蛋白质含量测定方法汇总
蛋白质含量测定方法汇总
实验七蛋白质含量测定测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。
[目的要求]1．掌握测定蛋白质的含量基本方法。
2．了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。
一、染料法[实验原理]在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。
利用这个原理可以测定蛋白质含量。
该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。
本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。
[器材]吸量管；试管；721型分光光度计[试剂]1.标准牛血清白蛋白溶液：配成0.1mg/ml的溶液。
2.待测蛋白质溶液。
3.染料溶液：称取考马斯亮蓝G-2500.1g溶于95%的酒精50ml，再加入85%的浓磷酸100ml，用水稀释至1000ml,混匀备用。
[操作步骤]按上表分别向各支试管内加入各种试剂，充分混匀，5min后在595nm波长处以0号管调零,测定各管吸光度值（A）。
以吸光度值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。
2．样品测定：取1ml样品溶液（约含25～250微克蛋白质），加入染料溶液5ml混匀，5min后测定其595nm吸光度值，对照标准曲线求得蛋白质浓度。
二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量[实验原理]在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。
凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。
六种方法测定蛋白质含量
常用紫外分光光度法测定蛋白质含量。
以下引用：6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理蛋白质是生物体内一种重要的有机化合物，具有构建细胞结构、调节生理功能等重要作用。
因此，准确测定蛋白质的含量对于生物科学研究和临床诊断具有重要意义。
本文将介绍几种常用的蛋白质含量测定方法及其原理。
一、比色法比色法是一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质与某些特定试剂形成显色物，根据显色物的光吸收特性来测定蛋白质的含量。
1. 低里氏法低里氏法是一种经典的蛋白质含量测定方法，其原理是利用试剂双硫苏三唑酮（DTNB）与蛋白质中的半胱氨酸残基反应产生黄色的二硫苏三唑，然后通过分光光度计测定其在412nm处的吸光度，根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
2. 伯杰法伯杰法是一种基于酪蛋白与浊度试剂金霉素的显色反应来测定蛋白质含量的方法。
酪蛋白与金霉素结合形成沉淀，通过比色法测定沉淀的光吸收度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
3. 白蛋白-酷伊斯基（BCA）法BCA法是一种常用的高灵敏度蛋白质测定方法，其原理是在碱性条件下，蛋白质与BCA试剂中的铜离子络合生成紫色的离子螯合物，通过比色法测定在562nm处的光吸收度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
二、光谱法光谱法是一种基于蛋白质在特定波长下的吸收特性来测定蛋白质含量的方法。
1. 紫外吸收法紫外吸收法根据蛋白质中的芳香族氨基酸（如酪氨酸、酪氨酸和色氨酸）在紫外光区域（200-400nm）的吸收特性来测定蛋白质含量。
通过分光光度计测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
2. 近红外光谱法近红外光谱法是一种无损、非破坏性的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质溶液在近红外光区域（700-2500nm）的吸收特性与其含量之间的关系。
通过近红外光谱仪获取蛋白质溶液的光谱图像，然后利用化学计量学方法建立标准模型，通过光谱图像预测蛋白质的含量。
三、生化分析法生化分析法是一种利用生化技术和仪器设备来测定蛋白质含量的方法。
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理蛋白质是生物体内重要的基础结构和功能分子，其含量的测定对于生物学和医学研究具有重要意义。
目前常用的蛋白质含量测定方法主要包括生物化学法、生物物理法和免疫学法等。
下面将对这几种方法的原理进行详细介绍。
1. 生物化学法：生物化学法通过酶促反应或化学反应，将蛋白质转化成可以测定的可溶物或在一定条件下呈现特定吸光度的产物，从而测定蛋白质的含量。
常用的生物化学法有Lowry法、Bradford法和BCA法。
(1) Lowry法：Lowry法是1969年由Lowry等人开发的一种蛋白质定量方法。
