按照《中华人民共和国传染病防治法》和《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。
（一）痰涂片镜检实验室基本要求1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任何人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室内应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。
结核病实验室要求
一、实验室生物安全实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR 核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。
实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合国家相关的标准和要求。
实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，严格按照标准化、规范化的操作程序进行各项实验室操作。
菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。
废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应严格按照《中华人民共和国传染病防治法》和《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。
（一）痰涂片镜检实验室基本要求1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任何人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室内应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。
结核病实验室生物安全与菌株运输
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结核杆菌的生物学性状
10、结核杆菌对紫外线敏感，直接日光照射数小时可被杀 死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒；
11、结核杆菌的抵抗力与环境中有机物的存在有密切关系， 如痰液可增强结核杆菌的抵抗力，因大多数消毒剂可使 痰中的蛋白质凝固，包在细菌周围，使细菌不易被杀死；
3、一般用萋-尼（Ziehl Neelsen）抗酸性染色法，以5% 石炭酸复红加温染色后可以染上，但着色后不易被盐酸 酒精脱色；
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结核杆菌的生物学性状
4、若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其它细菌及 背景中的物质为蓝色；
5、专性需氧，最适温度为37℃，低于30℃或高于42℃均 不
生长；营养要求较高，生长缓慢，初次分离需要营养丰 富的培养基。常用的有Lowenstein-Jensen培养基，内 含蛋黄、甘油、无机盐和孔雀绿等。
干净的物品 被污染的区域 废弃物托盘 垃圾袋
二、菌株运输
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法律依据
1、病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院令第424号 2004.11.12）
2、可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输 管理规定（卫生部令第45 号 2005.12.28）
3、人间传染的病原微生物名录（卫生部 2006.1.11）
14、结核杆菌对1：75000结晶紫或1：13000孔雀绿有抵 抗力，加在培养基中可抑制杂菌生长；
15、结核杆菌对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、乙 胺丁醇、卡拉霉素、对氨水杨酸等敏感，但长期用药容 易出现耐药性，而吡嗪酰胺的耐药性<5%。
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结核杆菌实验室生物安全规程
