细胞培养考试题
细胞培养期末考试试题
细胞培养期末考试试题一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞培养中常用的培养基是：A. 蒸馏水B. 营养琼脂C. RPMI 1640D. 细菌培养基2. 细胞培养中，以下哪项不是细胞生长必需的：A. 温度B. 氧气C. 二氧化碳D. 紫外线3. 以下哪种细胞培养技术不涉及细胞的遗传改造：A. 转染B. 转导C. 克隆D. 原代培养4. 细胞培养中，pH值的维持主要依赖于：A. 细胞自身的代谢B. 培养基中的缓冲系统C. 培养箱的温湿度控制D. 定期更换培养基5. 细胞培养中，细胞传代的频率通常取决于：A. 细胞的密度B. 细胞的类型C. 培养基的成分D. 培养箱的CO2浓度二、填空题（每空2分，共20分）6. 细胞培养中，细胞的贴壁依赖于细胞表面的_________与培养基表面的_________。
7. 细胞培养过程中，细胞的增殖速率通常用_________来表示。
8. 细胞培养中，常用的细胞计数方法包括_________和_________。
9. 细胞培养时，细胞的形态变化可能预示着_________。
10. 细胞培养中，细胞的冻存通常使用含有_________的冷冻保护剂。
三、简答题（每题10分，共30分）11. 简述细胞培养中常用的传代方法及其优缺点。
12. 描述细胞培养过程中可能出现的污染类型及其预防措施。
13. 解释细胞培养中为什么要维持适宜的pH值，并说明如何调节。
四、论述题（每题15分，共30分）14. 论述原代细胞培养与次代细胞培养的区别及其在生物医学研究中的应用。
15. 讨论细胞培养技术在药物筛选和毒性测试中的应用及其重要性。
五、实验设计题（共30分）16. 设计一个实验方案，以评估不同培养条件对特定细胞株生长的影响。
请包括实验目的、原理、材料与方法、预期结果和可能的实验变量。
高考生物高频考点71 动物细胞培养的过程
高考生物高频考点71动物细胞培养的过程一、选择题1．下列有关动物细胞培养的表述，正确的是()A．培养环境中需要氧气，不需要二氧化碳B．培养的细胞有两类：悬浮生长和贴壁生长，都需定期用胰蛋白酶处理，分瓶后才能继续增殖C．干细胞是从胚胎中分离提取的细胞D．幼龄动物细胞比老龄动物细胞更易于培养答案 D2．(2022·辽宁海城高三开学考试)某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行细胞培养。
下列说法正确的是()A．在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理B．细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸C．甲、乙细胞在持续的培养过程中，乙会出现停止增殖的现象D．仅用培养肝细胞的培养液也能用来培养乙肝病毒答案 C3．(2022·北京西城区高三月考)微载体动物细胞培养是以悬浮在培养液中的微珠作为细胞贴附的载体，在轻度搅拌下进行动物细胞培养。
下列相关叙述错误的是()A．轻度搅拌有利于细胞的氧气供应B．培养液中需添加糖、氨基酸等营养物质C．该技术能提高单位体积培养液的细胞产率D．该技术不能应用于病毒疫苗的生产过程答案 D解析该技术培养的动物细胞可作为病毒的宿主细胞，可应用于病毒疫苗的生产过程，D错误。
4．为了初步检测药物X和Y的抗癌活性，在细胞培养板的每个孔中加入相同数量的肝癌细胞，使其贴壁生长，实验组加入等体积相同浓度的溶于二甲基亚矾(溶剂)的药物X或Y，培养过程及结果如图所示。
下列有关叙述错误的是()A.对照组中应加入与实验组等体积的无菌蒸馏水B．细胞培养液中通常需要加入血清、血浆等天然成分C．可用胰蛋白酶处理使肝癌细胞脱落下来并进行计数D．根据实验结果，可以初步判断药物X的抗癌效果较好答案 A解析此题是动物细胞培养，对照组中不能加入与实验组等体积的无菌蒸馏水，应加入等体积的二甲基亚矾(溶剂)，A错误。
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细胞培养技术练习题选择题 1.接种工具灭菌常采用（A） A. 灼烧 B. 高压 C.过滤 D.熏蒸2.具有促进愈伤组织生产的物质是（ B ） A. 维生素 PP B. 维生素 B1 C.维生素 B6 D. 甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10 倍 B.100 倍 C.1mg/ml D.10mg/ml4.配制 10 倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ） mg A.9000 B.3700 C.16500 D.44005.配制 100 倍有机物母液时，所需维生素B1 ( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.16.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A. 维生素 B 2 B. 维生素 B 1 C.维生素 B6 D.维生素 C7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA8.下面哪种是MS 培养基大量元素所用药剂（A） A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C. 硫酸锌 D.硫酸铜填空： 1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。
2、目前，较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA 消化液。
3、接种培养瓶的细胞数量一般为5× 105-1× 106/ml。
4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。
5、细胞冻存时DMSO 常用的浓度为10%的浓度。
1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。
体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。
2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。
3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。
4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。
名词解释1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。
细胞培养技术考试试题
细胞培养技术考试试题一、选择题1. 细胞培养的基本步骤是：A. 细胞获取和处理；B. 细胞传代；C. 培养基配置；D. 细胞实验操作答案：ABCD2. 细胞培养的最佳温度范围是：A. 4-10°C；B. 15-25°C；C. 28-37°C；D. 40-50°C答案：C3. 常用的细胞培养基包括：A. DMEM；B. RPMI 1640；C. MEM；D. FBS答案：ABCD4. 细胞分离的方法有：A. 酶消化；B. 机械分离；C. 磁珠分离；D. 筛选分离答案：ABCD5. 细胞培养器具清洗消毒的方法包括：A. 高温蒸汽消毒；B. 紫外线照射消毒；C. 化学消毒；D. 过滤器过滤消毒答案：ABCD二、简答题1. 请简述细胞培养的原理及意义。
细胞培养是将细胞从生物体中分离出来，在无菌条件下通过培养基提供养分和适宜环境，使细胞在体外持续增殖和生长的过程。
细胞培养技术的意义在于：①探究细胞的生理生化特性和功能；②研究生物发育和分化机制；③药物筛选；④生物工程和生物制造的基础；⑤治疗和诊断疾病。
2. 请简述细胞培养的几种常用技术方法。
（1）传代：将细胞从一代细胞培养物中分离出来，移植到新的培养基中，继续培养和传代。
传代通常采用酶消化和机械分离的方法进行。
（2）冻存：将细胞冻存保存，以备后续使用。
常用的冻存方法是将细胞与冻存液混合，缓慢冷却至低温下保存。
（3）细胞分化：通过调控培养条件，使细胞表现出特定的细胞型态和功能。
（4）细胞感染：将病毒或质粒导入细胞，使细胞表达外源蛋白或产生特定生理反应。
3. 请简述细胞培养中常见的细胞污染及预防方法。
常见的细胞污染包括细菌污染、真菌污染和其他细胞污染。
