细胞房注意事项
细胞房注意事项
细胞房注意事项1.进出细胞房必须换拖鞋，勿将细胞房内拖鞋穿出细胞房，房外拖鞋也不可进入房内。
进入细胞房换上细胞房专用白大褂和专用实验服，勿将一楼动物实验的白大褂带进细胞房。
2.实验结束后及时清理台面，勿将垃圾留在实验台面。
整齐摆放各类物品。
实验室放置物品请写上姓名和标识。
实验后及时清洗实验用品，勿将要洗的用品留在洗涤盆过夜。
3.实验后检查显微镜/酶标仪/培养箱/离心机/超净台（显微镜在关闭电源前务必将光源调至最暗）。
离心时保存两端平衡。
4.实验中用到毒害物质或者有感染物质的，请先进行汇报，得到同意后才可进行实验。
5.注射器针头、玻璃等利器扔进利器盒，勿直接丢垃圾桶。
丢弃到实验室规定的盒子内。
6.培养瓶等放进培养箱前用，可用75%酒精消毒培养瓶表面，水平放置。
若有培养液渗出培养箱，一定要立即用75%酒精擦拭。
7.培养箱内发现细菌等污染，立即将污染的培养瓶丢弃，并及时报告实验室工作人员对污染区域进行消毒。
8.在使用酒精灯过程中，手上酒精挥发干后方可靠近酒精灯操作，切勿将表面有酒精的物品靠近火苗。
9.值日人员检查：显微镜/酶标仪/培养箱/离心机/超净台。
10.写好预约本和登记本的各项登记。
细胞房工作人员职责：定期检测下列项目：1.CO2 钢瓶之CO2 压力2.CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
3.无菌操作台内之气流压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
4.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
细胞房注意事项 --张贴
细胞实验室注意事项
1、操作者遵守细胞房消毒规定：由于正常人口腔带有支原体，因此进入细胞房一定要带好口罩、帽子(口罩必须罩住口鼻，帽子必须将头发全遮在里面)，鞋套，穿隔离衣，带乳胶手套，并用75%酒精擦拭手套表面。
2、每次实验开始前，须喷洒支原体预防喷雾，开启紫外灯灭菌30分钟。
开始实验时，关闭紫外，开排风扇，桌面用酒精擦拭后使用。
3、所有操作过程要在距离超净台边缘10cm以内的无菌区域进行。
4、操作过程严格按照无菌操作要求：开始要先用75%酒精棉球擦拭瓶口，在
火焰上烧灼瓶口，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，瓶口要再次转动烧灼；
操作时尽量不要讲话。
要常更换吸管，一旦发现吸管触及手和其他物品应弃去。
5、若有培养液滴到超净台面，应立即用酒精棉球擦掉，防止液滴挥发时，有害分子漂浮。
7、实验结束后，及时清理自己各自的桌面、台面、废液缸、地面，整理好实验器材，处理掉实验废物并及时带出。
然后喷洒支原体预防喷雾，开启生物安全柜紫外照射30分钟，检查细胞培养箱后方可离开。
8、实验所用试剂专人专用，防止交叉污染。
9、若发现细胞污染，应及时告知负责人并处理，避免污染扩散，保持洁净的工作环境，支原体检测定期进行。
生物实验室操作规范
生物实验室操作规范 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】生物实验室操作规范生物实验室规范1.进入实验室需要在实验室使用登记簿上登记，没有经过培训的人员不允许单独进入细胞间；2.进第二间屋子换上门口拖鞋，外套脱下，换上白大褂；3.进细胞间，换上拖鞋，并换上相应的白大褂；4.放在实验室的任何化学药品需要贴上标签，写明试剂名称、联系方式，否则一律垃圾处理；5.放入细胞间的物品需用酒精擦拭外包装。
放入冰箱的物品外围需用酒精擦拭，然后注明试剂名称、使用者，远离培养基；6.有毒、易挥发试剂在外间通风柜内操作；7.双手接触过任何未灭菌的东西后，都需用酒精消毒后才能接触灭菌的器具或试剂；8.值班同学：晚上开紫外灯，早上关掉；垃圾箱满了倒掉；废液瓶满了，加入次氯酸钠后倒掉；所有的仪器是否关闭；试剂是否收好；衣服、鞋子是否摆好。
生物实验室间使用要求实验前的例行检查与消毒措施1.减压阀检查：减压阀是连接在CO2培养箱与CO2气瓶间的减压装置，用于将气瓶内较高的压力降低至培养箱可以使用的压力。
靠近气瓶的一级压力表盘指示气瓶内气体压力，当该压力小于时，表明CO2气体不足，应及时购买气体。
远离气瓶的二级压力表盘指针应在之间，若超出此范围请根据箭头指示调节旋钮（注意：a旋钮感觉越紧，阀门开口越大；b指针示数会因为培养箱对橡胶管内气体的间断吸气而跳动，调节旋钮时注意延时因素，并将跳动范围控制到间）。
2.CO2培养箱检查：温度显示应在（℃）之间，CO2浓度在（%）之间，严禁私自改变设置。
底部增湿盘中水量不足1/3，应及时添加无菌去离子水，严禁添加自来水。
培养箱长时间断电重启后，应仅设置温度为37℃，CO2浓度设置为零，待培养箱温度稳定在37℃六小时后，再设置CO2浓度为5%。