结核杆菌实验室生物安全规程1、实验室管理制度1实验室入口处必须贴上生物危险标志,注明危险因子,生物安全级别,试验室负责人和相关负责人姓名和电话;2实验室应有明显的区域划分,清洁区,办污染区和污染区;3无论进入实验室时间长短,必须填写工作日志;要严格遵守实验室的一切操作规程;4进行结核菌操作时,需有两名工作人员同时进入实验室,尽量避免单独检验地带网工作;5在对大批量的痰标本和菌株进行分离培养和药敏试验前,英语中心新主任和实验室主任讨论,必要时加强预防措施;6试验室人员应做结核菌素试验,试验结果为阴性时,应接种卡介苗,并做好登记记录;7外来进修,参观人员必须学习实验室的一切规章制度和有关操作规程,经试验室主任批准方可进入实验室;2、标本采集人员安全要求1标本采集人员的防护：痰标本有病人自行留取,采集咽拭子等特殊标本,采集人员应穿防护服,戴一次性口罩,帽子,戴医用手术手套;2采集标本污染器材的处理：采集标本的痰盒,试管等污染器材军需高压处理;3、标本运送安全要求痰标本需留置在特制的痰盒内直径4cm,高2cm的光口盖密闭的塑料盒,并放置在专用的痰标本运送箱内,运送过程中切勿倒置,严防痰液外溢;由有专人送至痰检实验室,标本送达后痰标本运送箱检验地带网及时用乙醇或是碳酸等化学消毒剂或高压的办法彻底消毒;4、实验操作安全要求1结核病细菌学实验室要求结核病细菌学实验室应为生物安全Ⅲ级实验室,用于临床诊断,教学,属中度危险;应具备安全设备,缓冲间实验室条件应满足工作任务的要求,有完善的试验设施,试验室的环境应清洁,卫生,安静,无污染,试验室内的管线设置应整齐,要有安全管理措施和报警,应积及急救设施,房间数量不少于七间,包括实验室准备室,培养机制备室,显微镜检查室,图片检查室,接种室,培养室高压消毒室等;具备完善的质量保证体系中应有明确的分级责任制度,以确保检验的工作质量,保证检验,复核,科研结果等各项报告的准确可靠性;2实验室仪器设备及功能的要求结核菌素检查时必须在二级生物安全柜内进行,无菌操作内禁放杂物,并应制定地面,门窗,墙壁,设施等的定期清洁,灭菌规程,操作间没有紫外线灯；实验室内应光线明亮;具备性能良好的Ⅱ型生物安全柜,恒温培养仪器,双目生物显微镜,蒸汽凝固灭菌箱,高压蒸汽灭菌锅等仪器设备,并对各种仪器专人管理,定期叫阎检定,对不合格,待修,待检的仪器,要有明显德状态标志,并应及时进行相应的处理;一起使用人应经考核合格后方可操作仪器;3对检验人员的安全要求从事结核菌工作的人员须经培训后方能参加操作,并严格按照操作规则和其他国家标准进行各项试验,准确治疗试验结果;培训标准由各等级的实验室根据国家标准和规定自行制订,通过考核后,还须与有资格的工作人员一同工作3个月,才能获得操作资格;非专业技师人员,无专业技术职称者不得从事检验的技术工作;4进入实验室的规章制度a.非实验室工作人员一律禁止进入试验区;b.实验室内禁止饮食,吸烟,接待访客和喧哗;c.进行结核菌操作时,需有两名工作人员同时进入实验室;d.工作人员如有皮肤损伤,发热,感冒和妊娠六个月以上者,不能进入读君实验室;e.工作完毕,检查各实验室水,电,防火设备,打开防盗报警装置;f.从事与毒菌有关的工作后,7日内不可离开实验室所在城市;如出现身体不适现象,应在实验室所在地进行医学观察;因工作原因必须离开时,用口服抗结核药物预防;5意外事故及处理a.实验过程中,操作台或地面的污染,如菌液溢出,打破结核分枝杆菌培养皿和药敏管等,应立即喷洒消毒液,待消毒液彻底浸泡30分钟后,进行清理;清理后的物品,高崖灭菌;b.实验过程中,如污染物溅落在身体表面,或有割伤,烧伤,烫伤,感染动物咬伤等情况,应立即进行紧急处理：皮肤表面用消毒液清洗,伤口以碘酒究竟消毒,眼睛用无菌生理盐水冲洗;事故的情况应报告实验室主任和上级领导;c.实验过程中,如发生气溶胶污染,应立即关闭实验室,用消毒液喷雾和紫外线照射污染的区域,24小时后再进行终末消毒;d.进行毒菌操作后,有疑似症状出现时,应立即向实验室主任报告,观察就医;6污染物处理及消毒a.试验用试管,吸管及其他器械,需装载加盖不漏的容器内,经高压灭菌后,拿出实验室;b.培养物及污物,经高压灭菌后,拿出实验室;c.出实验室的更衣顺序：先用消毒液浸泡手套5分钟,依次除去口罩,眼镜,防护服,三角头巾,鞋,在浸泡手套后脱去手套;d.洗手后以75%酒精棉球擦面部裸露部位,用3%硼酸水漱口,离开实验室;e.实验室内,未经消毒的污水禁止直接排入公共排水系统;以消毒的污物集中倒入专用污物坑污物坑的深度2---3米,不许混入居民生活垃圾;5、生物标本保管安全要求结核分枝杆菌菌株必须由专人负责,按照卫生部1985中国医学微生物菌种保藏管理办法规定执行;应在4℃专用冰箱内保存,并要求双人双锁,有严格的菌株领取和销毁制度;。
结核分枝杆菌生物安全三级实验室表面去污染消毒剂杀菌效果的研究
结核分枝杆菌生物安全三级实验室表面去污染消毒剂杀菌效果的研究韩文东;孙志平;丁悦娜;瞿涤【摘要】在高致病性病原微生物实验活动过程中，选择有效的消毒剂对实验室环境去污染非常重要，这也是避免实验室获得性感染发生的有效途径。
本研究针对结核分枝杆菌 H37Rv ，应用滤膜过滤悬液定量杀菌实验进行消毒剂验证，其中75．0％乙醇、含有效氯1000 mg／L的次氯酸钠及Safespore消毒剂可高效杀灭结核分枝杆菌，37．5％乙醇作用延长至10 min也可有效杀灭结核分枝杆菌，这为选择针对结核分枝杆菌的生物安全三级实验室表面消毒剂提供了依据。
