茄科物种全基因组抗病基因鉴定及其进化分析

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高代自交系茄子CR_耐低温生理特性及转录组学分析

第46卷第6期2023年11月河北农业大学学报JOURNAL OF HEBEI AGRICULTURAL UNIVERSITYVol.46 No.6Nov.2023高代自交系茄子CR耐低温生理特性及转录组学分析宋雪，李冰，张敬敬，高秀瑞，潘秀清，武彦荣（河北省农林科学院经济作物研究所，河北石家庄 050051）摘要：低温是影响我国广大茄子产区春茄子生长的主要因素之一，筛选性状优异的耐低温茄子自交系可为培育抗逆品种提供可靠的育种材料。

本研究以高代自交系NCR品种为对照，研究高代自交系茄子CR的耐低温生理特性，并采用高通量测序技术筛选CR和NCR 2个品种在低温胁迫下的差异表达基因。

低温处理1 d后对照品种NCR即出现萎焉，CR品种低温处理6 d后出现萎焉，且冷害指数仅为对照品种的十分之一。

低温处理对CR品种的电解质渗透影响不大，而NCR品种低温处理6 d后电解质渗透增加了72.72%。

低温处理2个品种丙二醛含量都增加，但CR品种增加的水平低于对照NCR品种。

转录组学分析发现80个在高代自交系CR中特异性表达的基因，GO及KEGG分析表明这些基因涉及脱水反应、植物抗氧化系统、染色体或染色质复制和重塑、蛋白泛素降解和信号转导途径，说明高代自交系CR的耐低温特性与基因的特异性表达有关。

关键词：茄子；低温；转录组分析；差异表达基因中图分类号：S641.1开放科学（资源服务）标识码（OSID）：文献标志码：AIdentificantion of low temperature tolerance and transcriptomeanalysis of the high generation inbred eggplant CRSONG Xue, LI Bing, ZHANG Jingjing, GAO Xiurui, PAN Xiuqing, WU Yanrong(Institute of Cash Crops, Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Shijiazhuang 050051, China) Abstract: Low temperature is one of the main factors affecting the growth of spring eggplant in the productionareas in our country. Screening the high generation inbred eggplant with low temperature tolerance will providereliable materials for breeding stress-resistant varieties. This study identified the low temperature tolerance ofeggplant inbred lines CR with inbred line NCR as the control. RNA-seq was conducted to screen differentiallyexpressed genes in CR compared with NCR. The results showed that NCR plants became wilted at 1 day postlow-temperature treatment, while the CR plants became wilted at 6 days post low-temperature treatment. Lowtemperature treatment shed little effect on electrolyte permeation of CR, but the electrolyte permeation increasedby 72.72% in NCR plants at 6 days post low-temperature treatment. The malondialdehyde (MDA) content of bothcultivars increased under low temperature treatment, and CR cultivars displayed lower MDA content than thatof NCR. In the RNA-seq analysis, 80 differentially expressed genes were specifically found in CR. Those geneswere classified into dehydration response, plant antioxidant system, chromosome or chromatin replication and收稿日期：2023-05-19基金项目：河北省省级科技计划资助项目-果菜类蔬菜现代种业科技创新团队（21326309D）；河北省农林科学院现代农业科技创新专项课题资助（2022KJCXZX-JZS-2）；河北省农林科学院基本科研业务费项目（2021050202）.第一作者：宋雪（1986—），女，河北石家庄人，助理研究员，从事蔬菜栽培技术、遗传育种及分子生物学研究.E-mail：****************通信作者：武彦荣（1968—），女，河北井陉人，研究员，从事西甜瓜和茄子育种、栽培及推广研究.E-mail：********************本刊网址：文章编号：1000-1573(2023)06-0066-08DOI：10.13320/ki.jauh.2023.009467第6期经济作物研究所瓜类课题组保存的自交系CR 和NCR 。

茄科植物转录因子MYB_基因家族研究现状

2023年第18期现代园艺茄科植物转录因子MYB基因家族研究现状江舟，韩丽君（云南中医药大学，云南昆明650500）摘要:植物转录因子myb是一种DNA结合蛋白，最常出现在植物类型中，也是植物中覆盖面积最广的转录因子家族，和真核基因启动子区域特异性相互作用，是通过彼此间相互作用调控基因表达的一种转录因子。

实践证明，转录因子MYB基因家族成员积极参与茄科植物生长发育过程，目前已成为茄科植物的重要成员。

主要分析前人的研究成果，如归纳MYB转录因子的结构特征、生物学特性、调控机制等，结合国内外相关研究进展，全面分析茄科植物转录因子MYB基因家族的研究现状。

关键词:茄科植物；MYB；转录因子植物在生长发育过程中经常遭受各种逆境影响，如低温、盐渍、强光、干旱等环境，产生多样化特有基因表达模式，用来抵御各种不良环境。

转录因子是通过特异性方式和基因端上游的特定因子结合，是最典型的调节蛋白，具有特殊结构，能调控基因表达，对基因表达效应具有较强的抑制作用。

同时，MYB基因家族作为一个特殊的转录因子家族，在涉及到各种植物类型，其功能趋于多样化，和植物生长发育有必然联系，在大多数MYB 转录因子结构中都有保守的MYB结构域。

研究表明，真核生物基因表达关键因子是不同逆境相关基因启动子中顺式因子和转录因子的协同作用，MYB转录因子通过和这些顺式因子专一性结合，进而调控植物生长发育的应答机制，让其能正常生理代谢，从而限制基因的转录过程[1]。

作为蔬菜作物中最重要种类，茄科植物经济价值仅次于本科和豆科植物，有约3000种植物，如土豆、西红柿、辣椒、茄子、枸杞、烟草、碧冬茄等。

茄科植物类型多种多样，且物种内表型存在严重差异性，但茄科植物在基因组水平基本相同，在这里能明确看到其存在明显反差，能将其少数作物作为一种模式作物，植物能适应复杂环境的生活条件，研究植物中存在遗传变异现象。

随着基因组学和生物信息学的不断发展，MYB转录因子的分离、克隆和功能的研究，已逐渐成为人们关注的热点[2]。

茄科作物常见病害早期检测技术的研究进展

沈梦姣，侯海敏，赵　宏，等．茄科作物常见病害早期检测技术的研究进展［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（９）：１７－２５．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．０９．００３茄科作物常见病害早期检测技术的研究进展沈梦姣１，侯海敏１，赵　宏２，张楷文１，张　艳１（１．贵阳学院农产品无损检测工程研究中心，贵州贵阳５５０００５；２．贵州省贵阳市蔬菜技术推广站，贵州贵阳５５０００７）摘要：以番茄、马铃薯、烟草为主的茄科作物在全球经济作物中占据重要地位。

然而，茄科作物在生长过程中易受早疫病、晚疫病等多种病害侵染，病害的发病率高且危害范围广，严重制约了其生产发展的稳定性。

利用实时、快速、无损的检测技术在茄科作物病害显症之前进行早期诊断，可以显著降低产量损失、提高质量，对科学指导生产具有重要意义。

本文首先对茄科作物的常见病害的类型、病原菌、主要危害作物及发病症状进行概述，给出对应的病害典型图片；再简单介绍作物病害的传统检测技术，并与新型检测技术作对比分析，总结优缺点；接着系统阐述如可见光图像识别技术、红外热成像技术及高光谱成像技术等新型检测技术的基本原理与相关研究进展及其应用局限。

其中，重点介绍高光谱成像技术用于作物病害检测的原理机制和常规检测流程，综述其应用于茄科作物病害早期检测的国内外研究进展，总结列出了部分茄科作物病害研究的重要检测波段；最后，指出了目前试验方法存在的不足并探讨了未来研究发展的方向。

关键词：茄科作物；常见病害；早期检测技术；高光谱成像；红外热成像中图分类号：Ｓ１２７；ＴＰ３９１．４１文献标志码：Ａ文章编号：１００２－１３０２（２０２３）０９－００１７－０８收稿日期：２０２２－０６－２８基金项目：国家自然科学基金（编号：６２１４１５０１）；贵阳学院科研资金（编号：ＧＹＵ－ＫＹ－［２０２２］）。

作者简介：沈梦姣（１９９８—），女，安徽池州人，硕士研究生，主要从事作物病害的早期无损检测方面的研究。

利用VIGS技术分析野生茄Ve基因的抗黄萎病功能_刘军

华北农学报 ·2 0 1 4 ，2 9 ( 1 ) : 2 1 7 -2 2 1
利用 VIGS 技术分析野生茄周晓慧1 ，冯翠1 ，武文2 ，庄勇1
（ 1．江苏省农业科学院蔬菜研究所，江苏南京 210014； 2．中南林业科技大学风景园林学院，湖南长沙 410004 ）
收稿日期： 2013 － 11 － 22 基金项目：国家自然科学基金项目（ 31101542 ）；国家高技术研究发展计划项目（ 2012AA100103 ）；江苏省自然科学基金项目
（ BK2011675）；江苏省农业科技自主创新资金项目（ CX （ 13） 2003）作者简介：刘军（ 1985 －），男，重庆綦江人，研究实习员，硕士，主要从事茄子遗传育种与生物技术研究。通讯作者：庄勇（ 1973 －），男，江苏东台人，研究员，博士，主要从事茄子遗传育种与生物技术研究。
LIU Jun1 ，ZHOU Xiao-hui1 ，FENG Cui1 ，WU Wen2 ，ZHUANG Yong1
（ 1． Institute of Vegetable Crops，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Nanjing 210014，China； 2． College of Landscape Architecture，Central South University of Forestry and Technology，Changsha 410004，China）
Key words： S． linnaeanum； VIGS； Verticillium wilt； Ve

