中药染色补充标准完整版

内容：1. 蒲黄—金胺O1.1 薄层色谱法1.1.1 仪器：硅胶G薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、分液漏斗、漏斗、锥形瓶、打粉机、天平。

1.1.2 试剂：水、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、氨水。

1.1.3 供试品的制备：取本品粉末2g，加70%乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

1.1.4 对照品的制备：取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

1.1.5操作：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—氨水（4:5:1:1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可见光下检视。

1.1.6 结果判断：供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

1.2 高效液相色谱法1.2.1 色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调PH值3.0）（35:65）为流动相；检测波长为432nm。

理论塔板数按金胺O对照试剂色谱中的主峰计算，应不低于2000。

1.2.2 对照试剂溶液的制备：取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中含50μg的溶液，即得。

1.2.3 供试品溶液的制备：取上述薄层色谱法项下的供试品溶液，即得。

1.2.4 测定法取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

1.2.5 结果判断：供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在320~450nm波长范围的紫外—可见吸收光谱，吸收光谱应不同。

1.2.6 备注：必要时，可采用高效液相色谱—质谱联用方法验证。

建议采用乙腈—0.05mol/L醋酸铵（35:65）流动相系统。

2. 红花—金橙Ⅱ2.1 薄层色谱法2.1.1仪器：硅胶G薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、漏斗、锥形瓶、打粉机、天平。

2.1.2试剂：水、乙醇、氯仿、甲醇、冰乙酸。

2.1.3 供试品的制备：取药材粗粉2g，加70%乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.1.4 对照品的制备：取金橙Ⅱ对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

2.1.5操作：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照试剂溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—冰乙酸（7:1:2）为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。

2.1.6 结果判断：供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则用下列高效液相色谱法验证。

2.2 高效液相色谱法2.2.1 色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调PH值3.0）（40:60）为流动相；检测波长为484nm。

理论塔板数按金橙Ⅱ峰计算，应不低于2000。

2.2.2 对照试剂溶液的制备：取金橙Ⅱ对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中约含60μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备：取上述薄层色谱法项下的供试品溶液，即得。

2.2.4 测定法取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.2.5 结果判断：供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在210~550nm波长范围的紫外—可见吸收光谱，吸收光谱应不同。

2.2.6 备注：必要时，可采用高效液相色谱—质谱联用方法验证。

建议采用乙腈—0.05mol/L醋酸铵（35:65）流动相系统。

3. 五味子—胭脂红、赤藓红、酸性红3.1 薄层色谱法3.1.1仪器：硅胶G薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、锥形瓶、打粉机、天平、离心机。

3.1.2试剂：水、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、氨水。

3.1.3 供试品的制备：取本品2g（不粉碎），加70%乙醇10ml，超声提取20分钟，离心（3000转/分钟），取上清液作为供试品溶液。

3.1.4 对照品的制备：取胭脂红、赤藓红、酸性红73对照试剂适量，分别加70%乙醇溶解并制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

3.1.5 操作：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照试剂溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—正丁醇—乙醇—氨水—水（1:3:3:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。

3.1.6 结果判断：供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则用下列高效液相色谱法验证。

3.2 高效液相色谱法3.2.1 色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A、以0.05mol/L 醋酸铵为流动相B，按下表进行梯度洗脱：检测波长为508nm。

理论塔板数按胭脂红峰计算，应不低于2000。

时间（min）流动相A(%) 流动相B（%）0~12 20→45 80→5512~25 45→80 55→2025~30 80 203.2.2 对照试剂溶液的制备：上述薄层色谱法项下的对照试剂溶液，即得。

3.2.3 供试品溶液的制备：取上述薄层色谱法项下的供试品溶液，即得。

3.2.4 测定法：取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

3.2.5 结果判断：供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外—可见吸收光谱，吸收光谱应不同。

4. 朱砂（水飞）—808猩红4.1 薄层色谱法4.1.1仪器：硅胶G薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、漏斗、锥形瓶、打粉机、天平。

4.1.2试剂：水、乙醇、环己烷、乙酸乙酯。

4.1.3 供试品的制备：取本品粉末0.2g，加乙醇10ml，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

4.1.4 对照品的制备：取808猩红对照试剂适量，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

4.15操作：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。

5.1.7 结果判断：供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则用下列高效液相色谱法验证。

4.2 高效液相色谱法4.2.1 色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—0.1%的甲酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为520nm。

理论塔板数按808猩红峰计算，应不低于2000。

4.2.2 对照试剂溶液的制备：取808猩红对照试剂适量，加乙醇制成每1ml中约含60μg的溶液，即得。

4.2.3 供试品溶液的制备：取上述薄层色谱法项下的供试品溶液，即得。

4.2.4 测定法取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

4.2.5 结果判断：供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外—可见吸收光谱，吸收光谱应不同。

808猩红对照试剂色谱峰在519±1nm显示最大吸收。

4.2.6 备注：必要时，可采用高效液相色谱—质谱联用方法验证。

建议采用乙腈—0.1%的甲酸溶液（80:20）流动相系统。

5. 血竭—苏丹红Ⅳ、808猩红5.1 薄层色谱法5.1.1仪器：硅胶G薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、漏斗、锥形瓶、打粉机、天平。

5.1.2试剂：水、乙醇、环己烷、乙酸乙酯。

5.1.3 供试品的制备：取本品粉末0.2g，加乙醇25ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

5.1.4 对照品的制备：取苏丹红Ⅳ、808猩红对照试剂适量，分别加乙醇制成每1ml含苏丹红Ⅳ、808猩红0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

4.1.5操作：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。

5.1.6 结果判断：供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则用下列高效液相色谱法验证。

5.2 高效液相色谱法5.2.1 色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—水（95:5）为流动相；检测波长为520nm。

理论塔板数按苏丹红Ⅳ峰计算，应不低于2000。

5.2.2 对照试剂溶液的制备：取苏丹红Ⅳ、808猩红对照试剂适量，分别加乙醇制成每1ml中约含40μg的溶液，即得。

5.2.3 供试品溶液的制备：取上述薄层色谱法项下的供试品溶液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

5.2.4 测定法取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

5.2.5 结果判断：供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外—可见吸收光谱，吸收光谱应不同。

苏丹红Ⅳ对照试剂色谱峰在350±1nm,517±1nm显示最大吸收；808猩红对照试剂色谱峰在518±1nm显示最大吸收。

6. 乌梅—苋菜红、亮蓝、日落黄6.1 薄层色谱法6.1.1仪器：硅胶GF254薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、离心机、漏斗、锥形瓶、打粉机、天平。

6.1.2试剂：水、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、氨水。

6.1.3 供试品的制备：取本品2粒，加70%乙醇20ml，超声处理20分钟，取上清液离心，作为供试品溶液。

6.1.4 对照品的制备：取苋菜红、亮蓝、日落黄溶液（国家标准物质，标示浓度0.5mg/ml，国家标准物质研究中心）各1ml，分别加70%乙醇稀释至5ml，作为对照品溶液。

6.1.5操作：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯—正丁醇—乙醇—氨水—水（1:3:3:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。

6.1.6 结果判断：供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法进一步检查。