产脂肪酶菌株的分离

产脂肪酶菌株的分离

13生技1班黄涵

摘要:被油脂污染的土样中含有可产脂肪酶的菌体,经富集培养之后通过初筛、复筛能获得已分离的可产脂肪酶的菌株.

关键词:脂肪酶菌株分离纯化

脂肪酶也叫三酰甘油脂水解酶,是一类重要的酯键水解酶,能够在油-水界面上催化天然油脂(甘油三脂)生成游离的脂肪酸、甘油和甘油单酯或甘油二酯,广泛存在于动物、植物和微生物中.相对于动、植物脂肪酶,微生物脂肪酶具有生产成本低,易分离提纯且应用广泛,对金属离子、有机溶剂、表面活性剂的耐受性强,易于进行工业化生产等特点,使得微生物脂肪酶继淀粉酶、蛋白酶后再次掀起酶工业化应用的热潮.针对脂肪酶在工业中的需求,如何分离产脂肪酶菌株是其研究开发的基础.

1 试验内容

1.1 试验样品

试验采用的样品有食堂地沟边的土壤等样本.

1.2 培养基

1.2.1 富集培养基

富集培养基的主要成分（%）：橄榄油1.0，酵母浸膏0.2，K2HPO4 0.5，MgSO4·7H2O

0.05，NaCl 0.15，（NH4）2SO4 0.2。pH 值为7.0。

1.2.2 初筛培养基

初筛培养基的主要成分（％）：乳化橄榄油5.0，琼脂粉1.8，K2HPO4 0.1，MgSO4·7H2O

0.01，CaCl2 0.01，（NH4）2SO4 0.1，NaCl 0.05，灭菌后加罗丹明B。

1.2.3 复筛培养基

复筛培养基的主要成分（％）：橄榄油1.0，酵母浸膏0.2，K2HPO4 0.2，MgSO4 ·7H2O

0.05，（NH4）2SO4 0.1，葡萄糖1.0。

1.3 脂肪酶活力测定

脂肪酶活力的定义：在40 ℃，pH 值为7.5 的条件下, 将每分钟从橄榄油中释放 1 μmol 脂肪酸的酶量定义为一个酶活单位（U）。采用滴定法测定脂肪酶酶活[3]。

1.4 菌株筛选方法

1.4.1筛选路线

采样→富集培养→初筛→复筛→酶活性测定→菌种鉴定→固定化。

1.4.2筛选方法

（1）富集培养

将采集的土样稀释后，取1 ml 放入装有50 ml 富集培养基的三角瓶中,在温度为45 ℃,转速为220 r/min 的摇床上培养5 d, 并将富集培养液持续转接3～4 次。

（2）菌株初筛

将富集培养液稀释后涂布于加有罗丹明B为指示剂（也可以选用溴甲酚紫为指示剂）的选择培养基上,培养观察菌落周围是否出现透明圈，然

后分别保存出现透明圈的菌落。

（3）菌株复筛

（4）将经过初筛的菌株接种于复筛培养基上,在摇瓶内培养，50 h 后测定其酶活。（5）