预防细胞污染的方法有：①无菌操作，使用无菌工具和无菌培养基；②定期检测细胞污染，如细菌和真菌检测；③定期更换培养器具和培养基；④定期消毒培养环境。
三、论述题细胞培养在生物科技领域的应用细胞培养技术在生物科技领域起着重要的作用。
细胞培养技术题库
细胞培养技术题库细胞培养技术准备⼯作常⽤设备准备室的设备：单蒸馏⽔蒸馏器、双蒸馏⽔蒸馏器、酸缸、烤箱、⾼压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭⼒天平和电⼦天平（称量药品）、PH计（测量培养⽤液PH值）、磁⼒搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、⽇光灯和紫外灯、空⽓净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、⼆氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在⽆菌间的设备：离⼼机（收集细胞）、超净⼯作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、⽔浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养⽤液）。
⽆菌操作⽆菌室的灭菌：1.定期打扫⽆菌室：每周打扫⼀次，先⽤⾃来⽔拖地、擦桌⼦、超净⼯作台等，然后⽤3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧⼄酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先⽤3‰新洁尔灭擦拭，然后⽤75％酒精擦拭或者0.5％过氧⼄酸，再⽤紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空⽓净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：⽤75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验⼈员的⽆菌准备：1.肥皂洗⼿。
2.穿好隔离⾐、带好隔离帽、⼝罩、放好拖鞋3.⽤75％酒精棉球擦净双⼿。
⽆菌操作的演⽰：1.凡是带⼊超净⼯作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋⽩酶的瓶⼦均要⽤75％酒精擦拭瓶⼦的外表⾯2.靠近酒精灯⽕焰操作。
3.器⽫使⽤前必须过⽕灭菌4.继续使⽤的器⽫（如瓶盖、滴管）要放在⾼处，使⽤时仍要过⽕。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使⽤液时要注意更换吸管，防⽌交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：⼀、新的玻璃器⽫的洗消：1.⾃来⽔刷洗，除去灰尘。
2.烘⼲、泡盐酸：烤箱中烘⼲，然后再浸⼊5％稀盐酸中12⼩时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘⼲：12⼩时后⽴即⽤⾃来⽔冲洗，再⽤洗涤剂刷洗，⾃来⽔冲⼲净后⽤烤箱烘⼲。
细胞培养复习题
名称解释细胞培养动物细胞培养：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液,然后放在类似于体内生存环境的体外环境中,进行孵育培养,使其生存、生长并维持其结构与功能的方法;组织培养：从生物体内取出活的组织多只组织块在体外进行培养的方法;有时泛指所有的体外培养;器官培养：是将活体内的器官一般是胚胎器官、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法;合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基;无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子生长因子和激素、结合蛋白等组成;完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基;接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象;无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系;去分化脱分化：细胞在体外不可逆地失去原有特性;注意：去分化不意味分化能力完全丧失在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性;但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失;不适应：各种分化细胞,在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征,表现出某种趋同性;原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数MI：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间;原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞;培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养; 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养;1体外培养细胞,其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种,分别称为贴壁细胞和悬浮细胞;2一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型,最常见的为前两种;3体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化脱分化②不适应1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法要求：1培养前准备2操作间消毒3洗手和着装4火焰消毒培养前的准备的基本要求：培养基的选择和无菌配制动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理方法：1操作程序规范2试剂设备专人负责3培养用品定点存放2、平衡盐溶液BBS：1成分：无机盐和葡萄糖,少量酚红;2作用：维持渗透压、缓冲和调节酸碱度3常用：Hanks液、PBS等消化液1作用：分散组织或细胞团;2常用：胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液、蜗牛酶等2、消化液中的胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液作用的原理是什么胰蛋白酶消化液主要作用是水解细胞之间的蛋白质,使细胞相互分离;EDTA-2Na液：是一种化学螯合剂,其溶液又称Versen液,对细胞有一定的离解的作用;EDTA-2Na液的主要作用是通过结合螯合细胞间质中的二价阳离子从而破坏细胞之间的细胞连接;达到分散细胞的目的;胶原酶溶液：胶原酶是从细胞中提取的一种酶,对胶原组织和细胞间质有较强的消化作用,而对培养细胞一般不产生损伤,常在上皮类细胞原代培养时用来离散细胞与胶原组织;3、1天然培养基：定义:主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等;优点：含有丰富的营养物质,渗透压、pH等也与体内环境相似,培养效果好;缺点：成分复杂,批间差异大,易被支原体污染;2合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的,配方恒定的培养基;成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质;优点：标准化生产,组分和含量固定;成本低;缺点：缺少某些成分,不能促进细胞增殖生长;3完全培养基;定义：在合成培养基里添加血清后的培养基;细胞生长培养基:常用培养基,血清含量高, 10-20%;维持培养基:维持细胞不死或缓慢生长,血清含量低, 2-5%;4无血清培养基：定义：由基础培养基和替代血清的补充因子生长因子和激素、结合蛋白等组成;用途：用于研究细胞生长因子、单克隆抗体制备、细胞分泌产物研究等;优点：保证实验结果的准确性、可重复性和稳定性,减少细胞污染,简化提纯和鉴定等程序;3、完全培养基中各成分的作用是什么合成培养基基础培养基的成分只能维持细胞生存血清：常用牛血清,含有促进细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质;一定量的抗生素：防止污染4、体外培养细胞与体内培养细胞的差异都有哪些5、论述培养细胞的一代生存期可分为几个阶段及其特点培养细胞的“一代生存期”,是指从细胞接种后到再次传代培养之前的这一段时间,它与细胞世代或倍增时间不同;可分为潜伏期、指数生长期、停滞期平顶期1.