烟草DGAT基因家族全基因组鉴定与分析

烟草DGAT基因家族全基因组鉴定与分析作者：牛永志王国平郑昀晔马文广来源：《中国烟草科学》2020年第01期摘要：二酰甘油酰基转移酶（DGAT）是三酰甘油合成的关键酶和唯一限速酶。

在烟草中鉴定DGAT 基因对于研究油脂代谢途径和创造具有附加值的新型油料作物具有重要意义。

本研究从烟草基因组鉴定DGAT 家族基因，并对序列特性、基因结构、亚细胞定位、进化模式、表达模式等进行分析。

结果表明，共获得25 个烟草DGAT 家族蛋白，其平均氨基酸长度为485，大部分为碱性蛋白和亲水性蛋白，有13 个DGAT 蛋白定位到8 条连锁群上;有16 个蛋白定位到内质网，6 个定位叶绿体，3 个定位到胞外;烟草DGAT 蛋白包含典型的WS_DGAT 结构域和LPLAT 结构域;系统发育树将DGAT 家族分为DGAT1、DGAT2、DGAT3 和WSD 等4 个类群，但烟草DGAT 仅划分到DGAT2 和WSD 两个类群;不同烟草DGAT基因的时空表达特性有所差异，并表现出一定的组织特异性，主要集中在衰老叶片和花器官中大量表达。

关键词：基因家族;DGAT;烟草;生物信息植物油脂不仅可作为细胞膜组成的脂肪酸供体，还可以以三酰甘油（Triacylglycerol，TAG）的形式存贮，作为真核生物主要的能量来源，对植物生长发育具有重要作用[1]。

同时，植物油含有丰富的不饱和脂肪酸，是人类健康饮食的重要物质。

植物油脂经甲基化处理后也可作为一种可再生生物柴油，在替代石油燃料方面具有潜在价值[2]。

因此，了解油脂的生物合成也将有助于创造具有附加值的新型油料作物。

三酰甘油是油脂贮藏的一种主要形式。

虽然在不同的器官和组织中，三酰甘油的生物合成存在多种途径[3]，但最经典的还是三磷酸甘油途径（Kennedy途径）[4]。

在该途径中，二酰甘油酰基转移酶（Diacylglycerol acyltransferase， DGAT）催化最后一步反应，将二酰甘油转化为三酰甘油，是影响三酰甘油含量的关键酶，也是唯一的限速酶[5]。

茄子品种资源对黄萎病的抗性鉴定

茄子品种资源对黄萎病的抗性鉴定郭堂勋;王益奎;莫贱友;王艳娜;黄穗萍;李其利;唐利华【摘要】[目的]评价茄子品种资源及杂交后代材料对黄萎病的抗病性,为茄子抗病育种提供参考.[方法]收集茄子品种资源材料14份和杂交后代材料24份,应用不同地域的4个病原菌菌株,采用伤根孢子液接种法进行茄子品种资源抗黄萎病性鉴定.[结果]在供试的茄子品种资源中,接种变黑轮枝菌,表现免疫—抗病的材料11份,占总数的78.57％;接种大丽轮枝菌1,表现高抗—抗病的材料5份,占总数的38.46％;接种大丽轮枝菌2,表现抗病的材料1份,占总数的7.69％;接种黑白轮枝菌,表现高抗—抗病的材料3份,占总数的23.08％.在茄子杂交后代材料中,接种大丽轮枝菌2,表现抗病的材料2份;接种黑白轮枝菌,表现高抗—抗病的材料2份.蒜芥茄、南美红茄对4个供试菌株均表现免疫—耐病,栽培茄01对变黑轮枝菌、大丽轮枝菌1、黑白轮枝菌表现抗病—耐病;在供试的杂交后代材料中,未发现免疫材料.[结论]蒜芥茄、南美红茄和栽培茄01对黄萎病抗性较强,可作为抗病育种资源利用.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2015(046)011【总页数】5页(P1975-1979)【关键词】茄子;品种资源;黄萎病;抗病性【作者】郭堂勋;王益奎;莫贱友;王艳娜;黄穗萍;李其利;唐利华【作者单位】广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西作物病虫害生物学重点实验室,南宁530007;广西农业科学院蔬菜研究所,南宁530007;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西作物病虫害生物学重点实验室,南宁530007;广西大学,南宁530005;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西作物病虫害生物学重点实验室,南宁530007;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西作物病虫害生物学重点实验室,南宁530007;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007【正文语种】中文【中图分类】S436.411【研究意义】茄子黄萎病是由轮枝菌（Verticillium）侵染引起的一种土传性病害。

茄子种质资源抗黄萎病鉴定结果_陈灵芝

解性氮、速效钾含量呈逐年下降趋势 ,全磷、速效磷和 p H基本稳定。建议采用加厚土层 ,改良质地 ;增施有机肥 ,提高土壤有机质含量 ;合理施用化肥等方法进行改良。
关键词: 土壤养分 ; 状况 ; 建议中图分类号: S158. 3 文献标识码: A 文章编号: 1001-1463( 2006) 01-0023-02
土壤养分是植物营养的主要来源 ,在农业生产中 ,为了满足农作物对营养的需求 ,在土壤养分不足时 ,就要补充施肥 ,而经济合理的施肥必须以土壤养分状况为依据。为了给甘肃陇东陇南地区土壤养分普查、配方施肥和土壤改良提供科学合理的建议 ,我们对天水农校教学实习农场农田 20 cm 耕层土壤养分状况进行了抽样调查 ,并对养分含量及变化规律进行了分析。 1 调查研究方法
果实外观
色泽
形状
红
樱桃
紫
棒
紫
长棒
紫
灯泡
浅紫
长棒
淡紫紫紫紫
细 ,长棒粗 ,长棒粗 ,长棒
圆
紫
棒
表 2 抗病和耐病材料的综合性状
果长果宽单果重
株高×株幅
( cm) 3. 0
( cm ) 2. 6
(g) 15. 5
( cm) 142. 0× 121. 0
20. 0
4. 3 280. 5
99. 0× 36. 3
材料表现高抗 , 3份表现中抗 , 6份表现耐病 , 25份表现中感 , 8份表现感病。对高抗和中抗材料可作为茄子抗黄萎病育种的抗源加以利用 ,对其它材料可通过农艺性状的筛选和改良 ,提供生产利用或作为遗传资源改良的材料加以利用。
关键词: 茄子 ; 黄萎病 ; 抗性鉴定中图分类号: S641. 1 文献标识码: A 文章编号: 1001-1463( 2006) 01-0021-03

茄子3个Aux-IAA基因的克隆及表达分析

茄⼦3个Aux-IAA基因的克隆及表达分析园艺学报，2015，42 (10)：2049–2058.Acta Horticulturae Sinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0338；http：//www. ahs. ac. cn 2049茄⼦3个Aux/IAA基因的克隆及表达分析张⽴慧1,*，⽥时炳2,*，王志敏1,**，安礼渝1，汤青林1，王永清2，杨洋2，宋明1,**（1西南⼤学园艺园林学院，南⽅⼭地园艺学教育部重点实验室，重庆市蔬菜学重点实验室，重庆 400715；2重庆市农业科学院蔬菜花卉研究所，重庆 400055）摘要：以茄⼦单性结实品系‘D-7-1’为材料，克隆到3个新的Aux/IAA基因，分别命名为SmIAA3、SmIAA4和SmIAA9，其CDS长度分别为573、564和915 bp，分别编码190、187和304个氨基酸；系统进化树分析表明，3个蛋⽩均属于Aux/IAA家族蛋⽩，与番茄亲缘关系较近，且均具有Aux/IAA家族蛋⽩的DomainⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ保守结构域；其分⼦量分别为21.50、20.95和32.67 kD，理论等电点分别为7.62、6.02和8.57。

实时定量PCR分析表明：SmIAA9基因在单性结实和⾮单性结实品系茄⼦中的表达量差异明显，开花前单性结实品系的表达量显著⾼于⾮单性结实品系，推测其与茄⼦单性结实相关。

关键词：茄⼦；单性结实；Aux/IAA；克隆；⽣物信息学；表达分析中图分类号：S 641.1 ⽂献标志码：A ⽂章编号：0513-353X（2015）10-2049-10Gene Cloning and Expression Analysis of Three Aux/IAA Genes in EggplantZHANG Li-hui1,*，TIAN Shi-bing2,*，WANG Zhi-min1,**，AN Li-yu1，TANG Qing-lin1，WANG Yong-qing2，YANG Yang2，and SONG Ming1,**（1College of Horticulture and Landscape Architecture，Southwest University，Key Laboratory of Horticulture Science for Southern Mountainous Regions，Ministry of Education，Chongqing Key Laboratory of Olericulture，Chongqing 400715，China；2The Institute of Vegetables and Flowers，Chongqing Academy of Agricultural Sciences，Chongqing 400055，China）Abstract：Three Aux/IAA genes SmIAA3，SmIAA4 and SmIAA9 in eggplant were cloned from parthenocarpic eggplant‘D-7-1’. The full CDS length of SmIAA3，SmIAA4 and SmIAA9 was 573，564 and 915 bp，which encoded three polypeptides of 190，187 and 304 amino acids. The phylogenetic analysis showed that the three proteins belonged to Aux/IAA family proteins and they had the highest similarity with Aux/IAA proteins of tomato. And the three novel proteins contained conserved domainⅠ，Ⅱ，Ⅲ and Ⅳof Aux/IAA family proteins. The molecular weight of the three proteins were 21.50，20.95 and 32.67 kD with isoelectric point 7.62，6.02 and 8.57 respectively. The RT-PCR analysis showed that the expression of SmIAA9 gene was different between parthenocarpic and nonparthenocarpic eggplant. Evidently the parthenocarpic was higher than the nonparthenocarpic before flowering，which indicated that收稿⽇期：2015–06–30；修回⽇期：2015–10–09基⾦项⽬：国家⾃然科学基⾦项⽬（31501756）；国家现代农业产业技术体系建设专项资⾦项⽬（CARS-25-A-06）；中央⾼校基本科研业务费专项（XDJK2014C092）* 共同第⼀作者** 通信作者Author for correspondence（E-mail：minzniwang_555@/doc/0fb03d9887c24028915fc3dd.html ；swausongm@/doc/0fb03d9887c24028915fc3dd.html ）Zhang Li-hui，Tian Shi-bing，Wang Zhi-min，An Li-yu，Tang Qing-lin，Wang Yong-qing，Yang Yang，Song Ming.Gene cloning and expression analysis of three Aux/IAA genes in eggplant. 2050Acta Horticulturae Sinica，2015，42 (10)：2049–2058. SmIAA9 would be a gene related with parthenocarpy.Key words：eggplant；parthenocarpy；Aux/IAA；cloning；bioinformaticanalysis；expression analysis⽣长素信号转导主要受Aux/IAA、SAUR和GH3等3类基因家族的调控（Ramos et al.，2001），其中Aux/IAA基因家族是⽣长素信号转导通路的重要调节因⼦。

