第九章 第二节 沉淀反应

（三）免疫浊度测定
1. 透射免疫比浊法 通过检测光被吸收、衍射、反射和折射后光线减弱 的变化，来定量抗原抗体复合物。 2. 散射免疫比浊法 通过检测光折射和衍射形成的散射光强度来定量抗 原抗体的复合物。 3. 免疫乳胶比浊法 是以胶乳作为载体对小分子免疫复合物进行微量测 定，进一步提高了免疫浊度测定的灵敏度 。
二 液相内沉淀试验
（一）环状沉淀试验 一、 环状沉淀试验
•指在液体界面上进行的抗原抗体反应，界面形成白 色沉淀环 •应用于C反应蛋白（CRP）检测、血迹鉴定、食品 卫生学上鉴定肉的种类等
（二）絮状沉淀试验
•絮状沉淀试验是将抗原与相应抗体混合，在电解质 存在的条件下，抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状 沉淀物。 •方法受抗原抗体比例的影响非常明显 应用于测定抗原抗体反应的最适比例
（一）对流免疫电泳
原理：双向扩散
+ 电泳 比双向扩散试验灵 敏度提高8∼16倍
技术要点：制备1.2%巴比妥琼
脂凝胶板，在其上成对打孔，孔 径3mm，孔距6 mm，于阴极侧 孔内加待测血清，阳性侧孔加抗 血清，电泳条件34mA/cm 30min～1h。
通电
蛋白质抗原常 带较强的负电 荷，在电场中 向正极移动 抗体球蛋白 带负电荷较少， 籍电渗作用向 负极泳动
技术要点：
1.2%巴比妥琼脂 糖约55℃，加入 适量抗血清，混匀 后制板，打孔，孔 内加待测样品，样 品孔放负极侧， 6h后观察琼脂板 上沉淀峰，绘制标 准曲线，求出待测 样品浓度。
火箭免疫电泳示意图 +
火箭免疫电泳图 ①②③④为标准抗原；⑤⑥为标本
（三）免疫电泳
原理：区带电泳＋双向扩散
1、将蛋白质抗原在凝胶中电 泳分成肉眼不可见的若干区 带 2、沿电泳方向挖一与之平行 的抗体槽，加入相应抗血清 进行双向扩散 。
前倾注成平板，凝固后打孔（直径3～5mm ）孔中 加入抗原溶液和不同浓度的标准品，置湿盒内 37℃,24～48h 观察孔周围是否出现沉淀环，制作 标准曲线。
结果：沉淀环直径与抗原的浓度成正相关
倾注平板
打孔
加样
放置37℃
24～48h观察沉淀环
上排为5个不同浓度的参考品；下排为患者血清
单向扩散试验
应用：最常用于补体单一成分及Ig的定量检查
三 凝胶内沉淀反应
原理：可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成
浓度梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适
当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。
常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶。
（一）单向扩散试验
原理：抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结形
成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。
技术要点：将抗体混入1%琼脂糖内（50℃），未凝固
源自文库
－
＋
结果分析： 无沉淀线出现则表明 无相应的抗原。 沉淀线位于抗原抗体 孔中间，说明两者比 例较适合。 沉淀线偏向抗原孔一 方，表示抗体浓度＞ 抗原，反之，则是抗 体浓度＜抗原浓度。
（二）火箭免疫电泳
原理：单向免疫扩散＋电泳。
定量检测技术电泳时凝胶中抗体 不移动，样品孔中的抗原向正极 泳动，随着抗原量的逐渐减少， 抗原泳动的基底区越来窄，抗原 抗体分子复合物形成的沉淀线逐 渐变窄，形成一个形状如火箭的 不溶性复合物沉淀峰，抗体浓度 固定时，峰的高度与抗原量呈正 相关。
技术要点：制备琼脂板
打孔，加样于孔内，电 泳2～3mA/cm ，0.5～ 1h后，槽内加入相应抗 血清作双向扩散。
影响因素
抗原抗体比例不当,需测抗原抗体最适比
抗血清的的抗体谱 ，混合抗血清的使用 电泳条件直接影响分辨率
应
用
纯化抗原和抗体成分的分析及正常和 异常免疫球蛋白的识别与鉴定
免疫电泳示意图
概念：沉淀反应（precipitation）是指可溶性抗原
与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现的沉 淀现象,其特性与经典的抗原抗体反应相同。
特点：①抗原是分子量较小的可溶性物质；②沉淀
产物主要由抗体组成；③常稀释抗原；④反应结果以
抗原的稀释度判定效价。
类型
一、液相沉淀反应 1、环状沉淀反应 2、絮状沉淀反应 二、凝胶内沉淀反应 1、单向扩散试验 2、双向扩散试验 三、免疫电泳技术 1、火箭免疫电泳 2、对流免疫电泳 四、免疫浊度分析： 1、免疫透射浊度测定法 2、免疫胶乳浊度测定法 3、免疫散射浊度测定法
（二）双向扩散试验
鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一。
原理：将抗原抗体分别加在琼脂糖不同的对应孔中，两者
在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。
技术要点：平板玻璃上倾注一层均匀的琼脂糖薄层，凝固
后打孔，孔径为3mm，孔间距在3～5 mm之间，在相 对的孔中加入抗原或抗体，放置湿盒37℃18～24h 后，观察孔周围是否出现沉淀环。
-
+
小 结
沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发 生特异性结合而出的沉淀现象.根据沉淀反应介质和检 测方法的不同，将其分为液体内沉淀试验、凝胶内沉 淀试验和凝胶免疫电泳试验三大基本类型。 免疫浊法度测定为液体内沉淀试验；单向扩散试验平 板法是一种定量的凝胶内沉淀试验，免疫电泳技术是 电泳分析与沉淀反应的结合产物，常见的有对流免疫 电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、免疫固定电泳等。
第九章
第二节 沉淀反应
广西玉林市卫生学校 许潘健
目录
重点、难点
一 沉淀反应的特点
二 液体内沉淀试验
三 凝胶内沉淀试验
四 免疫电泳技术
小结
重点难点
• 重点学习并掌握沉淀反应的概念及特点，熟 悉沉淀反应的类型及各类沉淀反应的原理
• 难点：双扩试验沉淀线的位置、形状分析
一 概述：沉淀反应概念、特点和类型
双向琼脂扩散沉淀线的意义
1.相应抗原或抗体的存在与否 2.相对浓度的估计
3.抗原或抗体相对分子量的估计
4.抗原性质的分析
5.抗体效价的滴定
6.抗原或抗体纯度的鉴定
四 免疫电泳技术
电泳分析
优点： 1.加快反应的速度。 2.提高了灵敏度。 3.增加了分辨率。
＋
沉淀反应
抗原抗体反应 的高度特异性 电泳技术的高分辨 率、快速、微量