该方法利用蛋白质与Folin-Ciocalteu试剂在碱性条件下发生氧化反应，生成具有最大吸收峰的蓝色产物，通过测定产物的光密度与一系列标准溶液进行比较，来确定蛋白质的含量。
(2) Bradford法：Bradford法是Bradford于1976年提出的一种测定蛋白质含量的方法。
该方法基于蛋白质与染料(Coomassie Brilliant Blue G-250)之间的特异结合，蛋白质和染料形成一个蛋白质-染料复合物，该复合物的吸光度变化与蛋白质的浓度呈正相关。
通过测定复合物的光密度与一系列标准溶液进行比较，来确定蛋白质的含量。
(3) BCA法：BCA法是一种在碱性条件下，将蛋白质还原成具有强吸收的蓝色离子的方法。
BCA试剂(含有琥珀酸铜II配合物和增强剂)能与蛋白质中的酸性氨基酸残基(尤其是含有两个以上连续胺基的肽键)发生氧化还原反应，生成具有强吸收的蓝色离子。
利用光密度测定产生的蓝色离子与一系列标准溶液进行比较，即可确定蛋白质的含量。
2. 生物物理法：生物物理法是通过光学原理，利用蛋白质溶液对光的吸收、散射或旋光等性质进行测定，来间接推算蛋白质的含量。
常用的生物物理法有紫外吸收光谱法、比色法和荧光法等。
(1) 紫外吸收光谱法：紫外吸收光谱法是通过蛋白质在紫外光区域的吸收特性来测定蛋白质的含量。
测蛋白质含量方法
测蛋白质含量方法测定蛋白质含量是生物化学和生物技术研究中常用的实验手段之一。
蛋白质是生物体内重要的组成部分，其含量的准确测定对于研究细胞功能、药物筛选和疾病诊断具有重要意义。
本文将介绍几种常用的测定蛋白质含量的方法。
一、比色法比色法是一种常用的测定蛋白质含量的方法。
其基本原理是利用蛋白质与染色剂之间的化学反应，通过比色计测量吸光度来确定蛋白质的含量。
常用的染色剂有布拉德福试剂、伯胺蓝试剂和康氏试剂等。
比色法测定蛋白质含量的优点是操作简单、结果准确，但对于一些特定蛋白质可能存在一定的误差。
二、生物素标记法生物素标记法是一种利用生物素与蛋白质之间的亲和性进行测定的方法。
生物素通过共价结合到蛋白质上，形成生物素标记的蛋白质。
然后利用生物素与亲和素结合的特异性，使用亲和素结合物进行测定。
这种方法的优点是具有高灵敏度和高特异性，可以测定低浓度的蛋白质。
三、Western blottingWestern blotting是一种常用的蛋白质检测方法。
它通过将蛋白质样品进行电泳分离，然后转移到膜上，并使用特异性抗体与目标蛋白质结合，最后利用染色剂可视化目标蛋白质。
这种方法可以检测特定蛋白质的存在和相对含量，并且可以检测蛋白质的修饰状态，如磷酸化、乙酰化等。
四、质谱法质谱法是一种高灵敏度的蛋白质检测方法。
它通过将蛋白质进行消化，得到肽段，然后利用质谱仪进行分析。
质谱法可以用于鉴定未知蛋白质的结构和确定蛋白质的修饰位点，同时也可以测定蛋白质的相对含量。
测定蛋白质含量的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在选择方法时，需要根据实验目的、样品的性质和实验条件等因素进行综合考虑。
此外，根据实验的要求和需求，也可以结合多种方法进行蛋白质含量的测定，以提高结果的准确性和可靠性。
三种常见蛋白质含量测定方法
三种常见蛋白质含量测定方法
蛋白质含量是决定植物质量的重要因素，在植物栽培及种子货架上，精确掌握植物蛋白质含量，进而为植物中品质和效用性提供重要的评价依据。
目前，研究常用的植物蛋白质含量测定方法有Kjeldahl法，Bradford法和Lowry法等三种。
Kjeldahl法是一种多功能性的蛋白质定量方法，它可以测定含氮量甚至微量有机氮，此法在测定蛋白质含量方面易于操作，测试效率高， get精度也较高。
该法简单地以氨作为氮源，以硫酸释放氨，用硫酸钠将氨碱中的氨携带，然后进行缓冲及蒸发水解，最后通过酚酞形成深蓝色络合物对氮进行定量，从而间接的得到蛋白质的含量。
Bradford法同样是一种多用途的法子，它能够直接测定蛋白质中的色氨酸及胆羧酸含量，该方法的操作简便，使用成本低，测试效率高，可在一个小时内达到较高精度的测定结果。
Bradford法原理是将蛋白质及它的沉淀由蛋白质合酶结合至二价铬J络合物，从而形成一种光电的特异性比色反应。
Lowry法也是一种多功能性的定量方法，该方法能测定有机物中蛋白质、氨基酸等氮含量，以及各种物质中的亲合体，操作过程简单，精度也较高，比Kjeldahl法快7倍以上，Lowry法原理是蛋白质分解成其中的氨基酸，通过对色比色反应，底物络合过程自络合金属，再经冷酰膦处理，酰膦中色素降解，形成比色荧光，定量检测氮含量，从而间接得到蛋白质含量。
以上就是蛋白质含量测定常见三种方法。
从Kjeldahl法，Bradford法和Lowry法等三种方法，人们可以很好地掌握植物蛋白质含量，进而为植物中品质和效用性提供重要的评价依据。
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蛋白质含量测定方法汇总[整理]蛋白质含量测定是一种用于测定任何生物样品中蛋白质含量的有效测试方法。
此外，蛋白质含量也可以被用于检测不同生物样品中的样本污染程度的指标，以及生物样品中某种从另一个样本污染的量。
