9经典免疫学试验,沉淀反应解析

人民卫生出版社
二、环状沉淀试验
环状沉淀 (ring precipitation) 试验 是由 Ascoli 于 1902 年建立的一种经典 的血清学定性试验。用非常简便的技 术了解待测血清内是否存在某种抗原 或抗体。
人民卫生出版社
(一) 原理 把抗原溶液小心地加于已含抗体溶液的细 试管液面上。当对应的抗原与抗体相遇 ，在界面处形成清晰的乳白色沉淀环。
人民卫生出版社
(一) 原理 抗原溶液与相应抗体溶液混合，在电解质 存在的条件下，抗原与抗体结合出现可见的絮 状沉淀。絮状沉淀易受抗原与抗体比例的影响， 由此可作为最适比测定的基本方法。
人来自百度文库卫生出版社
(二) 操作步骤 1. 抗原稀释法 (1) 将可溶性抗原作一系列倍比稀释。 (2) 各管加入一定浓度的适量抗血清。 (3) 振摇使抗原、抗体充分混匀，置37℃孵育。 (4) 产生沉淀量随抗原量而不同，以出现沉淀物最多 的管为最适比例管。
人民卫生出版社
(3) 方法评价：
检测不必等到抗原抗体反应达到平衡，大大 节约反应时间，每小时可检测数十份标本， 敏感度高，最小检出量达μ g/L水平。
人民卫生出版社
2. 操作步骤 (1) 用稀释缓冲液将待检样品和标准品按 规定稀释，取一定量加至测定管中。 (2) 加最适工作浓度 (用方阵法预先滴定 ) 的抗体，孵育一定时间，测定吸光度 (A) 值。 (3) 以不同浓度抗原含量为横轴，吸光度 为纵轴，绘标准曲线。从标准曲线可得待 检抗原量。
人民卫生出版社
人民卫生出版社
2. 抗体稀释法 本法采用抗原量恒定与不同倍比稀释 度的抗体反应，出现沉淀物最多的管为抗 体最适比例管。 3. 方阵滴定法 抗原和抗体同时稀释，亦称棋盘 (checkerboard) 滴定法，是前二法的结合， 可一次完成抗原和抗体的滴定并找出抗原、 抗体的最适比。
人民卫生出版社
• (三) 方法评价 絮状沉淀试验方法简单，设备要求低，敏感度 较低，受抗原抗体比例影响非常明显，目前多 用以测定抗原抗体反应的最适比。
免疫学检验
人民卫生出版社
第十三章
沉淀反应
人民卫生出版社
可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀
人民卫生出版社
目
录
1897年 Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应 抗血清混合出现沉淀
1905年 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加 于其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行 1946年 Oudin 报告了试管免疫扩散技术 1965年 Mancini 提出单向免疫扩散技术，使定性 免疫试验向定量化发展免疫浊度法的出现，使沉淀 反应达到快速、微量、自动化的新阶段。
人民卫生出版社
(2) 操作步骤： 1) 用稀释液将待检抗原稀释成一定浓度。 2) 将稀释待检抗原和不同浓度抗原标准品加至试 管内，再加入一定量抗体，立即比浊，记录速率 单位(RU)。 3) 以抗原标准品含量为横坐标，RU值为纵坐标， 于普通坐标纸上绘制标准曲线。根据待测抗原 RU 值，查出相应抗原含量。
人民卫生出版社
1. 速率散射比浊法 (1) 原理：是一种抗原抗体结合动态测定法。 所谓速率是抗原抗体结合反应过程中，在单位 时间内两者结合的速度。速率法是测定最大反 应速率，即在抗原抗体反应达最高峰时，通常 为数十秒钟，测定其复合物形成的量。峰值的 高低在抗体过量情况下与抗原的量成正比。峰 值出现的时间与抗体的浓度及其亲和力直接相 关。不同抗原含量其速率峰值不同，通过微电 脑处理，求出抗原含量。
人民卫生出版社
(一) 透射比浊法 1. 原理 抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复合物粒 子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，免疫复合 物量越多，透射光越少，即光线吸收越多，可用吸光 度表示。吸光度和复合物的量成正比，当抗体量固定 时，与待检抗原量成正比。用抗原标准品建立标准曲 线，可测出待检抗原含量。
人民卫生出版社
(二) 操作步骤 1. 用毛细滴管吸取抗血清加于沉淀管(内径 约1.5~2mm)底部，避免产生气泡。 2. 将抗原溶液沿管壁缓缓叠加于抗血清液面 上，形成清晰的交界面。 3. 置沉淀管于室温下使其反应，1~5min内 在两界面间呈现乳白色沉淀环为阳性。 30min仍无沉淀环出现则为阴性。
人民卫生出版社
(三) 方法评价 该试验是经典的血清学反应之一，简便、 快速、实用。故用于鉴定血迹和诊断炭疽 (Ascoli试验)。只能定性，不能定量、敏感 性较低(3~20mg/L)，对含有多个抗原抗体对 的反应系统缺乏分辨力。方法难以推广。
人民卫生出版社
三、免疫浊度试验 经典的免疫沉淀试验是抗原和相应抗体在反应 终点时判定结果，方法存在耗时、敏感度低 (10~100mg/L) 和不能自动化等缺点。 70 年代以来， 根据抗原和抗体所在液相内快速结合并产生浊度 的原理，建立了免疫比浊法。临床常用3种微量免 疫技术，即透射比浊法、散射比浊法和免疫胶乳 比浊法，借助多种自动化分析仪器来完成。
3. 方法评价
敏感度高于单相琼脂扩散试验5~10倍， 批内、批间重复性较好，变异系数<10%， 操作简便快速，1h可报告结果。
人民卫生出版社
(二) 散射比浊法 散射光系指一定波长的光沿水平轴照射，碰到小 颗粒的免疫复合物，光线被折射，发生偏转，这 种偏转的角度可因光线波长和颗粒大小不同而有 所区别。散射浊度法是在入射光的一定角度检测 粒子发出的散射光，散射光的强度与复合物的含 量呈正比，即待测抗原越多，形成复合物越多， 散射光强度越强。又可分为速率散射比浊法和终 点散射比浊法。
返回总目录
人民卫生出版社
根据沉淀反应的介质和检测方法的不同, 沉淀反应可分为: 液相内的沉淀反应
凝胶内的沉淀反应
人民卫生出版社
第一节 液体内沉淀试验 根据沉淀现象的不同，液体内沉淀又可分为三类 ： 絮状沉淀 环状沉淀 免疫浊度沉淀
人民卫生出版社
一、絮状沉淀试验 絮状沉淀试验是一项经典实验技术。曾用 于测定梅毒抗体的Kahn试验是絮状沉淀的代 表试 验 ，现 今 已被 更 简便 而 敏感 的 USR 或 RPR方法替代。