潜伏期特点：1细胞适应新环境的恢复期包括悬浮期、贴壁期、潜伏期三个时期2可有运动活动,基本无增殖,少见分裂相;2.指数生长期特点：1细胞增殖最旺盛的时期,细胞数量呈指数生长,是实验研究和生产的主要阶段;2用细胞分裂指数和细胞群体倍增时间表示;3.停滞期特点：特点：细胞数量不再增加,仍有代谢活动6、动物细胞培养具有一系列优点：①可简化细胞的生长环境;在细胞存活的基础上独立研究细胞生命活动、逐项研究细胞生存条件和细胞功能;②能够方便地控制实验因素; 研究某种实验因素对细胞的生物学作用,只需在培养液中有针对性地加入或者删除这种成分;③易于观测实验结果;利用细胞培养技术研究细胞的生命活动规律,可以很方便地采用各种实验技术和方法来观察、检测和记录;④可供研究的细胞种类极其广泛;⑤可同时提供大量均一性较好的细胞群,降低实验成本;⑥能够进行大规模生物制品的生产;包括酶、单克隆抗体以及多种疫苗等生物制品或者基因工程产品;2、动物细胞培养的缺点：①体外培养的动物细胞对营养的要求较高;②动物细胞生长缓慢,对环境条件要求严格;③体外培养的细胞与体内生长的细胞存在或多或少的差异;形态和功能的差异7.动物细胞培养实验室有哪几个部分组成理想的培养实验室可分为：准备室、缓冲室与培养室相连的消毒房间,作为隔离培养室与外面非消毒房间的缓冲地带、培养室一间或几间,普通实验室、办公室;8.论述细胞培养的生长特点;培养细胞生命期：指细胞在培养中持续增殖和生长的时间;包括三个阶段：原代培养期、传代培养期、衰退期; 1.原代培养期也称初代培养,即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段,一般持续1一4周特点：二倍体,细胞分裂次数少,异质性,独立生存性差; 用途：药物测试,疫苗制备等;2.传代培养期定义：原代细胞接种到两个或以上的器皿继续进行培养标志进入传代培养期特点：细胞分裂增殖旺盛,去分化,在全生命期中此期的持续时间最长,传代10-50次;3.衰退期定义：传代培养一定代数后,细胞生命活动明显减弱,增殖很慢或不增殖,直至衰退死亡的时期;细胞特点：细胞形态轮廓增强,色泽变暗,细胞质内出现暗的颗粒样结构及空泡状结构,胞质突起回缩,最后衰退凋亡;9.论述玻璃制品清洗步骤10、论述动物细胞培养技术的应用1.在生物学领域基础研究中的应用1在细胞生物学上的应用研究细胞的形态、结构、生长发育、细胞营养、代谢以及病变等微观过程;2在遗传学上的应用染色体分析,杂交育种;3在胚胎学上的应用通过体外培养卵母细胞,进行体外受精、胚胎分割和移植;4在病毒学上的应用培养细胞为病毒的增殖提供场所;5在药理学领域的应用药品、食品添加剂等对机体的毒性及其产生不良影响的安全性调查;许多致畸、致癌物质加入动物细胞培养液后,培养细胞会发生染色体结构和数目的变异;2.在临床医学上的应用1用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断用羊膜穿刺技术获得胎儿细胞,培养后进行染色体分析,诊断胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型;2用于癌症的早期诊断和预防通过培养淋巴细胞,对其染色体进行对比分析检测出易患癌症的病人,进行及早的预防和治疗;3用于临床治疗目前已有将正常骨髓细胞经大量培养后植入患造血障碍症患者体内进行治疗的报道;4用于药物效应的检测检测的药物具有组织特异性时,可选用相应的细胞,如检测治疗肝病的药物可选用肝细胞、检测抗癌药物可选用癌细胞;3.在动物育种上的应用新品种的培育可大大缩短育种进程,且更加经济有效;胚胎干细胞的研究成果和克隆羊多莉的问世为动物遗传育种开辟了一条新途径;4.在生物制品生产上的应用用动物细胞可生产的生物制品有各类疫苗、干扰素、激素、酶、生长因子、病毒杀虫剂、单克隆抗体等; 11、血清种类：人血清、牛血清、马血清等;成分：基本营养物、激素、生长因子、结合蛋白、贴壁和扩展因子等;标准: 透明,淡黄色,无沉淀物,无细菌、支原体、病毒污染;使用：逐步解冻,热灭活, 10%浓度,超低温保存;牛血清又分胎牛血清和小牛血清,它们的区别胎牛血清是从母牛剖腹取出的胎牛中分离出来的血清,对许多细胞系均有促进生长作用,主要用于细胞株的保藏及特殊娇贵细胞株的体外培养,但价格昂贵;小牛血清是从刚出生但尚未哺乳的小牛分离出来的血清;12、细胞传代方法贴壁细胞的消化法传代步骤1吸出或倒掉瓶内的旧培养液;2加入适量的消化液消化;3镜检,发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,应立即终止消化;4吹打瓶壁细胞,制成细胞悬液;5计数,接种到新的培养瓶;悬浮细胞多采用离心法传代将细胞连同培养液一并转移到离心管内,800-1000rpm离心5min,然后取出上清,加入新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液,然后传代接种;13、培养细胞的观察和检测技术1培养液观察培养液的颜色和透明度的变化;正常培养液pH介于7.2～7.4之间,呈桃红色、清亮透明;培养中细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降,引起颜色变浅变黄;2～3天或3～4天换液一次;2细胞生长状况倒置显微镜观察;原代细胞培养中最先可见从组织块中边缘“长出”细胞;成纤维细胞是最易生长的细胞;细胞长满瓶底80%应及时传代;3、细胞形状变化生长良好的细胞：透明度大,折光性强,轮廓不清;细胞生长状态不良的细胞：轮廓增强,细胞折光性变弱,边缘不齐,胞质中出现空泡、脂滴、颗粒状物质,细胞之间空隙增大,细胞表面及周围出现丝絮状物;采取措施：换液、排污、废弃;4、微生物污染细菌污染：培养液浑浊、漂浮菌丝;支原体污染：生长减缓、胞质颗粒增多、培养液不变混;细胞交叉污染;化学物质污染;14、去分化和不适应的区别“去分化”不可逆染色体变化;“不适应”可重新诱导培养条件变化关于去分化需要注意：①去分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态;如:高度分化的神经细胞和心肌细胞已经丧失的增生活性不可能恢复,但已经具备的生物电活动特性不会完全失去 ;②可重新表现出分化特点; 如：把表皮细胞放在气液界面上培养,可分化成含大量角蛋白丝的角质细胞、内皮细胞,但,这种能力会随着培养时间延长逐渐丧失;15、谷氨酰胺在培养基中的主要作用配液时应该注意哪些问题作用：在细胞代谢中有重要作用,是细胞合成核酸和蛋白质必需氨基酸,在缺少时,细胞生长不良死亡配液时：由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20度冰箱中保存,在使用前加入培养液内;已含谷氨酰胺的培养液在4度冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来的谷氨酰胺;第二章1、细胞冷冻的原理是什么细胞冻存的原则：慢冻快融 2加冷冻保护剂常用：甘油或二甲基亚砜DMSO主要原因：1冷冻速度过快,细胞内水分结冰形成冰晶,造成细胞膜和细胞器的破坏引起细胞死亡;冷却速度越快,冰晶损伤越大;2细胞悬浮在溶液中,随着温度的下降,细胞外部的水分会先结冰,从而使得未结冰的溶液中电解质的浓度升高;如果将细胞暴露在这样高溶质的溶液中且时间过长,细胞膜上脂质会受到损坏,细胞便发生渗漏;冷冻保护剂作用机理：1冷冻保护剂易同溶液中水分子结合,从而降低冰点,减少冰晶的形成；2通过其摩尔浓度降低未结冰溶液中电解质的浓度,使细胞免受溶质的损伤,细胞得以在超低温条件下保存;2、复苏原理复苏时融解细胞速度要快,使之迅速通过细胞最易受损的-5~0度,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损害,以防止细胞内形成冰晶引起细胞死亡;3、细胞复苏的过程①将恒温水浴箱的温度调至37～40℃;②从液氮中取出冻存小管,立即投入37～40℃温水中快速晃动,直至冻存液完全融解;要在1～2min内完成复温;③将细胞冻存悬液移入离心管,加入约5m1培养液,轻轻吹匀;④将细胞悬液经800～1000 r/min离心5min;弃上清液;⑤给细胞沉淀物加入完全培养液,轻轻吹吸均匀;将细胞悬液移入培养瓶内,加培养液37℃、5%CO2培养;4、细胞活性检查1.