产脂肪酶菌株的分离
产脂肪酶的菌株筛选方法的研究
产脂肪酶的菌株筛选方法的研究近年来，随着植物油和动物油在食品、医药、农药以及其他行业的广泛使用，脂肪酶的需求量逐渐增加。
脂肪酶是一种具有多种功能的酶，它可以分解脂肪和油脂，用来制造食品添加剂、医药中间体以及其他有用的产品。
发酵技术是获得脂肪酶的重要方法之一，而发酵菌株的筛选是发酵技术的基础和关键步骤，其目的是从微生物资源中筛选出对脂肪酶产生量有明显提高的菌株（颜永涛，2018）。
一般而言，菌株的筛选标准主要有两个，一是筛选的菌株能有效的产出脂肪酶，二是筛选的菌株能兼顾发酵条件的优化。
因此，要求筛选出高产脂肪酶的菌株，必须考虑到发酵条件与产物形成之间的关系。
筛选高产脂肪酶的菌株一般包括多种筛选方法，其中比较常见的是两种：一种是培养基筛选方法，另一种是固定化筛选方法。
培养基筛选方法是在最佳培养基中，根据育种材料的不同（如不同的液体培养基或固体培养基），采用基础发酵条件对菌株进行培养，以获得高产脂肪酶的菌株。
优势在于，培养基筛选方法易于操作，能够及时获得结果，且价格低廉，但这种方法受发酵条件的限制，在某些情况下，成果不太满意。
固定化筛选方法是在发酵过程中，将发酵菌株通过固定化技术（如表面层析法、膜层流法、筛选电泳法）进行筛选，然后再根据筛选出来的菌株的表现和性状，以及细胞高分子量蛋白或细胞酶活性，来识别和分离出高产脂肪酶的菌株。
相比培养基筛选方法，固定化筛选方法更加精确，能够准确识别出高产脂肪酶的菌株，但操作复杂，费时费力，存在技术操作的难度。
另外，结合培养基筛选方法和固定化筛选方法也可以进行脂肪酶菌株的筛选。
例如，采用柔性发酵条件，针对不同的育种材料经过培养基的筛选，从中获得脂肪酶合成量提高明显的发酵菌株，再利用固定化筛选方法进一步筛选出脂肪酶合成量更高的菌株（张静，2019）。
综上所述，要筛选高产脂肪酶的菌株，可以采用培养基筛选方法、固定化筛选方法，也可以结合培养基筛选方法和固定化筛选方法进行操作，以达到所需的目标。
脂肪酶生产工艺
脂肪酶生产工艺
脂肪酶是一种重要的酶制剂，广泛应用于食品加工、制药、制糖、造纸、皮革、饲料等各个领域。
脂肪酶的生产工艺主要包括菌种筛选、发酵培养、酶液提取与纯化等几个关键步骤。
首先，菌种筛选是脂肪酶生产的起始步骤。
传统的方法是从环境中筛选出产酶能力强、耐受性好的菌株，如大肠杆菌、放线菌等。
随着现代生物技术的进步，可通过基因工程手段改造菌株，使其具有更高的酶活性和稳定性。
接下来是发酵培养，这是脂肪酶生产的核心环节。
首先，将选定的菌株进行预培养，使其进入活跃期。
然后将菌种接种到含有适宜营养物质的培养基中，并调节好温度、pH值、溶解氧和搅拌速度等发酵条件，促使菌株大量繁殖并产生酶。
在发酵过程中，可通过测定培养基中脂肪酶活性的变化，调节发酵条件以提高酶产量。
酶液提取是将发酵液中的酶分离和提取出来的步骤。
首先，通过简单的物理方法如离心、滤过等将固体颗粒去除。
然后，采用适当的预处理方法进行酶的初步分离，如酸碱沉淀、盐析、溶剂抽提等。
最后，通过纯化技术如层析、凝胶过滤、电泳等进一步提纯酶液，去除掉杂质和其他蛋白质。
脂肪酶生产工艺中的关键点在于发酵培养和酶液提取。
发酵培养涉及到菌株的选取和培养条件的优化，需要通过不断试验和改进，提高酶产量和酶活性。
酶液提取则需要采用合适的分离和纯化技术，以达到酶的高效提取和纯度的要求。
总的来说，脂肪酶的生产工艺主要包括菌种筛选、发酵培养和酶液提取等几个关键步骤。
这些步骤需要通过科学合理的操作和技术手段，不断优化提高，才能够实现高效、稳定地生产脂肪酶。
产脂肪酶菌株的分离、鉴定及其产酶条件优化
产脂肪酶菌株的分离、鉴定及其产酶条件优化赵伟;王俐琼;郑甲;周洪波【期刊名称】《湖南师范大学自然科学学报》【年(卷),期】2010(033)003【摘要】从长沙岳麓山和湘江等地富含油脂的样品中分离得到一株产脂肪酶菌株CS 1-1,经18S rDNA序列分析,确定该菌株为黑曲霉(Aspergillus,niger).对该菌株的产酶条件进行优化,发现该菌株在以体积分数为1%的橄榄油为诱导物,5 g/L蔗糖为碳源,40 g/L蛋白胨为有机氮源,1 g/L(NH4)2SO4为无机氮源,pH为6.5的培养基中,于28℃,180 r/min摇床培养48 h,可达最大酶产量(37.6±0.8)mmol·min-1·L-1.【总页数】5页(P88-92)【作者】赵伟;王俐琼;郑甲;周洪波【作者单位】中南大学资源加工与生物工程学院,中国,长沙,410083;中南大学资源加工与生物工程学院,中国,长沙,410083;中南大学资源加工与生物工程学院,中国,长沙,410083;中南大学资源加工与生物工程学院,中国,长沙,410083【正文语种】中文【中图分类】Q939【相关文献】1.产脂肪酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化 [J], 胡珺;杜新凯;王常高;林建国;杜馨;蔡俊2.产脂肪酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化 [J], 黎小军;谢莲萍;刘建宏;朱婷婷;刘蓉3.一株产脂肪酶细菌的分离鉴定及产酶条件优化 [J], 刘晓丽;杨孝朴;赵军4.产脂肪酶菌株C7828-5的筛选、鉴定以及产酶条件的优化 [J], 麻琼丽;张家明5.产脂肪酶菌株的筛选、鉴定及产酶条件优化 [J], 吴子君;陈思沅;杜昭君;胡双;李海峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
