磺基水杨酸法操作流程
磺基水杨酸显色法测铁实验思考
磺基水杨酸显色法测铁实验思考1. 实验背景和目的磺基水杨酸显色法是一种常用的测定铁离子的定性和定量分析方法。
该方法基于铁离子与磺基水杨酸反应生成带有特定色谱的络合物，通过颜色的变化来判断和测定样品中铁离子的含量。
本实验旨在通过实际操作，掌握磺基水杨酸显色法测铁的原理、方法和实验技巧，并通过数据处理和分析，验证该方法的准确性和可行性。
2. 实验材料和仪器设备•实验材料：–0.1 mol/L 铁标准溶液–磺基水杨酸-硫酸缓冲液–炭酸钠标准溶液•实验仪器设备：–分光光度计–容量瓶–称量瓶–空气开关–过滤膜3. 实验步骤第一部分：制备已知浓度的铁标准溶液1.取一定量的0.1 mol/L 铁标准溶液测量，用万能移液器分别分取1 mL、2mL、3 mL、4 mL、5 mL的标准溶液，分别转移到5个50 mL的容量瓶中。
2.使用去离子水稀释至刻度线，摇匀，得到铁的浓度分别为0.02 mol/L、0.04 mol/L、0.06 mol/L、0.08 mol/L、0.1 mol/L的标准溶液。
第二部分：测定样品中铁的含量1.取一定量的待测样品，通过合适的方法将其中的铁转化为Fe3+的形式。
2.取一个25 mL的比色管，加入1 mL样品溶液，再加入1 mL的磺基水杨酸-硫酸缓冲液，摇匀。
3.使用分光光度计，设置检测波长为510 nm，以磺基水杨酸-硫酸缓冲液作为空白参照，测量样品的吸光度。
记录吸光度的数值。
4.重复步骤2和步骤3，分别测量其他待测样品的吸光度。
第三部分：处理数据并计算结果1.绘制出吸光度与铁浓度的标准曲线，通过拟合直线的斜率和截距，得到吸光度与铁浓度的线性关系方程。
2.根据待测样品的吸光度数值和标准曲线的关系，计算出待测样品中铁的浓度。
3.分析实验结果，评估实验准确性和可靠性。
4. 实验注意事项1.实验过程中需要佩戴实验手套和眼镜，避免试剂接触皮肤和眼睛。
2.实验前要确保所有仪器设备的清洁和正常运行。
磺基水杨酸法测铁的含量
磺基水杨酸法测铁的含量
磺基水杨酸法是一种常用的测定铁含量的方法，其原理是利用磺化反应，将水杨酸中的羟基转化为磺基，形成磺基水杨酸（2-羟基苯磺酸），然后利用磺基水杨酸和铁离子反应，生成显色产物，通过比色法计算出样品中铁离子的含量。
实验步骤
1.用少量醋酸溶解待测样品，加入苯酚，使pH在3~4之间。
这样可以使铁以Fe3+的形式存在，以便后续的磺化反应。
2.加入少量磺酸（氢氧化二苯基磺酸），充分溶解。
3.加入过量的溶氧剂（过氧化氢），加速磺酸的磺化反应。
4.用氨水调整pH至9.5~10.5之间，使反应液处于碱性条件下，有利于后续显色反应的进行。
5.加入0.1%磺基水杨酸（2-羟基苯磺酸）溶液，与铁离子反应生成显色产物3-磺基-6-氨基三甲基苯并噁唑（Fe(III)-磺基水杨酸络合物），并使反应液呈现红色或紫色。
6.用光度计或比色计测定样品的吸光度或比色度，根据标准曲线计算出样品中铁离子的含量。
注意事项
1.磺化反应需要过氧化氢的存在，加入过量的过氧化氢会导致反应液变得过于浓稠，影响显色反应的进行。
因此，应当谨慎加入过氧化氢，适量调整反应液的浓度。
2.在调整pH值时，应当注意避免反应液的pH过高，以免铁离子发生水解反应，导致测定结果不准确。
3.在标准曲线的绘制中，应当使用含铁量相近的标准溶液，以确保所绘制的标准曲线具有一定的可靠性和准确性。
4.在测定过程中，要注意反应时间的控制，过长或过短的反应时间都会影响测定结果的准确性。
5.实验前要仔细准备试剂和设备，并进行充分的清洗和消毒，保证实验的准确性和可靠性。
实验37 磺基水杨酸法测铁的含量
实验37 磺基水杨酸法测铁的含量实验目的（1）巩固吸光光度法的基本理论，掌握吸收曲线及标准曲线的绘制及应用。