染色法：使损伤或死亡细胞着色;结晶紫、台盼蓝、苯胺黑等;2.四唑盐MTT比色法：活细胞可沉淀四唑盐并形成蓝紫色结晶,再用DMSO溶解结晶物,溶液颜色的深浅与所含的甲躜量成正比;用酶标仪在5 7 0nm波长处测定其吸光度OD值,可间接反映活细胞数;第三章1、原代细胞培养常用组织块培养法和消化培养法;2、组织块培养法定义：组织块培养是即将组织剪切成小块后,接种于培养瓶培养的方法;基本方法：将剪成的小组织团块接种于培养瓶或皿中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长;特点：操作简便,组织块易损伤,细胞生长缓慢,适于组织量少的原代培养;基本过程：①取材修剪冲洗；②剪成1mm3左右的小块；③移入培养瓶；④间距5mm分布组织小块；⑤翻转培养瓶37℃静止2-4h；⑥翻正培养瓶培养；⑦原代细胞培养;3、消化培养法定义：利用组织消化分散法将细胞间质物质去除,使细胞分散,形成悬液培养的方法;特点：容易获得大量细胞,生长速度快,适于培养大量组织,但步骤繁琐,易污染,实验费用高;过程：①消化分离法消化细胞、镜检；②发现组织已分散成细胞团或单个细胞,终止消化,筛网过滤,大块继续消化；③过滤的消化液,低速离心,加培养液,细胞计数后,接入培养瓶;4、原代取材的基本要求1无菌取材：严格无菌操作;2取材器械锋利：防止机械损伤;3及时培养：可培养液4℃暂存;4去除无用组织,避免干燥;5营养丰富：添加10%血清;6采用易培养组织：组织类型、分化程度、年龄等;7作好记录：来源等信息及标本要保留;5、组织材料的分离1 细胞悬液的分离方法来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,可采用离心法分离;一般采用5000~1000r/min的低速离心5~10分钟;2组织材料的分离方法可采用机械分散法物理裂解和消化分离法;1.机械分散法方法:注射针芯挤压法; 特点:简便、快速,但对组织机械损伤大,而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织;2.剪切分散法利用剪切法将组织剪切成1平方毫米的小块;3.消化分离法定义：消化法是结合生化和化学手段把已剪切成较小体积的组织进一步分散的方法; 种类：胰蛋白酶法、胶原酶法、EDTA法;6、应用体外培养技术进行中瘤研究具有的优点1,可以免受机体内部因素的影响,从而便于研究理化和生物等因素对肿瘤细胞生命的影响2、便与研究肿瘤细胞的结构和功能3、肿瘤细胞可长期保存以便观察其遗传行为的变化4、可用抗癌药物的快速筛选7、肿瘤细胞培养生物学特性：永生性、侵袭性,不受控增殖性,遗传性质改变,异质性、成瘤性;第四章动物细胞大规模培养技术：指在人工条件下,在细胞生物反应器中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术微载体：微载体指直径在60～250微米,能适用于细胞贴壁培养的微珠,一般由葡聚糖或各种合成聚合物组成;中空纤维培养技术：模拟细胞在体内生长的三维状态,利用中空纤维给培养细胞提供物质代谢条件而建立的一种大规模培养方法微囊化培养是指在无菌条件下将拟培养的细胞、生物活性物质以及生长介质共同包裹在薄的半透膜中形成微囊,再将微囊放入培养系统内进行培养的方法;1、动物细胞大规模培养的方法 1.贴壁培养2.固定化培养3.悬浮培养一贴壁培养定义：指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养方式;优点：适用细胞种类多；容易采用灌流培养；容易更换培养液;缺点：操作比较复杂,需要合适的贴附材料和足够的面积,培养条件不易均一,传质和传氧较差,投资大;培养方式：旋转瓶培养、中空纤维培养、细胞工厂培养、微载体培养;二固定化培养定义：将动物细胞与水不溶性载体结合起来进行培养的方式;优点：既适用于贴壁依赖性细胞,又适用于非贴壁依赖性细胞的包埋培养,细胞密度高,抗剪切力和抗污染力强,易于分离纯化;方法：吸附法、包埋法、微囊法三悬浮培养定义：指细胞在生物反应器中自由悬浮生长的培养方法;优点：操作简单、培养条件均一、传质和传氧比较好,容易扩大培养规模,可借鉴细菌发酵的经验;缺点：体积小,较难采用灌流培养;常用反应器为搅拌式和气升式;2、微载体的选择有何要求①微载体表面性质与细胞有良好的相容性,适用细胞附着、伸展和增殖；②微载体无毒、惰性,不与培养基成分发生化学变化,也不会吸收培养基中的营养成分；③微载体的比重在1.030～1.045g/ml,使载体在低速搅拌下就可悬浮,而在静止时又可很快沉降,便于换液和收获；④粒径在60～250μm溶胀后之间,均一,差异不大于20 μm ;有利于细胞均匀分布在各微载体表面；⑤具有良好的光学透明性,利于观察细胞在载体上的生长情况；⑥可耐120℃高温,便于采用高压蒸汽灭菌；⑦原料充足,价廉,制备简便,经简单的适当处理后,可反复多次地使用;3、微载体培养的操作包括哪些步骤①培养初期阶段；②粘附贴壁阶段；③维持培养阶段；④细胞收获阶段；⑤微载体培养放大阶段4、大规模培养技术的应用5、微囊化培养中微囊的制备应注意哪些问题1温和、快速、不损伤细胞,尽量在液体和生理条件下操作2所用试剂和膜材料对细胞无毒害3膜的孔径可控制,必须使营养物和代谢物自由通过4膜应有足够机械强度抵抗培养中的搅拌;6、理想的动物细胞生物反应器应满足哪些基本要求使比较教材所介绍的几种生物反应器各自优缺点①能提供充足氧气；②良好的传质传热及密闭性能；③制备材料对细胞无毒；④有自动检测调控系统；⑤便于操作维护;1、搅拌式细胞生物反应器优点：避免向培养基直接通气时气泡损伤细胞,没有移动部件,密封好,氧转换率较高,便于放大; 缺点：氧传递系数小,气路系统不能就地灭菌;2、气升式动物细胞培养反应器优点:器内气流温和均匀剪切力小,完全密封,便于无菌操作,氧的转换率高,便于放大生产缺点：1这种生物反应器只能用于需要气体的反应,或者是需要有气体的场合2在培养细胞的过程中会产生大量的气泡,从而会对正在培养的细胞的生长产生影响3这种生物反应器,如果没有其他装置的帮助就只能培养悬浮生长的细胞;3、中空纤维细胞培养反应器优点1培养器体积小,细胞高细胞损害小；2浓缩产品；3易于分离产物,产物纯度高,不易污染；4自动化程度高,细胞生长周期长; 缺点:细胞生长速度慢,代谢物容易堵塞孔径,不易清洗维护,价格高第五章抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构,叫做抗原决定簇;抗体：是指机体受抗原刺激后产生的能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白;单克隆抗体：即单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体;是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合,通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的;多克隆抗体：一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇,进入机体后会刺激好几中B细胞增殖,因而使机体产生几种不同的抗体,成为多克隆抗体基因转染技术：将外源性基因采用化学或物理的方法人工导入细胞的技术;主要用于癌基因研究;1、什么是单克隆抗体其特性和局限性如何与多克隆抗体有何异同单克隆抗体是由一种B细胞克隆所产生的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子;局限性：固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围；反应强度不如多克隆抗体；制备技术复杂,费时费工,价格较高;特性：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强,便于人为处理和质量控制不同：单克隆抗体的特异性强,只针对单一的抗原表位；而多克隆抗体则可以与多个抗原表位结合,当抗原的某个抗原表位改变时,单抗不能发挥其作用2、简述单克隆抗体的制备流程和应用;应用：1用于疾病的诊断和治疗：2作为载体制备导向药物;3、骨髓瘤细胞和脾细胞融合过程中应特别注意的几个问题是什么1细胞比例2反应时间3反应温度4PEG的选择4、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理1要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞,但B淋巴细胞不能在体外生长;2而骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞融合,得到杂种骨髓瘤细胞; 