多肽合成
多肽合成反应
多肽是少于100个氨基酸脱水缩合形成的化合物，分子结构介于氨基酸和蛋白质之间，具有很高的生物活性。
随着多肽在药物研发、食品研究以及在化妆品领域的广泛应用（特别是生物制药的发展），多肽合成已然成为化学生物学研究的一个重要且不断增长的领域。
多肽合成反应1）末端氨基酸N端脱保护2）激活待添加氨基酸（C端脱保护）3）偶联成具有酰胺功能的肽4）重复上述步骤添加更多的氨基酸，直到得到目的肽多肽化学合成方法1）固相合成（SPPS）：在聚合珠或树脂上从C端（羧基端）向N端（氨基端）固相合成多肽。
*Boc多肽合成法经典的多肽固相合成法，以Boc作为氨基酸α-氨基的保护基，苄醇类作为侧链保护基，Boc的脱除通常采用三氟乙酸(TFA)进行。
多肽合成时将已用Boc保护好的N-α-氨基酸共价交联到树脂上，TFA切除Boc保护基，N 端用弱碱中和。
肽链的延长通过二环己基碳二亚胺(DCC)活化、偶联进行，最终采用强酸氢氟酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)将合成的目标多肽从树脂上解离。
在Boc多肽合成法中，为了便于下一步的多肽合成，反复用酸进行脱保护，一些副反应被带入实验中，例如多肽容易从树脂上切除下来，氨基酸侧链在酸性条件不稳定等。
FMOC-苯甘氨酸102410-65-1BOC-L-4-甲基苯丙氨酸80102-26-7BOC-L-羟脯氨酸13726-69-7*Cbz-氨基酸及衍生物CBZ-L-赖氨酸甲酯盐酸盐27894-50-42）偶联试剂：*活性酯/添加剂N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐106627-54-71H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐128625-52-5Fmoc-His(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB，Substitution 0.3-0.8mmol/g。
多肽合成方法
多肽合成中肽键形成的基本原理一个肽键的形成（生成一个二肽），从表面上看是一个简单的化学过程，它指两个氨基酸组分通过肽键（酰胺键）连接，同时脱去水。
在温和反应条件下，肽键的形成是通过活化一个氨基酸（A）的羧基部分，第二个氨基酸（B）则亲核进攻活化的羧基部分而形成二肽（A－B）。
如果羧基组分（A）的氨基未保护，肽键的形成则不可控制，可能开有成线性肽和环肽等副产物，与目标化合物A－B混在一起。
所以，在多肽合成过程中，对不参与肽键形成的所有官能团必须以暂时可逆的方式加以保护。
因此，多肽合成－即每一个肽键的形成，包括三个步聚：第一步，需要制备部分保护的氨基酸，氨基酸的两性离子结构不再存在；第二步，为形成肽键的两步反应，N－保护氨基酸的羧基必须先活化为活性中间体，随后形成肽键。
这一耦合反应既可作为一步反应进行，也可作为两个连续的反应进行。
第三步，对保护基进行选择性脱除或全脱除。
尽管全部脱除要等到肽链全部组装完成后才能进行，但为了继??? 续肽合成，选择性脱除保护基也是必需的。
由于10个氨基酸（Ser、Thr、Tyr、Asp、Glu、Lys、Arg、His、Sec和Cys）含有需要选择性保护的侧链官能团，使肽合成变得更加复杂。
因为对选择性的要求不同，所以必须区分临时性和半永久性保护基。
临时性保护基用于下一步要反应氨基酸的氨基或羧基官能团的暂时保护，在不干扰已经形成的肽键或氨基酸侧链的半永久性保护基才脱除，有时也在合成过程中脱除。
在理想状态下，羧基组分的活化和随后的肽键形成（耦合反应）应为快速反应，没有消旋或副产物形成，并应用等摩尔反应物以获得高产率。
但遗憾的是，还没有一种能满足这些要求的化学耦合方法相比，适用于实际合成的方法很少。
在肽合成过程中，参与多种反应的官能团常常与一个手性中心相连（甘氨酸是唯一的例外），存在发生的消旋的潜在危险。