产脂肪酶菌株的筛选及紫外-光复活诱变
产脂肪酶菌株的筛选及紫外-光复活诱变王金主1，袁建国2，杨丹2，徐军庆2，谭少君2，刘建民2，王元秀1，李峰2*（1.济南大学化学化工学院，山东济南250022；2.山东食品发酵工业研究设计院，山东济南250013）摘要：目的从土壤中分离选育出脂肪酶高产菌株。
方法通过罗丹明B 指示平板法分离出产脂肪酶量高的菌株，通过紫外-光复活诱变选育提高产量。
结果从土壤中筛得脂肪酶产量为6.75U/mL 的菌株白地霉L-8，通过紫外-光复活诱变提高产量到12.08U/mL 。
结论获得了一株高产脂肪酶的白地霉菌株，结果表明从土壤中分离出产脂肪酶的菌株，再通过紫外-光复活诱变提高其产量的高产菌株的筛选方法是可行的。
关键词：脂肪酶；罗丹明B ；白地霉；紫外-光复活诱变中图分类号：Q814.1文献标识码：A文章编号：1672-979X （2011）05-0192-04收稿日期：2011-1-11作者简介：王金主()，男，山东临沂人，硕士研究生，研究方向发酵工程：x @*通讯作者：李峰，男，高级工程师，研究方向发酵工程和酶工程：j @Screening of Lipase Producing Strains and Its Breeding by UV -photoreactivation MutagenesisWANG Jin-zhu 1,YUAN Jian-guo 2,Y ANG Dan 2,XU Jun-qing 2,TAN Shao-jun 2,LIU Jian-min 2,W ANG Y uan-xiu 1,LI Feng 2(1.School of Chemistryand Chemical Engineering,University of Jinan,Jinan 250022,China;2.Shandong F ood &Fermentation Industry Research and Design Institute,Jinan 250013,China)Abstr act:Object ive To isolate and select a high-yield lipase producing strain from soil.Methods A high-yield strain was isolated by flat separation using Rhodamine B as indicator.Its production was improved by ultraviolet photoreactivation mutagenesis.R esult s We obtained Geotrichum candidum L-8from soil.Its lipase yield was improved from 6.75U/mL to 12.08U/mL through ultraviolet photoreactivation mutagenesis.Conclusion A high-yield lipase producing strain was obtained.The methods to isolate it from soil and to improve its production of lipase were feasible.Key Words:lipase;Rhodamine B;Geotrichum candidum;ultraviolet photoreactivation mutagenesis脂肪酶是一种特殊的酯键水解酶[1]，它能水解甘油三酯产生脂肪酸、甘油二脂、甘油单脂和甘油[2]。
脂肪酶的产生菌的分离生产及其运用
三、脂肪酶的分离纯化
酶的分离纯化书将酶从细胞中或其它酶原料中提取出来，再与杂 质分开，从而获得符合研究和使用要求的酶制品过程。主要内容包括 细胞破碎，酶的提取，离心分离，过滤与膜分离，沉淀分离，层析分 离，电泳分裂，萃取分离，浓缩，干燥和结晶等。酶的纯化策略的选 择首先要考虑的是其用途，在实验室研究和临床治疗中所使用的应为 高纯度的酶；而工业用途的酶对纯度的要求就不是很严格，但是一定 纯度的酶制剂不仅可以保证催化反应快速有效地进行，而且也降低了 反应的复杂性，增加了反应的可预测性。一次，脂肪酶的纯化研究具 有重要的意义。大部分微生物脂肪酶为胞外酶，发酵后通过离心或抽 滤出去菌体，得到的含酶上清液通过硫酸铵或有机溶剂萃取浓缩，出 去部分蛋白质和糖类，然后再用层析法进一步纯化。除了少部分基因 工程菌能够高效表达功能性脂肪酶，绝大部分野生型菌株都要联合两 种以上的层析方法纯化才能获得预期纯度的蛋白质。