（2）了解721型分光光度计的工作原理及使用方法。
一、提问（1）溶液酸度对磺基水杨酸铁配合物的吸光度有何影响？（2）本实验中哪些试剂应准确加入？哪些不必严格准确加入？为什么？（3）使用蒸馏水和试剂空白作参比溶液有何区别？工作曲线是否都通过原点？二、讲解1、原理：Fe3+离子与磺基水杨酸能形成有色配合物，在pH＝8～11的氨性溶液中该配合物呈黄色，且其浓度服从朗伯－比尔定律。
可以固定溶液浓度和比色皿厚度，通过调节入射光的波长测定不同波长时的吸光度并绘制吸收曲线，找出最大吸收波长；固定波长为最大吸收波长，测定一系列标准溶液的吸光度，作出工作曲线。
根据相同条件下未知液的吸光度，可以在工作曲线上求出未知液的浓度。
（1）Fe3+离子与磺基水杨酸能形成逐级配合物，在不同酸度条件下，可能生成1：1、1：2和1：3三种颜色不同的配合物，故测定时应控制溶液酸度。
（2）配制标准溶液时铁离子必须准确加入，过量的磺基水杨酸和氨水对溶液的吸光度影响不是很大，不必严格准确加入。
（3）试剂空白作参比溶液可以消除溶液中其它有色物质的影响，所得工作曲线通过原点。
蒸馏水不能消除溶液中其它有色物质的影响，所得工作曲线不一定通过原点。
2、操作注意（1）为避免引起光电池疲劳现象，不测定时应打开暗室盖，特别应避免强光照射。
（2）比色皿盛取溶液时只需装至比色皿的2/3处，过满易溅出腐蚀仪器。
（3）比色皿的光学表面一定要注意保护。
（4）操作仪器要小心，不要用劲拧动，以免损坏机件。
（5）读数时眼睛应垂直于表盘，使平面镜里外的指针重合，此时读数最准确。
（6）每改变一个波长，就得重新调0和100％。
三、实验要求（1）熟悉分光光度计的构造，并掌握其使用方法。
（2）绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
（3）绘制工作曲线，并利用工作曲线求出未知液的浓度。
磺基水杨酸法尿蛋白定性检查
磺基水杨酸法尿蛋白定性检查
原理：磺基水杨酸是一种生物碱，在酸性条件下，磺基水杨酸的磺酸根离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性的蛋白盐沉淀，沉淀生成的程度可反映蛋白质含量。
器材：小试管、滴管、吸管、黑色衬纸及PH广泛试纸。
试剂：200g/L磺基水杨酸溶液：20g磺基水杨酸溶于100ml蒸馏水中。
操作：1、取小试管2支，各加清晰尿液1ml
2、于第1支试管内加磺基水杨酸溶液2滴，轻轻混匀；另1支试管不加
试剂作空白对照，1min内观察结果。
3、结果判断
注意事项：1、该法灵敏，极轻微反应无意义。
判断结果应及时，否则会使阳性增高。
2、尿内含尿酸或尿酸盐过多，可出现假阳性，但反应较为缓慢，15s
后出现浑浊，由弱渐强；或于加试剂1min后渐呈蛛丝状浑浊，
缓慢扩散，覆盖于尿液的表面，加热或加碱可消失。
3、含碘造影剂、大剂量青霉素等也可使反应呈假阳性，但其反应与
蛋白尿不同，应仔细观察并结合用药情况综合分析。
4、要求在1min内观察并判断结果。
磺基水杨酸法测定铁
3.磺基水杨酸分光光度法
1.供试品溶液的制备取本品内容物0.25克，精密称定，置于250ml容量瓶中，加硫酸溶液（1-20）
2.5ml和水100ml,混匀，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2.对照品溶液浓度:160ug/ml.。
3.新血宝处方：鸡血藤、黄芪、大枣、当归、白术、陈皮、硫酸亚铁。
4.实验仪器：分光光度计,50ml容量瓶，1l容量瓶，铁标准溶液（10ug/ml）,磺基水杨酸溶液（20%），盐酸（1mol/L），氨水（1：1）
5.实验步骤：