3.医用冰箱检查：医用冰箱在稳定状态下冷藏温度应为4℃，冷冻温度应为-20℃，若示数变化应及时联系管理员。
细胞培养的注意事项
相关疾病：每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?早走早脱身，从此专注黑生物1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。
2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。
3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。
4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)。
5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。
6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。
非科班出身经验分享1. 别怕浪费。
枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。
2. 动作要既轻柔又有力。
动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。
后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。
3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。
4. 实验结束后对实验台的消毒。
紫外什么的，用前用后都照个30 分钟。
5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。
比如实验台，又比如培养箱内部。
6. 细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。
培养基的话最多最多不要超过2 天就要换一次。
细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。
大概就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰; 该使劲的时候绝对不含糊，不该使劲的地方一定忍住。
如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。
如果是高级台子就多用酒精喷喷。
感觉生物的实验，心疼钱就还是不要做了。
最后一点点绝对非科班的经验。
癌细胞真是坚挺。
有一次实在是不想传了，放了 5 天吧，感觉都长了几层出来，培养基都黄了。
bv2细胞培养注意事项
bv2细胞培养注意事项嘿，做细胞培养实验的小伙伴们！今天咱们可得好好唠唠bv2细胞培养的注意事项呀！这bv2细胞培养，那可是有不少讲究的呢！首先呢，在细胞培养的环境方面，温度和湿度可不能马虎呀！就像咱们人需要舒适的居住环境一样，bv2细胞也有它的喜好。
温度得精准控制在37℃左右，这就好比给细胞们打造了一个最适宜的小窝。
湿度也得合适，太干或者太湿都不行呢，这就像花儿需要合适的空气湿度才能娇艳盛开一样。
说到培养基，那更是重中之重啦！咱们得选择适合bv2细胞生长的培养基，这就像是给细胞们准备专属的营养大餐。
而且呀，培养基的成分要准确无误，少了哪种营养成分，就好比给孩子吃饭缺了某种维生素一样，会影响细胞的生长发育。
在添加血清的时候，也要注意比例哦，血清就像是培养基里的超级营养剂，比例不对可不行，这就像做菜放盐多了或者少了都会影响味道一样。
还有啊，细胞接种的密度也很关键呢！不能太稀，不然细胞们会觉得孤单寂寞冷，生长起来没劲儿；也不能太密，就像人挤在一个小房间里会不舒服一样，细胞太密会互相抢夺营养，影响生长状态。
这时候就需要咱们像个细心的管家一样，精确计算接种的细胞数量。
在培养过程中，要时刻关注细胞的状态。
如果发现细胞有什么异常，比如说形态变得奇怪啦，或者生长速度突然变慢啦，可不能坐视不理呀！这就像照顾生病的孩子一样，得赶紧找出原因。
是污染了呢，还是培养条件出了问题？一定要及时解决，可别让咱们的bv2细胞受到更大的伤害。
另外，换液也是个精细活。
换液太勤，细胞可能还没吸收够营养就被换走了；换液不勤，细胞就会在脏脏的环境里，就像人住在不打扫的房间里会生病一样。
所以呀，要按照合适的时间间隔来换液，这就像给细胞们定期打扫房间一样。
咱们在操作的时候，一定要保持无菌的环境。
这就像进入无菌手术室一样，任何一点细菌或者微生物的污染，对于bv2细胞来说可能都是灭顶之灾。
所以消毒工作一定要做到位，手要洗干净，实验器材也要彻底消毒。
细胞房房管理规章制度及细则
细胞房房管理规章制度及细则第一条使用人员要严格执行无菌操作，保持实验室清洁。
