微生物实验室规范指导原则48页PPT
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微生物实验室ppt课件
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微生物实验室的分区
一般分为下列区域: 接样室、样品保存室、培养基配制室、洁净室、生化室 、培养室、仪器室和洗刷消毒室，此外还有办公室。
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实验室核心工作间的照度不低于350 lx,其他区域照度不低于 200 lx，宜采取吸顶式防水洁净照明灯。
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天平
最大量程：100g、120g等 可读性精度：0.1mg
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精密电子稀释仪
样品量：0.5-1000g（依靠系数调整） 稀释系数：2-1000 液流速度：950ml/min 重量误差精度：<1%
能够准确释放稀释液的重量。
借助经过消毒的均质袋，可对样本进行 准确的稀释，最大程度地减少手工接触 操作，避免样品污染。
实验室的温度宜控制18℃~26℃范围内。
实验室的相对湿度宜控制30%~70%范围内。
在安全柜开启情况下，核心工作间的噪声应不大于68 dB(A)。
------GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求
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病原微生物分类
国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度， 将病原微生物分为四类： 第一类 指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我 国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。（天花病毒）
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洁净室分级
洁净度级别 100级
尘粒最大允
≥0.5μm尘粒数
浮游菌/立方米
3,500
微生物检验实验室规范指导原则24页PPT
微生物检验实验室规பைடு நூலகம்指导 原则
26、机遇对于有准备的头脑有特别的 亲和力 。 27、自信是人格的核心。
28、目标的坚定是性格中最必要的力 量泉源 之一， 也是成 功的利 器之一 。没有 它，天 才也会 在矛盾 无定的 迷径中 ，徒劳 无功。- -查士 德斐尔 爵士。 29、困难就是机遇。--温斯顿．丘吉 尔。 30、我奋斗，所以我快乐。--格林斯 潘。
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
实验室生物安全—生物安全实验室操作规范(微生物检验课件)
（二）暴露的处理
5．离心管破碎：
如果正在运行时非封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离心管发生破 裂，应关闭机器电源，停止后密闭离心桶约30分钟，待气溶胶沉降后开盖。
若离心机停止时发现离心管破碎，应立即盖上离心机，密闭30分钟。随后操作 都应戴结实手套。
玻璃碎片用镊子等工具清除，所有破碎的离心管、玻璃碎片、离心桶、十字轴 和转子都应放在无腐蚀性、已知对相关微生物具有杀灭活性的消毒剂内，消毒30 分钟。
未破损的带盖离心管应放在另一装有消毒剂的容器内，然后回收。离心机内腔应 用适当浓度的同种消毒剂反复擦拭，然后用水冲洗并干燥。
（三）感染性物质的运输
感染性物质运输要求 按内层、中层、外层 三层进行包装。
（四）感染性废弃物的处理
感染性废弃物处理的首要原则是必须在实验室内清除污染后 丢弃。高压蒸汽灭菌是清除污染时首选的方法。所有感染性废 弃物都应装入可高压灭菌的黄色塑料袋，并置于防渗漏的容器 内进行高压灭菌后，放到运输容器内运输至焚烧炉。
生物安全实验室操作技术规范
一、实验室准入要求
1.禁止非工作人员进入实验室。参观实验室等特殊情况须经实 验室负责人批准后方可进入。
2.实验室的门应保持关闭。 3.BSL-2实验室入口处应贴有国际通用的生物危害警告标志， 其下部应注明实验室的生物安全等级、实验室名称、负责人姓名和 联系电话等有关信息 4.进入动物房应当经过特殊批准，禁止将无关动物带入实验室 。
三、感染性物质的操作与处理
（一）感染性物质的操作
1.标本采集：必须有掌握相关职业知识和操作技能的工作人员进行采集，并 根据采集的标本中可能含有病原微生物的危害程度而采取相应的个人防护。
2.标本运送：采集的标本应采取防止污染工作人员、患者及环境的方式在医 疗机构内运送。
微生物实验室规范指导原则
谢谢，再见！
试验结果的判断
一、影响试验结果的因素 ⑴活微生物 ⑵受到外界影响因素较
实验结果分析与评价
1、对实验结果进行充分的分析和全面的评 价是十分重要的。
分析内容
⑴实验室环境 ⑵抽样区的防护条件 ⑶样品本身对微生物是否具毒性 ⑷实验操作是否规范
2、如果依据分析调查结果发现，试验
全过程中任何一个环节有错误，可判实 验结果无效，如果需要，重新抽样复试.