①10ug/ml的铁标液的配置，准确称取0.07030g硫酸亚铁铵于100ml烧杯中，加50ml 1mol/lHCL溶液，完全溶解后，移入1l容量瓶中，再加50ml 1mol/lHCL，并用蒸馏水定容，混匀。
②系列标准溶液配置，取6只50ml容量瓶编号，分别用移液管移取0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50ml铁标液，依次加入容量瓶中，每份依次加入20%磺基水杨酸2.5ml，然后假如1：1氨水，使溶液由红色变为稳定的黄色，再过量1ml，稀释至刻度，摇匀。
③在分光光度计上，选取最大的吸收波长，使用2cm比色皿，以蒸馏水作参比液分别测定1~6号和样品的吸光度，重复一次，然后取平均值。
6.实验数据的记录与处理。
磺基水杨酸测铁
第一步：光度测量
第二步： 设置换灯点
第三数步：设置参数
第四步：波长定位
测量结果
皿差
点电脑上的“光度测 量”——仪器（设置 幻灯点）360nm—— 光度测量——参数(测 量方式Abc、波长 422.5-修改-确定—— 波长定位422.5——测 量（拉入参比、样品 拉入光路（先拉再按 确定）
用玻璃棒搅拌 配好盖好玻璃盖
10ug的铁标溶液配制
从已配好的1000ml的容量瓶中的铁标溶液 中
用已润洗好的移液管移取10mL的溶液移
到100mL的容量。然后稀释到刻度线。
润洗移液管
移取铁标
移取铁标到容量瓶中
滴 至 刻 度 线
稀 释 好 的 铁 标
将配好的10ug/mL的铁标溶液中吸取 0ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、 （5ml、5ml--未知样）至8个100ml的 容量瓶中
移取铁标到8个容量瓶中
移好铁标的8个容量瓶
标水 的杨再 容酸将 量溶配 瓶液制 中各好 吸的 至 个磺 铁基
25% 8
移取 磺基 水杨 酸之 后变 成紫 色 移取磺基
水杨酸
标到 签刻 度 线 ， 摇 匀 ， 贴 上
再滴用 过至胶 量 头 个滴 铁管 标 ， 将 溶 然 液 后 的 到 稀 氨 黄 释 色水
8
1ml
1:1
滴氨水之后的颜 色变化过程
二、 测量
接通电源，打开电脑，打开uv-1801
的开关,连接电脑，连接成功，初始化 成功，会出现5个ok，然后预热20min。
开关
连接电脑
连接成功
预热20min之后，打开暗箱盖子， 先用蒸馏水把比色皿冲洗，再用铁1 和其他任 意五个铁标把比色皿润洗三遍，然 后放在第一格和第二格，关闭暗箱 盖子
磺基水杨酸法测铁的含量
实验37 磺基水杨酸法测铁的含量实验目的（1）巩固吸光光度法的基本理论，掌握吸收曲线及标准曲线的绘制及应用。
（2）了解721型分光光度计的工作原理及使用方法。
一、提问（1）溶液酸度对磺基水杨酸铁配合物的吸光度有何影响？（2）本实验中哪些试剂应准确加入？哪些不必严格准确加入？为什么？（3）使用蒸馏水和试剂空白作参比溶液有何区别？工作曲线是否都通过原点？二、讲解1、原理：Fe3+离子与磺基水杨酸能形成有色配合物，在pH＝8～11的氨性溶液中该配合物呈黄色，且其浓度服从朗伯－比尔定律。
可以固定溶液浓度和比色皿厚度，通过调节入射光的波长测定不同波长时的吸光度并绘制吸收曲线，找出最大吸收波长；固定波长为最大吸收波长，测定一系列标准溶液的吸光度，作出工作曲线。
根据相同条件下未知液的吸光度，可以在工作曲线上求出未知液的浓度。
（1）Fe3+离子与磺基水杨酸能形成逐级配合物，在不同酸度条件下，可能生成1：1、1：2和1：3三种颜色不同的配合物，故测定时应控制溶液酸度。
（2）配制标准溶液时铁离子必须准确加入，过量的磺基水杨酸和氨水对溶液的吸光度影响不是很大，不必严格准确加入。
（3）试剂空白作参比溶液可以消除溶液中其它有色物质的影响，所得工作曲线通过原点。
蒸馏水不能消除溶液中其它有色物质的影响，所得工作曲线不一定通过原点。