实验
1．1试剂和仪器 固定化脂肪酶Novozym435(工业品)，标称活力约为10 固定化脂肪酶Novozym435(工业品)，标称活力约为10 000 PLU／g；菜籽油(毛油)；甲醇(分析纯)； PLU／ ；菜籽油(毛油)；甲醇(分析纯) 油酸甲酯(化学纯) 1102型气相色谱仪(氢火焰) CDMA色 油酸甲酯(化学纯)。1102型气相色谱仪(氢火焰)，CDMA色 谱工作站进行数据处理。 1．2实验方法 将一定量的脂肪酶在油酸甲酯中浸泡、过滤，用菜籽油淋洗 0．5 h后，再在菜籽油中浸泡、过滤；或 h后，再在菜籽油中浸泡、过滤；或 者将脂肪酶依次在菜籽油和油酸甲酯中浸泡、过滤，最后用 菜籽油淋洗0 菜籽油淋洗0．5 h。 h。 在具塞锥形瓶中加入一定量的脂肪酶、菜籽油和甲醇，置于 温度为30℃、振荡速率为150 r／min的 温度为30℃、振荡速率为150 r／min的 空气浴振荡器中进行反应，每间隔一定时间取样，静止，分 层，由气相色谱分析上层产品中甲酯含量。待 反应结束后，静置、冷却、分层，取上层溶液经蒸馏( 反应结束后，静置、冷却、分层，取上层溶液经蒸馏(回收甲 醇)、反复洗涤，得到黄色澄清透明的产品。
土壤中产脂肪酶菌株的分离及浓缩培养
土壤中产脂肪酶菌株的分离及浓缩培养
土壤中产脂肪酶菌株的分离及浓缩培养
李霞;刘尚军;岳春;曾虎
【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2014(035)006
【摘要】从食用油污染的土壤中筛选得到1个产脂肪酶较多的酵母菌株,测得其脂肪酶活力为8.30 U/m L.用正交试验法对该菌株的最佳发酵条件进行了优化.结果表明,最佳培养基成分为:1.50％蛋白胨、1.20％葡萄糖、10.00％橄榄油乳化液、0.5％酵母膏、KH2PO4 0.65％、K2HPO4 0.20％、MgS04·7H2O 0.02％;最佳产酶培养条件为:温度30℃,发酵的初始pH 7.5,接种菌量为2.0％,摇床转速180 r/min,培养20 h后测定脂肪酶酶活力达到33.19 U/mL,是优化前的4倍.在菌株培养20 h时采用微孔滤膜过滤二次培养,结果表明在培养24h 时菌数达到最大;培养28 h后脂肪酶活力达到峰值86.08 U/mL,较未采用微孔滤膜过滤二次培养提高160％,为初始脂肪酶活力的10.4倍,达到浓缩培养要求.【总页数】6页(56-61)
【关键词】酵母菌;脂肪酶;微孔滤膜;浓缩培养
【作者】李霞;刘尚军;岳春;曾虎
【作者单位】南阳理工学院生物与化学工程学院,河南南阳473000;南阳理工学院生物与化学工程学院,河南南阳473000;南阳理工学院生物与化学工程学院,河南南阳473000;南阳理工学院生物与化学工程学院,河南南阳473000
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.3
【相关文献】。
产脂肪酶菌株的筛选、鉴定及发酵培养基优化
was selected and identified as
. The fermentation medium formula was optimized by single factor and response surface methodology as
follows: tributyrin 2.0% ( / ), glucose 9 g/L and urea 8 g/L. Under the condition, the lipase activity was 4.3 U/ml, which was 16.22% higher than that of
将采集的样品分别依次进行富集培养、初筛和初始发 酵复筛。样品经过3次富集培养后，分别取50 滋L菌液上清 涂布于罗丹明B培养基平板，罗丹明B能与脂肪酶降解油脂 产生的脂肪酸特异性结合，产酶菌落周围会生成玫红色， 在波长365 nm紫外灯下呈现橙黄色。将罗丹明B平板放在 波长365 nm紫外灯下进行观察，选取橙黄色圈较大的菌株 进行分离培养，镜检至无杂菌后作为出发菌种，接种于初 始发酵培养基中进行复筛，选出脂肪酶高产菌株[15-17]。 1.3.2 菌种鉴定
富集培养基：酵母膏0.2 g/L，氯化钠0.5 g/L，磷酸氢二 钠3.5 g/L，磷酸二氢钾1.5 g/L，七水硫酸镁0.5 g/L，橄榄油 10 mL，用蒸馏水定容至1 000 mL，121 益灭菌20 min。