多肽合成循环的最后一步，保护基要全部脱除。
除了在二肽的合成中需要全脱保护以外，选择性脱除保护基对于肽链延长具有非常重要的意义。
多肽有机合成和无机合成
多肽有机合成和无机合成1.引言1.1 概述概述多肽是由氨基酸残基通过肽键连接而成的生物大分子。
多肽具有广泛的生物活性和应用价值，因此对于多肽的合成研究一直是化学领域的重要研究方向之一。
多肽的合成方法多种多样，可以分为有机合成和无机合成两种主要类型。
有机合成方法是通过有机合成化学的手段将氨基酸残基逐个加入到多肽链中。
这种方法需要有机合成化学家们设计并合成一系列的保护基、缩合试剂以及催化剂等。
有机合成方法的优点在于可以合成具有复杂结构和特定功能的多肽，但由于合成步骤多、操作繁琐，合成周期较长，因此在合成过程中往往需要进行大量的优化和调试。
无机合成方法是通过无机化学的手段合成多肽链。
这种方法利用了无机合成反应的高效性和选择性。
无机合成方法的优点在于高效快速，适用于合成较短的多肽链。
然而，由于无机合成反应的特点，无机合成方法往往无法合成含有较长的多肽链或者特殊结构的多肽。
本文将重点介绍多肽的有机合成方法和无机合成方法。
对于有机合成方法，将讨论其定义、原理以及常用的合成方法，并介绍其中的优缺点。
而对于无机合成方法，将阐述其定义、原理以及适用的合成方法，并探讨其在多肽合成中的应用前景。
通过对有机合成和无机合成的对比分析，可以更加全面地了解两种方法在多肽合成中的优缺点。
同时，展望未来，对多肽合成技术的发展方向进行展望，探索更加高效、简便的合成方法，以满足对于多肽的广泛应用需求，并促进多肽领域的进一步发展。
接下来将详细介绍多肽的有机合成方法和无机合成方法，深入探讨其原理和具体的合成方式。
同时，通过案例分析和实验结果的展示，更加直观地展示多肽合成方法的优势与不足，并对其未来的发展进行展望。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将对多肽有机合成和多肽无机合成进行详细介绍和比较分析。
首先，引言部分将给出多肽有机合成和多肽无机合成的概述，包括定义和原理的解释，并说明本文的目的。
接着，正文部分将分成两个小节，分别介绍多肽有机合成和多肽无机合成的相关内容。
多肽固相合成
多肽固相合成引言多肽是由氨基酸单元组成的生物大分子，具有广泛的生物活性和潜在的药物研发价值。
多肽固相合成是一种常用的合成方法，可以用于制备中小型多肽以及肽类药物。
本文将介绍多肽固相合成的原理、步骤和常用技术，并探讨其在药物研究领域中的重要性。
1. 多肽固相合成的原理多肽固相合成基于肽链从C端向N端逐渐延伸的原理。
合成过程中，多肽链通过戊二烯二硅烷（Boc）或氯甲酰（Fmoc）等保护基与固体载体（通常为氯甲基丙烯酸酯交联的聚合物）共价结合。
经过一系列的反应和保护基的去除，最终得到目标多肽。
2. 多肽固相合成步骤多肽固相合成步骤一般包括以下几个阶段：2.1. 准备工作首先，需要准备好实验室必备的试剂和仪器设备，并确保实验室操作符合安全要求。
此外，还需要选取合适的固相载体和保护基。
2.2. 固相修饰将固相载体与氯甲基丙烯酸酯进行反应，引入活性基团，以便后续与氨基酸单元的连接。
2.3. 保护基的引入选择合适的保护基（例如Boc、Fmoc）引入到固相载体上，以保护其反应活性。
2.4. 氨基酸单元的耦合将保护基的氨基酸单元与固相载体上的活性基团耦合，形成肽链的C端。
2.5. 保护基的去除通过适当的反应条件去除保护基，暴露出氨基酸单元的反应位点。
2.6. 重复步骤2.4和2.5重复步骤2.4和2.5，直到合成完整的多肽链。
2.7. 多肽链的剪切与脱保护将多肽与固相载体分离，并通过适当的反应条件去除保护基。
2.8. 纯化与鉴定对合成得到的多肽进行纯化和鉴定，通常使用高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）等检测技术。