3杂种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性,用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群,可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体;与多抗相比,单抗纯度高,专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应;5、HAT筛选杂交瘤细胞原理细胞融合时加入HATH为次黄嘌呤、A为氨基喋呤、T为胸腺嘧啶选择系统,目的是保证只有杂交瘤细胞的生长;HAT培养基是含有由次黄嘌呤H、氨基喋呤A、胸腺嘧啶T、的一种选择性培养基,这三种成分与细胞DNA合成有关;A可阻断细胞利用正常途径合成DNA,细胞在含有氨基碟呤的培养基中不能通过正常途径合成DNA;这时正常细胞可以通过“补救合成途径”,由胸腺嘧啶激酶HK和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶HGPRT利用T和H合成核酸而繁殖;骨髓瘤细胞都是HGPRT缺乏株,不能利用H和T合成DNA,而B细胞中有这种酶,但在体外培养只存活5·7天,所以只有脾-瘤才能在HAT选择培养基上生长;6、酶联免疫吸附法ELISA原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记;结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性;第六章外植体：用于植物组织细胞培养的器官或组织的切段;愈伤组织：在人工培养基上,由外植体的表面形成的一团不定形的排列疏松的薄壁细胞;细胞全能性：植物的每个细胞都携带一整套遗传信息,具有发育成完整植株的潜力;。
细胞培养复习题(含答案)
1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。
（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。
）⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。
此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。
处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。
细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。
②. 传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。
一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。
③衰退期：处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。
以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。
⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。
此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。
时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上, 游离期结束。
底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6～24小时。
④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。
细胞培养复习题
名称解释细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。
组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。
有时泛指所有的体外培养。
器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。
合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。
无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。
完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。
接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。
无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。
注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。
但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。
不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。
原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。
培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。
3）完全培养基;定义：在合成培养基里添加血清后的培养基。
细胞生长培养基:常用培养基，血清含量高, 10-20%。
维持培养基:维持细胞不死或缓慢生长，血清含量低, 2-5%。
细胞培养技术考题整理
1.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞核血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。
（在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
）2.谷氨酰胺在细胞培养中起什么作用及使用方法？作用：几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
使用方法：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃保存，临用前加入培养液。
配制方法：谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
3.如何用台盼兰计数活细胞？正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
（用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。
轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。
）4.如何消除组织培养的污染？确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。
（一）认真做好外植体的选择和消毒工作，防止外植体带菌。
（二）改善接种室和培养室的环境条件，保证接种与培养环境清洁无菌。
（三）操作人员严格遵守无菌操作规程。
（四）培养基及接种工器具要严格灭菌，确保灭菌质量。
（五）在培养基中加入适量的抗生素。
（六）利用病毒在植株体内分布不均匀的原理，生产脱毒苗。