2、操作注意（1）为避免引起光电池疲劳现象，不测定时应打开暗室盖，特别应避免强光照射。
（2）比色皿盛取溶液时只需装至比色皿的2/3处，过满易溅出腐蚀仪器。
（3）比色皿的光学表面一定要注意保护。
（4）操作仪器要小心，不要用劲拧动，以免损坏机件。
（5）读数时眼睛应垂直于表盘，使平面镜里外的指针重合，此时读数最准确。
（6）每改变一个波长，就得重新调0和100％。
三、实验要求（1）熟悉分光光度计的构造，并掌握其使用方法。
（2）绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
（3）绘制工作曲线，并利用工作曲线求出未知液的浓度。
磺基水杨酸法测铁的含量
实验37 磺基水杨酸法测铁的含量实验目的（1）巩固吸光光度法的基本理论，掌握吸收曲线及标准曲线的绘制及应用。
（2）了解721型分光光度计的工作原理及使用方法。
一、提问（1）溶液酸度对磺基水杨酸铁配合物的吸光度有何影响？（2）本实验中哪些试剂应准确加入？哪些不必严格准确加入？为什么？（3）使用蒸馏水和试剂空白作参比溶液有何区别？工作曲线是否都通过原点？二、讲解1、原理：Fe3+离子与磺基水杨酸能形成有色配合物，在pH＝8～11的氨性溶液中该配合物呈黄色，且其浓度服从朗伯－比尔定律。
可以固定溶液浓度和比色皿厚度，通过调节入射光的波长测定不同波长时的吸光度并绘制吸收曲线，找出最大吸收波长；固定波长为最大吸收波长，测定一系列标准溶液的吸光度，作出工作曲线。
根据相同条件下未知液的吸光度，可以在工作曲线上求出未知液的浓度。
（1）Fe3+离子与磺基水杨酸能形成逐级配合物，在不同酸度条件下，可能生成1：1、1：2和1：3三种颜色不同的配合物，故测定时应控制溶液酸度。
（2）配制标准溶液时铁离子必须准确加入，过量的磺基水杨酸和氨水对溶液的吸光度影响不是很大，不必严格准确加入。
（3）试剂空白作参比溶液可以消除溶液中其它有色物质的影响，所得工作曲线通过原点。
蒸馏水不能消除溶液中其它有色物质的影响，所得工作曲线不一定通过原点。
2、操作注意（1）为避免引起光电池疲劳现象，不测定时应打开暗室盖，特别应避免强光照射。
（2）比色皿盛取溶液时只需装至比色皿的2/3处，过满易溅出腐蚀仪器。
（3）比色皿的光学表面一定要注意保护。
（4）操作仪器要小心，不要用劲拧动，以免损坏机件。
（5）读数时眼睛应垂直于表盘，使平面镜里外的指针重合，此时读数最准确。
（6）每改变一个波长，就得重新调0和100％。
三、实验要求（1）熟悉分光光度计的构造，并掌握其使用方法。
（2）绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
（3）绘制工作曲线，并利用工作曲线求出未知液的浓度。
磺基水杨酸合铁实验操作流程
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铁离子测定的几种方法
铁离子检定的定性方法（Fe3+）的检验方法：(1)加苯酚显紫红色。
(2)加SCN-(离子) 显血红色 (络合物)。
(3)加氢氧化钠有红褐色沉淀,从开始沉淀到沉淀完全时溶液的pH（常温下）：2.7~3.7。
（4）NH4SCN试法。
Fe3+与SCN-生成血红色具有不同组成的络离子。
碱能分解络合物，生成Fe(OH)3沉淀，故反应需要在酸性溶液中进行。
HNO3有氧化性，可使SCN-受到破坏，故应用稀HCL溶液酸化试液。
其他离子在一般含量时无严重干扰。
（5）K4Fe（CN)6试法Fe3+在酸性溶液中与K4Fe（CN)6生成蓝色沉淀（以前为普鲁土蓝），但实际上它与前述滕氏蓝系同一物质。
其他阳离子在一般含量时不干扰鉴定。
Co2+、Ni2+等与试剂生成淡蓝色至绿色沉淀，不要误认为是Fe3+。