①每日第一个开门者，必须将开门时间记录在《细胞房预约登记表》上。
②使用细胞房者，统一从604门口进入。
一更处换鞋，脱外套。
二更处穿隔离衣、戴口罩，手套和帽子（头发必须全部进入帽子）。
③进入风淋间，必须吹满10，不允许急停。
不可携带物品进入风淋间。
④所有进出细胞房的物品，必须由传递口出入。
洁净物品和污物各有一个传递口，不允许污物放置于洁净物传递口内。
洁净物、废液桶进入传递口必须先紫外照射10min。
⑤废弃物不可留滞于细胞房。
⑥超净台使用结束后，打开紫外灯15分钟，然后关闭。
⑦气瓶间房门如无特殊情况，完全关闭，不允许随意打开。
⑧如需观察气瓶供气和更换气瓶时，可打开602门，平时不允许随意打开。
⑨每周日晚8点半之后停止使用细胞房，安排值日生打扫卫生。
如有特殊情况需要使用细胞房者，请提前向管理老师报备，并通知值日生。
第二条未培养过细胞的人员，不可独立使用细胞房。
①必须在管理老师或者高年级研究生指导下进行操作。
②考试合格后，方能独立使用细胞房。
考试不合格者，不得独立使用细胞房。
③如发现擅自使用细胞房，将追究其责任。
第三条未经管理老师许可，不得私自带外来人员使用细胞房和细胞房内仪器设备。
不得在细胞房做任何与细胞培养无关试验。
第二项、细胞房使用实行预约制，使用人员必须提前预约。
使用人员须在《细胞房预约登记表》上预约使用房间、使用人员姓名、使用时间等信息。
严格按照预约登记使用细胞房。
第一条如预约取消，必须及时将预约信息删除。
第二条未登记预约使用细胞房；或在预约时间内，无人使用细胞房等行为将视为违规。
第三项、细胞房主要划分为三个区域和安全柜专区。
第一条A间主要供朱俐组使用；B间主要供高永静组使用；C间主要供姜正林组使用。
第二条每一小间均配有一台培养箱供各组使用，分层请各组自己分配。
未经本人允许，不得随意查看、移动他人培养的细胞。
培养箱旁均有气阀开关，请勿触碰，以免影响机器正常使用。
细胞房使用流程及细胞培养注意事项流程
细胞房使用流程及细胞培养注意事项流程♦需使用细胞房的人员请提前一周至负责人处登记。
♦进入细胞房前，先换专用鞋♦进入缓冲间，穿衣、戴帽和口罩♦进入层流室，戴手套、消毒后，才可进行实验♦每天工作完成时，最后一个同学需负责关掉风机、空调及细胞房门注意事项加强自身实验素养，具备在对自己负责的同时必须对他人负责的思想。
♦每天使用细胞房之前，必须将缓冲间及层流室用紫外灯照射30 分钟。
♦消毒结束后，通风15分钟后才可使用。
♦细胞房的拖鞋仅能在细胞房内使用，不得穿出。
♦进入层流室必须换衣服，戴帽、口罩及手套。
♦不得将外来人员带入。
♦保持细胞房内外地面、桌面的清洁、整齐，不得有杂物及废弃物。
♦关于培养箱⏹打开培养箱之前，必须将手套上喷上消毒剂。
⏹拿细胞时动作要迅速，并随手将培养箱门关上。
禁止培养箱不关，避免反复开关。
⏹记住放置细胞的位置，不经他人允许，不得动别人的细胞。
⏹每个人都有义务和责任经常观察CO2 钢瓶中气体的使用情况。
♦关于离心机⏹离心细胞必须打开制冷开关。
⏹离心时，离心管必须平衡。
⏹离心结束时，依次关制冷开关、总开关、拔电源。
♦关于显微镜⏹保持载物台的清洁。
⏹载物台上的所有附件用后，全部放回载物台。
⏹用后，一定记住关电源。
♦关于超净工作台⏹掌握正确地开门方式。
⏹实验前，必须点燃酒精灯，并用酒精棉将台面消毒。
⏹实验过程中，手臂不能与台面接触。
⏹取用超净工作台的所有物品，必须注意避免双手与装有内容物的无菌区域接触。
⏹枪头盒放置的位置必须与枪架有一定的距离。
⏹所有经高压消毒、烘干过的物品在放入超净工作台后，需照射30分钟后才能使用。
⏹实验结束后，托盘内所有废弃物必须全部移走，固体物可倒入垃圾桶、液体必须倒入细胞房外的水槽，并冲洗。
⏹实验结束后，必须用酒精棉将台面消毒。
⏹紫外灯照射。
♦关于水浴箱⏹用前，先检查箱内是否有水，并将小容器内的水换上新的超纯水。
⏹温度为39 度，预热2 小时。
⏹用完后，关开关及电源。
细胞室设计要求范文
细胞室设计要求范文
1.保持稳定的环境：细胞室应该能够提供一种能够稳定细胞环境的条件，例如恒定的温度、湿度和氧气浓度。
这些条件对于细胞的正常生长和
功能维持至关重要。
2.控制污染：细胞室应具备严格的控制措施，以防止外界的污染物进
入细胞环境，可能影响细胞的生长和功能。
这包括净化空气、过滤水等措施。
3.充足的储存空间：细胞室应该有足够的空间来存放各种设备和试剂，确保操作方便和安全。
4.强大的成像系统：细胞室应配备高分辨率的显微镜和成像系统，以
观察和记录细胞的形态和结构。
这对于研究细胞的功能和分子机制非常重要。
5.控制水平增加：细胞室应具有多种控制参数的能力，如温度、湿度
和氧气浓度的精确控制，以便通过调节这些参数来模拟不同的细胞环境。
6.安全性：细胞室应采取各种措施以确保操作人员的安全和实验材料
的安全。
这可能包括使用防护设备、保持清洁和杀菌环境等措施。
7.可持续性：细胞室的设计应考虑到能源的高效利用和环境保护，以