（七）利用培养基中高盐或高糖的浓度，抑制微生物的生长。
（八）减少培养基中的某些有机成分，可抑制微生物的生长繁殖。
动物细胞工程(动物细胞培养、核移植)练习题
动物细胞工程（动物细胞培养、核移植）练习题1．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( )①无毒的环境②无菌的环境③培养液中需加血清④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能维持培养液的pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥2．下列对动物核移植技术的描述不正确的是( )A．哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植B．体细胞核移植过程中可通过显微操作去除卵母细胞的细胞核C．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是无性繁殖D．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对动物进行了100%的复制4．在动物细胞培养前胰蛋白酶所起的作用是( )A．分解细胞膜易于融合B．分解培养基的蛋白质供给细胞营养C．使组织分散成单个细胞D．用于细胞内物质的分解5．下列动物细胞工程技术利用了细胞膜流动性原理的是( )①动物细胞培养②动物细胞融合③核移植④胚胎移植A．①④B．②③C．①②D．③④10．现将“细胞工程”中动、植物细胞培养技术列表比较如下，你认为哪一项比较有错误( )C．结果D．培养目的6．有关全能性的叙述，不正确的是( )A．克隆羊的诞生证明了已分化动物细胞的细胞核仍具有全能性B．生物体内细胞由于分化，全能性不能表达C．卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性最高D．植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性7．下列属于动物细胞培养与植物组织培养区别的是( )A．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同B．动物细胞培养需在无菌条件下进行，而植物组织培养不需要C．动物细胞培养过程中可发生基因重组，而植物组织培养不能D．动物细胞培养需控制温度，而植物组织培养不需要14．下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是( )A．培养基为液体培养基B．培养结果只能获得大量细胞及生物制品，而不能获得生物体C．需要氧来满足细胞代谢的需要，不需要二氧化碳D．通过细胞培养可以检测有毒物质，判断某物质的毒性8．某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。
动物细胞培养复习题精品.doc
动物细胞培养复习题一、名词解释：1、器官培养c 4-^ *fci*2、In亦圣3、生长液4、维持液5、动物组织培养6、天然培养基7、人工培养基8、胚胎分割9、胚胎干细胞10、核移植技术11、成体干细胞12、传代培养13、原代培养14、胚胎工程15、人工授精16、体外受精二、填空：1、动物细胞贴壁培养时，按照培养细胞的形态不同，主要可分为、、、四类：2、当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器,细胞中可溶性物质浓度升高, 并在细胞内形成。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结品会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。
复苏过程应,目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
3、动物器官培养可分为：、两类；培养原则：① 提供充足的氧气和养料，及时排除。
②抑制细胞从植块向外o4、常用的胚胎培养方法有、、、等5、早期胚胎性别鉴定方法主要有、、等6、人体干细胞从分化功能上可分为三种类型：、、o从来源上可分为两类：、7、干细胞形态特征：, , 具有较强的，因此具有较强增殖能力。
8、近年来已经陆续分离出了、、、等多种成体干细胞，有些成体干细胞已经应用于临床治疗。
9、体外细胞培养一般过程： -一一 f 等10、体外细胞生长过程包括：、、11、________________________________________________________ 动物细胞大规模培养技术是建立在贴壁培养法和________________________________________ 基础上，再融合了固定化细胞、流式细胞术、填充床、生物反应器技术以及等技术而发展起来的。
主要包括悬浮培养、微载体培养、、中空纤维法等。
12、胚胎工程采用的技术主要有:、胚胎移植、胚胎分割与融合、、卵核移植技术、胚胎冷冻保存技术和等。
13、细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了 (一般为预防剂量)，也可能因为而引起污染。
高中生物(新人教版)选择性必修三同步习题：动物细胞培养(同步习题)【含答案及解析】
第2节动物细胞工程第1课时动物细胞培养基础过关练题组一归纳动物细胞培养的条件1.(2020河北沧州一中高二月考)一般来说,动物细胞体外培养需要满足以下哪些条件(易错)①无毒的环境②无菌的环境③合成培养基需加入血清④温度与动物体温相近⑤需要O2,不需要CO2⑥适宜的渗透压A.①②③④⑤⑥B.①②③④C.①③④⑤⑥D.①②③④⑥2.(2020江苏南通高三一模)在进行动物细胞培养时,需要(易错)A.用胃蛋白酶处理以获得细胞悬液B.充入5%CO2以刺激细胞正常呼吸C.加入经高压蒸汽灭菌的血清以提供营养D.定期更换培养液以清除代谢物题组二理解动物细胞培养的过程3.(2020山东章丘四中高三月考)动物细胞培养的顺序是()①原代培养②传代培养③胰蛋白酶处理组织,形成分散的悬浮细胞A.③①②B.①②③C.②①③D.①③②4.下列有关动物细胞培养的叙述,错误的是()A.细胞通常贴壁生长B.细胞进行有丝分裂和减数分裂C.细胞之间有接触抑制现象D.体外培养的动物细胞的分类:一类悬浮在培养液中生长增殖,另一类贴附于某些基质表面生长增殖5.(2020辽宁六校协作体高二期中)下列关于动物细胞培养的叙述,正确的是()A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶瓶壁上可形成多层细胞B.传代培养时,贴壁生长的细胞可直接用离心法收集C.细胞的传代培养次数通常是无限的D.动物细胞培养中定期更换培养液可以清除代谢物6.(2020江苏徐州一中高二开学考试)某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性,准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行细胞培养。
下列说法正确的是(易错)A.在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时,也可用胃蛋白酶处理B.细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行,CO2的作用是刺激细胞呼吸C.甲、乙细胞在持续的培养过程中,乙会出现停止增殖的现象D.仅用培养肝细胞的培养液也能用来培养乙肝病毒7.(2020云南师大附中高三二模)如图为动物细胞培养过程的示意图。
临床医学检验临床免疫：PCR及细胞培养技术考试答案真题