现今，存在许多蛋白质含量测定的方法，通常称作“蛋白质测定方法”，它们常用于检测各种类型的高分子生物物质，如蛋白质、核酸、多糖、脂类等。
下面总结了一些常见的蛋白质含量测定方法：1、分子吸光法：分子吸光法是一种常用的蛋白质测定方法，它利用液体或气体样品中分子的光吸收特性来测量蛋白质的含量。
它通过测量样品当量吸收辐射的强度来测量含量，并通过分子结构及激发能获取分子吸收率。
2、酶标法：酶标法是一种常见的蛋白质测定方法，它使用特定酶将蛋白质转化为可测试物质来准确估算样品中蛋白质含量。
此外，也可以用其他物质作为指示物来改变酶反应的速率，从而获取蛋白质含量。
3、体外测定法：体外测定法是一种常见的蛋白质测定方法，它可以任意选择探测，即特定蛋白质向特定外部刺激物反应的速率，以反映样品中的蛋白质含量。
它在分析较新的样品以及批量定量分析中有很大的优势。
4、表面增强拉曼光谱：表面增强拉曼光谱是一种新的蛋白质测定方法，它利用光的调制前后产生的均方根像素来测量蛋白质的含量，这种方法可在低浓度范围内准确定量样品中的蛋白质含量。
5、比多肽配体应答行为水平测定：比多肽配体应答行为水平是一种常见的蛋白质测定方法，它利用特指性多肽核酸探针乙酰化后，在特定条件下发生应答强度及反应速率的改变，从而测量样品中的蛋白质含量。
这是一种可以在短时间内实现高灵敏度和高精度的测定方法。
6、限制性酶体系：限制酶体系是一种常见的蛋白质测定方法，它利用限制性酶来切割或降解蛋白质链，从而得到可用于测定蛋白质含量的切片产物。
限制酶体系也能够有效地检测末端特异性蛋白质种类，以及它们的分布情况。
测量蛋白质含量的几种方法以及优缺点
一、染料法
优点：因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。
缺点：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。
二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量
优点：较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
缺点：灵敏度差。
因此双缩脲法常用于快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
三、酚试剂法测定血清蛋白质含量
（改良Lowry法）
优点：方法简便，灵敏度高，能够测定2～100μg的微量蛋白质。
其方法凯氏定氮法操作简便，其灵敏度比双缩脲法高100倍左右。
因此经常被用于科研与临床检验。
四、紫外吸收法
优点：灵敏度高，仪器设备简单，操作简便。
缺点：准确度不高，有的检测不可用，有限制。
五、凯氏定氮法（Kjeldahl determination）优点：可用于所有食品的蛋白质分析中，操作相对简单费用低。
结果
准确、改进后可以用于微量蛋白质的测定。
缺点：最终测定的是总有机氮而不是蛋白质氮。
精确度低于双缩脲法、试剂有腐蚀性。
六、F olin－酚试剂法（Folin-phenol
Reagent Method ）
优点：灵敏度高，方便简单。
缺点：费时较长，精确控制操作时间
七、考马斯亮蓝法（Coomassie
brilliant blue staining ）
优点：灵敏度高，测定快速，应用广泛，只需一种试剂，用时间短。
缺点：有较大的偏差，而且去污剂等很多试剂对其有干扰。
蛋白质含量测定方法
蛋白质含量的测定方法有：凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法。
1、凯氏定氮法
凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。
即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。
由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。
2、双缩脲法
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。
双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。
当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。
可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。
鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
鉴定反应蛋白质单位1-10mg。
3、酚试剂法
取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值。
4、紫外吸收法
大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收，这是由于蛋白质中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用于测定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。