三价铁离子的检验方程式加入KSCN溶液，如果出现血红色，说明原溶液中有三价铁。
离子方程式 Fe3+ +3SCN- =Fe(SCN)3根据碱的不同有区别，强碱：Fe3+ +3OH== Fe(OH)3沉淀符号弱碱：例如氨水：Fe3+ +3NH3.H2O == 3NH4+ + Fe(OH)3沉淀符号Fe3+ + 3OH→ Fe(OH)3加入硫化钾溶液，若溶液变为血红色，则有三价铁离子Fe3+ + 3SCN==Fe(SCN)3加入KSCN 溶液，如果出现血红色，说明原溶液中有三价铁。
①浓度高的时候直接观察颜色,黄色的是三价铁,二价铁是浅绿色的.②加氢氧化钠,产生红棕色沉淀的是三价铁.产生白色沉淀并中途变为墨绿色,最后变为红棕色的是亚铁离子.③加KSCN【硫氰化钾】溶液,不变色的是亚铁离子,血红色的是铁离子.④加苯酚溶液,变成浅紫色的是铁离子.⑤加酸性高锰酸钾溶液,褪色的是亚铁离子.⑥加碘化钾淀粉,使之变蓝色是三价铁离子.⑦PH试纸,即使两者浓度不相同,低浓度的铁离子水解程度也是非常大的,一般加入酸抑制水解,酸性很强,酸性强者是铁离子,中学一般不建议使用此法.检验Fe2＋、Fe3＋的常用方法1．溶液颜色含有Fe2＋的溶液显浅绿色含有Fe3＋的溶液显黄色2．用KSCN溶液和氯水(1)流程：(2)有关反应：Fe3＋＋3SCN－??Fe(SCN)3(血红色)2Fe2＋＋Cl2===2Fe3＋＋2Cl－3．用NaOH溶液(1)流程：铁离子的检验(2)有关反应：Fe3＋＋3OH－===Fe(OH)3↓(红褐色沉淀)Fe2＋＋2OH－===Fe(OH)2↓(白色沉淀)4Fe(OH)2＋O2＋2H2O===4Fe(OH)3铁离子测定的几种方法（邻菲啰啉法）本方法采用邻菲啰啉分子吸收光谱法测定铁含量，本方法适用于含Fe0.02～20mg/L 范围工业循环冷却水中铁含量的测定。
分光光度法测定磺基水杨酸实验报告
分光光度法测定磺基水杨酸实验报告1. 了解并掌握分光光度法的基本原理和操作方法；2. 熟悉分光光度法在磺基水杨酸测定中的应用；3. 学习正确处理实验数据和结果的方法。
实验原理：分光光度法是一种通过测定溶液对特定波长单色光的吸收程度来测定物质浓度的方法。
磺基水杨酸具有较强的紫外吸收能力，在260 nm处吸收峰比较明显。
根据比尔－朗伯定律，物质溶液的吸光度与物质的浓度成正比。
实验步骤：1. 准备工作：清洗量瓶，皮试盘，吸光皿等实验仪器，并将它们晾干；2. 将磺基水杨酸样品溶解于适量的甲醇中，制备浓度为100 mg/L的磺基水杨酸溶液；3. 以甲醇为基准，制备不同浓度的标准溶液，例如：10, 20, 30, 40, 50 mg/L；4. 使用紫外可见分光光度计设置波长为260 nm，调整到最大吸收峰；5. 用纸巾擦拭清洁吸光皿，并分别取一定量标准溶液和磺基水杨酸溶液；6. 将吸光皿插入分光光度计，并将其吸光度值调整至零点；7. 分别测量标准溶液和磺基水杨酸溶液的吸光度值，记录下实验数据；8. 取标准溶液和磺基水杨酸溶液的吸光度及浓度，绘制标准曲线；9. 根据标准曲线，计算磺基水杨酸溶液的浓度；10. 计算并记录每个样品的浓度值。
实验结果：根据测量得到的吸光度数据和标准曲线，计算得到磺基水杨酸的浓度，结果如下所示：样品编号吸光度浓度(mg/L)- -1 0.100 11.112 0.200 22.223 0.300 33.334 0.400 44.445 0.500 55.56根据计算结果，可以得出磺基水杨酸在样品中的浓度分别为11.11 mg/L，22.22 mg/L，33.33 mg/L，44.44 mg/L和55.56 mg/L。