临床医学检验临床免疫：PCR及细胞培养技术考试答案真题1、单选定量PCR扩增仪的关机次序一般为OA.关软件一关PCR仪一关电脑B.关软件一关电脑一关PCR仪C.关PCR仪f关软件f关电脑D.关PCR仪（江南博哥）一关电脑一关软件E.关电脑一关PCR仪一关软件正确答案：A2、单选、体外培养细胞的分类（贴附型或悬浮型）是根据OA.细胞为上皮样或成纤维细胞样B.能否贴附在支持物上生长C.呈密度抑止特性D.肿瘤细胞E.细胞可多次传代正确答案：B3、单选以下哪种物质在PCR反应中不需要OA.TaqDNA聚合酶B.dNTPsC.Mg2+D.RNA酶E.合适PH缓冲液正确答案：D4、单选二氧化碳培养箱结构的核心部分，主要是OA.湿度调节装置B.湿润的含水托盘C.湿度调节器D.C02调节器、温度调节器和湿度调节装置E.气体保护器装置正确答案：D5、多选目前常用的PCR基因扩增仪控温方式有OA.水浴锅控温B.压缩机控温C.半导体控温D.离心式空气控温E.金属控温正确答案：C,D6、单选下述细胞传代的概念中，正确的是OA.当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器的过程B.体内取出细胞接种到培养容器，细胞继续增殖的过程C.养细胞期间更新培养液的过程D.细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器并及时更新培养液使细胞增殖继续的过程E.细胞倍增的过程正确答案：D7、多选电热恒温培养箱适用于OA.普通的细菌培养和封闭式细胞培养B.厌氧细菌培养C.病毒培养D.衣原体培养E.开放式细胞培养正确答案：A,B,C,D8、多选PCR技术每一个循环均包含以下哪些环节OA.酶切B.变性C.退火D.延伸E.连接正确答案：B,C,D9、单选温度均一性较好的PCR仪为OA.水浴锅PCR基因扩增仪和压缩机PCR基因扩增仪B.半导体PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪C.压缩机PCR基因扩增仪和半导体PCR基因扩增仪D.压缩机PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪E.水浴锅PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪正确答案：E10、单选PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，以下哪一项应除外（）A.缩短反应时间B.提高工作效率C.消除位置的边缘效应D.缩短非特异性反应时间E.提高反应特异性正确答案：C11、单选PCR技术的本质是OA.核酸杂交技术B.核酸重组技术C.核酸扩增技术D.核酸变性技术E.核酸连接技术正确答案：C12、多选二氧化碳培养箱已广泛应用于OA.各种组织和细胞的培养、病毒增殖B.细菌培养、遗传工程？C.试管工程和克隆技术D.控制温度的精度E.门加热正确答案：A,B,C13、多选PCR基因扩增仪的温度控制主要是指OA.温度的准确性控制B.温度的均一性控制C.退火温度控制D.升降温速度控制E.延伸温度控制正确答案：A,B,D14、单选以下哪种酶可耐高温（）Λ.TaqDNA聚合酶B.HindIIIC.T4连接酶D.RNA酶E.Klenow片段正确答案：A15、单选PCR反应正确过程应为OA.退火一变性一延伸B.变性退火f延伸C.退火一延伸一变性D.变性一延伸一退火E.延伸一变性一退火正确答案：B16、单选“位置的边缘效应”是指OA.温度的准确性欠佳B.温度的均一性欠佳C.边缘升降温速度快D.边缘升降温速度慢E.梯度模式和标准模式温度不一致正确答案：B17、多选普通PCR基因扩增仪除通常的定性PCR仪外，还包括（）A.水浴式PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.变温金属块式PCR仪E.变温气流式PCR仪正确答案：B,C18、单选厌氧培养箱内厌氧菌最佳的气体生长条件是（）A.80%N2∖5%C02和15%H2B.80%N2∖15%C02和5%H2C.80%N2∖10%C02和10%H2D.85%N2∖5%C02和10%H2E.85%N2∖10%C02和5%H2正确答案：D19、多选以下哪些酶可用于PCR反应（）A.KlenowB.HindIIIC.TaqDNA聚合酶D.RNaseE.DNase正确答案：A,C20、单选以空气为加热介质的PCR仪是OA.金属板式实时定量PCR仪B.96孔板式实时定量PCR仪C.离心式实时定量PCR仪D.各孔独立控温的定量PCR仪E.荧光实时定量PCR仪正确答案：C21、单选PCR基因扩增仪最关键的部分是OA.温度控制系统B.荧光检测系统C.软件系统D.热盖E.样品基座正确答案：A22、多选按变温方式不同，PCR基因扩增仪可分为（）A.水浴式PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.变温金属块式PCR仪E.变温气流式PCR仪正确答案：ADE23、£选后氧器养箱通过自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态，其换气过程是OA.①气体排空一②净化一③气体排空一④N2净化~⑤气压平衡B.①气体排空->②N2净化一③气压平衡C.①N2净化②气体排空f③N2净化一④气压平衡D.①N2净化一②气体排空f③N2净化f④气体排空一⑤气压平衡E.①气体排空一②N2净化一③气体排空一④N2净化一⑤气体排空一⑥气压平衡正确答案：E24、单选二氧化碳培养箱调节C02浓度范围为OA.0%〜20%B.20%〜40%C.10%—20%D.20%〜30%E.30%〜40%正确答案：A25、单选在梯度模式下得出最佳反应条件，并以此条件在标准模式下单独做，但结果却不如人意，最有可能的原因是OA.样品孔温度与设定温度不一致B.样品孔间的温度有差异C.样品孔位置的边缘效应较高D.升降温速度不够快E.不同模式温度特性有差异正确答案：E26、多选荧光定量PCR仪的荧光强度减弱或不稳定，可能的原因有（）A.滤光片发霉B.光源损耗C.半导体模块故障D.荧光染料污染E.光电倍增管灵敏度下降正确答案：A,B,E27、多选确定有无支原体污染可做的检测有OA.相差显微镜检测B.荧光染料染色检测C.用电镜检测D.DNA分子杂交检测或支原体培养E.FITC荧光染料染色，置荧光显微镜下观察亮绿色小点正确答案：A,B,C,D28、多选荧光定量PCR仪的荧光检测系统主要包括（）A.发光二极管B.激发光源C.检测器D.光度计E.光电倍增管正确答案：B,C29、单选SteadySlOPe技术是下列哪一家公司的专利技术（）A.eppendorf公司B.MJ公司C.Cepheid公司D.Roche公司E.ABI公司正确答案：A30、单选TaqDNA聚合酶酶促反应最适温度为（）A.37℃B.50°C~55°CC.70°C~75°CD.80°C~85°CE.94C~95°C正确答案：C。
细胞培养技术习题.docx
常用术语及解释■体外培养(in vitro)：原意为在试管中，现常与组织培养一词通用，译为体外培养。
I组织培养(tissue culture)：维持组织在体外生长，也泛指体外培养。
■器官培养(organ culture)：在体外维持器官、器官的部分或器官的原基生存和生长的方法。
■*细胞培养(cell culture)：即细胞(包括单个细胞)在体外条件下的生长。
在细胞培养中，细胞不再形成组织。
■细胞融合(cell fusion)：两个独立的细胞融合成一个细胞。
可用聚乙二醇(PEG)或仙台病毒诱发。
I *细胞杂交(cell hybridization)：两个或多个不同的细胞融合。
导致一个含核体(aynkaryo)的形成。
I体外培养转化(in vitro transformation)：细胞在体外培养中发生与原细胞遗传性状不同的变化，但不一定具有致癌性。
单倍体(haploid)：正常细胞染色体基本数(每一染色体只有一种)。
■整倍体(euploid)：具有两个以上单倍体数目的细胞■*原代培养(primary culture)：从体内取出细胞或组织的第一次培养。
■*传代(passage)也称再培养无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。
也称再培养。
■单层培养(monolayerculture)：培养细胞在底物上长成单层。
I 悬浮培养(suspension culture)：细胞在培养液中是悬浮状态生长。
■*贴壁依赖性(anchorage-dependent)为细胞需贴附于底物或支持物上才能生长的性质。
I贴壁依赖性细胞(anchorag dependent cell)：由它们繁衍出来的细胞(或培养物)只有贴附于不起化学作用的物体(如玻璃或塑料等无活物体)的表面时，才能生长，生存或维持其功能。
I 无贴壁性(anchorage—independent)：不依赖于贴附底物或支持物上生长的性质。
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细胞培养试题
1、体外培养包括几类？什么是组织培养技术？