3. 常用的多肽固相合成技术多肽固相合成涉及到许多关键的技术，下面介绍几种常用的技术方法：3.1. Boc策略Boc策略是一种常用的多肽固相合成策略，其特点是生化反应条件温和，适用于氨基酸侧链中含有灵敏官能团的情况。
然而，Boc保护基的去除需要使用强酸，容易引起副反应。
3.2. Fmoc策略Fmoc策略是另一种常用的多肽固相合成策略，它与Boc 策略相比，具有更广泛的应用范围。
多肽合成的书
多肽合成的书1. 引言多肽是由氨基酸通过肽键连接而成的生物大分子，具有广泛的生物活性和应用潜力。
多肽合成是一项重要的研究领域，它涉及到多种化学技术和方法。
本书将介绍多肽合成的原理、方法和应用，旨在为读者提供全面、详细且深入的知识。
2. 多肽合成的原理多肽合成是通过将氨基酸分子中的羧基与氨基反应形成肽键，将多个氨基酸连接在一起而实现的。
常用的多肽合成方法包括固相合成法、液相合成法和化学合成法等。
2.1 固相合成法固相合成法是最常用且高效的多肽合成方法之一。
它利用聚苯乙烯或聚酰胺树脂等固相材料作为载体，在其表面上固定一个保护了氨基酸羧基的功能基团，然后通过反复进行去保护-偶联循环反应，逐步扩大多肽链长度。
固相合成法具有高纯度、高效率和高自动化程度的优点，适用于合成中等长度（10-50个氨基酸）的多肽。
然而，固相合成法在合成长链多肽时面临一些挑战，如副反应的产生和耐受性差等问题。
2.2 液相合成法液相合成法是通过在溶液中进行多肽合成的方法。
它与固相合成法相比，更适用于合成短链多肽。
液相合成法通常采用保护-偶联策略，即先保护氨基酸羧基和氨基，然后将它们连接起来形成肽键。
液相合成法具有操作简便、灵活性高和耐受性好的优点，但由于产物分离和纯化困难，其应用范围受到一定限制。
2.3 化学合成法化学合成法是通过化学反应直接构建多肽链的方法。
它不依赖于生物体内酶类催化反应，可以在无需特殊条件下实现多肽的快速合成。
化学合成法具有反应条件温和、选择性好和适用范围广的优点，但需要对每个氨基酸进行独立的保护和偶联，反应步骤较多，合成过程复杂。
3. 多肽合成的方法多肽合成的方法包括固相法、液相法和化学法等，下面将对每种方法进行详细介绍。
3.1 固相法固相法是通过将氨基酸固定在载体上，然后在其表面上进行反应来合成多肽。
具体步骤如下：1.载体选择：选择适宜的聚合物材料作为载体，如聚苯乙烯或聚酰胺树脂。
2.活化载体：将载体活化，使其表面具有反应活性基团。
多肽合成详细解说
多肽合成详细解说多肽合成详细解说1．多肽化学合成概述：1963年，R.B.Merrifield［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖.今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield所建立的Boc法(Boc:叔丁氧羰基)之外，又发展了Fmoc固相法(Fmoc:9-芴甲氧羰基).以这两种方法为基础的各种肽自动合成仪也相继出现和发展，并仍在不断得到改造和完善.Merrifield所建立的Boc合成法［2］是采用TFA(三氟乙酸)可脱除的Boc为α-氨基保护基，侧链保护采用苄醇类.合成时将一个Boc－氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用TFA 脱除Boc，用三乙胺中和游离的氨基末端，然后通过Dcc活化、耦联下一个氨基酸，最终脱保护多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法.用Boc法已成功地合成了许多生物大分子，如活性酶、生长因子、人工蛋白等.多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。
它是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。