5、考马斯亮蓝法
考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250定量结合。
一般情况，当溶液中的蛋白质浓度增加时，显色液在595nm处的吸光度基
本能保持线性增加，因此可以用考马斯亮蓝G-250显色法来测定溶液中蛋白质的含量。
测定蛋白质的方法
测定蛋白质的方法蛋白质是生物体内重要的有机大分子，对维持生命活动起着重要的作用。
因此，测定蛋白质的含量和性质对于生物学、医学和食品科学等领域具有重要意义。
下面将介绍几种常用的测定蛋白质的方法。
一、紫外吸收法。
紫外吸收法是一种常用的测定蛋白质含量的方法。
蛋白质在紫外光下有较强的吸收作用，因此可以通过测定蛋白质在特定波长下的吸光度来确定其含量。
这种方法操作简便，结果准确，广泛应用于蛋白质含量的测定。
二、比色法。
比色法是通过蛋白质与某些化学试剂发生反应后产生色素，再利用分光光度计测定其吸光度来测定蛋白质含量的方法。
常用的比色试剂有布拉德福试剂、洛文斯试剂等。
比色法对于含有多种物质的样品也能准确地测定蛋白质的含量。
三、氨基酸分析法。
氨基酸分析法是通过水解蛋白质得到氨基酸，再利用色谱等方法对氨基酸进行分析，从而测定蛋白质含量的方法。
这种方法能够准确地测定不同氨基酸的含量，对于分析蛋白质的组成和结构具有重要意义。
四、免疫学方法。
免疫学方法是利用抗体与特定蛋白质结合的原理来测定蛋白质含量的方法。
常用的免疫学方法有酶联免疫吸附实验（ELISA）和免疫印迹等。
这种方法对于特定蛋白质的测定具有高度的特异性和灵敏度。
五、质谱法。
质谱法是利用质谱仪对蛋白质进行分析，从而测定蛋白质的含量和结构的方法。
这种方法能够准确地确定蛋白质的分子量、氨基酸序列和翻译后修饰等信息，对于蛋白质的深入研究具有重要意义。
总结。
以上介绍了几种常用的测定蛋白质的方法，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据需要选择合适的方法来测定蛋白质的含量和性质，从而更好地开展相关研究和应用。
希望本文能对您有所帮助。
(精选)蛋白质含量的测定测定蛋白质含量的方法`
注意事项
测定蛋白质的浓度最好在25~100μg之 间，故血清稀释倍数一般为200~500。
各管加酚试剂应快，必须立即混匀， 否则就会出现浑浊。
12
实验 结果
1、 原始数据:各管的OD值
2、绘制出标准曲线：要求规范作图 铅笔作图、 横、纵坐标名称及单位 日期、作者 、曲线名称 曲线上体现出待测样品的OD值及 ug数。
碱性 蛋白质肽键
烯醇化
铜离子在pH10条件下螯合在肽键结构中
从而使电子转移到混和酸的显色剂上， 增强了酚试剂对蛋白质的敏感性。
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蛋白质与酚试剂呈色深浅与蛋白质的 含量成正比，利用蛋白质的浓度与呈 色的关系，制备标准曲线，来测定样 品中的蛋白质含量。
6
实验操作
用已知浓度的标准牛血清白蛋白溶液 （浓度为50mg%）配成一系列不同 浓度的蛋白质溶液。
二、比色法：利用蛋白质与不同试剂的呈色反应， 测定蛋白质的含量，如双缩尿法和酚试剂法 （lowry’s method）。
三、紫外分光光度法：利用蛋白质对280nm紫 外光有最大的吸光度而采用
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蛋白质 呈色试剂: 酚试剂 磷钼酸--钨酸的混和酸
半胱氨酸、 酪氨酸、 色氨酸 组氨酸
还原型混和酸
(兰色)
3、计算：100ml血清中的蛋白质含量。 要求： 写出公式、代入数据、写出结果。
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实 验 讨论
分析实验误差产生的原因 总结该方法测定蛋白质含量的优缺点。
14
个人观点供参考，欢迎讨论！
取七支试管，编号，按下表操作
7
编号 蛋白质含量 （μg） 标准液(ml) 生理盐水ml) 试剂A(ml)
试剂B
试剂C(混匀)
12 3 4 5 67 50 100 150 200 250 空白
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理一、紫外吸收法。
紫外吸收法是一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是根据蛋白质在280nm波长处的特征吸收峰来进行测定。
在实验中，首先将待测样品溶解于适量的缓冲液中，然后使用紫外可见分光光度计测定样品在280nm处的吸光值，通过标准曲线的对照，可以计算出样品中蛋白质的含量。
二、比色法。
比色法是另一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质与某些特定试剂发生化学反应后产生显色物质，通过测定显色物质的吸光值来计算样品中蛋白质的含量。
常用的试剂包括布拉德福试剂、伯杰试剂等，不同试剂适用于不同类型的蛋白质测定。
三、BCA法。
BCA法是一种基于铜离子与蛋白质中的蛋白质酰基发生还原反应的测定方法。
其原理是将待测样品与BCA试剂混合后在60℃条件下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