茄科植物中hct基因家族的鉴定及进化和表达分析

李　倩，盖江涛，白蓓蓓，等．茄科植物中ＨＣＴ基因家族的鉴定及进化和表达分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１９，４７（１９）：６５－６８．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１９．１９．０１５茄科植物中ＨＣＴ基因家族的鉴定及进化和表达分析李　倩１，２，盖江涛２，白蓓蓓２，叶秀旭２，王　鹏２（１．黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆１６３０００；２．中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所／农业部华南作物基因资源与种质创制重点实验室，海南儋州５７１７３７）摘要：莽草酸／奎宁酸羟基肉桂酰转移酶（ｓｈｉｋｉｍｉｃａｃｉｄ／ｑｕｉｎｉｃａｃｉｄｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，简称ＨＣＴ）是辣椒素苯丙烷代谢途径中关键的限速酶，其催化的产物对茄科植物具有重要的生理学意义。

为了探清ＨＣＴ在茄科植物基因组中的状况，重点考察了其在茄科植物基因组中的分布，并利用生物信息学分析的方法，对ＨＣＴ基因进行全面的鉴定，共获得拟南芥、烟草、番茄和辣椒的１３条基因序列。

其次，构建了ＨＣＴ在茄科植物中的系统发育树，并对其进行相关的结构、功能和表达的分析。

结果揭示了茄科植物中ＨＣＴ基因的亲缘关系；ＨＣＴ基因编码的蛋白结构域高度保守，该保守性体现在植物的结构和功能上。

本研究为进一步研究茄科植物中的ＨＣＴ基因的酶学及生理功能提供了基础。

关键词：茄科植物；莽草酸／奎宁酸羟基肉桂酰转移酶；ＨＣＴ基因；辣椒素；进化；表达中图分类号：Ｓ６４１．３０１文献标志码：Ａ文章编号：１００２－１３０２（２０１９）１９－００６５－０３收稿日期：２０１８－０７－０３基金项目：中国热带农业科学院基本科研业务专项（编号：１６３００３２０１８０２３）。

作者简介：李　倩（１９９４—），女，安徽池州人，硕士研究生，研究方向为植物基因组学。

Ｅ－ｍａｉｌ：ａ８２７６８０８３１＠１６３．ｃｏｍ。

通信作者：王　鹏，博士，副研究员，主要从事植物天然产物生物技术、植物基因组学。

茄科植物PAL基因家族的鉴定和序列分析

茄科植物PAL基因家族的鉴定和序列分析作者：盖江涛陈振玺王鹏来源：《热带作物学报》2015年第03期摘要苯丙氨酸解氨酶（PAL，phenylalanine ammonia-lyase[EC：4.3.1.24]）是植物次生代谢尤其是苯丙烷途径的关键酶，与植物抵抗病原菌入侵密切相关，具有重要的植物生理学意义；其催化产物是辣椒素等植物天然产物的前体。

采用BLASTP方法，依托全基因组数据库，获得了番茄、马铃薯、本氏烟草、辣椒等4种茄科植物及杨树、拟南芥的PAL基因家族成员共27条序列，并对其进行初步的生物信息学分析、理化性质分析及结构分析。

结果表明：在进化过程中，茄科植物烟草、番茄、马铃薯和辣椒的亲缘关系较近，拟南芥、杨树与茄科植物的亲缘关系较远；酸性蛋白质占96.3%，所有蛋白均为亲水性稳定蛋白、有明显跨膜现象、无信号肽；所有PAL亚细胞定位于细胞质中，具有活性位点的蛋白占96.3%。

本研究结果为进一步研究茄科植物中PAL代谢机理提供理论支持。

关键词苯丙氨酸解氨酶；PAL；基因家族；氨基酸；茄科中图分类号 Q949.777.7 文献标识码 AAbstract Phenylalanine ammonialyase（PAL， EC：4. 3. 1. 24）is a critical enzyme in secondary metabolism of plants， which has significant biological relevance and strong ability against bacteria； also， its product provides precursor for plant natural products such as capsaicinoids. In this study， based on the genome database， 27 peptide sequences belonging to phenylalanine ammonialyase gene family were obtained from Lycopersicon esculentum Mill. （syn. Solanum lycopersicum L.）， Solanum tuberosum L.， Nicotiana benthamiana Domin， Capsicum annuum L.， Populus trichocarpa L and Arabidopsis thaliana（L.）Heynh by BLASTP， and analysed by bioinformatics， physico-chemical properties， structural analysis. The analysis showed that tobacco， tomatoes， potatoes and peppers have close genetic relationship， then Arabidopsis thaliana， poplar is further in evolution. Acidic protein is 96.3%. All PAL proteins are located in cytoplasm， hydrophilic， stable， transmembrane， no signal， and 96.3% of the protein has the active site. The anaytical results provide data for the next study of Solanaceae metabolic mechanism.Key words Phenylalanine ammonia-lyase；PAL；Gene family；Amino acid；Solanaceaedoi 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.03.005苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase，PAL，EC：4.3.1.24）是一种与植物抗病性相关的酶。

基于形态学标记的茄子种质资源遗传多样性分析

基于形态学标记的茄子种质资源遗传多样性分析作者：郑于莉刘燕姚慧静周刚袁鹤张新杰来源：《安徽农业科学》2021年第21期摘要为拓宽茄子遗传基础，加快选育适合内蒙古地区种植的茄子新品种，对65份茄子种质资源的20个形态学性状进行遗传多样性分析，结果表明：20个性状在供试材料之间存在丰富的遗传变异，变异范围在16.40%～102.68%，果形、单果重、果实纵径、果实横径、果形指数等与果实有关的性状均表现出较高的遗传变异;果皮色、果萼颜色、首花节位与茎色呈极显著正相关，果形与果肉色、果顶形状呈极显著正相关;单果重与果顶形状、果形呈极显著负相关;聚类结果较分散，大致可分为5个大类9个亚类，近缘野生茄和栽培茄与其近缘野生茄划分明显。

关键词茄子;种质资源;形态学性状;遗传多样性中图分类号 S 602.4 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2021）21-0128-05doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.21.031开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Analysis of Genetic Diversity of Eggplant Germplasm Resources Based on Morphological MarkersZHENG Yu-li，LIU Yan，YAO Hui-jing et al（Baotou Science and Technology Research Institute of Agriculture and Animal Husbandry，Baotou， Inner Mongolia 014013）Abstract In order to broaden the genetic basis of eggplant and speed up the breeding of new eggplant varieties suitable for planting in Inner Mongolia， this study used 65 eggplant germplasm resources as test materials to analyze the genetic diversity of 20 morphological traits. The results showed that there are abundant genetic variation among the tested materials. The variation range is between 16.40% and 102.68%. Fruit-related traits such as fruit shape， single fruit weight， fruit length， fruit width， and fruit shape index show high genetic variation; peel color， calyx color，first flower node position and stem color are extremely significant positive correlation， fruit shape，fruit flesh color and the shape of the top of the fruit is very significantly positively correlated; the weight of a single fruit is highly negatively correlated with the shape of the top and the shape of the fruit; the clustering results are relatively scattered and can be roughly divided into 5 categories and 9 subcategories. There is a clear distinction between wild eggplant and cultivated eggplant and its relative wild eggplant.Key words Eggplant;Germplasm resources;Morphological traits;Genetic diversity 基金項目内蒙古农牧业科学院青年创新基金（2018QNJJN12）。

