腾飞基因肿瘤免疫微环境基因表达谱研究方案 20190115

2. 肿瘤微环境 • PD-L1表达 • 肿瘤微环境表达谱 肿瘤的发生发展是肿瘤细胞与其微环境相互影响、共同进化的结果，肿瘤微环境表达谱的分析对 免疫治疗疗效和方案分析有着重要的意义，寻找新的预后指标和治疗新方法，有效解除肿瘤微环 境介导的免疫抑制将极大地促进肿瘤免疫治疗的临床疗效和广泛应用。
肿瘤免疫微环境基因表达谱研究面临的问题
• 人类免疫相关基因数量多 • 实验周期长 • 成本高 • 数据重复性，准确性难于保证
• 包含国际生物制药及临床医学肿瘤免疫研究的91热点基因（panel A）。 • 并在此基础上拓展了74个肿瘤免疫相关基因(panel B)。
微流控高通量集成芯片原理介绍
微流控高通量集成芯片原理介绍 DNA, cDNA, RNA, …
动态芯片/数码芯片技术
技术路线
肿瘤样本（石蜡切片）制备 RNA提取 CDNA制备 CDNA预扩增 转移扩增产物与引物至芯片 使用微流控核酸扩增系统上样 转移至微流控核酸检测系统进行QPCR反应 收集信号结果分析
微流控芯片QPCR、RNA-seq、基因芯片方法进行基因表达分析的比较
微流控芯片QPCR RNA-seq 基因芯片
肿瘤免疫治疗标记物研究思路
肿瘤免疫环境复杂，如何评估/预测免疫治疗疗效？
1. 肿瘤免疫原性 • 微卫星不稳定性 并非所有肿瘤都是微卫星不稳定 • 肿瘤突变负荷 预测筛选肿瘤免疫治疗获益人群的有 益尝试，与传统免疫标志物以及PDL1的检测形成互补
3. 免疫组库 • 免疫淋巴细胞浸润TIL • T细胞组库（TCR测序） 需要高通量测序，筛查
N
Samples
N Reagents
N x N Discrete Reactions 48 x 48 = 2304 96 x 96 = 9216
腾飞基因肿瘤免疫微环境基因表达检测平台
• 低模板量 – 25ng-100ng 的cDNA量最高即可完成96次反应 • 低试剂量– 完成9216反应只需240ul master mix • 高通量– 可同时处理12-96样本，每样本可同时处理12-96反应 ，通量最高可同时处理9216个反应。 • 高准确性– 微流控芯片技术可让96样本与96对引物分别同时反 应，完全避免加样与反应时间差造成的结果误差。 • 灵活性高– 可灵活的定制检测位点 微流控实时荧光信号检测系统 • 操作时间短-普通定量PCR仪完成9216个反应至少需要8天时间 ，微流控基因检测平台约4个小时即可完成
通量
灵敏度百度文库对样本要求 实验操作 实验周期 成本 数据分析 灵活度
高（可达9216反应/芯片） 高
高 低 简便易上手 9216反应可4小时内完成 低 简易直观 灵活度高，可定制基因
低
短和低丰度基因检出率会有所 低 下降
高 繁琐 实验周期长 高 需要结合生信分析 可发现新的转录本，剪接体 高 多位点检测时实验繁琐 多位点检测时周期长 高 简易直观 灵活度低
詹姆斯 · 艾利森（左）、本庶佑（右）
肿瘤治疗进入免疫治疗时代
•治疗性肿瘤疫苗 与免疫检查点单抗 联合用药 •CAR-T疗法与免 疫检查点单抗联合 使用
肿瘤免疫治疗方法一览
CTLA-4和PD-L1/PD-1抑制剂免疫检查点治疗原理
免疫治疗——可应用于不同肿瘤的治疗
肿瘤免疫治疗市场潜力巨大
资料来源：Nature Review Drug Discovery
肿瘤免疫微环境基因表达谱研究方案
--微流控QPCR技术
林程忠 20181211
广东腾飞基因科技有限公司
肿瘤免疫微环境
种子和土壤学说 肿瘤细胞与肿瘤微环境共同进化
肿瘤免疫治疗
肿瘤治疗进入免疫治疗时代 2018年10月公布的诺贝尔生理学或医 学奖授予美国免疫学家艾利森和日本 免疫学家本庶佑，表彰他们 ‘发现负 性免疫调节治疗癌症的疗法’为肿瘤 治疗带来革命性的进步,肿瘤免疫治疗 进入了一个新时代。
客户案例
微流控QPCR平台发表的论文
截止 2016.09 合计1400篇论文
参考文献 Atezolizumab (MPDL3280A)抑制剂免疫疗法相关研究