减少资源的浪费和环境的污染。
8.灵活性：细胞室应该具备灵活的设计和设备，以应对不同研究要求
的变化。
这包括可以调整的工作台、设备和试剂储存的灵活布局和设计等。
总之，细胞室的设计是一个复杂而细致的工作。
只有充分考虑到细胞的生理和功能需求，以及操作人员的安全和研究的可靠性，才能设计出合理有效的细胞室。
细胞培养操作规范
4.一次将所有的所需要试剂、工具放入工作 台。不要半路走出工作间拿东西，传递东西 进工作室需酒精擦拭灭菌
CO2 培养箱：
1.设定的条件为 37℃ ， 5 ％CO2 。 2.使用 CO2 培养箱应注意的问题： ▫ 用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证 通气。 ▫ 保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。
▫ 箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000毫升 ，以保持箱内湿度。
控制水盘内污染的方法： 1、 定期(至少每两周一次)，更换水盘内的无菌 蒸馏水或无菌去离子水。 2、 在水盘内添加适量硫酸铜，预防真菌污染。 配制方法：20g无水硫酸铜＋5ml浓硫酸＋1L 灭菌纯水。 3、 水盘内添加适量抗生素。 4、定期为培养箱（含水盘）进行一次高温灭菌 。
细胞消化时间的控制：
4:细胞冻存： 吸出旧培养液加PBS冲洗两次 胰酶消化 加培养基中止消化，（以上步骤同细胞传代 ） 细胞计数 离心收集细胞，吸弃上清，加入冻存液调整细 胞密度至1×106个/ml
将细胞移入冻存管，写好标签（细胞种类，冻存时间 ）4 ℃15-30分钟，-20 ℃1-2小时，-80 ℃
消毒： 消毒前常用的包装：牛皮纸、棉布、铝饭盒包 装 高压蒸汽消毒：121℃ ，维持20-30分钟。
三：细胞培养方法
1.细胞复苏方法：
从 液 氮 中 取 出 冷 冻 管 ， 迅 速 投 入 37℃ 水 浴中，甩动冻存管，使其融化（1分钟左右）； 5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上； 1000转低速离心5分钟； 去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
血清： 常用血清种类：胎牛血清、新生牛血清、小牛血清 血清的灭活（消除补体活性） 56℃ ，30 分钟。 使用浓度：5%-20%，一般10% 血清的消毒：过滤除菌 血清解冻步骤：–20℃ 或–70℃至4℃冰箱溶解一 天，至室温下全溶后再分装，一般用15ml无菌 离心管分装。
细胞房工作守则新
细胞房工作守则一、常规1.细胞房最多可4个人同时使用。
尽量避免在内长时间逗留、交谈，最好戴口罩。
2.为保持无菌状态，经常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2h）或打开空气消毒机消毒1-1.5h，人员在30-45min以后才能进入房间。
每个细胞房一个组长，组长安排好该细胞房的值日表，值日生要负责当天细胞房内的所有清洁问题。
组长每周安排一次彻底大扫除，包括墙面，地板，桌面，培养箱。
每月过氧乙酸熏蒸（2h）的方式进行消毒。
3.细胞房实验耗材、仪器、药品等均不可随意带出。
4.培养基分瓶，各用自己的培养基，以免交叉污染。
5.血清56度，30min灭活，冷却后分装，-20度保存。
要经常使用的放在4度保存。
6.新配好的培养基和血清等混合后需要试培养，即先用一瓶正常细胞培养一天以上或者不加细胞放瓶中三天以上，如未出现污染才可以拿来继续培养细胞。
7.一旦出现污染，被污染的细胞先用新洁尔灭喷一下再全部扔掉；同一批的培养基、使用的细胞清洗液等等全部重新滤过消毒；打开培养箱，用75%酒精擦洗，然后用新洁尔灭擦洗（重复2次，隔天），用紫外照射4小时以上；清扫培养室，紫外照4小时以上，重复一次。
8．清洁液的配方有三种：按重铬酸钾：浓硫酸：蒸馏水排列强液：63g:1000ml:200ml次强液：120g:200ml:200ml 弱液：100g:100ml:1000ml 最常用的是次强液。
配制的时候应选用防酸、耐热、开口较大的容器盛清洁液。
先将需要量的重铬酸钾和水加到容器里，最好是完全溶解。
然后，缓慢、分次加入浓硫酸。
配制时，注意做好自我防护。
新配制的的清洁液(泡酸液)一般呈棕红色,经长时间使用后因有机溶剂和水分增多逐渐变成绿色,表明已经失效,应该重新配制.二、培养箱使用规则1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。
* 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。
长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。