到现在，人们已发现和分离出一百多种存在于人体的肽，对于多肽的研究和利用，出现了一个空前的繁荣景象。
多肽的全合成不仅具有很重要的理论意义，而且具有重要的应用价值。
通过多肽全合成可以验证一个新的多肽的结构；设计新的多肽，用于研究结构与功能的关系；为多肽生物合成反应机制提供重要信息；建立模型酶以及合成新的多肽药物等。
多肽的化学合成技术无论是液相法还是固相法都已成熟。
近几十年来，固相法合成多肽更以其省时、省力、省料、便于计算机控制、便于普及推广的突出优势而成为肽合成的常规方法并扩展到核苷酸合成等其它有机物领域。
多肽合成
多肽合成及应用进展简介什么是多肽多肽是α-氨基酸以肽键连接形成的化合物，是蛋白质的中间代谢产物。
通常来说，多肽指的是少于100个氨基酸脱水缩合形成的化合物，相对分子量低于10,000。
多肽具有很高的生物活性。
目前，已经发现了上万种内源性多肽，包括激素、生长因子和神经肽等多种调节因子，他们在免疫、神经系统、内分泌等发挥重要作用。
图1. 肽键形成示意图。
多肽合成多肽合成的方法众多，主要分为化学合成和生物合成两条途径。
1. 化学合成化学合成主要是通过氨基酸脱水缩合反应来实现。
在反应过程中，将原料中不需要反映的氨基酸暂时保护起来，从而保证合成的定向进行。
化学合成又分为固相和液相合成，主要区别在于是否使用固相载体。
液相合成：液相合成有两种策略，逐步合成和片段组合。
逐步合成简单迅速，适合绝大部分多肽的合成，而片段组合有利于合成更大的多肽（含有超多100个氨基酸），最大特点是易于纯制。
固相合成：固相合成法是Merrifield于1963年创立，原理是将氨基酸的C末端固定在不溶树脂上，然后依次进行缩合反应、延长肽链。
固相合成法可以细分为Fmoc（9-芴甲基氧羧基）和Boc（叔丁氧羧基）法。
Boc法是以Boc作为氨基酸α-氨基的保护基，以苄醇类作为侧链保护基，是一种经典的方法；而Fmoc是以Fmoc作为氨基酸α-氨基的保护基。
相比Boc法，Fmoc 法具有反应条件温和、产率高、副反应少等优势。
在两种传统方法的基础上，科学家又逐渐发明了氨基酸的羧内酸苷法（NCA）、组合化学法、液相分段合成法等。
NCA法：氨基酸的羧内酸酐是一种氨基酸衍生物。
NCA 法基于阴离子开环聚合机理,可通过碱类等引发反应。
NCA法反应：在碱性条件下,氨基酸阴离子进攻NCA 形成氨基甲酸根离子,酸化时该离子失去二氧化碳形成二肽，该二肽又在碱性条件下形成阴离子进攻其它的NCA ,如此反复进行下去。
图2. NCA法。
组合化学法：该方法是在固相多肽合成基础上提出来的，即氨基酸的构建单元通过组合的方式连接，合成出含有大量化合物的库，从中筛选出理化性质或者药理活性一致的化合物。
多肽液相合成操作步骤
多肽液相合成操作步骤多肽是由两个或多个氨基酸残基通过肽键连接而成的生物大分子。
多肽液相合成是一种常用的多肽合成方法，它通过在液相中依次添加氨基酸残基来合成多肽链。
本文将介绍多肽液相合成的操作步骤。
一、材料准备1. 氨基酸：根据所需合成的多肽序列，准备好需要的氨基酸。
可以选择市售的氨基酸，也可以自行合成。
2. 溶剂：选择适合的溶剂来溶解氨基酸。
常用的溶剂包括二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)等。
二、合成步骤1. 保护基的引入：如果需要保护某些特定的氨基酸残基，可以在合成开始前引入保护基。
常用的保护基有丙酰基、苯乙酰基等。
2. 激活剂的选择：选择适合的激活剂来促进氨基酸的连接。
常用的激活剂有DCC、HATU等。
将激活剂按照一定的摩尔比例加入到氨基酸溶液中。
3. 催化剂的添加：为了加快反应速度，可以添加催化剂。
常用的催化剂有二甲基氨基咪唑(DIPEA)、三乙胺(TEA)等。
4. 反应条件的调节：根据不同的氨基酸和反应需求，调节反应的温度、时间等条件。
一般情况下，反应温度在室温至60℃之间。