实验讨论：1. 实验中我们使用了分光光度法来测定磺基水杨酸的浓度，这是一种经典的测定方法，具有较好的准确性和灵敏度；2. 在实验过程中，我们选择了260 nm处的吸光度峰进行测定，这是因为磺基水杨酸在该波长处吸收最强；3. 实验数据的处理过程中，我们绘制了标准曲线，通过插值法计算出磺基水杨酸溶液的浓度，该方法具有较高的可靠性和准确性；4. 在实际应用中，需要注意样品的制备和操作的准确性，以避免实验误差的产生。
磺基水杨酸光度法测定铁(一)
磺基水杨酸光度法测定铁(一)摘要：测定水体中铁的方法很多，常用的是滴定法、光度法、原子吸收分光光度法。
对于含铁量不太高的水样，用磺基水杨酸作显色剂进行光度法测定是一种准确可靠而又简便快速的分析方法。
关键词：磺基水杨酸光度法测定铁光度法1原理在pH8～11的氨性溶液中，三价铁与磺基水杨酸生成稳定的黄色络合物，其反应式：Fe3++3SSal2-=〔Fe(SSal)3]3-(1)式中SSal2---磺基水杨酸根离子，最大吸收波长420nm，颜色强度与铁的含量成正比。
Fe3+在不同的pH下可以与磺基水杨酸形成不同组成和颜色的几种络合物。
在pH1.8～2.5的溶液中，形成红紫色的〔Fe(SSal)+；在pH4～8的溶液中，形成褐色的〔Fe(SSal)2}-；在pH8～11.5的氨性溶液中，形成黄色的〔Fe(SSal)3}3-；若pH＞12，则不能形成络合物而生成氢氧化铁沉淀。
在氢氧化铵碱性介质中，二价铁离子同样也与磺基水杨酸生成黄色络合物。
2仪器与试剂分光光度计。
铁标准溶液：溶解0.4317g硫酸高铁铵〔FeNH4（SO4)2·12H2O]于10mL的1∶1盐酸溶液中，移入500mL容量瓶内，用水稀释至刻度。
此溶液铁离子含量为100μg/mL。
将此溶液稀释5倍后，铁标准溶液的浓度为20μg/mL。
氢氧化铵1∶1；磺基水杨酸20%。
3绘制标准曲线依样品的含量取0、5、10、20……500μg铁标准溶液于100mL容量瓶中，加水稀释至50mL。
加入20%磺基水杨酸10mL，用1∶1氢氧化铵中和至溶液颜色由紫红色变为黄色并过量4mL，用水稀释至刻度，摇匀。
10min后，用分光光度计(420nm波长)进行测定。
4样品的测定取10～50mL水样(依样品含量高低适当增减)，置于100mL容量瓶中，加入20%磺基水杨酸10mL，进行显色、测定。
根据公式计算水样中铁的含量：C(Fe)=m/V(2)式中C(Fe)--测定样品所得铁的浓度，μg/mLm--由标准曲线查出的样品中铁量，μgV--水样体积，mL5讨论①按上述方法测定出的结果为水样中全铁的含量。
实验37 磺基水杨酸法测铁的含量
实验37 磺基水杨酸法测铁的含量实验目的（1）巩固吸光光度法的基本理论，掌握吸收曲线及标准曲线的绘制及应用。
（2）了解721型分光光度计的工作原理及使用方法。
一、提问（1）溶液酸度对磺基水杨酸铁配合物的吸光度有何影响？（2）本实验中哪些试剂应准确加入？哪些不必严格准确加入？为什么？（3）使用蒸馏水和试剂空白作参比溶液有何区别？工作曲线是否都通过原点？二、讲解1、原理：Fe3+离子与磺基水杨酸能形成有色配合物，在pH＝8～11的氨性溶液中该配合物呈黄色，且其浓度服从朗伯－比尔定律。
可以固定溶液浓度和比色皿厚度，通过调节入射光的波长测定不同波长时的吸光度并绘制吸收曲线，找出最大吸收波长；固定波长为最大吸收波长，测定一系列标准溶液的吸光度，作出工作曲线。
根据相同条件下未知液的吸光度，可以在工作曲线上求出未知液的浓度。
（1）Fe3+离子与磺基水杨酸能形成逐级配合物，在不同酸度条件下，可能生成1：1、1：2和1：3三种颜色不同的配合物，故测定时应控制溶液酸度。
（2）配制标准溶液时铁离子必须准确加入，过量的磺基水杨酸和氨水对溶液的吸光度影响不是很大，不必严格准确加入。
（3）试剂空白作参比溶液可以消除溶液中其它有色物质的影响，所得工作曲线通过原点。
蒸馏水不能消除溶液中其它有色物质的影响，所得工作曲线不一定通过原点。