%The application of effective disinfectants during experimental activities of high‐pathogenic microorganism is crucial for decontamination of laboratory environment to prevent laboratory‐acquired infections .In this study , the quantitative germicidal disinfectant validation experiments using membrane filtration suspension were conducted against Mycobacterium tuberculosis (M . tuberculosis) H37Rv .Sodium hypochlorite solution (containing 1 000 mg/L active chlorine ) , 75% ethanol/water , and Safespore disinfectant killed M . tuberculosis efficiently .When the concentration of ethanol decreased to 37 .5% ,it was still able to kill M . tuberculosis by prolonging killing time to 10 min . The results suggest that 75%ethanol/water is suitable as conventional disinfectant and sodium hypochlorite solution (containing 1 000 mg/L active chlorine) is suitable under emergency and accident in biosafety level 3 laboratories (BSL‐3) .【期刊名称】《微生物与感染》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】7页(P301-307)【关键词】结核分枝杆菌;生物安全三级实验室;表面去污染;消毒剂【作者】韩文东;孙志平;丁悦娜;瞿涤【作者单位】上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032;上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032;上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032;上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032【正文语种】中文结核分枝杆菌生物安全三级实验室表面去污染消毒剂杀菌效果的研究韩文东，孙志平，丁悦娜，瞿涤上海复旦大学三级生物安全防护实验室，复旦大学基础医学院教育部／卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海200032摘要：在高致病性病原微生物实验活动过程中，选择有效的消毒剂对实验室环境去污染非常重要，这也是避免实验室获得性感染发生的有效途径。
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2. 混匀：吸管吸吹 菌液时不要产生气 泡，应沿容器壁排 出。
3. 研磨：最 好使用组织研 磨器，乳钵易 产生气溶胶。
4. 移液：吸管上端的棉花松紧要适度，吸液时要 从管底吸取，吹出时要轻缓，不要全部吹净，以免 产生气泡，形成气溶胶。
➢ 事件原因：
• 意外事故—皮肤损伤；
• 虽抗结核治疗，但证实实验室感染；
• 意外事故感染预案—做好评估、处理和监测。
二、结核杆菌的生物安全防护
➢实验室生物安全：
• 指实验室的生物安全条件和状态不低于容许 水平，可避免实验室人员、来访人员、社区 及环境受到不可接受的损害，符合相关法规、 标准等对实验室生物安全责任的要求。
在BSL-1 设备条件上增加：
① 生物安全柜 ② 高压灭菌器 ③ 洗眼装置
实验室位置：与公共场所分隔开； 通风: 有方向性。
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（二）实验室管理要素
实验室入口处贴上生物 安全标志，注明实验室生 物安全级别，负责人姓名， 负责人姓名和电话，需要 接种的免疫种类，进入实 验室的特殊要求等； •正在进行感染性试验时 禁止他人进入，或经负责 人同意后进行安全防护后 进入；
感（结节）； • 创伤物质培养处B族结核杆菌； ➢ 事件原因： • 防护措施不到位； • 个人防护装备不全； • 实验人员安全意识不强。
5. 结核杆菌感染2
➢ 事件说明： • 戴一次性乳胶手套在安全柜准备操作鉴定结核分
枝杆菌； • 操作时，左手桡骨背侧被安全柜的前窗边缘划伤，
皮肤上有小的擦伤； • 停止工作，70%酒精清洗伤口； • 3周后，出现局部红肿，有无痛的硬结； • 在伤口处取标本进行培养，6周后培养阳性； • 限制性片段多态性分析，与操作的结核杆菌一致；
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• 3. 台湾SARS感染
➢ 事件说明： • 2003年12月，某研究所研究人员感染SARS。为清
理运输舱内溢出物，仅作一般消毒，穿戴一般防护 装备，将头与躯干伸入运输舱中清理。 ➢ 事件原因： • 未使用适当除污程序； • 未使用合适消毒剂； • 未报告所有溢出意外。
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4. 结核杆菌感染1