初筛罗丹明B培养基[14]：硫酸铵0.5 g，氯化钠4 g，磷酸 氢二钾1 g，七水硫酸镁0.5 g，琼脂粉15 g，三丁酸甘油脂乳 化液100 mL（4% PVA颐三丁酸甘油脂=3颐1，超声乳化），用 蒸馏水定容至1 000 mL，121 益灭菌20 min后，待温度降至 60 益时加入1 mL罗丹明B 溶液（质量浓度＜10 mg/mL），混 匀后倒平板。
产脂肪酶菌株的筛选
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谢谢，请各位 老师同学批评 指导！
静置培养的摇瓶发现也可以生长良好，加菌剂 的药品出现絮状物，油层下面出现乳化现象，
推测是菌体将油包裹为极小的油滴故出现乳化
现象
显微镜观察
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极端环境下摇床摇瓶培养的菌体40倍观察图
极端环境下静置摇瓶培养的菌体40倍观察图 The Presentation
富集培养
富集培养基配方：酵母膏0.2 g/L, NaCI 0.5 g/L, Na2HP04 3.5 g/L,KH2POQ 1.5 g/L, MgS04.7H20 0.5 g/L. 实验组编号1、2、3、4、5分别加入豆油2ml、4ml、6ml、8ml、10ml和0.5%菌剂。 空白对照编号6、7、8、9、10加入豆油2ml、4ml、6ml、8ml、10ml和不添加菌剂。
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富集培养基镜检照片
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分离纯化
1、稀释：用无菌水对富集培养基进行稀释。稀释到10-1到10-5倍。
2、初筛：将菌液分别取200微升涂布到营养培养基平板上和维多利亚蓝B平板上。 28℃培养 3到5天，观察菌落生长情况及水解圈情况。 3、复筛：对初筛培养基上生长的菌落挑取单菌落划线，接到平板上培养。对平 板上的菌落进一步纯化。鉴定菌株。然后将菌株接种与发酵培养基上。28℃，
试验计划
极端环境检验降解效果
富集培养
稀释涂布
分离ห้องสมุดไป่ตู้化
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极端环境检测降解效果
起始状态
摇床培养
静置培养
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产脂肪酶菌株的分离、鉴定及其产酶条件优化
分析 ， 确定该菌株为黑 曲霉 （ ｓ ｒｉｕ ｒ． Ａｐ ｇｌｓ ｅ ｌ ｎ ）对该菌株的产酶条件进行优化 ， 发现该菌株在 以体积分数为 Ｉ 的橄 ％ 榄油为诱导物 ， ｇ Ｌ蔗糖为碳源 ， ／ ５／ ４ ｇ Ｌ蛋 白胨 为有 机氮源 ， ｇＬ（ Ｈ ） ｓ 为无机氮 源 ，Ｈ为 ６ ５的培养基 ０ １ ／ Ｎ ０ ｐ ． 中， ２ ｃ，８ ｒｎ摇床培养 ４ ， 于 ８ ｏ １０ｒａ ／ｉ ８ｈ 可达最 大酶产量（ ７６± ． ）ｍ ｏ ・ ａ ～ ・ 一． ３ ． Ｏ ８ ｍ ｌ ｒｎ ｉ Ｌ 关键词 脂肪酶 ； 黑曲霉 ； 筛选 ； 产酶条件
Ｇ Ｃ Ｇ一 ，８ ５一 Ｆ Ａ Ｃ Ｔ Ｃ Ｇ Ａ Ｇ Ｆ Ａ － ） Ｃ Ａ ３ １ Ｒ： Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ Ｆ Ｔ Ｃ Ｇ Ｔ Ｃ ３ 进行 Ｐ Ｒ扩增 ． Ｃ
１５３ Ｐ Ｒ扩增产物的纯化与测序 扩增的 Ｐ Ｒ产物用 Ｏ ｅａ ．． Ｃ Ｃ ｍ ｇ 生产的凝胶 回收试剂盒纯化 ， 操作均按说 明书进行 ．纯化 产物 交 由上海桑 尼 生物工程 有 限公 司 测序 ． １ ５ ４ 序 列分析及 系统发 育分 析 将得 到 的 １ Ｓｒ Ｎ ．． ８ Ｄ Ａ测 序 结果 提交 到 Ｎ Ｂ 数据 库并 进 行 Ｂ Ａ Ｔ比对 ， ＣＩ ＬＳ 找 到并下 载典 型 的菌株 序列 与实验 菌株 的序列 用 Ｃｕｔ ． ｌｓ ｌ ２ ０软件 进行 同源性 分 析 ， 用 ＭＥ Ａ３ １软件 ａＸ 并 Ｇ ． 构建 系统 发育 树 ． １６ 产酶 条 件优化 ． １６ １ 温 度对 产酶 的影 响 不 同的温度条 件下 ， 曲霉 的生 长状 况有差 别 ， ．． 黑 产脂 肪酶 的能 力也 有差 异 ． 了 为 使其 在较 好 的生长 条件 下能 达到最 佳 的产酶条 件 ， 将筛选 得 到 的菌株 以发酵 产酶 培养基 为基 础 ， 于不 同 特 置 的温 度下 （ ６２ ，０３ ，４℃ ） 养 ， ２ ，８３ ，２ ３ 培 以检测 其最佳 产酶 温度 ． １６ ２ 初 始 ｐ ．． Ｈ对 产酶 的影 响 由于 ｐ Ｈ值对 黑 曲霉本 身 生长 和产 脂肪 酶 能 力 的影 响较 大 ， 使 Ｈ －３菌 为 Ｂ０ 株达 到最佳 的产 酶条 件 ， 特设定 不 同的 ｐ Ｈ梯 度 （ ． 、． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、０ ０ 以得 到该 菌株 ６０６ ５ ７０ ７ ５ ８０ ８ ５ ９０ ９ ５ １． ） 产酶 的最佳 ｐ Ｈ值 ． ’ １６ ３ 不 同诱导物对产酶的影响 研究表明不同的诱导物对菌株产脂肪酶 的能力有很大的影响 ， ．． 因此 ， 设 定不同的诱导物验其对菌株产酶能力 的影响． １６４ 不 同碳源对产酶的影响 ．． 黑曲霉可以利用不同的碳源生长产酶 ， 但是碳源不同， 会有不 同的产酶能