5. 反应监测：可以使用氨基酸分析仪或者高效液相色谱仪(HPLC)来监测反应的进程，确保反应的完全性。
6. 反应结束与纯化：当反应结束后，可以用酸性溶液将保护基去除，得到纯净的多肽产物。
纯化的方法包括逆流层析、高效液相色谱等。
7. 验证与分析：通过质谱分析或者氨基酸序列分析等方法验证合成的多肽是否与设计一致，并进行纯度分析。
三、注意事项1. 操作环境要保持干燥和无菌，以防止多肽的降解或受到污染。
2. 操作过程中要注意安全，避免接触有害物质。
3. 每一步反应的时间和温度要根据具体情况进行调节，以保证反应的有效性。
4. 在纯化过程中，要选择合适的纯化方法和条件，以获得高纯度的多肽产物。
5. 合成多肽的过程中可能会出现副反应或者氨基酸残基之间的错误连接，需要通过合适的分析方法进行鉴定和排除。
总结：多肽液相合成是一种常用的多肽合成方法，通过在液相中依次添加氨基酸残基来合成多肽链。
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多肽合成技术多肽化学已经走过了一百多年的光辉历程，1902年，Emil Fischer首先开始关注多肽合成，由于当时在多肽合成方面的知识太少，进展也相当缓慢，当时合成采用了苯甲酰，乙酰保护，脱去相当困难，而且容易导致肽链断裂。
直到1932年，Max Bergmann等人开始使用苄氧羰基（Z）来保护α-氨基，该保护基可以在催化氢化或氢溴酸的条件下定量脱除，多肽合成才开始有了一定的发展。
到了20世纪50年代，随着越来越多的生物活性多肽的发现，大大推动了有机化学家们对多肽合成方法以及保护基的研究，因此这一阶段的研究成果也非常丰富，人们合成了大量的生物活性多肽，包括催产素（oxytocin），胰岛素等，同时在多肽合成方法以及氨基酸保护基上面也取得了不少成绩，这为后来的固相合成方法的出现也提供了实验和理论基础。
也就是这个阶段，Fred Sanger发明了氨基酸序列测定方法，并为此获得了1958年的Nobel 化学奖。
还是他后来发明了DNA序列检测方法，并于1980年再次获得了Nobel化学奖，成为到目前为止唯一获得两次Nobel化学奖的科学家。
1963年，Merrifield提出了固相多肽合成方法（SPPS），这个在多肽化学上具有里程碑意义的合成方法，一出来，就由于其合成方便，迅速，现在已经成为多肽合成的首选方法，随后的发展也证明了该方法不仅仅是一种合成方法，而且也带来了有机合成上的一次革命，并成为了一支独立的学科，固相有机合成（SPOS）。
当然，Merrifield也因此荣获了1984年的Nobel化学奖。
也正是Merrifield，他经过了反复的筛选，最终屏弃了苄氧羰基（Z）在固相上的使用，首先将叔丁氧羰基（BOC）用于保护α-氨基并在固相多肽合成上使用，其可以在酸性条件下定量的脱除，反应也非常迅速，在30min就可以反应完全。
由于叔丁氧羰基（BOC）方法中，氨基酸侧链的保护基团大多基于苄基（Bzl），因此也称为BOC-Bzl策略。
同时，Merrifield在20世纪60年代末发明了第一台全自动多肽合成仪，并首次合成生物蛋白酶，核糖核酸酶（124个氨基酸）。
随后的多肽化学研究主要集中在固相合成树脂，多肽缩合试剂，氨基酸保护基的研究。
1972，Lou Carpino 首先将9-芴甲氧羰基（FMOC）用于保护α-氨基，其在碱性条件下可以迅速脱除，10min就可以反应完全，而且由于其反应条件温和，迅速得到广泛使用，到了20世纪80年代取代了叔丁氧羰基（BOC），成为了固相多肽合成中的首选合成方法。
该方法中氨基酸的侧链大多基于叔丁基（But），因此，也称为FMOC-But策略。
同时，在多肽合成树脂，缩合试剂以及氨基酸保护，包括合成环肽的氨基酸正交保护上也取得了丰硕的成果。
进入21世纪，随着蛋白质组学的研究深入，对于多肽化学的要求不仅仅是合成方法，而更多的集中在多肽标记与修饰方法，以及蛋白结构与功能模拟多肽的合成以及长肽或蛋白合成。