四、Lowry法。
Lowry法是一种以菁蓝G与蛋白质发生化学反应产生显色物质的测定方法。
其原理是将待测样品与碱液、菁蓝G和还原剂混合后在室温下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
五、总蛋白法。
总蛋白法是一种直接测定样品中总蛋白含量的方法，其原理是将待测样品与总蛋白试剂混合后在室温下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
总结，蛋白质含量的测定方法及原理有多种，每种方法都有其适用的样品类型和测定条件，研究人员可以根据自己的实验需要选择合适的方法进行蛋白质含量的测定工作。
希望本文所介绍的内容能为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
测定蛋白质含量常用方法
测定蛋白质浓度常用方法一，微量凯氏（Kjeldahl）定氮法二，双缩脲法（Biuret 法）三，Folin—酚试剂法（Lowry 法）四，紫外吸收法五，考马斯亮蓝法（Bradford 法）几种方法比较：方法灵敏度时间原理干扰物质说明凯氏定氮法（Kjedahl 法）灵敏度低，适用于0.2~1.0mg氮，误差为±2％费时8～10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长双缩脲法（Biuret 法）灵敏度低1～20mg中速20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋?紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似紫外吸收法较为灵敏50～100μg 快速5～10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高≈5μg慢速40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化考马斯亮蓝法(Bradford 法) 灵敏度最高1～5μg快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其λmax由465nm变为595nm强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化五，考马斯亮兰法（bradford法）（一）实验原理双缩脲法（biuret法）和folin—酚试剂法（lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。
1976年由bradford建立的考马斯亮兰法（bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。
这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。
蛋白质含量的测定方法
蛋白质含量的测定方法
蛋白质的含量是指在样品中蛋白质的质量或浓度。
测定蛋白质含量是许多生物学和生化实验中常用的实验方法之一，以下是一些常见的测定方法：
1. 布拉德福德法（Bradford法）：该方法利用布拉德福德蛋白
质染料与蛋白质形成复合物，并产生特定的颜色，通过比色法测定颜色强度从而确定含量。
2. 低里氏法（Lowry法）：该方法基于在碱性条件下，蛋白质
与碱性铜离子复合生成紫色产物的原理，通过比色法定量测定。
3. BCA法（Bicinchoninic Acid法）：该方法利用BCA试剂与
蛋白质中的蛋白质产生螯合，形成紫色到蓝色的产物，并通过光度计测定吸光度从而测定含量。
4. 还原硝酸银法：该方法是通过硝酸银与蛋白质中的氨基酸中的硫原子反应产生黑色沉淀，通过沉淀的重量或者比色法测定吸光度来确定蛋白质含量。
5. 紫外吸收法：蛋白质具有特定的紫外吸收峰，在特定波长下进行测定，可以通过比较样品吸光度与标准曲线来计算蛋白质含量。
以上只是一些常见的测定方法，根据具体需要和实验条件的不同，可以选择适合的方法进行蛋白质含量的测定。
蛋白质含量的测定方法
蛋白质含量的测定方法
蛋白质是生物体内重要的营养成分之一，它对于人体的生长发育、免疫功能、肌肉修复等方面起着重要作用。
因此，准确测定食物或样品中的蛋白质含量对于科研和生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的蛋白质含量测定方法，希望能够帮助读者更好地了解和掌握这些方法。
首先，常用的蛋白质含量测定方法之一是比色法。
比色法是通过蛋白质与某些特定试剂发生反应后产生有色产物，利用比色计或分光光度计测定其吸光度来计算蛋白质含量的方法。
这种方法操作简单，准确性较高，适用于大多数食品和生物样品的蛋白质含量测定。
其次，还有Kjeldahl法。
Kjeldahl法是一种经典的蛋白质含量测定方法，它通过将样品中的蛋白质分解成氨基酸，再利用氨基酸中的氮含量来计算蛋白质含量的方法。
这种方法需要较长的操作时间和较复杂的操作步骤，但是其测定结果准确可靠，适用于各种类型的样品。
另外，还有紫外吸收法。
紫外吸收法是通过蛋白质中芳香族氨