体外培养包括组织培养、细胞培养、器官培养三类；组织培养技术是指：从体内取出组织模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。
2、进行细胞培养的基本条件包括哪些？
（1）无污染的环境。
无毒和无菌培养环境是保证培养细胞生存的首要条件。
（2）适宜温度。
人体细胞的适宜温度为36.5℃+0.5℃，偏离时，会影响细胞代谢，甚至死亡。
培养细胞对低温的耐受力比对高温强。
（3）气体和pH值。
开放培养时（碟皿或培养瓶松盖培养），一般置于95%的空气加5%CO2混合气体环境中。
O2参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种所需成分。
多数细胞缺氧不能生存。
CO2既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，作用是维持培养基的pH值，细胞要求7.2-7.4。
（4）营养物质。
包括糖，无机盐，氨基酸，维生素，促细胞生长因子等。
牛血清是提供生长因子和细胞所需物质的来源。
（5）渗透压。
260-320 m Osm/L 培养基
3、原代培养、传代培养、二倍体细胞、克隆细胞株的概念。
原代细胞：直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。
传代细胞：初代培养细胞从第一次传代培养后具有增殖能力的细胞群。
二倍体细胞：细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同的细胞群。
克隆细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单个细胞增殖形成的
细胞群。
4、制备单细胞悬液的方法主要有哪些？
（1）悬浮细胞的分离方法是离心法，最简单方法是采用1000r/min 的低速离心10min。
（2）实体组织材料的分离方法有机械分离法和消化分离法，机械分离法包括切割分离法（组织培养法）和机械挤压分离法；消化分离法包括胰蛋白酶消化法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和胶原酶协同用法、EDTA消化法。
5、简述细胞冻存、复苏和运送的方法。
（1）细胞冻存方法：预先配制冻存液（含20%血清培养基、10%DMSO）；取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入新鲜培养液，低速离心5分钟；弃上清液，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液，分装至冻存管中。
密封后标记冻存细胞名称，日期，细胞状态也可标记，冻存者姓名。
（细胞冻存是慢冻的过程：4℃1小时，-20℃1小时，-80℃过夜，液氮中保存）
（2）细胞复苏方法（快融）：从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～38 ℃水浴中，使其融化（1分钟左右）。
5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。
低速离心10分钟。
去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
（3）细胞运送方法：①冻存运送：液氮中；②充液法：细胞传代后贴壁，瓶内充满培养液，密闭封口，保温携带。
6、细胞培养的基本方法有哪几种？
（1）初代细胞培养：贴壁细胞初代培养、组织块培养法、悬浮细胞的初代培养；
（2）传代细胞培养：悬浮生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代、贴壁生长细胞传代；
（3）球体细胞培养；
（4）悬浮细胞培养：成批培养、连续培养、微载体细胞培养法
7、干细胞有何特性，如何分类
特性：①具有自我更新能力②有无限增殖潜能③可分化成特定组织细分类：
按分化能力，分全能、多能、专能性干细胞。
①全能性干细胞，又称胚胎干细胞，如受精卵。
②多能性干细胞，又称为成体干细胞，如囊胚中的内囊细胞。
③专能干细胞，如造血干细胞
8、简述贴壁细胞传代培养法的过程。
（1）弃去培养瓶中的培养液
（2）加入1-2 ml 0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准）静置2-10 min（显微镜下动态监测）。
（3）吸去胰蛋白酶液，加入培养液。
（4）用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。
（5）吸取1/3—1/4细胞悬液，接种于新的培养瓶内。
（6）加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。
（7）将后者放入培养箱中培养。
9、简答基因转导的目的和用途，并列举细胞内基因转导的常用方法。
将外源性基因(或基因组DNA)导入细胞的技术称为基因转导。
目的：使外源基因能整合入受体细胞基因组中。
用途：研究基因表达、结构和功能。
培养细胞是最适宜的对象。
基因转导，尤其对于检测癌基因，更为常用。
常用方法：染色体转导、细胞融合技术、磷酸钙法、电击法、脂质体法、显微注入法、逆转录病毒介导法、转基因技术（生殖细胞）等（1）染色体转导
①细胞融合技术
②染色体转导
（2）基因转导
①基因转染：磷酸钙法、电击法、脂质体法、显微注入法、逆转
录病毒介导法等
②转基因技术（生殖细胞）
10、常用培养细胞的生物学活性检测方法有哪些？
（1）细胞计数
（2）细胞活性的检查
（3）细胞生长曲线
（4）细胞克隆形成试验
（5）软琼脂集落形成试验
11、常用哪些方法检测培养细胞的核酸及蛋白质？
（1）DNA检测方法：聚合酶链反应（PCR）、Southern Blot、基因长
度多态性（RFLP）检测；
（2）RNA检测方法：RT-PCR、Northern Blot；
（3）蛋白质检测方法：细胞内蛋白质含量的测定、Western Blot、ELISA、荧光抗体法、组化法
12、简述MTT试验原理、试验步骤及应用。
试验原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色甲攒颗粒（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。
再用酶标仪测定OD值
试验步骤：（1）单细胞悬液接种于96孔培养板；103-104细胞/孔，每孔培养基总量200微升（96孔培养板每孔容积370微升），37℃、5％CO2培养箱中培养一段时间
（2）加入2毫克／毫升的MTT液（50微升／孔）；继续培养3小时。
（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（150微升／孔），将培养板置于微孔板振荡器上振荡10分钟，使结晶物溶解。
（4）酶标仪检测各孔OD(570nm），记录结果。
（5）绘制曲线：以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制生长曲线。
应用：MTT法简单快速、准确，广泛应用于新药筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性实验等
13、简述软琼脂法细胞克隆形成实验的步骤及应用。
（1）用蒸馏水分别制备出1.2％和0.7％两个浓度的低溶点琼脂糖，高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。
（2）取对数生长期细胞，0.25％胰酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作做细胞计数，用20％胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。
然后根据实验要求作梯度倍数稀释。
（3）按1：1比例使1.2％的琼脂糖和2×DMEM培养基混合后，取3ml混合液注入直径6cm平皿中（10cm平皿中加7~10ml），冷却凝固，可作底层琼脂，置CO2温箱中备用。
（4）按1：1比例让0.7％的琼脂糖和2×DMEM培养基在无菌试管中相混以后，再向管中加入0.2ml的细胞悬液，充分混匀，注入铺有1.2％的琼脂糖底层平皿中，逐渐形成双琼脂层。
待上层琼脂凝固后，置入37℃、5％CO2温箱中培养10~14天。
（5）把平皿放置在倒置显微镜下，观察细胞克隆数。
计算形成率。
应用：常用于检测肿瘤细胞和转化细胞系。