细胞培养的污染及控制

冻存方法 观察细胞，洗涤细胞，计数并调整数 量。 滴加冻存保护剂，慢速。 逐步降温，慢速。
细胞的复苏 快速、无菌。 稀释冻存液，洗涤细胞。 观察细胞，及时换液。
细胞的运输 冷冻储存运输 充液法运输
第九章 培 养 细 胞 的 观 察 与检测方法
常规检查和观察方法
肉眼观察：颜色、透明度。 显微镜观察：细胞形态、折光度、 排列。 细胞生长状态：数量、形态。 无菌状态：培养基清晰度、细胞状 态。
细胞生长状况的检测方法
细胞计数 生长曲线 分裂指数 接种存活率 克隆形成率
细胞生物活性的检测
MTT比色法 考马斯亮蓝法 蛋白质合成的3H亮氨酸掺入试验 DNA合成测定（ 3H-TdR掺入法、流 式细胞仪测定法）
电子显微镜观察法 透射电镜 扫描电镜
活细胞的观察方法
倒置相差显微镜观察 暗视野显微镜观察 缩时显微镜观察 活细胞染色：台盼蓝染色
细胞固定观察法 固定剂：甲醇/醋酸、FAA液、Carnoy 等
常用染色法： H.E(苏木精－伊红）染色法 Giemsa染色法
特殊染色方法 Feulgen染色法：胞核粉红色 免疫荧光染色法：抗原抗体反应，荧光 免疫酶染色法：抗原抗体反应，棕褐色 细胞银染色法：反映增殖，黑色颗粒 考马斯亮蓝（Coomassie，BB)染色 法： 蓝色 微丝
细胞的冻存
概述：超低温保存（-196°C） 低温保存（-80°C或-105°C） 保护剂 慢速
目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，
主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细 胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外 的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。 如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰 晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的 损伤，而致细胞死亡。因此，细胞冷冻技术的关键 是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形 成。采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质 分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下 降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒 性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外， 减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞 的损伤。
污染来源及鉴别 来源：1. 取材不慎或处理不当 2. 空气尘埃 3. 消毒不严 4. 操作不当 5. 试剂尤其是血清污染
鉴别：
1. 细菌、真菌的检测 肉眼观察、镜下观察、接种观察。
2. 支原体检测 培养、电镜、荧光等 。
污染的清除和预防
清除：较困难，抗生素、加温、抗 体等。如传代细胞有留存，或可购 置，或污染细胞价值不大，宜弃之。
预防：最有效，严密消毒、谨慎操 作。
第八章 细胞的冷冻保存复苏技 术
细胞的传代是有限制的，长期连续 传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物Leabharlann Baidu力，而且细胞的生长与形态等会有一定 退变或转化，因而细胞失去原有的遗传 特性，有时还会由于细胞污染而造成传 代中断，种子丢失。因此，在实际工作 中常需冻存一定数量的细胞，以备替换 使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养室的 常规工作和通用技术。
细胞培养的污染及控制
污染是细胞培养的大敌。预防和 避免污染是细胞培养成功的关键之 一。一开始就要十分重视，应积极 采取措施，防止污染，否则会前功 尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人 力、物力，甚至造成无法弥补的损 失。
污染的类型 一、细菌：较常见，G+菌较多，多浑浊。 二、真菌：最常见，霉菌较多，见菌丝。 三、支原体：常见，不易检测。 四、病毒：影响疫苗生产。 五、非同种细胞：细胞系丢失。 六、化学成分：出现毒害或营养不良。