基酸（如酪氨酸、苯丙氨酸等）在紫外光下的吸收来测定蛋白质含量的方法。
这种方法操作简单，灵敏度高，适用于各种类型的食品和生物样品。
除了上述方法外，还有一些其他的蛋白质含量测定方法，如生物素标记法、荧光法等。
这些方法各有其特点和适用范围，可以根据实际需要选择合适的方法进行蛋白质含量的测定。
总之，蛋白质含量的测定方法有多种多样，每种方法都有其适用的范围和特点。
在进行蛋白质含量测定时，需要根据样品的特点和实际需求选择合适的方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保测定结果的准确性和可靠性。
希望本文所介绍的内容能够对读者有所帮助，谢谢阅读！。
测定蛋白质含量方法
测定蛋白质含量方法
1. 布里亚蛋白定量法：利用蛋白质与荧光素的发光作用。
首先将不同浓度的标准蛋白质与荧光素混合后测定发光强度，制作标准曲线。
然后将待测蛋白质与荧光素混合后测定发光强度，根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
2. 低里德蛋白定量法：根据蛋白质中色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等芳香族氨基酸的特定吸收波长进行测量。
直接或间接测定蛋白质的含量。
3. 比色法：利用蛋白质与染料中亲合基团之间的反应测定蛋白质含量。
如利用布拉德福德染料，将蛋白质溶液与染料反应后测定吸光度，根据标准曲线计算出蛋白质含量。
4. 尿素/巯基乙醇（Urea/ME）法：将蛋白质加入含有尿素和巯基乙醇的缓冲液，等待蛋白质的还原和解离，根据吸光度测定巯基乙醇的浓度，再根据巯基乙醇与蛋白质的比例计算出蛋白质的含量。
5. Kjeldahl法：是一种常用的蛋白质含量分析方法。
将样品加入强酸，使其分解出所有氮，然后用强碱滴定测定氮酸的含量，最后计算出样品中蛋白质的含量。
测定蛋白质含量的方法有哪些
测定蛋白质含量的方法有哪些
测定蛋白质含量的方法有许多种，其中包括以下几种常用方法：
1. Bradford法：通过与蛋白质结合后的染料的吸光度变化来测
定蛋白质含量。
2. BCA法：通过还原性染料与蛋白质中的蛋白质质氨基酸发
生反应产生显色物，再通过光度计测量显色物的吸光度来测定蛋白质含量。
3. Lowry法：通过蛋白质与重铜离子和碱性染料的复合反应生
成显色物质，再通过比色计或光度计来测定蛋白质含量。
4. UV吸光度法：通过测量在特定波长下蛋白质溶液吸光度的
变化来间接测定蛋白质含量。
5. NIRS法：利用近红外光谱仪测定蛋白质样品在近红外光谱
范围内的吸光度变化，通过建立标准曲线来测定蛋白质含量。
以上所列方法只是测定蛋白质含量的一部分常用方法，实际上还有一些其他方法，如Kjeldahl法、生物学法等。
不同方法适用于不同类型的蛋白质样品，选择最合适的方法可以提高测定的准确性和可重复性。
简述四种测定蛋白质含量的方法及其原理
简述四种测定蛋白质含量的方法及其
原理
蛋白质是生命活动中不可缺少的重要物质，因此测定蛋白质含量对于生命科学研究和医学诊断等领域具有重要的意义。
目前，常用的测定蛋白质含量的方法有四种：浊度法、酶测定法、比色法和免疫测定法。
下面我们将简述这四种方法的原理和基本流程。
1.浊度法
浊度法是利用蛋白质的吸光度特性测定蛋白质含量的方法。
该方法的基本原理是，蛋白质具有较强的吸光性，在紫外到可见光谱范围内均有吸光度。
因此，在适当的光谱范围内测定样品的吸光度，就可以推算出蛋白质的含量。
浊度法的基本流程是：将样品加入溶剂，在适当的光谱范围内测定样品的吸光度，然后按照蛋白质吸光度与蛋白质浓度之间的关系计算出蛋白质的浓度。
2.酶测定法
酶测定法是利用蛋白质所含的氨基酸的特性测定蛋白质含量的方法。
该方法的基本原理是，蛋白质所含的氨基酸中有一类叫做可氧化氨基酸，如组氨酸、苯丙氨酸。
3.硫氰酸法：这种方法利用蛋白质中的硫氰酸氨基酸，将其与特定的试剂反应，产生的反应产物再与染料反应，通过测量吸收光的强度来测定蛋白质含量。
4.光度法：这种方法利用蛋白质与染料反应，产生的反应产物吸收特定波长的光，再通过测量吸收光的强度来测定蛋白质含量。
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实验七蛋白质含量测定测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。
[目的要求]1．掌握测定蛋白质的含量基本方法。
2．了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。
一、染料法[实验原理]在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。
利用这个原理可以测定蛋白质含量。
该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。
本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。
[器材]吸量管；试管；721型分光光度计[试剂]1.标准牛血清白蛋白溶液：配成0.1mg/ml的溶液。
2.待测蛋白质溶液。