茄子斑驳皱缩病毒病病原物的鉴定及分子进化分析

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２３ꎬ３９(３):６７４￣６８２ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ邵宇纯ꎬ仲健新ꎬ路云爽ꎬ等.茄子斑驳皱缩病毒病病原物的鉴定及分子进化分析[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２３ꎬ３９(３):６７４￣６８２.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２３.０３.００７茄子斑驳皱缩病毒病病原物的鉴定及分子进化分析邵宇纯ꎬ㊀仲健新ꎬ㊀路云爽ꎬ㊀宋美娜ꎬ㊀陈雅寒(甘肃农业大学植物保护学院ꎬ甘肃兰州７３００７０)收稿日期:２０２２￣０８￣１５基金项目:甘肃农业大学省级大学生创新创业训练计划项目(Ｓ２０２２１０７３３０２７)ꎻ国家自然科学基金项目(３２１６０６２８)ꎻ甘肃省自然科学基金项目(２１ＪＲ７ＲＡ８２０)ꎻ甘肃省高等学校创新基金项目(２０２１Ｂ￣１１７)ꎻ甘肃农业大学人才启动资金项目(ＧＡＵ￣ＫＹＱＤ￣２０１９￣２２)作者简介:邵宇纯(２００１－)ꎬ女ꎬ山西太原人ꎬ本科生ꎬ研究方向为植物病理学ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)１０５４０３０９４７＠ｑｑ.ｃｏｍ通讯作者:陈雅寒ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｙｈｃｈｅｎ１０１８＠ｎｗａｆｕ.ｅｄｕ.ｃｎ㊀㊀摘要:㊀为了鉴定引起茄子斑驳皱缩病毒病的病原物ꎬ利用ｓｉＲＮＡ高通量测序技术(ＳｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡꎬｓｉＲ￣ＮＡ)ꎬ结合生物信息学的方法发现２个表现斑驳和皱缩的茄子样品中存在蚕豆萎蔫病毒２号(ＢｒｏａｄｂｅａｎｗｉｌｔｖｉｒｕｓꎬＢＢＷＶ２)㊁葡萄Ａ病毒(ＧｒａｐｅｖｉｎｅｖｉｒｕｓＡꎬＧＶＡ)和烟草花叶病毒(ＴｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＴＭＶ)ꎮ采用ＲＴ￣ＰＣＲ技术对该结果进行验证ꎬ２个样品中均检测到ＢＢＷＶ２和ＴＭＶꎬ未检测到ＧＶＡꎮ通过对ＢＢＷＶ２外壳蛋白(ＬａｒｇｅｃｏａｔｐｒｏｔｅｉｎꎬＬＣＰ)大亚基基因进行测序和分子进化分析ꎬ获得了２条１１２６ｂｐ的ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因片段ꎬ２条ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列一致性分别为９９６％和９９３％ꎻ与ＮＣＢＩ中已发表的２３个ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列一致性分别为７９９％~９５２％和８０５％~９７２％ꎮ基于ＬＣＰ基因核苷酸序列进行种群结构和遗传多样性分析ꎬ结果表明在系统发育进化树中ꎬＢＢＷＶ２可分为两大支ꎮ不同寄主ＢＢ￣ＷＶ２ＬＣＰ基因的遗传距离在００４９~０３３２ꎮ关键词:㊀茄子ꎻ斑驳皱缩病毒病ꎻ蚕豆萎蔫病毒２号ꎻ烟草花叶病毒ꎻＬＣＰ基因中图分类号:㊀Ｓ６４１.１㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２３)０３￣０６７４￣０９Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｖｉｒｕｓｅｓｃａｕｓｉｎｇｅｇｇ￣ｐｌａｎｔｍｏｔｔｌｅｃｒｉｎｋｌｅｄｉｓｅａｓｅＳＨＡＯＹｕ￣ｃｈｕｎꎬ㊀ＺＨＯＮＧＪｉａｎ￣ｘｉｎꎬ㊀ＬＵＹｕｎ￣ｓｈｕａｎｇꎬ㊀ＳＯＮＧＭｅｉ￣ｎａꎬ㊀ＣＨＥＮＹａ￣ｈａｎ(ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＬａｎｚｈｏｕ７３００７０ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀Ｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｖｉｒｕｓｅｓｃａｕｓｉｎｇｅｇｇｐｌａｎｔｍｏｔｔｌｅｃｒｉｎｋｌｅｄｉｓｅａｓｅꎬｔｈｅｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆｓｍａｌｌｉｎｔｅｒ￣ｆｅｒｉｎｇＲＮＡ(ｓｉＲＮＡ)ａｎｄｔｈｅｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｖｉｒａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓꎬｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｂｒｏａｄｂｅａｎｗｉｌｔｖｉｒｕｓ２(ＢＢＷＶ２)ꎬｇｒａｐｅｖｉｎｅｖｉｒｕｓＡ(ＧＶＡ)ａｎｄｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ(ＴＭＶ).ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｖａｌｉｄａｔｅｄｂｙＲＴ￣ＰＣＲ.ＢＢ￣ＷＶ２ａｎｄＴＷＶｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｓꎬａｎｄＧＶＡｗａｓｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄ.Ｔｈｒｏｕｇｈｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙａｎａｌｙ￣ｓｉｓｏｆｔｈｅｌａｒｇｅｓｕｂｕｎｉｔｇｅｎｅｏｆＢＢＷＶ２ｃｏａｔｐｒｏｔｅｉｎ(ＬＣＰ)ꎬｔｗｏ１１２６ｂｐＢＢＷＶ２ＬＣＰｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ.Ｔｈｅｎｕ￣ｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄｃｏｄｉｎｇａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅｔｗｏＢＢＷＶ２ＬＣＰｇｅｎｅｓｗｅｒｅ９９.６％ａｎｄ９９.３％ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｔｈｅｎｕ￣ｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅ２３ＢＢＷＶ２ＬＣＰｇｅｎｅｓｐｕｂｌｉｓｈｅｄｉｎＮＣＢＩｗｅｒｅ７９.９％－９５２％ａｎｄ８０.５％－９７２％ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｂａｓｅｄｏｎＬＣＰｇｅｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＢＢＷＶ２ｃｏｕｌｄｂｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｂｒａｎｃｈｅｓｉｎｔｈｅｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅ.ＴｈｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｏｆＢＢＷＶ２ＬＣＰｇｅｎｅｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｏｓｔｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ００４９ｔｏ０.３３２.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀ｅｇｇｐｌａｎｔꎻｍｏｔｔｌｅｃｒｉｎｋｌｅｄｉｓｅａｓｅꎻｂｒｏａｄｂｅａｎｗｉｌｔｖｉｒｕｓ２ꎻｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎻＬＣＰｇｅｎｅ㊀㊀茄子(ＳｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａＬ.)为茄科(ＳｏｌａｎａｃｅａｅＪｕｓｓ.)ꎬ茄属(ＳｏｌａｎｕｍＬ.)植物[１]ꎮ据统计ꎬ近年来中国茄子种植面积约占７.４ˑ１０５ｈｍ２ꎬ产量约为２.０ˑ１０８４７６ｔ[２]ꎬ所带来的经济效益十分可观ꎮ随着种植面积的不断增加ꎬ病毒病严重影响了茄子的产量和品质ꎮ蚕豆萎蔫病毒２号(Ｂｒｏａｄｂｅａｎｗｉｌｔｖｉｒｕｓ２ꎬＢＢＷＶ２)属于豇豆花叶病毒科(Ｃｏｍｏｖｉｒｉａｄａｅ)蚕豆病毒属(Ｆａｂａ￣ｖｉｒｕｓ)ꎬ在自然界主要通过多种蚜虫非持续性传播ꎬ可侵染４４科１８６属３２８种植物ꎬ被侵染后植物多表现为不同程度的变色㊁畸形㊁萎蔫且叶片多附有黑褐色坏死斑点ꎬ严重影响了植物的正常生长[３￣９]ꎮＢＢＷＶ２基因组由２段单链ＲＮＡ分子组成ꎬＲＮＡ１(５８００ｎｔ)表达蛋白酶辅因子(Ｃｏ￣Ｐｒｏ)㊁解旋酶(Ｈｅｌｉｃａｓｅ)㊁ＮＴＰ结合基序(ＮＴＢＭ)㊁蛋白酶(Ｐｒｏ)和ＲＮＡ依赖性ＲＮＡ聚合酶(ＲＴ)等５种功能蛋白质ꎬ主要参与基因组的复制和表达ꎻＲＮＡ２(３３００ｎｔ)表达运动蛋白(Ｍｏｖｅ￣ｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎꎬＭＰ)㊁外壳蛋白大亚基(Ｌａｒｇｅｃｏａｔｐｒｏ￣ｔｅｉｎꎬＬＣＰ)和外壳蛋白小亚基(ＳｍａｌｌｃｏａｔｐｒｏｔｅｉｎꎬＳＣＰ)等３种功能蛋白质[１０￣１２]ꎮ㊀㊀目前ꎬ检测植物病毒的方法有传统病毒血清学鉴定法(Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓ)㊁透射电镜法(Ｔｒａｎｓｍｉｓ￣ｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙꎬＴＥＭ)㊁酶联免疫吸附测定法(ＥｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｓꎬＥＬＩＳＡ)㊁逆转录环介导等温扩增技术(Ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ￣ｌｏｏｐ￣ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬＲＴ￣ＬＡＭＰ)和聚合酶链式反应法(ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎꎬＰＣＲ)等[１３￣１５]ꎮ这些方法仅适用于对已知病原物的病毒检测ꎬ而对未知病原物的检测则受到了极大的限制ꎮｓｉＲＮＡ高通量测序技术(ＳｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡꎬｓｉＲ￣ＮＡ)与传统的病原检测方法不同ꎬ是利用高通量测序技术检测病毒产生的ｓｉＲＮＡ序列ꎬ并对测序结果进行拼接ꎬ与数据库进行比对从而筛选和鉴定病毒种类[１６￣２０]ꎬ其灵活性高ꎬ适用性强ꎮ本研究利用ｓｉＲＮＡ高通量测序技术对２０２０年７月在甘肃省临洮市采集到的２株表现斑驳和皱缩等疑似病毒病症状的茄子样品进行深度测序ꎬ采用ＲＴ￣ＰＣＲ技术对测序结果进行验证ꎬ旨在明确引起茄子斑驳皱缩病毒病的病毒种类ꎬ为茄子斑驳皱缩病毒病的快速诊断和防控提供科学的理论依据ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料２０２０年７月在甘肃省临洮县采集到２株表现斑驳和皱缩等疑似病毒病症状的茄子叶片(图１)ꎬ液氮速冻ꎬ保存于－８０ħ超低温冰箱备用ꎮ图１㊀健康茄子叶片(Ａ)和染病茄子叶片(Ｂ)Ｆｉｇ.１㊀Ｔｈｅｈｅａｌｔｈｙｅｇｇｐｌａｎｔｌｅａｆ(Ａ)ａｎｄｉｎｆｅｃｔｅｄｅｇｇｐｌａｎｔｌｅａｆ(Ｂ)１.２㊀样品总ＲＮＡ的提取及ｓｉＲＮＡ测序按照ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＴＲＩｚｏｌＴＭ说明书提取样品总ＲＮＡꎬ利用Ｕｎａｎｏ￣２０００微量核酸分析仪(ＵＭＩꎬ美国)测定ＲＮＡ浓度ꎬ提取的ＲＮＡ送至北京百迈客生物科技有限公司完成ｓｉＲＮＡ的分离㊁高通量测序以及ｃＤＮＡ文库的构建ꎬ测序平台为ＩｌｌｕｍｉｎａＨｉｓｅｑ２５００ꎮ１.３㊀病毒种类筛选对测序得到的粗序列ｒａｗｒｅａｄ进行过滤ꎬ去除质量值低㊁无３ᶄ接头序列和插入片段的ｒｅａｄꎬ筛选长度在１８~３５ｎｔ的ｓｉＲＮＡꎮ使用ｖｅｌｖｅｔ软件对所得ｓｉＲＮＡ进行拼接ꎬ将拼接所得ｃｏｎｔｉｇ进行分类注释ꎮ具体方法如下:(１)将获得的ｃｏｎｔｉｇ与茄子基因组序列进行比对ꎬ去除寄主基因组序列ꎮ(２)用ＢＬＡＳＴＮ将剩余的ｃｏｎｔｉｇ与ＮＣＢＩＮｔ(ＮＣＢＩｎｏｎ￣ｒｅｄｕｎｄａｎｔｎｕ￣ｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ)进行比对ꎬ获得高度同源的序列ꎮ(３)用ＢＬＡＳＴＸ将２中未注释到的ｃｏｎｔｉｇ与ＮＣＢＩＮｒ(ＮＣＢＩｎｏｎ￣ｒｅｄｕｎｄａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ)进行比对ꎬ获得部分同源的序列ꎮ(４)选出高度同源和部分同源序列中ｅ值最小的ｃｏｎｔｉｇꎬ分别与ＧｅｎＢａｎｋＶｉｒｕｓＲｅｆＳｅｑ核酸数据库(ＶｉｒｕｓＲｅｆＳｅｑＮｕｃｌｅｔｉｄｅ)和ＧｅｎＢａｎｋＶｉｒｕｓＲｅｆＳｅｑ蛋白质数据库(ＶｉｒｕｓＲｅｆＳｅｑＰｒｏｔｅｉｎ)进行比对ꎬ筛选和鉴定病毒种类ꎮ１.４㊀ＲＴ￣ＰＣＲ的检测及克隆测序ｓｉＲＮＡ高通量测序结果显示样品中存在ＢＢ￣ＷＶ２㊁葡萄Ａ病毒(ＧＶＡ)和烟草花叶病毒(ＴＭＶ)３种病毒ꎮ根据ＮＣＢＩ中收录的ＢＢＷＶ２和ＧＶＡ基因组全序列ꎬ使用ＶｅｃｔｏｒＮＴＩ软件设计２对简并引物ꎮＴＭＶ的特异性引物(表１)参考已报道文献ꎬ引物委托西安擎科生物科技有限责任公司合成ꎮ５７６邵宇纯等:茄子斑驳皱缩病毒病病原物的鉴定及分子进化分析按照ＴａＫａＲａＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔ说明书将总ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡꎬ反应体系(２０μｌ):取１μｇＲＮＡ为模板ꎬ加入５ˑＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＢｕｆｆｅｒ４μｌ㊁ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴＥｎｚｙｍｅＭｉｘⅠ１μｌ㊁ＯｌｉｇｏｄＴＰｒｉｍｅ１μｌꎬＲａｎｄｏｍ６ｍｅｒｓ１μｌ㊁ＲＮａｓｅＦｒｅｅｄｄＨ２Ｏ补全至２０μｌꎻ反应程序:３７ħ１５ｍｉｎꎬ８５ħ４ｓꎮ合成的ｃＤ￣ＮＡ保存于－２０ħ冰箱备用ꎮ以ｃＤＮＡ为模板进行ＲＴ￣ＰＣＲ扩增ꎬ反应产物经２％琼脂糖凝胶电泳ꎬＥＢ染色ꎬ观察结果并拍照ꎮ用胶回收试剂盒(ＴａＫａＲａ)将目标产物切胶回收ꎬ纯化产物经连接转化㊁单克隆挑选和摇菌后ꎬＰＣＲ筛选阳性克隆ꎬ鉴定为阳性的菌液提取质粒ꎮ质粒送至西安擎科生物科技有限责任公司测序ꎮ表１㊀本研究用到的引物信息Ｔａｂｌｅ１㊀Ｐｒｉｍｅｒｓｕｓｅｄｉｎｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈ检测病毒引物名称引物序列(５ᶄң３ᶄ)㊀㊀㊀㊀长度(ｂｐ)ＴＭ(ħ)参考文献ＢＢＷＶ２ＢＢＷＶ２￣ＬＣＰ￣ＦＣＡＣＴＧＧＴＧＡＡＣＡＧＴＴＴＧＴＣＡＧ１１２６５５ＢＢＷＶ２￣ＬＣＰ￣ＲＣＴＡＴＣＡＡＡＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＴＣＧＧＶＡＧＶＡ￣ＣＰ￣１ＴＣＣＡＴＧＧＳＳＷＷＣＡＳＳＴＷＷＣＧＣＭＭＡＲＲＧ６００５２ＧＶＡ￣ＣＰ￣２ＣＴＡＴＡＴＣＴＣＲＲＡＣＡＧＣＹＹＴＧＹＹＴＣＴＭＶＴＭＶｄＦＧＡＴＴＣＧＴＴＴＴＡＡＡＴＡＴＧＴＣＴＴＡＣ６００４６[２１]ＴＭＶｄＲＣＴＴＣＧＡＴＴＴＡＡＧＴＧＧＡＧＧＧＡＢＢＷＶ２:蚕豆萎蔫病毒２号ꎻＧＶＡ:葡萄Ａ病毒ꎻＴＭＶ:烟草花叶病毒ꎮ１.５㊀序列一致性分析和系统进化分析将获得的两段序列用ＤＮＡＭＡＮ６.０软件进行校正和拼接ꎬ将得到的ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因序列提交ＮＣＢＩ核酸数据库(ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/ＢＬＡＳＴ/)进行ＢＬＡＳＴ序列比对分析ꎬ采用ＳＤＴｖ１.２软件中的ＣｌｕｓｔａｌＷ算法进行核苷酸序列及其编码的氨基酸序列一致性分析[２２]ꎮ以南芥菜花叶病毒(ＡｒａｂｉｓｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＡｒＭＶ)为外群ꎬ采用ＭＥＧＡ７.０软件构建系统发育树ꎬ选择邻近法(Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇꎬＮＪ)进行系统进化分析ꎬ自展校正值设定为１０００ꎮ１.６㊀遗传距离分析和基因交流分析使用ＭＥＧＡ７.０软件中ＭａｘｘｉｍｕｍＣｏｍｐｏｓｉｔｅＬｉｋｅｌｉｈｏｏｄ模型计算ＢＢＷＶ２分离物不同分组之间的遗传距离ꎬＧａｍｍａ参数默认为１ꎮ使用ＤｎａＳＰｖ５软件分析ＢＢＷＶ２分离物不同分组之间的基因交流ꎬ以种群基因差异Ｆｓｔ值和基因流Ｎｍ值为参考来衡量种群间的遗传分化程度和基因交流ꎮ一般｜Ｆｓｔ｜介于０至１ꎬ当０ɤ｜Ｆｓｔ｜ɤ０３３ꎬ表明这两个分组之间存在频繁的基因交流ꎻ当０.３３ɤ｜Ｆｓｔ｜ɤ１ꎬ表明这两个分组之间基因交流的频率很低ꎮ当Ｎｍ<１ꎬ表明这两个分组之间很容易发生遗传漂变ꎻ当Ｎｍ>１ꎬ表明这两个分组之间存在可以基因交流的渠道[２３￣２６]ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀样品ｓｉＲＮＡ高通量测序分析经测序得到的粗序列ｒａｗｒｅａｄ进行筛选后获得的总ＲＮＡ数为１２５６８８７７(表２)ꎬ其中ꎬｓｉＲＮＡ长度分布结果如图２ꎬ本研究中ｓｉＲＮＡ序列长度主要集中于１８~２４ｎｔꎬ表明样本ｓｉＲＮＡ文库质量较高ꎮ使用ｖｅｌ￣ｖｅｔ软件将ｓｉＲＮＡ进行拼接后ꎬ所组装的ｃｏｎｔｉｇ数为３６２４ꎮ将拼接所得的ｃｏｎｔｉｇ进行分类注释ꎬ筛选出与病毒同源的ｃｏｎｔｉｇ数目结果见表３ꎬ包括ＢＢＷＶ２㊁ＧＶＡ和ＴＭＶ３种病毒ꎬ与ＢＢＷＶ２同源的ｃｏｎｔｉｇ数目最高ꎬ为６４ꎻ与ＧＶＡ和ＴＭＶ同源的ｃｏｎｔｉｇ数目依次为２和３ꎻ其中ꎬＢＢＷＶ２㊁ＧＶＡ和ＴＭＶ的ｅ￣ｖａｌｕｅ值分别为８ˑ１０－５１㊁７ˑ１０－１３㊁２ˑ１０－２８ꎬ表明ＢＢＷＶ２出现假阳的概率最小ꎬ但还需进一步验证才能明确引起茄子斑驳皱缩病毒病的病毒种类ꎮ表２㊀测序数据质量统计Ｔａｂｌｅ２㊀Ｑｕａｌｉｔｙｓｔａｔｉｓｔｉｃｓｏｆｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｄａｔａ项目粗序列长度小于１８ｎｔ读段长度大于３５ｎｔ读段低质量干净的读段个数１６８９１６１１３２１７５９２１１０５１４２０１２５６８８７７占比(％)１００.００１９.０５６.５４０７４.４１６７６江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第３期图２㊀ｓｉＲＮＡ长度分布Ｆｉｇ.２㊀ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｓｉＲＮＡｌｅｎｇｔｈ表３㊀样品ｓｉＲＮＡ文库与已知病毒同源的ｃｏｎｔｉｇ检测结果Ｔａｂｌｅ３㊀ＨｏｍｏｌｏｇｏｕｓｃｏｎｔｉｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆｖｉｒｕｓｉｎｓｉＲＮＡｌｉ￣ｂｒａｒｙ病毒名称同源ｃｏｎｔｉｇ数目ｅ期望值与比对参考序列的相似度得分ＢＢＷＶ２６４８ˑ１０－５１２１６/２６９(８０.３０)２０２.０ＧＶＡ２７ˑ１０－１３４８/５２(９２.３１)７３.１ＴＭＶ３２ˑ１０－２８８０/８６(９３.０２)１２６.０ＢＢＷＶ２㊁ＧＶＡ㊁ＴＭＶ见表１注ꎮ２.２㊀样品病毒检测结果以ｃＤＮＡ为模板ꎬ利用特异性引物进行ＲＴ￣ＰＣＲ检测ꎬ结果显示２份疑似病毒病的茄子样品中ꎬ扩增出２条大小约为１１００ｂｐ和６００ｂｐ的目标条带(图３)ꎬ表明茄子样品中含有ＢＢＷＶ２和ＴＭＶ２种病毒ꎬ并未检测到ＧＶＡꎮ２.３㊀序列一致性分析和系统进化分析将测序后所获得的ＢＢＷＶ２ＬＣＰ原始序列采用ＤＮＡＭＡＮ６.０软件进行了校正和拼接ꎬ获得２条１１２６ｂｐ的序列ꎬ并将其命名为ＢＢＷＶ２￣Ｑ１１㊁ＢＢＷＶ２￣Ｑ１４后进行序列一致性分析ꎮ结果表明本研究中所获得的２条ＢＢＷＶ２分离物ＬＣＰ核苷酸序列及其编码的氨基酸序列一致性分别为９９６％和９９３％ꎮ与ＮＣＢＩ中已发表的２３个ＢＢＷＶ２分离物ＬＣＰ核苷酸序列及其编码的氨基酸序列一致性分别为７９９％~９５２％和８０５％~９７２％(表４㊁表５)ꎮ其中ꎬＢＢＷＶ２￣Ｑ１１㊁ＢＢＷＶ２￣Ｑ１４与ＢＢＷＶ２新加坡分离物(ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＮＣ００３００４)的核苷酸序列一致性最低ꎬ为７９９％ꎻ与中国分离物(ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＫＹ６０６９９３)的核苷酸序列一致性最高ꎬ为９５２％ꎻ与ＢＢＷＶ２新加坡分离物(ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＮＣ００３００４)的氨基酸序列一致性最低ꎬ为８０５％ꎻ与中国分离物(ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＫＹ６０６９９３)的氨基酸序列一致性最高ꎬ为９７２％ꎮ说明本研究所获得的ＢＢ￣ＷＶ２ＬＣＰ核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与ＮＣＢＩＡ:Ｍ为５０００ｍａｒｋｅｒꎻ１为阴性对照ꎻ２和３为ＢＢＷＶ２ꎮＢ:Ｍ为２０００ｍａｒｋｅｒꎻ１和２为ＧＶＡꎻ３和４为ＴＭＶꎮＢＢＷＶ２㊁ＧＶＡ㊁ＴＭＶ见表１注ꎮ图３㊀样品中病毒的ＲＴ￣ＰＣＲ检测结果Ｆｉｇ.