多肽化学合成的基本介绍多肽化学合成方法，包括液相和固相两种方法。
液相合成方法现在主要采用BOC和Z两种保护方法，现在主要应用在短肽合成，如阿斯巴甜，力肽，催产素等，其相对与固相合成，具有保护基选择多，成本低廉，合成规模容易放大的许多优点。
与固相合成比较，液相合成主要缺点是，合成范围小，一般都集中在10个氨基酸以内的多肽合成，还有合成中需要对中间体进行提纯，时间长，工作量大。
固相合成方法现在主要采用FMOC和BOC两种方法，它具有合成方便，迅速，容易实现自动化，而且可以比较容易的合成到30个氨基酸左右多肽。
1.1．氨基酸保护基20种常见氨基酸，根据侧链可以分为几类：脂肪族氨基酸（Ala，Gly，Val，Leu，Ile，），芳香族氨基酸（Phe，Tyr，Trp，His），酰胺或羧基侧链氨基酸（Asp，Glu，Asn，Gln），碱性侧链氨基酸（Lys，Arg），含硫氨基酸（Cys，Met），含醇氨基酸（Ser，Thr），亚氨型基酸（Pro）。
多肽化学合成中氨基酸的保护非常关键，直接决定了合成能够成功的关键。
因为常见的20中氨基酸中有很多都是带有活性侧链的，需要进行保护，一般要求，这些保护基在合成过程中稳定，无副反应，合成结束后可以完全定量的脱除。
合成中需要进行保护的氨基酸包括：Cys，Asp，Glu，His，Lys，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Trp，Tyr。
需要进行保护的基团：羟基，羧基，巯基，氨基，酰胺基，胍基，吲哚，咪唑等。
其中Trp也可以不保护，因为吲哚性质比较稳定。
当然在特殊的情况下，有些氨基酸也可以不保护，象，Asn，Gln ，Thr，Tyr。
表1 常见3种氨基脱除条件图1 常见3种氨基保护基结构氨基酸侧链保护基团非常多，同一个侧链有多种不同的保护基，可以在不同的条件下选择性的脱除，这点在环肽以及多肽修饰上具有很重要的意义。
而且侧链保护基和选择的合成方法有密切的关系，液相和固相不一样，固相中BOC和FMOC策略也不一样，从某种意义上看，多肽化学就是氨基酸保护基的灵活运用与搭配。
关于侧链保护基的使用，请参考王德心的《固相有机合成——原理及应用指南》第四章，我们这里主要介绍Cys，Lys，Asp的几种保护基及其脱除方法。
Cys最常见的保护基有三种，Trt，Acm，Mob，这三个保护基可以完成多对二硫键多肽的合成。
Lys最常见的保护基有：Boc，Fmoc，Trt，Dde，Allyl，这对于固相合成环肽提供了很多正交的保护策略。
Asp最常见的保护基有：Otbu，OBzl，OMe，OAll，OFm，同样也提供了多种正交的保护策略。
表2 巯基常见保护基表3 氨基常见保护基表3 羧基常见保护基1.2．多肽缩合试剂目前多肽合成中，主要采用羧基活化方法来完成接肽反应，最早使用的是将氨基酸活化为酰氯，叠氮，对称酸酐以及混合酸酐的方法，但是由于这些条件下，存在氨基酸消旋，以及反应试剂危险以及制备比较复杂，逐渐被后来的缩合试剂取代，按照其结构可以分为两种：缩合试剂主要有：碳二亚胺型，鎓盐型（Uronium）。
1.2.1．碳二亚胺型主要包括：DCC，DIC，EDC.HCl等。
采用DCC进行反应，由于反应中生成的DCU，在DMF中溶解度很小，产生白色沉淀，所以一般不用在固相合成中，但是由于其价格便宜，在液相合成中，可以通过过滤除去，应用仍然相当广泛。
EDC.HCl因为其水溶解性的特点，在多肽与蛋白的连接中使用比较多，而且也相当成功。
但是该类型的缩合试剂的一个最大的缺点，就是如果单独使用，会有比较多的副反应，但是研究表明如果在活化过程中添加HOBt，HOAt等试剂，可以将其副反应控制在很低的范围。
其反应机理如下：图2 DIC活化反应机理1.2.2．鎓盐型鎓盐型缩合试剂反应活性高，速度快，现在使用非常广泛，主要包括：HBTU，TBTU，HATU，PyBOP等。