3.染料溶液：称取考马斯亮蓝G-250 0.1g溶于95%的酒精50ml，再加入85%的浓磷酸100ml，用水稀释至1000ml,混匀备用。
[操作步骤]按上表分别向各支试管内加入各种试剂，充分混匀，5min后在595nm波长处以0号管调零,测定各管吸光度值（A）。
以吸光度值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。
2．样品测定：取1ml样品溶液（约含25～250微克蛋白质），加入染料溶液5ml混匀，5min后测定其595nm吸光度值，对照标准曲线求得蛋白质浓度。
二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量[实验原理]在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。
凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。
蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。
测定范围为1～10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
[试剂]1．双缩脲试剂：取CuSO4·5H20(c.P.)1.5g和酒石酸钾钠(c.P.)6.0g以少量蒸馏水溶解，再加2.5mol／L NaOH溶液300ml，KI 1.0g，然后加水至1000ml。
棕色瓶中避光保存。
长期放置后若有暗红色沉淀出现，即不能使用。
2．标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10g/L的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1g/L的A280为0.66来校正其纯度。
如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。
牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0.05mol/L NaOH配制。
[器材]1．试管：15×150mm 试管7只；2．1ml，5ml移液管；3．坐标纸；4．721分光光度计。
[操作步骤]混匀，37℃水浴20分钟，冷却至室温，在分光光度计波长540nm处，用空白管调零，读取各管吸光度值。
1～5为标准曲线管，测得吸光度后，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。
以测定管的吸光度，在标准曲线上求得蛋白质浓度。
[注意事项]1．双缩脲试剂中，加入酒石酸钾钠，Cu2+形成稳定的络合铜离子，以防止CuSO4·5H20不稳定形成Cu(OH)2沉淀。
酒石酸钾钠与CuSO4·5H20之比不低于3∶1，加入KI作为抗氧化试剂。
2．双缩脲试剂要封闭贮存，防止吸收空气中的二氧化碳。
3．本法各种蛋白质的显色程度基本相同，重复性好，几乎不受温度影响，唯一缺点是灵敏度较低。
4．黄疸血清、严重溶血对本法有明显干扰。
[思考题]1．双缩脲法测定蛋白质的原理是什么?其它还有什么方法测定蛋白质的含量?2．请用双缩脲法，设计一个测定蛋白质含量的定量方法(除标准曲线法外)。
三、酚试剂法测定血清蛋白质含量（改良Lowry法）[实验原理]蛋白质分子中所含肽键在碱性条件下与铜络合生成复合物产生紫红色化合物（双缩脲反应），同时使肽链展开，蛋白质中半胱氨酸、络氨酸、色氨酸和组氨酸均能使钨酸、钼酸同时失去1个，2个或者3个氧原子，还原成多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝颜色（最大吸收峰波长为745～750nm,反应式一）其蓝色深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，由此可测出样品中蛋白质的含量。
同时蛋白质肽键发生烯醇化反应（反应式二）能使钼离子在pH10时螯合在肽结构中，形成复合物，从而使电子转移到混合酸的显色剂上，大大增加了酚试剂对蛋白质的敏感性。
反应式一3H2OP2O5•13WO3•5MoO3•10H2O3H2OP2O5•14WO3•4MoO3•10H2O反应式二3H2OP2O5•13WO2•5MoO3•10H2O3H2OP2O5•14WO2•4MoO2•10H2O烯醇化反应后，可与Cu2+络合，络合后，易于使肽释放电子，使酚试剂还原。
[试剂器材]1．碱性铜试剂：甲液：称取无水碳酸钠2.0g，溶于0.1mol/L NaOH溶液100ml中。
乙液：取硫酸铜（CuSO4•5H2O ）0.5g，溶于1%酒石酸钾溶液100ml中。
临用前取甲液50ml，乙液1ml混合，即为碱性铜试剂。
此液需现用现配。
2．标准蛋白质溶液（250 g/ml）：精确称取结晶牛血清清蛋白25mg，溶于0.9%NaCl溶液中，以容量瓶定容至100ml。
3．样品：取血清0.1ml，置于50ml容量瓶中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度处，混匀，为待测血清样品。
