使用说明步骤图解

OLYMPUS IX71倒置相差荧光显微镜

使用说明

一、 明场：

1.1 打开④号设备（汞灯）后面的开关，2S 后按下前面下方右侧按钮“ON/OFF ”，此时中间蓝色指示灯会亮起，此时即为工作状态。然后调节上方光强调节旋钮，调整到合适的光强度。

注意：汞灯光源不要频繁开关，打开后至少使用半小时以上，关闭后至少等待半小时再打开。

1.2 在③号设备上选择合适的物镜（左侧中下方，物镜盘可以转动），然后将“聚光镜调节环”调到BF 位置

指示灯，亮起时为蓝色

“ON/OFF ”按钮

光强调节旋钮

聚光镜调节环

调焦旋钮

物镜

1.3 调节调焦旋钮，获得清楚的明场图像。

1.4 需要拍照时，要将光路切换到目镜和软件里都能看到的位置（中间位置）。

二、相差拍照：

2.1 选择合适的物镜，合适的聚光镜调节环位置，请按下表一一对应：

2.2 20×和40×的物镜上有矫正环，根据不同的培养容器需要调节矫正环，在聚焦到相对最清楚后调节矫正环至图像最清晰

聚光镜调节环

三、 荧光拍照：

3.1 打开④号设备（汞灯），步骤见1.1。

3.2 调节“荧光滤色块转盘”到合适的位置进行荧光观察，各个荧光滤块对应的荧光染料请见下表。观察之前确保荧光滤色块转盘上的光闸“shutter ”处于打开位置（“O ”为打开，反之为关闭）。

光闸“shutter ” 荧光滤色块转盘

人肉眼对光源波长的颜色感觉：

紫色：350~455 nm

蓝靛色：455~492 nm

绿色：492~577 nm

黄色：577~597 nm

橙色：597~622 nm

红色：622~770 nm

理想的荧光染料一般具有几个特点：

1、具有高的光子产量，信号强度高；

2、对激发光有较强的吸收，降低背景信号；

3、激发光谱与发射光谱之间距离较大，减少背景信号的干扰；

4、易与被标记的抗原、抗体或其他生物物质结而不影响被标记物的特异性；

稳定性好，不易受光、温度、PH、标本抗凝剂和固定剂的影响。

荧光染料及其种类：

1、荧光素类染料：异硫氰酸荧光素（FITC）、羟基荧光素（FAM）、四氯荧光素（TET）等及

其类似物。

FITC: 488 nm处由氩离子激光激发，发射525 nm的蓝绿色荧光。其在碱性溶液中稳定。