３㊀ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｖｉｒｕｓｉｎｓａｍｐｌｅｓｂｙＲＴ￣ＰＣＲ中已收录的ＢＢＷＶ２ＬＣＰ核苷酸序列及其编码的氨基酸序列有较高的一致性ꎮ㊀㊀将获得的ＢＢＷＶ２￣Ｑ１１㊁ＢＢＷＶ２￣Ｑ１４ＬＣＰ核苷酸序列与ＮＣＢＩ中已发表的２３个ＢＢＷＶ２ＬＣＰ核苷酸序列进行系统进化分析ꎬ以ＡｒＭＶ为外群ꎬ使用ＭＥＧＡ７.０构建系统发育进化树ꎮ系统发育进化树(图４)表明ꎬＢＢＷＶ２ＬＣＰ核苷酸序列可分为两大支ꎬ以来自中国的ＢＢＷＶ２￣ＫＹ６０６９９３和ＢＢＷＶ２￣ＡＪ１３２８４４ꎬ韩国的ＢＢＷＶ２￣ＪＸ１８３２２２㊁ＢＢＷＶ２￣ＫＴ３８００２３㊁ＢＢＷＶ２￣ＪＸ１８３２２４㊁ＢＢＷＶ２￣ＪＸ１８３２３０㊁ＢＢＷＶ２￣ＫＣ６２５５０９㊁ＢＢＷＶ２￣ＫＣ６２５５１０㊁ＢＢＷＶ２￣ＫＣ６２５５１６㊁ＢＢＷＶ２￣ＫＣ６２５５１７㊁ＢＢＷＶ２￣ＫＣ６２５５１５㊁ＢＢＷＶ２￣ＫＣ６２５５１４㊁ＢＢＷＶ２￣ＫＣ６２５５１２和ＢＢＷＶ２￣ＫＣ６２５５１８等为Ⅰ组ꎬ其他序列聚为Ⅱ组ꎮＢＢＷＶ２￣Ｑ１１㊁ＢＢＷＶ２￣Ｑ１４与ＢＢ￣ＷＶ２￣ＫＹ６０６９９３亲缘关系较近ꎮ２.４㊀遗传差异分析不同寄主间ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因的遗传距离介于０.０４９~０３３２(表６)ꎬ其中ꎬ寄主为红辣椒(Ｃｈｉｌｌｉ)和赤苞花(Ｍｅｇａｓｋｅｐａｓｍａｅｒｙｔｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ)的ＢＢＷＶ２ＬＣＰ遗传距离最高为０３３２ꎬ遗传差异显著ꎻ寄主为辣椒(Ｃａｐｓｉ￣ｃｕｍａｎｎｕｕｍ)和菠菜(Ｐｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍ)的ＢＢＷＶ２ＬＣＰ遗传距离最低为００４９ꎬ遗传差异不显著ꎮ但由于本研究７７６邵宇纯等:茄子斑驳皱缩病毒病病原物的鉴定及分子进化分析采集到的样本数量较少ꎬ无法判断不同的寄主是否会对鉴定到的ＢＢＭＶ遗传有影响ꎬ还需进一步研究ꎮ表４㊀ＢＢＷＶ２￣Ｑ１１与其他ＢＢＷＶ２分离物的ＬＣＰ核苷酸序列及其编码的氨基酸序列相似性Ｔａｂｌｅ４㊀ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎＢＢＷＶ２￣Ｑ１１ａｎｄｏｔｈｅｒＢＢＷＶ２ｉｓｏｌａｔｅｓ序号ＮＣＢＩ序列号寄主㊀㊀㊀㊀㊀国家相似度(％)核苷酸序列氨基酸序列１ＡＪ１３２８４４蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)中国９０.８９２.５２ＪＸ１８３２２２辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.７９５.１３ＪＸ１８３２２４辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.４９３.３４ＪＸ１８３２３０辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.８９５.６５ＪＸ１８３２３４辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国７９.９８１.４６ＫＣ６２５５０６蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)韩国８１.４８２.０７ＫＣ６２５５０７蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)韩国９３.１９４.２８ＫＣ６２５５０９辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.６９４.８９ＫＣ６２５５１０辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.４９４.８１０ＫＣ６２５５１２豌豆(Ｐｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍ)中国９２.１９３.６１１ＫＣ６２５５１４辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９１.９９３.６１２ＫＣ６２５５１５辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)中国９２.１９３.０１３ＫＣ６２５５１６菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)中国９４.３９３.９１４ＫＣ６２５５１７菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)韩国９４.５９４.２１５ＫＣ６２５５１８菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)韩国９２.１９３.６１６ＫＦ４９８６９７辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)中国８０.５８３.０１７ＫＪ８２５８５７红辣椒(Ｃｈｉｌｌｉ)中国８４.９８９.５１８ＫＭ０７６６４９益母草(Ｌｅｏｎｕｒｕｓｓｉｂｉｒｉｃｕｓ)韩国７９.９８２.０１９ＫＴ３８００２３辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.５９４.５２０ＫＹ６０６９９３蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)中国９５.１９５.９２１ＭＷ１９２５２２太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)中国８０.３８０.８２２ＭＷ１９２５２６太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)中国８０.０８０.８２３ＮＣ００３００４赤苞花(Ｍｅｇａｓｋｅｐａｓｍａｅｒｙｔｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ)新加坡８０.１８０.５表５㊀ＢＢＷＶ２￣Ｑ１４与其他ＢＢＷＶ２分离物的ＬＣＰ核苷酸序列及其编码的氨基酸序列相似性Ｔａｂｌｅ５㊀ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎＢＢＷＶ２￣Ｑ１４ａｎｄｏｔｈｅｒＢＢＷＶ２ｉｓｏｌａｔｅｓ序号ＮＣＢＩ序列号寄主㊀㊀㊀㊀㊀㊀国家相似性(％)核苷酸序列氨基酸序列１ＡＪ１３２８４４蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)中国９０.８９４.２２ＪＸ１８３２２２辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.８９６.７３ＪＸ１８３２２４辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.５９５.０４ＪＸ１８３２３０辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.９９６.７５ＪＸ１８３２３４辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国８０.２８３.９６ＫＣ６２５５０６蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)韩国８１.１８４.２７ＫＣ６２５５０７蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)韩国９３.２９５.６８ＫＣ６２５５０９辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.７９５.８９ＫＣ６２５５１０辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.５９５.８１０ＫＣ６２５５１２豌豆(Ｐｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍ)中国９２.１９５.０１１ＫＣ６２５５１４辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９２.０９５.０８７６江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第３期续表５㊀Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ５序号ＮＣＢＩ序列号寄主㊀㊀㊀㊀㊀㊀国家相似性(％)核苷酸序列氨基酸序列１２ＫＣ６２５５１５辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)中国９２.２９４.７１３ＫＣ６２５５１６菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)中国９４.３９５.３１４ＫＣ６２５５１７菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)韩国９４.５９５.５１５ＫＣ６２５５１８菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)韩国９２.１９５.０１６ＫＦ４９８６９７辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)中国８０.６８５.４１７ＫＪ８２５８５７红辣椒(Ｃｈｉｌｌｉ)中国８５.０９０.６１８ＫＭ０７６６４９益母草(Ｌｅｏｎｕｒｕｓｓｉｂｉｒｉｃｕｓ)韩国８０.０８４.２１９ＫＴ３８００２３辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)韩国９４.６９６.１２０ＫＹ６０６９９３蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)中国９５.２９７.２２１ＭＷ１９２５２２太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)中国８０.３８３.６２２ＭＷ１９２５２６太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)中国８０.０８３.３２３ＮＣ００３００４赤苞花(Ｍｅｇａｓｋｅｐａｓｍａｅｒｙｔｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ)新加坡７９.９８２.５图４㊀ＢＢＷＶ２￣Ｑ１１和ＢＢＷＶ２￣Ｑ１４与ＮＣＢＩ已发表２３个分离物ＬＣＰ基因核苷酸序列的系统发育进化树Ｆｉｇ.