2、操作注意（1）为避免引起光电池疲劳现象，不测定时应打开暗室盖，特别应避免强光照射。
（2）比色皿盛取溶液时只需装至比色皿的2/3处，过满易溅出腐蚀仪器。
（3）比色皿的光学表面一定要注意保护。
（4）操作仪器要小心，不要用劲拧动，以免损坏机件。
（5）读数时眼睛应垂直于表盘，使平面镜里外的指针重合，此时读数最准确。
（6）每改变一个波长，就得重新调0和100％。
三、实验要求（1）熟悉分光光度计的构造，并掌握其使用方法。
（2）绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
（3）绘制工作曲线，并利用工作曲线求出未知液的浓度。
铁的含量测定 磺基水杨酸
铁的含量测定、原理应用比色分析测定溶液中伯的含量有硫氰酸盐显色法、磺基水杨酸法及邻菲罗啉显色法等各各方法现以磺基水杨酸法例介绍铁的含量测定。
在不同酸度下，Fe3+和磺基水杨酸生成组成不同的配合物。
若控制溶液PH 值在8-11.5的条件下显色，可生成配位为6的黄色三磺基水杨酸合铁配合物。
反应式如：上式可简写为溶液的最吸收波长λmax=420nm，因此可在420nm 处进行测定（若用光电比色计测定可选择蓝色光片）。
此方法适合于测定无大量Cu2+、Ca2+、Cr3+、Ni2+等离子存在的溶液中铁离子的含量。
二、操作步骤（一）标准曲线的绘制称取一定量硫酸铁铵[NH4Fe(SO4)2·12H2O]用蒸馏水溶解，加适量配制成含Fe3+0.1lg·L-1的标准溶液，再稀释成含Fe3+0.025mg·L-1的操作溶液。
取25ml容量瓶6只，编号后分别加入操作溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00及5.00ml，各加入10%NH4CL溶液2ml和10%磺基水杨酸溶液2ml，滴加氨水至溶液由紫红色变为黄色，并使氨水稍过量，然后用NH4CL-NH3缓冲溶液稀释至刻度，摇匀，以1号为空白，在420nm处依次测定吸光度。
以Fe3+含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
（二）样品的测定取25ml容量瓶1只，准确加入经过处理的浓度在标准范围内的被测溶液，按上面标准系列配制的同样加入等量的显色剂和缓冲溶液，在相同条件下测定被测溶液的吸光试，利用标准曲线找出样品溶液的浓度，根据样品溶液的稀释倍数，求出样品的含量。
例如，用磺基水劣根性酸法比色测定微量铁含量。
称取0.432g硫酸铁铵溶于水，加18%硫酸溶液1ml，转移至500ml容量瓶中，用水定容，作为标准溶液，其浓度为0.1g·L－1。
取下列不同体积的上述溶液于50ml容量瓶中，加入显色剂后定容，在420nm处测定吸光度，结果如下：全屏显示表格以吸光度A值纵坐标，标准溶液中Fe3+含量为纵坐标作图，即得如图8-12的标准曲线吸取待测液样品5.00ml于50ml容量瓶中，加入显色剂后定容，其方法与绘制标准曲线相同，测得吸光度为0.341。
磺基水杨酸分光光度法
浓度[μ g/mL]
吸收值 A
Fe ＋3 含量
公式：
C V
S 100 % x
2
1.0588 1.0835
0.126
3
1.0229
0.072
称样量 克 1 1.0946 1.0408 2 1.0588 1.0835 3 1.0229
溶液 Fe ＋3 含量
24 小时后 Fe ＋3 含量
浓度[μ g/mL]
样品液静置 48 小时 溶液 Fe ＋3 含量
浓度[μ % 0.77% 0.47%
5-磺基水杨酸分光光度法
测定 3 价铁