该试剂使用过程中需要添加有机碱，如，二异丙基乙胺（DIEA），N-甲基吗啉（NMM），该试剂加入后，才能活化氨基酸。
其反应机理如下：图3 TBTU活化反应机理1.3．多肽合成方法比较1.3.1．液相多肽合成（solution phase synthesis）液相多肽合成现在仍然广泛的使用，在合成短肽和多肽片段上具有合成规模大，合成成本低的显著优点，而且由于是在均相中进行反应，可以选择的反应条件更加丰富，象一些催化氢化，碱性水解等条件，都可以使用，这在固相中，使用却由于反应效率低，以及副反应等原因，无法应用。
液相多肽合成中主要采用BOC和Z两种反应策略。
图4液相合成Glu-Trp1.3.2．固相多肽合成图5 FMOC固相合成Glu-Trp固相多肽合成现在使用的主要有两种策略：BOC和FMOC两种。
BOC方法合成过程中，需要反复使用TFA脱BOC，而且在最后从树脂上切割下来需要使用HF，由于HF必须使用专门的仪器进行操作，而且切割过程中容易产生副反应，因此现在使用受到实验条件限制，使用也逐渐减少。
FMOC方法反应条件温和，在一般的实验条件下就可以进行合成，因此，也得到了非常广泛的应用。
1.3.2.1．固相合成中常用树脂固相合成中树脂，一般都是聚苯乙烯-二乙烯苯材料，大小在75-150μm，交联度在1-2%之间，现在使用的大多是1%，因为这种交联度下，树脂在DMF，DCM中具有很好的溶胀性能，立体上是一个空间网状结构，反应物分子可以在树脂内部自由移动。
树脂中最关键的部分是连接手臂，它一端连接在树脂上，一端作为反应位点。
目前广泛使用的树脂有：PAM，MBHA，Wang，2-Cl-Trt，Rink-Amide-MBHA等。
其中PAM，MBHA 是用在BOC策略中，因为其对酸非常稳定，需要在HF，TFMSA等强酸条件下才能够切割下来。
图6 固相合成常用树脂1.3.2.2．茚三酮检测固相多肽合成中，主要是通过检测树脂上游离氨基来判断连接效率，检测方法称为Kaiser方法，其检测结果，如果有游离氨基的时候，显示兰色，或红褐色（pro，ser，His）。
Kaiser试剂包括：A，6% 茚三酮的乙醇溶液B，80% 苯酚的乙醇溶液C，2% 0.001M KCN的吡啶溶液配制中的吡啶需要经过茚三酮处理后，重蒸后再使用。
检测过程，取少量树脂，加入A，B，C各2-3滴，100℃下加热1-2min，如果溶液有兰色，或树脂出现兰色，红褐色，表明还有游离氨基，否则说明连接完全。
还有其它检测游离氨基的方法：三硝基苯磺酸法，苦味酸法，溴芬兰法等。
图7 茚三酮检测原理1.3.2.3．固相合成切割方法固相合成完成之后，必须选择合适的切割试剂将多肽从树脂上切割下来，然后经过冰乙醚沉淀，离心收集沉淀，经过HPLC分离纯化，冷冻干燥得到最后产品。
由于选择的树脂不同，氨基酸序列不同，在切割时候，选择的切割方法也不完全相同，一般都是选择酸性条件下切割的条件，对于PAM，MBHA树脂，一般采用HF 切割，切割过程中需要添加对甲苯酚，对巯基苯酚，苯甲醚等试剂。
而对于Wang，Rink-Amide，Trt树脂，一般采用TFA切割，切割过程中加入，乙二硫醇，苯甲硫醚，水，三异丙基硅烷，苯酚等。
这些添加试剂主要作为碳正离子俘获试剂使用，目的是俘获切割反应过程中生成的碳正离子，减少这些碳正离子对部分氨基酸侧链的进攻导致的副反应，比较容易产生副反应的氨基酸有：Trp，Tyr。
切割试剂用量一般10-15ml/g 树脂。
常用的切割配比：HF/p-cresol/p-thiocresol（90/5/5），TFA/TIS/EDT/H2O（94/1/2.5/2.5），反应一般是在室温条件下2h-4h。
1.3.3．多肽合成中主要问题1.3.3.1．消旋及其反应机理多肽合成过程中，部分氨基酸在活化的过程中会导致不同程度的消旋，特别容易消旋的氨基酸有：Cys，His，Phe，当然这些消旋化还和溶剂，温度以及合成中的有机碱等因素有关。