中药染色补充标准完整版

内容：

1. 蒲黄—金胺O

1.1 薄层色谱法

1.1.1 仪器：

硅胶G薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、分液漏斗、漏斗、锥形瓶、打粉机、天平。

1.1.2 试剂：

水、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、氨水。

1.1.3 供试品的制备：

取本品粉末2g，加70%乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

1.1.4 对照品的制备：

取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

1.1.5操作：

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—氨水（4:5:1:1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可见光下检视。

1.1.6 结果判断：

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

1.2 高效液相色谱法

1.2.1 色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调PH值3.0）（35:65）为流动相；检测波长为432nm。理论塔板数按金胺O对照试剂色谱中的主峰计算，应不低于2000。

1.2.2 对照试剂溶液的制备：

取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中含50μg的溶液，即得。

1.2.3 供试品溶液的制备：

取上述薄层色谱法项下的供试品溶液，即得。

1.2.4 测定法

取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

1.2.5 结果判断：

供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在320~450nm波长范围的紫外—可见吸收光谱，吸收光谱应不同。

1.2.6 备注：

必要时，可采用高效液相色谱—质谱联用方法验证。建议采用乙腈—0.05mol/L醋酸铵（35:65）流动相系统。

2. 红花—金橙Ⅱ

2.1 薄层色谱法

2.1.1仪器：

硅胶G薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、漏斗、锥形瓶、打粉机、天平。

2.1.2试剂：

水、乙醇、氯仿、甲醇、冰乙酸。

2.1.3 供试品的制备：

取药材粗粉2g，加70%乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.1.4 对照品的制备：

取金橙Ⅱ对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

2.1.5操作：

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照试剂溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—甲醇—冰乙酸（7:1:2）为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。

2.1.6 结果判断：

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则用下列高效液相色谱法验证。

2.2 高效液相色谱法

2.2.1 色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调PH值3.0）（40:60）为流动相；检测波长为484nm。理论塔板数按金橙Ⅱ峰计算，应不低于2000。

2.2.2 对照试剂溶液的制备：

取金橙Ⅱ对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中约含60μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备：

取上述薄层色谱法项下的供试品溶液，即得。

2.2.4 测定法

取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.2.5 结果判断：

供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱主峰保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在210~550nm波长范围的紫外—可见吸收光谱，吸收光谱应不同。

2.2.6 备注：

必要时，可采用高效液相色谱—质谱联用方法验证。建议采用乙腈—0.05mol/L醋酸铵（35:65）流动相系统。

3. 五味子—胭脂红、赤藓红、酸性红

3.1 薄层色谱法

3.1.1仪器：

硅胶G薄层板、微升毛细管点样器、平底展开缸、超声仪、锥形瓶、打粉机、天平、离心机。

3.1.2试剂：

水、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、氨水。

3.1.3 供试品的制备：

取本品2g（不粉碎），加70%乙醇10ml，超声提取20分钟，离心（3000转/分钟），取上清液作为供试品溶液。

3.1.4 对照品的制备：

取胭脂红、赤藓红、酸性红73对照试剂适量，分别加70%乙醇溶解并制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

3.1.5 操作：

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照试剂溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—正丁醇—乙醇—氨水—水（1:3:3:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。

3.1.6 结果判断：

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则用下列高效液相色谱法验证。

3.2 高效液相色谱法

3.2.1 色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A、以0.05mol/L 醋酸铵为流动相B，按下表进行梯度洗脱：检测波长为508nm。理论塔板数按胭脂红峰计算，应不低于2000。

时间（min）流动相A(%) 流动相B（%）0~12 20→45 80→55

12~25 45→80 55→20

25~30 80 20

3.2.2 对照试剂溶液的制备：

上述薄层色谱法项下的对照试剂溶液，即得。