４㊀ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｓｏｆＢＢＷＶ２￣Ｑ１１ａｎｄＢＢＷＶ２￣Ｑ１４ＬＣＰｇｅｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｎｄ２３ｉｓｏｌａｔｅｓｐｕｂｌｉｓｈｅｄｉｎＮＣＢＩｄａｔａｂａｓｅ９７６邵宇纯等:茄子斑驳皱缩病毒病病原物的鉴定及分子进化分析表６㊀不同寄主ＢＢＷＶ２病毒ＬＣＰ基因间的遗传距离分析Ｔａｂｌｅ６㊀ＧｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＢＢＷＶ２ｖｉｒｕｓＬＣＰｇｅｎｅｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｏｓｔｓ组群辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)豌豆(Ｐｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍ)菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)红辣椒(Ｃｈｉｌｌｉ)益母草(Ｌｅｏｎｕｒｕｓｓｉｂｉｒｉｃｕｓ)蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)赤苞花(Ｍｅｇａｓｋｅｐａｓｍａｅｒｙｔｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ)茄子(Ｓｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａ)辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕ￣ｕｍ)０.０８７０.０４９０.１９５０.３０４０.０６００.２９２０.３１４０.０５８豌豆(Ｐｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍ)０.０９１０.１９２０.２９４０.０８６０.２７８０.３０７０.０９０菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)０.２０１０.３２４０.０５７０.３１００.３１６０.０６３红辣椒(Ｃｈｉｌｌｉ)０.２９４０.２０００.２９１０.３３２０.１９７益母草(Ｌｅｏｎｕｒｕｓｓｉｂｉｒｉ￣ｃｕｓ)０.３０１０.０８２０.１０４０.３０６蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)０.２９６０.３０６０.０５４太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)０.１０６０.３０５赤苞花(Ｍｅｇａｓｋｅｐａｓｍａｅｒｙｔｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ)０.３０８茄子(Ｓｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎ￣ｇｅｎａ)㊀㊀不同寄主间ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因的遗传差异(Ｆｓｔ)介于－０.０１９~０９２０(表７)ꎬ其中ꎬ寄主辣椒(Ｃ.ａｎｎ￣ｕｕｍ)和蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因的遗传差异(Ｆｓｔ)最低为－０.０１９ꎬ其数值介于０ɤ｜Ｆｓｔ｜ɤ０３３ꎬ表明这两个寄主ＢＢＭＶ２病毒之间存在频繁的基因交流ꎻ寄主茄子(Ｓ.ｍｅｌｏｎｇｅｎａ)和太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌ￣ｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因的遗传差异(Ｆｓｔ)最高为０９２０ꎬ其数值介于０.３３ɤ｜Ｆｓｔ｜ɤ１ꎬ表明这两个寄主ＢＢＭＶ２病毒基因交流的频率很低ꎮ不同寄主ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因之间基因流(Ｎｍ)介于０.０２~１３４１ꎬ其中ꎬ寄主茄子(Ｓ.ｍｅｌｏｎｇｅｎａ)和太子参(Ｐ.ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)ＢＢＭＶ２病毒的基因流(Ｎｍ)最低为００２ꎬ其数值Ｎｍ<１ꎬ表明这２个寄主ＢＢＭＶ２病毒之间很容易发生遗传漂变ꎻ寄主辣椒(Ｃ.ａｎｎｕｕｍ)和蚕豆(Ｖ.ｆａｂａ)ＢＢＭＶ２病毒的基因流(Ｎｍ)最高为１３４１ꎬ其数值Ｎｍ>１ꎬ表明这两个寄主ＢＢＭＶ２病毒之间存在可以基因交流的通道ꎮ表７㊀不同寄主ＢＢＷＶ２病毒ＬＣＰ基因间的遗传差异和基因流Ｔａｂｌｅ７㊀ＧｅｎｅｆｌｏｗａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＢＢＷＶ２ｖｉｒｕｓＬＣＰｇｅｎｅｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｏｓｔｓ寄主㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀统计量(Ｋｓ)基因分化系数(Ｇｓｔ)遗传差异(Ｆｓｔ)基因流(Ｎｍ)辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)与菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)９６.４５３０.００３０.１００２.２５辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)与蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)１１７.５８７０.０１６－０.０１９１３.４１辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)与茄子(Ｓｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａ)９０.２４１０.１８９０.４１２０.３６辣椒(Ｃａｐｓｉｃｕｍａｎｎｕｕｍ)与太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)９５.７４００.０６３０.６０９０.１６菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)与蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)１０４.９０５０.００３０.０７１３.２７菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)与茄子(Ｓｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａ)３４.２０００.２９００.５７５０.１９菠菜(Ｓｐｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ)与太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)４７.４０００.００８０.７７４０.７３蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)与茄子(Ｓｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａ)９３.８８９０.２６２０.３１５０.５４蚕豆(Ｖｉｃｉａｆａｂａ)与太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)１０４.８８９０.０２００.４８４０.２７茄子(Ｓｏｌａｎｕｍｍｅｌｏｎｇｅｎａ)与太子参(Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)１６.５０００.３３３０.９２００.０２０８６江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第３期３㊀讨论为明确引起茄子斑驳和皱缩的病毒种类ꎬ本研究对表现出斑驳和皱缩的茄子样品进行ｓｉＲＮＡ高通量测序和ＲＴ￣ＰＣＲ检测ꎬ检测结果表明表现出斑驳和皱缩的茄子样品中含有ＢＢＷＶ２和ＴＭＶꎬ采用２种方法联合鉴定病毒种类显著提高了筛查的效率和准确度ꎮ这与柴阿丽等[１９]通过ｓｉＲＮＡ进行高通量测序和ＲＴ￣ＰＣＲ技术鉴定出侵染茄子的烟草轻型绿花叶病毒(ＴｏｂａｃｃｏｍｉｌｄｇｒｅｅｎｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓꎬＴＭＧ￣ＭＶ)和番茄斑驳花叶病毒(Ｔｏｍａｔｏｍｏｔｔｌｅｍｏｓａｉｃｖｉ￣ｒｕｓꎬＴｏＭＭＶ)和陈雅寒等[２７]利用ｓｉＲＮＡ高通量测序技术和ＲＴ￣ＰＣＲ技术鉴定出侵染杏的亚洲李属病毒１(Ａｓｉａｎｐｒｕｎｕｓｖｉｒｕｓ１ꎬＡＰＶ１)和亚洲李属病毒３(Ａｓｉａｎｐｒｕｎｕｓｖｉｒｕｓ３ꎬＡＰＶ３)的研究方法相似ꎮ虽然ｓｉＲＮＡ高通量测序在茄子样品中检测出ＧＶＡꎬ但是ＲＴ￣ＰＣＲ未检测到ＧＶＡ的存在ꎬ原因可能是ｓｉＲ￣ＮＡ高通量测序过程中添加多个核苷酸时ꎬ插入和删除等测序错误造成的假阳性[２８]ꎮ本研究检测出ＢＢＷＶ２和ＴＭＶꎬ说明甘肃省临洮县茄子斑驳皱缩症状是由多种病毒复合侵染造成的ꎬ原因可能是由于传毒介体与病毒之间互作所致ꎬ也有可能是由于寄主感染其中一种病毒后ꎬ失去抵御另外一种病毒的能力[２９]ꎮ为明确ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因序列的遗传多样性和分子进化关系ꎬ将获得的ＢＢＷＶ２￣Ｑ１１㊁ＢＢＷＶ２￣Ｑ１４和２３个寄主来源不同的ＢＢＷＶ２分离物ＬＣＰ基因核苷酸序列进行一致性分析ꎬ核苷酸序列及其编码的氨基酸序列一致性分别为７９.９％~９５２％和８０.５％~９７２％ꎮ这表明ꎬ虽然ＢＢＷＶ２的ＬＣＰ基因有很高的保守性ꎬ但仍具一定程度的分子变异[２９]ꎮ以ＡｒＭＶ为外群ꎬ构建系统发育进化树ꎬ并对不同寄主ＢＢＷＶ２分离物进行遗传距离和遗传差异分析ꎬ结果显示本研究寄主茄子(Ｓ.ｍｅｌｏｎｇｅｎａ)和太子参(Ｐ.ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ)ＢＢＷＶ２ＬＣＰ基因之间遗传交流的频率很低ꎬ这与系统发育树中聚类结果显示一致ꎬ说明ＢＢＷＶ２的分离物之间有一定的寄主差异ꎮ参考文献:[１]㊀中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[Ｍ].北京:科学出版社ꎬ１９９３:１６.[２]㊀崔彦玲.无公害茄子标准化生产[Ｍ].北京:中国农业出版社ꎬ２００６:１.[３]㊀ＥＤＷＡＲＤＳＯＮＪＲꎬＣＨＲＩＳＴＩＥＲＧ.ＣＲＣｈａｎｄｂｏｏｋｏｆｖｉｒｕｓｅｓｉｎ￣ｆｅｃｔｉｏｎｌｅｇｕｍｅｓＢｏｃａＲａｔｏｎ[Ｍ].Ａｍｅｒｉｃａ:ＣＲＣＰｒｅｓｓꎬ１９９１:２６３￣２７４.[４]㊀周㊀颖ꎬ张㊀瑞ꎬ郭㊀颂ꎬ等.北京地区地黄花叶病病原的分子鉴定[Ｊ].植物保护学报ꎬ２０１０ꎬ３７(５):４４７￣４５２. 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云南野生茄科砧木资源农艺性状调查与4种土传病害抗病鉴定