重要的仪器设备，应由专人负责，保证
其运行状态正常和受控，同时应有相应 的备用设备以保证试验菌株和微生物培 养的连续性.
3、对于一些容易污染微生物的仪器设 备 、无菌器具应有明确标识及标准的操 作规程。
记录
规范化管理 记录档案将充分证明试验规范化和检验结 果的真实性。包括以下几个方面： 1、试验人员 2、试验设备 3、培养基及稀释液 4 、试验操作程序
无菌室布局
无菌室应远离交通干道、厕所及污染区，应
选上、下水道及其他安装适宜的位置。无菌室的 配套设施包括洗刷、培养基配制、消毒灭菌、灭 菌物品存放和传输、培养间、结果观察、试验菌 实验和办公室等，要集中，减少污染，便于管理 和使用。
微生物实验室的规划
实验室应划分成洁净区、无菌区和培养区 等。
药品微生物检验的实验室应符合《中国药典》无 菌检查、微生物限度检查试验环境的要求
4、培养基的有效期－是指已通过促生长 试验的培养基在整个有效期内均需符合 这些相应的标准。
5、对配制培养基的过程作详细的记录。
常用菌种管理和保存
菌种的保存
微生物实验过程中，实验菌株可能是最 敏感的，因为它们的生物活性和特性依 赖于合适的试验操作和贮藏条件。
菌种的保存和处理
1、实验室菌种的处理和保藏的程序应标 准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性 的改变。
微生物实验室管理 PPT课件
微生物实验室管理（三）
洁净实验室的要求： 室内墙壁光滑，应尽量避免死角，以便于 洗刷消毒。 应保持密闭、防尘、洁净、干燥。进行操 作时尽量避免走动。 室内设备简单，禁止放置杂物。 工作台、地面和墙壁可以用0.1％新洁尔灭 溶液或0.5％ 8微生物限度检验方法（二）
2. 稀释法：取规定量的供试液，加至较大量的 培养基中，使单位体积内的供试品含量减少至不 具抑菌作用。用平板法测定菌数时，1ml供试液 可等量分注多个平血;控制菌检 时，可加大增菌 培养基的用量。
微生物限度检验方法（三）
3.薄膜过滤法 采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于 0.45μm， 直径一般为 50mm， 若采用其它直径的滤膜， 冲洗量应进行相应的调整。滤器及滤膜使用前应 采用适宜的方法灭菌。 使用时， 应保证滤膜在 过滤前后的完整性。
检定菌管理（二）
检定菌的保存、传代： 1 菌种应于2～10℃专用冰箱中贮存，并有 每天的运行记录。 2 每月定期对菌种进行传代，传代时须核 对编号、代数、传代日期、所用培养基， 并记录。 3 控制传代次数。 一般传代次数不得超过5 代。
检定菌管理（三）
检定菌传代编号方法： 1 编号由阳性菌简写字母+代数+支数组成，中间以“—” 连接。 2 阳性菌的简写字母：大肠埃希菌：Y ，黑曲霉：H ，金 黄色葡萄球菌：JY，枯草芽孢杆菌：KY ，白色念珠菌： BY ，沙门菌：SY 3 保存形式： 在阳性菌的简写字母后加以汉子说明。保 存方式有两种，琼脂斜面保存和半固体加封石蜡，斜面保 存不用加以说明，如为半固体在阳性菌的简写字母后加写 “半”字。 4 首次购进的检定菌规定为0代，以购进时编号表示；第 一次传代后变为第一代，代数“1”，第二次传代后变为 第二代，代数“2”，依次类推。
微生物实验室规范操作共48页文档
谢谢！
36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。—拉罗什福科
xiexie! 38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
微生物实验室规范操作
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， 大的可 以破网 而出， 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子
微生物实验室规范管理及质量保证指导原则
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培养基的制备和质量控制