产脂肪酶菌种分离筛选流程图设计概念
The hunt for lipase-producing bacterial superstars is a wild and exhilarating process that involves a series of thrilling steps. First, we embark on a daring expedition to extract microbial strains from their natural habitats, like the soil, water, or even industrial waste. Armed with petri dishes and the dilution method, we streak our samples and watch as tiny colonies begin to emerge, like hidden treasures waiting to be discovered. After some quality time in the incubator, these colonies flourish and multiply, ready to be picked and cultured, each one a potential star in the lipase production world. It's like building a dream team of microbial rockstars, each with their own unique talents and potential for greatness. The excitement is palpable as we gather our diverse cast of characters for the ultimate screening showdown.捕捉产生唇酸酶的细菌超巨星是一个野生的和激动人心的过程，涉及一系列刺激步骤。
一株产脂肪酶细菌的分离、筛选和鉴定
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｌｉｐａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎ
２０１８业 大 学 学 报 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＡＮＳＵ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
第 ５３卷 双月刊
一株产脂肪酶细菌的分离、筛选和鉴定
刘晓丽１，刘玉华１，韩生义１，马才２，杨孝朴１
（１．甘肃农业大学动物医学院，甘肃 兰州 ７３００７０；２．河南索康生物技术有限公司，河南 焦作 ４５４９５０）
ＬＩＵ Ｘｉａｏｌｉ１，ＬＩＵ Ｙｕｈｕａ１，ＨＡＮＳｈｅｎｇｙｉ１，ＭＡＣａｉ２，ＹＡＮＧＸｉａｏｐｕ１
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ；２．ＨｅｎａｎＳｕｏｋａｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｏｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｊｉａｏｚｕｏ４５４９５０，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙａｉｍｅｄｔｏｓｃｒｅｅｎｌｉｐａｓｅｈｉｇｈｙｉｅｌｄｉｎｇｓｔｒａｉｎｓｆｒｏｍｎａｔｕｒｅ，ｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｔｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｏｉｌｐｏｌｌｕｔｅｄｒｉｖｅｒｓａｎｄｓｏｉｌ ａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｉｔｅｓｉｎＢａｉｙｉｎｃｉｔｙｔｏｃｏｎｄｕｃｔｐｒｉｍａｒｙｓｃｒｅｅｎｕｓｉｎｇＶｉｃｔｏｒｉａｂｌｕｅｍｅｄｉｕｍａｎｄｎｅｕｔｒａｌｒｅｄｏｉｌ ｍｅｄｉｕｍａｎｄｒｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｂｙｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｕｓｉｎｇｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄｃｏｐｐｅｒｓｏａｐｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏ ｔｏｍｅｔｅｒｍｅｔｈｏｄ，ｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｓｔａｉｎｓｂｙｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ ｔｉｏｎ，ａｎｄ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｆｉｎａｌｌｙｓｔｕｄｙｔｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｌｉｐａｓｅ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ａｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎＢＹ８ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｌｉｐａｓｅｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓ犃犾犮犪犾犻犵犲狀犲狊犳犪犲犮犪犾犻狊ｗｉｔｈｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ３．６４ Ｕ／ｍＬｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆ４０℃ａｎｄｐＨ７．０．ＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｒｅａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨｆｏｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇｌｉ ｐａｓｅｆｒｏｍＢＹ８ｗａｓ３５ ℃ ａｎｄ７．０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＢＹ８ｗａｓｐｒｏｍｏｔｅｄｂｙ Ｍｇ２＋ ａｎｄ Ｃａ２＋ ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙＣｕ２＋ ａｎｄＺｎ２＋ ，ａｎｄａｐｐｅａｒｅｄｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｆｔｅｒｂｅｉｎｇｔｒｅａｔｅｄｂｙＥＤＴＡａｎｄＳＤＳ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ＴｈｅｌｉｐａｓｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＢＹ８ｓｔｒａｉｎｗａｓａｎｅｕｔｒａｌｌｉｐａｓｅｗｉｔｈｏｒｄｉｎａｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｂｕｔｓｔａｂｌｅｅｎ ｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．
产脂肪酶菌株的筛选
产脂肪酶菌株的筛选实验目的:以橄榄油作为唯一碳源筛选出能产生出脂肪酶的菌株。
橄榄油乳化法是测定脂肪酶活性的常用方法，其测定的原理是天然油脂被水解产生的游离脂肪酸可以被氢氧化钠中和。
橄榄油乳化：聚丙烯醇3:1橄榄油乳化，水包油型，然后装在合适的瓶子里。
实验原理：脂肪酶是一类特殊酯键水解酶，产脂肪酶的微生物广泛的分布，主要以各类真菌为主；在富含油脂的地方进行采样，利用稀释平板分离法筛选产脂肪酶菌株，再以乳化橄榄油为底物。
脂肪酶作用于橄榄油乳化液，催化酯键水解，生成脂肪酸，用标准氢氧化钠滴定脂肪酸，利用酚酞滴定终点，记录消耗的氢氧化钠体积，根据氢氧化钠的用量来计算脂肪酶的活力。
材料：烧杯、玻璃棒、锥形瓶、试管、平板、接种环、制备乳化状态的针筒等。
土壤采集：在土门菜市场油污重地进行土壤采样。
富集培养基配置：硫酸铵0.1% 磷酸氢二钾0.1% 七水硫酸镁 0.05% 七水硫酸亚铁0.001% 酵母膏0.5% 橄榄油乳化液12% 氯化钠l% PH自然，115℃灭菌30min选择培养基平板：乳化橄榄油 12% 蛋白胨 1% 硫酸铵0.2% 磷酸氢二钾0.1% 磷酸二氢钾0.3% 七水硫酸亚铁0.1% 维多利亚蓝0.004% 琼脂1.5% PH=8.0灭菌115℃30min 复筛培养基平板：乳化橄榄油12% 蛋白胨1% 硫酸铵0.2% 磷酸氢二钾0.1% 磷酸二氢钾0.3% 七水硫酸亚铁0.1% 琼脂1.5% PH=8 115℃灭菌30min实验方法：1、取土样2g悬于20ml无菌水中，震荡，在100ml培养基中加入5ml的悬液，30℃ 180r/m 培养3d。