4.酚试剂：取钨酸钠（Na2WO4•2H2O）100g和钼酸钠（Na2MoO4•2H2O）25g,溶于700ml 蒸馏水中，再加入85%磷酸50ml和浓硫酸100ml充分混匀，置于1500ml圆底烧瓶中温和地回流10小时，冷却，取下冷凝装置，再加入硫酸锂（Li2SO4•2H2O）150g,水50ml,溴3～4滴，开口继续沸腾15分钟，驱除过量的溴，冷却后稀释至1000ml，过滤，溶液应呈黄色或金黄色（如带绿色不能使用，应继续加溴煮沸），置于棕色瓶中保存。
使用前，以酚酞为指示剂，用0.1mol/LNaOH溶液滴定，求出酚试剂的摩尔浓度。
然后根据此浓度，将酚试剂用蒸馏水稀释至最后酸度为1mol/L。
（滴定时可将酚试剂稀释，以免颜色影响）。
试剂放置过久，变成绿色时，可再加溴数滴煮15分钟，如能恢复原有的金黄色仍可使用。
5．721分光光度计；旋涡混合器；秒表；试管。
[操作步骤]混匀，室温放置30min后，以0管调零点，在波长650nm比色，分别读取各管吸光度值。
以蛋白质含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
以测定管吸光度值，查标准曲线求得血清蛋白质含量。
[临床意义]1.血清总蛋白浓度增高：（1）血清中水分减少，而使蛋白浓度相对增高。
如急性失水时（呕吐、腹泻、高热）；休克时，由于毛细管通透性的变化，血浆也发生浓缩等。
（2）蛋白合成增加，大多数发生多发性骨髓瘤患者中，主要是血清球蛋白增加。
2．血清蛋白合成降低：（1）合成障碍，主要为肝功能障碍，肝脏是合成蛋白质的场所，肝功严重损害时，蛋白质的合成减少，以白蛋白最为显著。
（2）蛋白质丢失，如严重灼伤时，大量血浆渗出；肾病综合症时，尿液中长期丢失蛋白质等。
（3）营养不良或长期消耗性疾病，如严重结核或长期消耗性疾病。
（4）血液中水分增加，血浆被稀释，因各种原因引起的水钠潴留或输注过多低渗溶液。
[注意事项]1.酚试剂在酸性条件下较稳定，而碱性铜试剂是在碱性条件下与蛋白质相互作用，所以当加入酚试剂后，应迅速摇匀（加一管摇一管），使还原反应发生在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏之前。
2.碱性铜试剂必须临用前配制。
3.磷钼酸、磷钨酸的显色反应是由于和还原物质的还原反应而引起的，因此本法可受很多还原性物质的干扰，如带有-SH的化合物，糖类、酚类等甚至有些缓冲剂（如Tris）也能干扰测定。
但如控制在低浓度范围内，则不影响测定，Lowry法很灵敏，可以对5～100μg蛋白质样品进行很好的显色反应，而如此低的蛋白质浓度常常已把干扰物质的浓度稀释到一个不起作用的水平。
4.所有器材必须清洗干净，否则影响实验结果。
5.血清稀释的倍数应使蛋白质含量在标准曲线范围内，若超过此范围需要将血清酌情稀释。
6.本法操作简便、灵敏度高，缺点是试剂只与蛋白质中半胱氨酸、色氨酸等起反应，因此可因各种蛋白质中含这几种氨基酸的量不同使显色强度稍有不同。
[思考题]1.用酚试剂法测定蛋白质含量有哪些优点？2.用酚试剂法测定蛋白质含量有哪些干扰作用？应如何注意？四、紫外吸收法[实验原理]蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。
吸收高峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。
此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。
利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可以进行蛋白质含量的测定。
紫外吸收法简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。
低浓度的盐，例如生化制备中常用的（NH4）2SO4等和大多数缓冲液不干扰测定。
特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其绝对值。
此法的特点是测定蛋白质含量的准确度较差，干扰物质多，在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差。
故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。
若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰。
核酸的干扰可以通过查校正表，再进行计算的方法，加以适当的校正。
但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的，虽然经过校正，测定的结果还是存在一定的误差。
此外，进行紫外吸收法测定时，由于蛋白质吸收高峰常因pH的改变而有变化，因此要注意溶液的pH值，测定样品时的pH要与测定标准曲线的pH相一致。
[试剂器材]1．蛋白质标准液（1mg/ml）：准确称量经微量凯氏定氮法校正的标准蛋白质配制。
2．紫外分光光度计。
[操作步骤]1.标准曲线的绘制：混匀。
在280nm处测定各管溶液的吸光度值。
以0号管调零，以蛋白质溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制出蛋白质标准曲线。