培养基是微生物试验的基础，培养基的质量直接影 响微生物的试验结果，培养基的制备方法、贮藏条 件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。
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1、培养基制备
⑴培养基可按处方制备也可使用按处方生产的符合 规定的商品化成品培养基。
⑵脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明有 效期、贮存条件、适用性试验的质控菌株和用途。
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2、培养基的灭菌 培养基灭菌方法和条件，应按说明书和验证试验 的参数，采用不同的方法进行灭菌。
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脱水培养基在分装和灭菌前应完全溶解于水中。
使用的过滤器应通过验证，滤膜孔径为0.22um材 质依过滤物品的性质而定；不得对过滤成分有吸 附作用，不得有纤维脱落，不得使用石棉过滤器。
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微生物实验室规范包括以下几个方面：人员、培养基、 菌种、实验室的布局和运行、设备、文件、实验记录、 结果的判断等。
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试验人员培训 管理人员培训
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微生物实验室设施规划和运行
微生物实验室的规划和设计应充分考虑到微生物操 作规范和实验室安全操作的要求。 ⑴应具有进行微生物检测所需的适宜环境和设施， 其中最重要的是尽最大可能防止微生物对环境、人 员、样本造成污染和危害。 ⑵合理的规划活动区域的划分将提高微生物实验 室操作的可靠性。
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2、当一批培养基的适用性试验不符合规定，应查找 造成不合格的原因，处理后重新进行促生长实验， 合格后再使用。 3、一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂，它们的 质量控制目的和验证方法相同。在试剂用于鉴定前， 选择正确的标准质控菌，按其用途和使用说明上的要 求进行质控试验。
临床微生物实验室必须规范化ppt课件
7
棉花纤维 + 竹 /木条
抑菌区是因为： 植物分泌出来的： 脂肪酸； 树脂； 福尔马林
氯气 ， 重金属与胶水的影响
美国与欧洲对实验室的新要求
NCCLS M40 标 准 DIN 58942 标 准
10
推荐COPAN Amies运送培养基
多用途运送系统 – 需氧 + 厌氧 低 氧 化 的 环 境 –不会对标本 的微生物造成损害 拭子是深入培养基中来 保护苛养菌与厌氧菌 两面是以塑料密封,不透水和漏 气 – 减少污染和维持缺氧环境
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环甲膜穿刺
6.血液及骨髓标本
1. 采血时间：尽可能在用抗生素前，心内膜 炎例外。
2. 采血量：采一次或采一瓶是错误的，至少 应采一套2瓶，分需氧和厌氧。2瓶血量不少 于16-20ml，先将10ml注入需氧瓶，再将剩 余血采血注入厌氧瓶。
3. 采血方法：不要与血气和血沉标本一起采 血；不推荐血入瓶前换针头；不推荐静脉血 直接入瓶；不宜在静脉导管或静脉留置口采 血。
抽血量 ml 1-2 4 6 20
40-60
套（需氧+厌氧） 1 2 2 2 2-3
二.标本培养前的基本规范
1.痰培养标本 实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色，当在低
倍镜下白细胞小于10个每视野、上皮细胞大于25 个每视野时应作为不宜做培养的标本； 当白细胞小于10个每视野，上皮细胞小于25个每 视野时再参照油镜观察标本中细菌分布作出判断。