细胞房注意事项和管理
4. 值日周完毕前需完成的事情：星期五全方位清扫细胞房。包括拖地，擦
桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上的仪器，给水浴锅加水或
换水，洗细胞房专用的实验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、
检查硫酸铜溶液是否需要更换〔一个月更换一次〕！
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z.
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5. 每 2 周清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对 于比拟敏感的细胞可以暂存于其他细胞房的培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出， 包括 4 块横板和左右 2 块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；翻开 培养箱清洁内壁时动作要迅速，防止长时间敞开门使得大量不干净空气进入，缩 短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部 15min，手提紫外灯放入培养箱前要 用酒精棉擦拭干净。
* 频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长 条件的恒定。
超净台操作规则
1. 超净台使用前用紫外灯照射 15 分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦 拭工作区消毒，所有物品放入超净台前均应用酒精喷拭外表消毒。
2. 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高 1/3-2/3。
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z.
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*从-20℃取用血清者需在表格上做好登记，方便在不够时及时领取，以免耽
误实验进程。
3. 原则上解冻好的血清应全部配成含血清的培养基备用，假设有剩余，则
暂存于 4℃并尽快使用。尽量不要使用他人开过的血清，以免穿插污染。
细胞冻存记录
细胞 冻存位置
冻存方式
冻存管 细胞 细胞 冻存 冻存 冻存
名称
3. 值日周内每天需做的事情：开大紫外灯消毒细胞房 15-30min 后才能投
入一天的使用，晚上开启紫外灯灭菌，第二天及时关闭；检查灭菌物品的储藏情
细胞培养操作及其注意事项
六、操作完处理
• 1.试剂瓶瓶口喷酒精，用封口膜封住后，拿回冰箱应该放置的位置。 • 2. 清理工作台面，并用酒精消毒。下拉门，开紫外照射一般30分钟。 • 3. 垃圾袋封口，拿出高压蒸气灭菌（如果有感染试剂）。 • 4. 关掉37℃水浴箱的电源，细胞培养箱CO2浓度恢复至5%后，关掉
次解冻。10%浓度配制冻存液。 • 3. 由于DMSO稀释时会放出大量热量，故不可将DMSO直接加入细胞液中，
必须使用前先行配制完成。 • 4. adherent tumor lines: 5-7 x 106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma 解
冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 106 cells/ml。other suspensions: 510 x 106 cells/ml, human lymphocyte 须至少5 x 106cells/ml。 • 5. 回收动物细胞，其离心速率一般为300×g(约1,000rpm），过高的转速， 将照成细胞死亡。
• 3. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如移液器和枪头盒等可以暂时 放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以酒精擦拭后才带 入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
• 4. 操作人员应注意自身的安全，须穿戴实验衣及手套Байду номын сангаас才进行实验。用酒精擦拭手套 后才可进行操作。
• 5. 实验服应该定期灭菌和更换。进出细胞间时，不要同时打开相邻两个房间的门。
二、贴壁细胞的换液及传代
• 1. 换液 • 当培养基中有较多漂浮的死细胞或者培养基颜色变黄，而细胞密度未