2、取富集液稀释分别涂布于选择培养基平板上，经培养观察菌落周围的蓝色圈，然后挑取该菌落于富集培养基斜面上。
30℃培养箱3d。
3、将初筛得到的菌株在复筛培养基平板划线，然后放于30℃培养箱中3d。
4、挑取单菌落，镜检并纯化，得到纯菌株保存。
5、活力测定：U=(V-V.)/t×50×n。
产脂肪酶菌株的筛选及其固定化的研究
产脂肪酶菌株的筛选及其固定化的研究随着人们生活方式的改变和食物极限的提高，肥胖和心脑血管疾病等疾病也日益增多。
白领和学生等群体中，人们的饮食习惯和健康状况引起了更多的关注。
研究表明，脂肪酶能够降低脂肪的含量，对于健康人群以及需要减肥的人来说，这种酶被应用广泛。
因此，本文主要讨论如何通过菌株的筛选和固定化研究，实现产脂肪酶的目标。
1.产脂肪酶菌株的筛选(1)菌株分类首先我们需要得到具有脂肪酶产生能力的微生物株。
目前，研究人员从不同来源的环境中筛选得到脂肪酶分解菌株。
一般来说，脂肪酶菌株按照细菌、真菌、酵母菌的类型划分。
以细菌领域为例，产脂肪酶的细菌具有广泛的分布。
研究表明，主要包括属于芽孢杆菌属（Bacillus）、乳酸菌属（Lactobacillus）、放线菌属（Streptomyces）、泥炭菌属（Pseudomonas）等。
其中，芽孢杆菌属的应用比较广泛。
其次，酵母菌的产酶能力比较强，因此也是研究的热点对象。
真菌也是研究的对象之一。
上述微生物大多数有代表性的株系都已经分离鉴定过程中分离纯化和筛选中，通过选择合适的产酶基质，调节适宜的菌株培养环境，确定了不同的产酶体系。
基于活性、脂肪酶酶特异性和影响、菌株生产含量等方面着手，最终确定了适宜的菌株，如Bacillus subtilis CICC 40224，Bacillus pumilus CICC 1316。
(2)筛选菌株的影响因素1.酸碱度：脂肪酶的酸碱度是影响酶活性的一种因素，特别是在温度较高的条件下，酸碱度会对酶的活性和稳定性产生较大的影响。
2.温度：温度也是影响脂肪酶活性的因素之一。
根据研究，脂肪酶在40-50℃时的活性最为理想。
3.基质：脂肪酶对基质的种类和特性有一定的要求。
研究表明，基质的溶解度、分子大小、分子构型等因素会影响脂肪酶的分解能力。
4.浓度：产酶菌株的营养状态也会影响到它的产酶性能。
不同浓度的培养基对产酶菌株的贡献不同，太浓或太稀的培养基均会对脂肪酶的产生产生不利影响。
从土壤中分离一株脂肪酶水解阳性菌株
创新性实验：从土壤中分离一株脂肪酶水解阳性菌株一、实验目的：掌握细菌的富集培养以及划线培养的方法，学习从土壤中提取微生物的方法，了解菌种鉴定的一些基本方法。
二、实验原理：某些细菌能够分泌脂肪酶（胞外酶），能将培养基中的脂肪水解为甘油和脂肪酸。
所产生的脂肪酸，可通过预先加入油脂培养基中的中性红加以指示[指示范围pH6.8（红）～pH8.0（黄）]。
当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，培养基中出现红色斑点。
三、预先掌握的知识和原理：富集培养：富集培养基就如同其表面的意思，的确是一种可以让微生物大量繁殖，获得高密度培养的培养基，但是不同的富集培养基其组成是不同的，相应的所针对的菌种也是不同的，通常情况下一种富集培养基只能对一种或几种特定菌种有伏击培养效果，并不能实现对所有细菌的富集培养。
四、实验器材和材料：土壤样品（实验者自己准备），生理盐水，橄榄油，胰蛋白胨，酵母浸粉，NaCl，琼脂粉，K2HPO4，葡萄糖，Rhodamine B溶液(罗丹明B溶液)，MgSO4，Na2HPO4，KH2PO4。
五、实验方法：1、细菌培养基：（g\L）胰蛋白胨（5.0），酵母浸粉（5.0）葡萄糖（1.0）琼脂（15.0）K2HPO4（1.0）2、Rhodamine B平板筛选培养基的配制：在培养基中加入3%的橄榄油，灭菌冷却之后至60度，加入0.2%过滤灭菌的Rhodamine B溶液，制成平板。
3、富集培养基的配制（g\L）：橄榄油20，酵母浸粉0.2，Na2HPO43.5，KH2PO41.5，MgSO40.5,NaCl0.5。
4、鉴别培养基的配制：在Rhodamine B平板筛选培养基中加入中性红。
5、菌悬液的制备：取1g土壤样品于10mL生理盐水中，摇匀后取出0.1mL 悬液，加入富集培养液中。
6、富集培养：起始pH为7.5，放在培养箱中30度保温，150r\min摇瓶，培养2-4天，然后取5ml培养液移入另一支装有相同培养基的试管中，在相同的条件下在培养一次。
脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件研究
脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件研究第一章综述1.1脂肪酶1.1.1脂肪酶的性质脂肪酶（甘油三酯水解酶，Lipase EC 3.1.1.3）是一类特殊的酯键水解酶，只作用于油水界面的两相系统，当底物以微粒、小聚合分散状态或者乳化状态存在时，脂肪酶的催化作用才会比较明显。
脂肪酶催化脂肪的水解产物主要有甘油二酸酯、甘油酸酯、甘油以及脂肪酸。
脂肪酶除了可以发生水解反应还可以催化酯类化合物的醇解、酯-酯交换、酯-酸交换及合成等。
1.1.2脂肪酶的来源自然界中脂肪酶主要来自于植物种子（主要是油作物种子：花生、油菜籽和蓖麻子等）当油料种子发芽时，脂肪酶和其他酶一起作用催化从而将脂肪类物质转化为糖类从而为作物提供碳源；动物中的脂肪组织、胰脏、动物的肠液以及一些动物的胃液中；脂肪酶还存在多种微生物中，目前自然界发现有65个属的微生物产脂肪酶：其中细菌有28个属、放线菌4个属、酵母菌10个属、其它真菌23个属。
微生物具有种类多、生长周期短、繁殖非常快以及容易发生遗传变异等特点，因此，微生物产生的脂肪酶相比动植物产生的脂肪酶具有更大的pH、温度范围和底物特异性，还可以对产脂肪酶微生物进行训化使其更好地适应特殊环境[1]。
目前研究发现来源不同的脂肪酶所具有的底物特异性和对环境的耐受能力并不同，因此，在不同的应用上微生物都具有更好地研究意义。
虽然产脂肪酶的菌株种类很多，可是产酶量高的菌种却很少，所以本次的菌种挑选主要是选取产脂肪酶量高的菌种。
1.1.3脂肪酶的生产目前生产脂肪酶的方法主要有三种：一、在植物组织和动物器官中进行提取，但是动植物中的脂肪酶的催化条件并不是很广，因此在应用方面很有限制；二、使用化学合成法，通过分析脂肪酶的成分组成再根据其成分组成顺序进行化学方法合成；三是使用微生物进行人工控制发酵生产脂肪酶，微生物生产脂肪酶的成本很高，但是由于微生物本身的诸多优点使得脂肪酶的适应性更广，甚至可以应用极端环境中[1][2][3]。
高效产脂肪酶菌株C1的分离鉴定与酶学性质研究
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产脂肪酶菌种分离筛选流程图设计概念
产脂肪酶菌种分离筛选流程图设计概念下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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产脂肪酶菌株的分离
13生技1班黄涵
摘要:被油脂污染的土样中含有可产脂肪酶的菌体,经富集培养之后通过初筛、复筛能获得已分离的可产脂肪酶的菌株.
关键词:脂肪酶菌株分离纯化
脂肪酶也叫三酰甘油脂水解酶,是一类重要的酯键水解酶,能够在油-水界面上催化天然油脂(甘油三脂)生成游离的脂肪酸、甘油和甘油单酯或甘油二酯,广泛存在于动物、植物和微生物中.相对于动、植物脂肪酶,微生物脂肪酶具有生产成本低,易分离提纯且应用广泛,对金属离子、有机溶剂、表面活性剂的耐受性强,易于进行工业化生产等特点,使得微生物脂肪酶继淀粉酶、蛋白酶后再次掀起酶工业化应用的热潮.针对脂肪酶在工业中的需求,如何分离产脂肪酶菌株是其研究开发的基础.
1 试验内容
1.1 试验样品
试验采用的样品有食堂地沟边的土壤等样本.
1.2 培养基
1.2.1 富集培养基
富集培养基的主要成分（%）：橄榄油1.0，酵母浸膏0.2，K2HPO4 0.5，MgSO4·7H2O
0.05，NaCl 0.15，（NH4）2SO4 0.2。
pH 值为7.0。
1.2.2 初筛培养基
初筛培养基的主要成分（％）：乳化橄榄油5.0，琼脂粉1.8，K2HPO4 0.1，MgSO4·7H2O
0.01，CaCl2 0.01，（NH4）2SO4 0.1，NaCl 0.05，灭菌后加罗丹明B。
1.2.3 复筛培养基
复筛培养基的主要成分（％）：橄榄油1.0，酵母浸膏0.2，K2HPO4 0.2，MgSO4 ·7H2O
0.05，（NH4）2SO4 0.1，葡萄糖1.0。
1.3 脂肪酶活力测定
脂肪酶活力的定义：在40 ℃，pH 值为7.5 的条件下, 将每分钟从橄榄油中释放 1 μmol 脂肪酸的酶量定义为一个酶活单位（U）。
采用滴定法测定脂肪酶酶活[3]。
1.4 菌株筛选方法
1.4.1筛选路线
采样→富集培养→初筛→复筛→酶活性测定→菌种鉴定→固定化。
1.4.2筛选方法
（1）富集培养
将采集的土样稀释后，取1 ml 放入装有50 ml 富集培养基的三角瓶中,在温度为45 ℃,转速为220 r/min 的摇床上培养5 d, 并将富集培养液持续转接3～4 次。
（2）菌株初筛
将富集培养液稀释后涂布于加有罗丹明B为指示剂（也可以选用溴甲酚紫为指示剂）的选择培养基上,培养观察菌落周围是否出现透明圈，然
后分别保存出现透明圈的菌落。
（3）菌株复筛
（4）将经过初筛的菌株接种于复筛培养基上,在摇瓶内培养，50 h 后测定其酶活。
（5）。