5. 儿童：采血量是总血量的1%。 6. 延迟培养瓶处理: 延迟培养瓶不要放冰箱或孵箱，
放常温，尽早送往临床细菌室。 7. 皮肤消毒液推荐：建议先用70-80%异丙醇去
脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。
棉花纤维 + 竹 /木条
抑菌区是因为： 植物分泌出来的： 脂肪酸； 树脂； 福尔马林
氯气 ， 重金属与胶水的影响
美国与欧洲对实验室的新要求
NCCLS M40 标 准 DIN 58942 标 准
10
推荐COPAN Amies运送培养基
多用途运送系统 – 需氧 + 厌氧 低 氧 化 的 环 境 –不会对标本 的微生物造成损害 拭子是深入培养基中来 保护苛养菌与厌氧菌 两面是以塑料密封,不透水和漏 气 – 减少污染和维持缺氧环境
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环甲膜穿刺
6.血液及骨髓标本
1. 采血时间：尽可能在用抗生素前，心内膜 炎例外。
2. 采血量：采一次或采一瓶是错误的，至少 应采一套2瓶，分需氧和厌氧。2瓶血量不少 于16-20ml，先将10ml注入需氧瓶，再将剩 余血采血注入厌氧瓶。
3. 采血方法：不要与血气和血沉标本一起采 血；不推荐血入瓶前换针头；不推荐静脉血 直接入瓶；不宜在静脉导管或静脉留置口采 血。
抽血量 ml 1-2 4 6 20
40-60
套（需氧+厌氧） 1 2 2 2 2-3
二.标本培养前的基本规范
1.痰培养标本 实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色，当在低
倍镜下白细胞小于10个每视野、上皮细胞大于25 个每视野时应作为不宜做培养的标本； 当白细胞小于10个每视野，上皮细胞小于25个每 视野时再参照油镜观察标本中细菌分布作出判断。
5. 儿童：采血量是总血量的1%。 6. 延迟培养瓶处理: 延迟培养瓶不要放冰箱或孵箱，
放常温，尽早送往临床细菌室。 7. 皮肤消毒液推荐：建议先用70-80%异丙醇去
脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。
微生物实验室规范操作ppt课件
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5.质量控制
1．药物敏感试验的质量控制：应包括30天的初始质
量稳定测试；每周一次的常规质量控制；5天的纠控 程序。
2．鉴定试剂质量控制：购入新的试剂；在更换批号； 更换生产厂家；结果发生异常等情况时均应进行质量 控制。
3．染色液质量控制：每天临床标本染色前应包括染 色结果阳性和阴性的对照物及染色液污染的质量检查。
微生物实验室规范操作
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世界卫生组织（WHO）对临床微 生物实验室提出三项指导性方针：
（1）临床微生物实验室尽可能把目标集中在 快速诊断方面；
（2）显微镜检查对建立快速的初步诊断具有 很大价值；
（3）实验室人员必须主动与临床结合，将实 验室数据转化为临床有用的信息。
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2
严峻的感染形势
感染性疾病并没有象人类曾经所预料的那样随着抗 感染化疗时代的到来而逐一销声匿迹。多种原因造 成的易感人群增加;
⑷参与抗菌药物临床合理应用的管理和医院感 染监测、控制和管理。
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5
卫生部 国家中医药管理局 总后 卫生部发布卫医发 2004 285 号文件
关于实施《抗菌药物临床应用指 导原则》的通知
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6
2009-01-9-11卫生部关 于合理应用抗菌药物的
星火计划启动
三年180个省市8个专业组,包括微生 物实验室,药房,呼吸,血液,儿科,ICU, 感染科,30000-45000个医生或实验
室接受培训.