细胞房工作守则及注意事项
细胞房工作守则及注意事项Last revised by LE LE in 2021细胞房工作守则及注意事项细胞房工作守则及注意事项一、常规操作1.穿着专用实验服。
自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。
2.穿着专用拖鞋。
在缓冲间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。
3.细胞房最多可4个人同时使用。
尽量避免在内长时间逗留、交谈。
二、培养箱使用规则三、1.从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。
四、注：五、培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。
长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。
六、 2.七、培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
八、 3.九、2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。
十、 4.十一、普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。
十二、注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。
十三、显微镜使用规则十四、1.显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
十五、 2.十六、离开细胞房时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。
尽量避免频繁开关显微镜电源。
十七、超净台相关操作规则十八、1.超净台使用遵循预约原则。
无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。
十九、2.超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒。
二十、3.点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。
二十一、注：二十二、消毒用75%的酒精，酒精灯用95%的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。
二十三、注：二十四、酒精和酒精棉球由值日生负责补给，发现细胞房内存放量不足时请及时通知值日生。
细胞房的使用及注意事项
细胞房的使用及注意事项细胞房是一种用于细胞培养的实验设备，它提供了一个稳定的环境，以支持细胞的生长和繁殖。
细胞房通常由一个密封的箱体和一系列控制设备组成，可以控制温度、湿度、气体组成等参数，以满足不同类型细胞的培养需求。
细胞房的使用有一些注意事项，下面将会对这些注意事项进行详细介绍。
首先，使用细胞房前，需要进行必要的准备工作。
首先，清洁细胞房内部和外部的工作台和设备，确保无尘、无菌。
其次，准备好所需的培养基、培养皿等细胞培养材料。
最后，将细胞房的温度、湿度等参数调整到适合细胞培养的范围内。
在使用细胞房时，需要注意以下几点。
首先，维持细胞房的洁净和无菌是非常重要的。
细胞房内的空气应经过过滤处理，以防止细菌和其他微生物的污染。
其次，细胞房的温度和湿度需要根据细胞类型的要求进行调节。
细胞房内的温度通常应保持在37摄氏度左右，湿度则应在相对湿度70%以上。
此外，细胞房内的气体组成也需要根据细胞类型的要求进行调整，常见的有调节二氧化碳浓度等。
细胞房的使用还需要注意细胞培养的基本原则。
首先，细胞应该保持在合适的培养基中，培养基要适合细胞类型的特性和需求。
其次，细胞的培养密度应控制在适当的范围内，过高或过低的密度都会影响细胞的生长和分裂。
此外，细胞的培养时间也需要注意，不同类型的细胞对于培养时间的要求不同，过长或过短都会对细胞的生长和功能产生影响。
在细胞房的使用过程中，还需要注意细胞的无菌操作。
无菌操作是指在无菌条件下进行的操作，以防止细菌和其他微生物的污染。
无菌操作包括洗手、穿戴无菌手套、使用无菌培养器具等。
此外，在进行细胞传代和细胞冻存等操作时，也需要采取相应的无菌措施，以确保细胞的纯度和无菌性。
除了以上注意事项，还有一些细胞培养的基本技巧需要掌握。
首先，细胞的传代要适时进行，不宜过早也不宜过晚。
过早传代会导致细胞密度过低，影响细胞的生长和分裂；过晚传代则会导致细胞密度过高，影响细胞的生理状态。
其次，注意细胞的观察和记录。
细胞实验室工程施工
细胞实验室工程施工1. 细胞实验室的规划在进行细胞实验室的工程施工前，首先需要进行详细的规划。
