生物技术药物的相关知识

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光谱分析法
比色法 蛋白质 双缩脲反应 硫酸软骨素 Elson-Morgan比色法 按干燥品计算，测定氨基己糖含量 原理：酸性条件下水解 氨基己糖 碱性条件下与乙酰丙酮反应 再与二甲氨基苯甲醛反应 氨基葡萄糖（红色） 以盐酸葡萄糖溶液为对照，525nm测定A
计算:
放射化学法
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举例 胰蛋白酶效价测定 胰蛋白酶能专一地作用于赖氨酸、精氨 酸等碱性氨基酸的羧基组成的肽键，酰 氨键及酯键
供试品溶液的配制 精密称取本品适量 0.001mol/L盐酸溶液溶解 制成50-60IU/ml胰蛋白酶溶液
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生化药物、基因工程药物常用定量分析方法
理化分析法
生化测定法 生物检定法
化学分析法 电化学分析法 光谱分析法 色谱法 酶法 电泳法
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化学分析法
重量法 根据样品中分离出的单质或化合物的重量测定 所含成分的含量
根据被测组分分离方法分类： 提取法 胰酶中脂肪含量的测定 挥发法 炽灼残渣 干燥失重 沉淀法 沉淀反应
每个酶分子每分钟转化底物的分子量
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测定方法
物理法 化学法 酶分析法 终点法
动力学法（取样测定法） 反应速率法（连续测定法）
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取样测定法 中止酶反应 酶变性剂
5%三氯醋酸 3%高氯酸 酸 碱 醇
连续测定法 在反应过程中对反应系统进行连续检测 准确性和测定效率都较取样法更好
一类底物浓度足够高
单底物反应
活化剂 注意：浓度超过一定水平后导致抑制
测定不专一，易受干扰
抑制剂
不可逆抑制剂 浓度 抑制程度 线性
可逆抑制剂 低浓度范围 浓度 抑制程度
举例 抑肽酶的效价测定 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
底物溶液的制备 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐171.3mg 加水溶解并稀释至25ml
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酶反应进程曲线和酶浓度曲线
产物
反应速度
6
5
4
3
2
1
0
0
5
10
15
反应时间(min)
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0
20
40
60
酶量
酶分析法
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动力学分析法
酶的底物
当底物浓度[S]<Km时，一级反应性态 辅酶 双底物反应
底物溶液的配制 BAEE盐酸盐85.7mg 加水溶解使成100ml 精密量取10ml 磷酸缓冲液稀释成100ml 25.0± 0.5 ℃,253nm以水做空白，测定 吸光度 A应在0.575－0.585之间为宜
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测定 空白： 底物溶液3.0ml＋0.001mol/L盐酸液0.2ml 供试品溶液 0.2ml与底物溶液3.0ml 立即计时并摇匀 253nm测定吸收度 每隔30s测一次，共5min 以A为纵坐标，时间为横坐标作图 每30s吸收度改变恒定在0.015－0.018之间， 呈线性关系不少于3min
来自百度文库
活力单位 比活性 酶以外其它物质的含量
共同点：
以酶能专一而高效地催化某些反应为基础，通 过对酶反应或生成物等浓度的测定而检测相应 物质的含量
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酶活力测定法
基本概念 酶活力 酶催化一定化学反应的能力 活性单位（国际单位，IU）
任何一种酶，在25℃ 以最适当的底物浓度、 最适当的缓冲离子强度以及最适当的pH等 条件下，每分钟能转化一微摩尔底物的酶量 比活性 每一毫克蛋白质所含酶的单位数 分子活力 每微摩尔酶对最适底物的活性单位
计算
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P= A1-A2 0.003TW
式中P－每1mg胰蛋白酶供试液中含胰蛋白酶
单位数
A1－直线上终止的吸收度 A2－直线上开始的吸收度 T－A1至A2读数的时间（min） W－测定液中含供试品的mg数
0.003－上述条件下，吸收度每改变0.003，
相当于1个胰蛋白酶单位
胰蛋白酶溶液的制备 胰蛋白酶对照品适量，精密称定 加盐酸滴定液（0.001 mol/L）制成每1ml 中约含0.8单位溶液（约每1ml中含1mg） 的溶液
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紫外分光光度法 蛋白质 280nm 糜蛋白酶与底物N-乙酰-L-酪氨酸乙酯 作用后产物 237nm
荧光分光光度法 反应物或反应激发产生荧光直接测定 应用荧光试剂的荧光测定 应用另一酶的催化反应的荧光测定
酶法
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酶活力测定法
酶分析法
以酶为分析对象 以酶为分析工具或试剂
检测方法
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紫外－可见分光光度法 氧化还原酶
脱氢辅酶NAD(P)H 340nm
细胞色素氧化酶底物细胞色素C
550nm 摩尔吸收系数 2.18×104
氧化型 0.80×104
荧光分光光度法
底物本身在酶反应过程中有荧光变化
❖利用具有荧光底物
旋光度法
酶偶联测定法
其他 电化学测定法 离子选择性电极测定法
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氨基己糖的含量=
A×Ws×0.8309×500 As×W
×100％
式中 A—供试品溶液吸收度平均值
As—对照品溶液吸收度平均值 Ws—对照品溶液每1ml中含盐酸氨基葡萄
糖的量（mg）
0.8309—校正因数（氨基葡萄糖与盐酸氨
基葡萄糖分子量的比值）
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滴定分析法 根据样品中某些成分与标准溶液能定量地发生 酸碱中和、氧化还原或络合反应等进行测定
电化学分析法 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
离子选择性电极 药物电极
酶电极
药物膜电极 生物组织膜电极
微生物电极 免疫电极
免疫场效应管
酶催化反应 生成产物不 同，电极种 类不同
其他：极谱氧电极法 微电流电位法 生物传感器技术
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影响效价测定的因素 酶浓度 最佳浓度 50IU/ml－60IU/ml 温度 温度每升高1 ℃ 活力单位增高5% 底物 底物溶液应在配制后3h内使用
关键在于判断底物浓度[S]与Km的关系 pH值 H+能改变酶活性中心的解离状况，
升高或降低酶的活性 空白和对照实验