➢ 事件说明： • 1952年，细菌学家两年从事B族结核杆菌工作； • 血清1:160稀释度下凝集，无典型症状； • 1955年，右手红色伤口（丘疹），右腋下轻微痛
结核分枝杆菌与实验室生物安全
广东检验检疫技术中心BSL-3实验室 师永霞
一、实验室感染典型案例 二、结核杆菌的生物安全防护 三、生物安全柜的安全使用 四、意外事故处理
一、实验室感染典型案例
1. 中国CDC SARS感染
➢ 事件说明： • 2004年4月，安徽、北京发现新的SARS病例，其中
两名CDC实验室人员。 ➢ 事件原因： • 采用未经论证确实有效的SARS灭活方法； • 在不符合防护要求之实验室内操作SARS。
制度； • 实验室人员：① 注意潜在的危害；② 熟知操作规
程，精通操作技术。 20
（三）标准操作程序
➢《人间传染的病原微生物名录》：
• 结核分枝杆菌危害程度第二类，高致病性病原微 生物；
• 少量细菌的分离培养、样品检测和药敏实验在 BSL-2实验室进行；
• 大量细菌培养在BSL-3实验室，动物感染实验在 ABSL-3实验室；
• 无感染性材料的操作在BSL-1实验室。
• 结核病传播途径可由呼吸道、消化道、皮肤等途径 感染，但其主要传播途径是以空气为传播因子的呼 吸道传染，而排菌的肺结核病人传染性更大，是传 播感染的主要传染源。
• 实验室感染以气溶胶形式的呼吸道感染和皮肤感染。
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产生气溶胶的操作及预防
• 1. 接种：应使用无弹力的铂丝接种环，结核菌接种 后接种环火焰灭菌易崩散，酒精灯烧灼时要特别注 意。
➢实验室获得性感现为有症状或无症状， 都属于实验室获得性感染。
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实验室生物风险管理要素
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实验室生物安全控制要素
设施设备
防护屏障
管理
个人防护装备
标准操作程序
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（一）设施设备和个人防护装备
• 一级防护屏障 实验室的生物安全柜和个人防护装备等构 成的防护屏障。
• 二级防护屏障 实验室的设施结构和通风系统等构成的防 护屏障。
一级防护屏障
生物安全柜是最重要的安全设备，形成最主要 的防护屏障；
为消除或减少人员暴露于有害生物材料所配备 其他安全设备（如离心机负压罩等）；
必须给实验室工作人员配备必要的个体防护用 品：手套、口罩、鞋套、面罩、正压服等。
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BSL-2 结构设计常规要求
① 实验室有带锁的门； ② 有洗手水槽； ③ 工作面易于清洁； ④ 天棚不渗水； ⑤ 实验室台结实； ⑥ 按照要求放置生物安全 柜； ⑦ 适当的照明系统； ⑧ 眼睛冲洗装置； ⑨ 实验室排除的气体不能 循环到非实验区； ⑩ 窗户安装有纱窗。
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BSL-2 设备条件
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• 工作人员接受必要的免疫接种，免疫耐受或正在 进行免疫抑制剂治疗的病人须经同意方可进入工 作；必要时留本底血清；
• 新员工必须接受培训方可进入工作，老员工必须 接受再培训；
• 尽量减少利器使用，严格按照规范操作； • 消毒物品需放在容器内运输、进行有效灭菌消毒
和效果监测，交给有资质单位进行处理； • 建立实验室感染应急预案、意外事故报告、登记
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个体安全防护措施
各类口罩：需做个体适配性试验
医用外科口罩
杯罩式随弃口罩
折叠式随弃口罩
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手套穿脱:戴前检漏、盖住衣袖
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脱隔离衣程序
手部表面消毒后由内向外翻卷脱去外层手套 注意退出胳膊时让隔离衣内面朝外向中间覆盖， 两手持领、将隔离衣清洁面在外向内翻卷，投入污物袋中。
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二级防护屏障
选址与平面布局； 围护结构； 送、排风系统； 消毒、灭菌设备； 污水处理设备； 尸体处理设备； 其他安全装置。
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2. 新加坡 SARS感染
➢ 事件说明： • 2003年8月23日某国立大学博士研究生从事西尼罗
研究，感染SARS病患检体； ➢ 事件原因： • 实验室安全程序不当，同一时间进行不同活性病毒
研究，造成其交叉感染； • 对于人员生物安全教育训练不足，人员对所有病原
体警觉性不够，无自我监测症状观念。