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7
萌芽计划:2009年6月启动
3年培训450名二级甲等医院微生物实验室技术 人员
目的
规范常规微生物检验技术 提高基层医院微生物检验人员的业务水平 更新老的实验诊断理念和方法
-
微生物检验实验室规范指导原则详解演示文稿
• 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次， 以避免因过度受热造成培养基质量下降或 微生物污染。培养基的再融化一般采用的 水浴加热或流通蒸汽。若使用微波炉，应 避免培养基过度受热及和水份的蒸发，更 要注意安全。融化的培养基应置于45～ 50℃的水浴中，不得超过8 小时。倾注培养 基时，应擦干培养基容器外表面的水分， 避免容器外壁的水滴进入培养基中造成污
<五> 设 备
• 实验室应配备与检验能力和工作量 相适应的仪器设备，其类型、测量 范围和准确度等级应满足检验所采 用标准的要求。
• 实验室在仪器设备完成相应的检定、 校准、验证、确认其性能，并形成 相应的操作、维护和保养的标准操 作规程后方可正式使用，使用要有 记录。应定期维护和期间核查，并 保存相关记录。
• 实验室应对进出洁净区域的人和物建 立控制程序和标准操作规程（如更衣 程序等），应按相关国家标准建立洁 净室（区）和隔离系统的验证、使用 和清洁维护标准操作规程，对可能影 响检测结果的工作（如洁净度验证及 监测、消毒、清洁维护等）能够有效 地控制、监测并记录。
• 实验室对所用的消毒剂应定期更换， 使用的消毒剂应无菌。
• 商品化的成品培养基除了应附 有处方和使用说明外，还应注 明有效期、贮存条件、促生长 试验的质控菌和用途。
• 脱水培养基或各配方组分应准确 称量，并要求有一定的精确度。
• 配制培养基所用容器和配套器具 应洁净。对热敏感的培养基如糖 发酵培养基其分装容器一般应预 先进行灭菌，以保证培养基的无 菌性。
<四>实验室的布局和运行
• 实验室的布局与设计应充分考虑到良 好微生物实验室操作规范和实验室安 全的要求。 实验室布局设计的基本原则:是既要最 大可能防止微生物的污染，又要防止 检验过程对环境和人员造成危害。合 的规划及活动区域的合理区分将提高 微生物实验室操作的可靠性。
<五> 设 备
• 实验室应配备与检验能力和工作量 相适应的仪器设备，其类型、测量 范围和准确度等级应满足检验所采 用标准的要求。
• 实验室在仪器设备完成相应的检定、 校准、验证、确认其性能，并形成 相应的操作、维护和保养的标准操 作规程后方可正式使用，使用要有 记录。应定期维护和期间核查，并 保存相关记录。
• 实验室应对进出洁净区域的人和物建 立控制程序和标准操作规程（如更衣 程序等），应按相关国家标准建立洁 净室（区）和隔离系统的验证、使用 和清洁维护标准操作规程，对可能影 响检测结果的工作（如洁净度验证及 监测、消毒、清洁维护等）能够有效 地控制、监测并记录。
• 实验室对所用的消毒剂应定期更换， 使用的消毒剂应无菌。
• 商品化的成品培养基除了应附 有处方和使用说明外，还应注 明有效期、贮存条件、促生长 试验的质控菌和用途。
• 脱水培养基或各配方组分应准确 称量，并要求有一定的精确度。
• 配制培养基所用容器和配套器具 应洁净。对热敏感的培养基如糖 发酵培养基其分装容器一般应预 先进行灭菌，以保证培养基的无 菌性。
<四>实验室的布局和运行
• 实验室的布局与设计应充分考虑到良 好微生物实验室操作规范和实验室安 全的要求。 实验室布局设计的基本原则:是既要最 大可能防止微生物的污染，又要防止 检验过程对环境和人员造成危害。合 的规划及活动区域的合理区分将提高 微生物实验室操作的可靠性。
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❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
33、如果惧怕前面跌宕的山岩，生命 就永远 只能是 死水一 潭。 34、当你眼泪忍不住要流出来的时候 ，睁大 眼睛， 千万别 眨眼!你会看到 世界由 清晰变 模糊的 全过程 ，心会 在你泪 水落下 的那一 刻变得 清澈明 晰。盐 。注定 要融化 的，也 许是用 眼泪的 方式。
35、不要以为自己成功一次就可以了 ，也不 要以为 过去的 光荣可 以被永 远肯定 。
微生物实验室规范指导原则
31、别人笑我太疯癫，我笑他人看不 穿。(名 言网) 32、我不想听失意者的哭泣，抱怨者 的牢骚 ，这是 羊群中 的瘟疫 ，我不 能被它 传染。 我要尽 量避免 绝望， 辛勤耕 耘，忍 受苦楚 。我一 试再试 ，争取 每天的 成功， 避免以 失败收 常在别 人停滞 不前时 ，我继 续拼搏 。