云南野生茄科砧木资源农艺性状调查与4种土传病害抗病鉴定作者：蒋舒蕊王怀正李静赵威赵凯朱海山来源：《南方农业学报》2021年第10期摘要：【目的】调查统计云南野生茄科砧木资源的农艺性状，筛选具有抗番茄青枯病、溃疡病、枯萎病和茄子黄萎病的材料，为茄科抗病优良砧木的收集和利用提供理论依据。

【方法】对云南野生茄科砧木进行主要农艺性状及田间常见病虫害调查，筛选出优良砧木，并与对照（自交系番茄5号）进行番茄青枯病、溃疡病、枯萎病和茄子黄萎病的抗性鉴定比较，利用主成分分析法及聚类热图对资源属间关系进行分析。

【结果】根据形态特性及主成分分析、聚类分析结果，可将材料归属为茄科的3个属，其中茄属材料17份，皆为直立型，主茎颜色主要为绿色，株高为82.42～292.29 cm，叶型均为长卵圆形，叶色为绿色和深绿色，花冠颜色以白色为主，果面皆有光泽，果色多数为橘红色，单果重在1.61～433.54 g;番茄属材料7份，生长习性以无限生长型为主，株型以半蔓性为主，叶片类型有普通叶型、复细叶型和薯叶型，叶片均为羽状复叶，花序类型为单式花序，花色皆为黄色，果实以中果型为主，果形有圆形、扁圆形和长圆形;辣椒属材料5份，株型有半直立型和直立型，主茎颜色绿色为主，叶形以长卵圆形为主，花冠颜色皆为白色，成熟果色红色，果面光滑有光泽，果顶形状以钝圆形为主。

主成分分析得出前3个主成分能反映所测15项农艺性状的绝大部分信息，累积贡献率为82.758%。

所有材料中7份抗病性、生长势、适应性均较好，且在相近苗期，砧木与接穗茎的粗度一致，茎叶无皮刺;5份具有优良的果实性状。

7份优良材料中，对青枯病表现免疫的3份，高抗2份;对溃疡病免疫的2份，高抗资源3份;对枯萎病没有表现免疫和高抗的资源，抗病2份;对茄子黄萎病免疫的3份，高抗1份;S-11免疫青枯病、溃疡病和黄萎病3种病害。

【结论】29份野生茄科资源属于3个属，其中7份砧木材料表现优良，2份（S-7和S-11）免疫青枯病和溃疡病，1份（S-11）免疫番茄青枯病、溃疡病和黄萎病，可为茄科蔬菜抗性基因的开发利用提供材料，且部分茄科砧木资源具有应用于生产的价值。

茄子种植的病毒病诊断与抗病品种选育

茄子种植的病毒病诊断与抗病品种选育茄子是我国重要的经济作物之一，但茄子种植常常受到各种病毒病的威胁。

病毒病是由病毒引起的茄子病害，会导致茄子植株畸形生长、减产甚至死亡。

因此，茄子种植者必须及时进行病毒病的诊断，并通过抗病品种选育来增加茄子的抗病能力。

茄子病毒病的诊断是通过病原检测和病状观察来进行的。

首先，可以收集茄子植株和受害的叶片进行病原检测。

病原检测可以使用多种方法，如PCR（聚合酶链反应）和ELISA（酶联免疫吸附试验）等。

这些方法可以检测出茄子植株中存在的病毒，并确定感染的种类。

另外，病状观察也是一种常用的方法。

茄子病毒病的病状通常包括叶片变黄、变褐、变绿或变红，畸形生长，果实变小等。

通过观察这些病状，可以初步判断是否是病毒病的感染。

在茄子病毒病的抗病品种选育方面，可以通过自然选择和人工选择来进行。

自然选择是通过观察自然环境中茄子植株的表现，选取抗病的个体进行繁殖，逐渐培育出抗病能力强的品种。

而人工选择则是通过人工干预，选择具有抗病性状的茄子植株进行杂交，增加抗病基因的遗传频率。

这样可以加快选育进程，提高茄子的抗病能力。

目前，已经有一些抗茄子病毒病的品种被选育出来。

例如，“状元茄子”就是一种抗病能力较强的茄子品种。

这种品种具有较高的抗病基因频率，能够有效防御多种茄子病毒病的感染。

另外，“紫茄3号”也是一种抗病能力较强的茄子品种。

这种品种通过人工选择和育种，具有了较高的抗病遗传素质，可以有效抵抗茄子病毒病的侵袭。

总之，茄子病毒病的诊断和抗病品种选育是茄子种植中非常重要的工作。

通过病原检测和病状观察，可以及时发现茄子病毒病的感染，并采取相应的措施。

同时，通过自然选择和人工选择，可以培育出抗病能力强的茄子品种，提高茄子的抗病能力，保障茄子种植的健康发展。

茄子病毒病的诊断和抗病品种选育在茄子种植中扮演着至关重要的角色。

茄子病毒病是由多种病毒引起的茄子病害，其中最常见的有番茄花叶病毒（TMV）、番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）和茄花叶病毒（TEV）等。

茄子黄萎病抗病性鉴定_李海涛

文章编号:1002-1728(2006)01-0004-03茄子黄萎病抗病性鉴定李海涛,张子君,杨国栋,邹庆道,吕书文(辽宁省农业科学院园艺研究所,辽宁沈阳　110161)摘要:主要研究了茄子黄萎病的苗期接种鉴定技术。

利用PD 液体培养基振荡培养可产生大量的分生孢子,采用灌根法接种,接种浓度为2×107孢子/ml ,接种苗龄为2叶期,土温25℃,接种10d 后进行第1次发病调查,共调查3次。

对8份茄子材料进行了苗期人工接种抗病性鉴定,有2份材料表现高抗,1份材料表现感病,5份材料表现高感。

关键词:茄子黄萎病;抗病性鉴定;抗病性中图分类号:S436.412.1+9文献标识码:A 由大丽轮枝孢菌(Verticillium dahliae Kleb )引起的茄子黄萎病是生产上的主要病害之一,发生普遍,危害严重,在茄子各个生长期均可发病,以成株期发病最重。

成株多在坐果后开始表现症状,且多自上而下或从一边向全株发展。

叶片初在叶缘及叶脉间变黄,后发展至半边叶片或整片叶变黄,早期病叶晴天高温时呈萎蔫状,早晚尚可恢复,后期病叶由黄变褐,终致萎蔫下垂以至脱落,严重时全株叶片变褐萎垂以至脱光只剩茎秆。

由于该病的病原菌为土壤习居菌,具有高度抵抗不良环境的能力,药剂难于进行有效的防治。

因此,种植抗(耐)病品种是防治茄子黄萎病经济有效的途径。

而抗性鉴定则是选育抗病品种的不可缺少的手段。

我们于2003～2004年进行了茄子黄萎病抗病性鉴定方法的研究,通过选择和摸索,所得结果如下。

1　材料与方法1.1　鉴定材料托鲁巴母、刺茄、EF15圆茄、EF15长茄、EF45小圆茄、EF934、中黑茄、辽茄3号自交系。

1.2　菌源及接种体的制备菌种从沈阳农业大学园艺学院引进,经扩繁、鉴定、纯化后获得。

应用PDA 斜面保存菌种。

接种用的分生孢子的繁殖方法是采用PD 培养液,用250ml 三角瓶盛装100ml 培养液。

病菌在PDA 平板上(9cm ×9cm )培养,待菌落直径长至3～5cm ,从边缘打取直径0.4cm 的菌片,移入PD 培养液中,每瓶移入2个菌片(直径0.4cm ),110r /min ,25℃,震荡培养7d ,PD 培养液由透明液体变成乳白色液体。