规划阶段需要考虑到实验室的用途、规模、布局等因素。
根据实验室的具体需求，确定实验室的功能区域，如细胞培养区、PCR实验区、显微镜观察区等。
同时还需要设计实验室的通风、消毒、供水、排水等设施，以确保实验室的安全和卫生。
2. 细胞实验室的选址选址是细胞实验室工程的重要环节。
在选择实验室的位置时，需要考虑到实验室周围环境的安全性和卫生程度。
最好选择在干净、通风良好的地方建设实验室，避免受到外界环境因素的干扰。
此外，实验室的选址还需要考虑到周边设施的便利性，如停车场、交通、供电等。
3. 细胞实验室的施工流程细胞实验室的施工流程包括设计、招标、施工、验收等环节。
设计阶段需要找到专业的设计团队，根据实验室的需求进行详细规划和设计。
招标阶段则需要根据设计方案选择合适的施工团队进行施工。
在实验室的施工过程中，需要严格按照设计方案进行施工，确保实验室的建设质量。
最后，在完成施工后还需要进行验收，确保实验室的设施和设备符合相关标准。
4. 细胞实验室工程的注意事项在进行细胞实验室工程施工时，需要注意以下几个方面：(1) 安全问题。
实验室是一个涉及生物材料和化学试剂的环境，施工时需要严格遵守相关安全规范，使用防护设备，避免事故发生。
(2) 设备采购。
在进行实验室的建设时，需要选购高质量的实验设备和设施，以确保实验室的正常运行。
(3) 环境保护。
在进行实验室的施工过程中，需要考虑环保因素，避免对周围环境造成污染，采取必要的措施做好环保工作。
(4) 合理预算。
在规划实验室工程施工时，需要合理预估施工成本，确保项目资金充足，并按预算合理分配经费。
综上所述，细胞实验室工程施工是一个复杂的过程，需要充分考虑各方面因素，确保实验室的建设质量和安全性。
通过精心规划和施工，可以建设一个符合需求的高水平细胞实验室，推动细胞学研究和药物研发的进步。
细胞实验室简介
界隔离，不能穿行或受其他干扰。
理想的无菌操作室应划为三部分： a) 更衣室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。 b) 缓冲间—―位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境。 c) 无菌操作间—―专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其顶部不宜过高 （不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒 。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于酚红
冰箱 天平 酸度计 恒温水浴锅 磁力搅拌器 液氮罐 纯水设备
PH 7.0～7.4 去离子水 无菌
2.灭菌设备
高温电子灭菌炉
蒸汽式压力灭菌锅
过滤灭菌装置 喷雾消毒器 紫外灯
0.45 μm 0.22 μm
3.无菌操作设备
生物安全柜
生物安全柜
根据主要几项生物安全柜国际标准 的规定，安全柜可分为一级、二级和 三级三大类以满足不同生物研究和防 疫的要求。安全柜的分类级别与生物 安全登记无关。
输出压力指示
罐内压力指示
流量控制阀门
接培养箱的管子
压力调节旋钮
5.细胞学鉴定设备
倒置显微镜
荧光显微镜 酶标检测仪 流式细胞仪
四.常用器皿、器械
培养器皿
移液器 特殊用具
移液器
电动移液器 微量移液器 多通道微量移液器
特殊用具 细胞筛网、细胞刮刀、细胞计数板
实验完毕，及时清洁工作台面，将使用过的 实验用品移出无菌室 定期对无菌室进行消毒灭菌
谢谢
五.实验室操作注意事项
做好实验前准备，避免反复进出而增加污染机会 进入细胞培养室前需更换工作服,换鞋并洗净、消 毒双手。 注意无菌室内的紫外灯 室内常规用品不准随意拿出室外，所有物品不得 挪作它用
细胞培养注意事项(入门级)
细胞培养注意事项（入门级）总的原则：无菌操作、保证细胞培养环境的稳定性按时间顺序整理1、细胞房和生物安全柜（或超净工作台）先开紫外照射30min。
作用：对环境灭菌（空气）。
（备注：如果着急，至少也要开15分钟）在做实验之前考虑好需要哪些物品。
开始照射之前，将所需要用到的物品都放到生物安全柜（或超净工作台）里面。
常用移液枪或电动移液器等，需要在工作台上放置一套专用设备。
细胞培养箱一般都已经调整好。
定期留意一下二氧化碳是否足够。
不够及时更换。
2、显微镜需要定期消毒酒精擦拭。
注意：显微镜一般都放在细胞房。
3、进入实验之前，首先给自己带上拖鞋、头套，口罩，实验服，手套（手套带双层）。
注意：手套要将袖口套进去。
实验服、拖鞋最好是细胞房专用。
4、开始操作之前先观察细胞。
首先观察细胞培养液的颜色。
现在的细胞培养液通常都放有酸碱指示剂（绝大部分是酚红）。
细胞在培养生长过程中，不断在培养液上清中累积酸性物质，时间长了，培养液变为黄色（同时培养液中营养物质耗尽）。
其次镜下观察细胞的生长状态是否良好，是否需要传代。
如果生长状态不好，需要对培养液进行调整（一般是加大血清浓度）。
过于密集出现大片融合或太密集而导致细胞脱落，则进行传代。
如果长势良好，且细胞培养液颜色未发生变化，可以酌情进行1/2、1/3、1/4换液，也可以全换液。
总之，视细胞生长情况而定。
5、细胞培养预准备：首先是准备各种溶液。
第一是配制溶液过程中要用到的水。
水用纯水，高压灭菌之后，再去内毒素。
去内毒素方法很多，最简单可以放在烘箱180度3小时。
或者过去内毒素的柱子后，高压灭菌。
第二，各种溶液灭菌：抗生素用去内毒素水配制后，直接过滤除菌（过0.22u滤头）。
可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。
现在用的培养液，如果是商业化液体培养基，不用处理。
如果是粉末，需要用去内毒素水在生物安全柜（或超净工作台）进行配制，再过滤除菌。
可以先配浓缩液（如10×），过滤除菌后。
细胞培养房内用的气体钢瓶可用小推车等形式进行固定
细胞培养房内用的气体钢瓶可用小推车等形式进行固定.细胞培养房内用的气体钢瓶可采用气液分离器、空气压缩机、离心分离器和小推车等形式进行固定，一般应注意保持气液分离器进水口处的清洁。
细胞培养房内用的气体钢瓶的摆放应注意：①容器上方应有足够空间，使瓶内气体完全排出；②瓶体上与空气隔离，使瓶口不要接触空气。
③瓶口在瓶体上部，且瓶口离液面不能太高或太低；④用小推车或其它方法将钢瓶固定于液面上；⑤瓶和瓶之间应无空气接触。
细胞培养房内一般应保持良好的通风状态，室内相对湿度不超过60%,温度控制在22~25℃。
为保证细胞培养房内各部分温度均衡及氧气充足，应经常检查气体钢瓶和瓶塞是否漏气。
在用完气体钢瓶后，应将气瓶夹上的橡胶垫放入容器中并加以固定。
(1)当有下列情况之一时，应立即停止使用本容器：。
发现气体钢瓶内有气泡；。
钢瓶中剩余的气体已经不能满足需要；。
瓶塞或瓶口出现裂痕或裂缝，或瓶塞变形；④钢瓶内有积水。
⑤因气体钢瓶漏气而引起的爆炸、火灾或爆炸事故。
⑥气体钢瓶漏气超过规定期限后仍未修理完成时，应停止使用本容器。
(2)当用完后，不应立即在容器内进行冷冻处理。
(3)气体钢瓶的放气方法：先在气瓶夹上的橡胶垫上放入少量的清水，然后用力压下瓶塞，待水从瓶塞流入瓶内，就可排出瓶中的气体。
(4)使用气液分离器或离心分离器时，应注意保持气体钢瓶的清洁和密封。
(5)气体钢瓶必须垂直摆放，用后用清水冲洗，并晾干或烘干。
(6)每次使用后应立即盖好瓶盖；超过半年不用时要放入冰箱中进行冷冻处理；如长期不用者必须重新密封保存。
(7)在气液分离器进水口处应安装一只过滤器，使气体通过过滤器除去其中有害物质。
(3)当发生严重的泄漏时，须立即关闭本容器的气阀，打开应急泄压阀排出瓶内气体，并将泄漏处用水冲洗干净。
[例某实验室内有一只新购的气体钢瓶，打开气阀后发现瓶内气体呈乳白色(水状),瓶内有较多气泡产生。
[处理方法]在确认瓶内气体完全排出前，迅速将钢瓶倒置；如瓶内液体仍不断流出，应立即将气体钢瓶倒转的角度不能小于45°)。
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细胞房注意事项
1.进出细胞房必须换拖鞋，勿将细胞房内拖鞋穿出细胞房，房外拖
鞋也不可进入房内。
进入细胞房换上细胞房专用白大褂和专用实验服，勿将一楼动物实验的白大褂带进细胞房。
2.实验结束后及时清理台面，勿将垃圾留在实验台面。
整齐摆放各
类物品。
实验室放置物品请写上姓名和标识。
实验后及时清洗实验用品，勿将要洗的用品留在洗涤盆过夜。
3.实验后检查显微镜/酶标仪/培养箱/离心机/超净台（显微镜在关闭
电源前务必将光源调至最暗）。
离心时保存两端平衡。
4.实验中用到毒害物质或者有感染物质的，请先进行汇报，得到同
意后才可进行实验。
5.注射器针头、玻璃等利器扔进利器盒，勿直接丢垃圾桶。
丢弃到
实验室规定的盒子内。
6.培养瓶等放进培养箱前用，可用75%酒精消毒培养瓶表面，水平
放置。
若有培养液渗出培养箱，一定要立即用75%酒精擦拭。
7.培养箱内发现细菌等污染，立即将污染的培养瓶丢弃，并及时报
告实验室工作人员对污染区域进行消毒。
8.在使用酒精灯过程中，手上酒精挥发干后方可靠近酒精灯操作，
切勿将表面有酒精的物品靠近火苗。
9.值日人员检查：显微镜/酶标仪/培养箱/离心机/超净台。
10.写好预约本和登记本的各项登记。
细胞房工作人员职责：
定期检测下列项目：
1.CO2 钢瓶之CO2 压力
2.CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
3.无菌操作台内之气流压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
4.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。