项目：样品溶液稳定性考察 日期：2015.1.29-1.30 样品：2015 年 1 月生产，研细品。 1. 超声 30 分钟，静置 24 小时，取上清液，显色放置 30 分钟后，24 小时后分别检测。 2. 样品液静置 48 小时，取上清液，显色 30 分钟后，检测。 检测: 上清液 10 毫升至 100 毫升，加显色剂 10 毫升，考察 100 毫升 Fe ＋3 溶液浓度变化。 标准曲线方程： 24 小时后
浓度[μ g/mL] 1.2600 2.5200 5.0400 7.5600 11.3400 Abs 0.043 0.082 0.162 0.245 0.363 Abs 0.042 0.082 0.162 0.245 0.365
＋3
称样量 克 1 1.0946 1.0408 2 1.0588 1.0835 3 1.0229
0.74% 0.75% 0.98% 0.89% 0.60%
0.72%
0.92%
0.54%
备注：未扣除 Fe ＋2 干扰值 A=0.02 统计分析 标准差 S 0.150151 0.230517 0.349149 0.359917 0.275925 0.004583 0.007071 0.011061 0.011314 0.008505 0.036056 0.056569 0.080829 0.084853 0.065064 平均数 X 3.1037 2.976 3.8423 3.6015 2.1873 0.101 0.097 0.1247 0.117 0.0717 0.71 0.71 0.9067 0.83 0.5367 变异系数 CV % 4.84 7.75 9.09 10.0 12.61 4.54 7.29 8.87 9.67 11.86 5.08 7.97 8.91 10.22 12.12
磺基水杨酸分光光度法测铁的微型实验设计
磺基水杨酸分光光度法测铁的微型实验设计《用磺基水杨酸分光光度法测铁的微型实验设计》实验目的本实验旨在利用磺基水杨酸分光光度法（Griess法）测定水样中铁的含量，并建立准确的测定方法，解决铁的分析问题。
实验原理磺基水杨酸可以与Fe（Ⅲ）结合形成深红色的复合物（如FeS-磺基水杨酸），其吸光度与Fe（Ⅲ）浓度成正比，故利用这种复合物吸收光谱测定Fe（Ⅲ）浓度。
实验材料用于衡量Fe（Ⅲ），磺基水杨酸，氢氧化钠，氟溴酸纳，氨水，外加曲利醇，0.1mol/L硫酸钾和不含Fe（Ⅲ）的纯水。
实验步骤1.将一种不含Fe（Ⅲ）的纯水（50ml）在野外实验室中称取，然后向该液中加入硝酸钡以及曲利醇（硝酸钡：曲利醇=1:1），搅拌均匀，使水样得到全面酸化，并保持。
2.将50ml甲醇中加入0.2mmol的磺基水杨酸，搅拌使之均匀溶解，作为比色剂。
3.将前步骤中制备的水样加入一定量的标准溶液（Fe（Ⅲ）），搅拌均匀，使Fe（Ⅲ）和吸光剂上的结合物形成。
4.将以上混合物放入分光光度仪中，测定其在540nm处的吸光度。
5.根据该实验所测定的结果，按照磺基水杨酸的比色分光光度赤仪（Griess法）的标准，计算所检测的水样中Fe（Ⅲ）的含量，以求得实验质量控制结果。
结果及分析通过磺基水杨酸分光光度法（Griess法）测定，本实验得出的水样中铁的含量为1.2mgl-1。
通过分析结果，我们可以知道，本次实验能够较准确地测定水样中铁的含量，并能够为铁的分析提供参考。
结论本次实验采用食品科学习磺基水杨酸分光光度法（Griess法）来测定水样中铁的含量，试验结果表明，磺基水杨酸分光光度法能够获得比较准确的测定结果。
因此，可以用磺基水杨酸分光光度法来测定水样中的铁的含量，为今后的科学研究提供有效的思路。
磺基水杨酸、邻二氮菲显色剂的选择
显色剂的选择一、邻二氮菲1.配制：[醇溶法] 取1.5g邻二氮菲，溶于约20mL乙醇（甲醇）中，转移至1L的烧杯中，以蒸馏水定容至1L。
即得到~0.15%邻二氮菲水溶液。
[热溶法] 取1.5g邻二氮菲，于小烧杯中加少量水搅拌成悬浮状，将其加入到1L热水（80℃+）中，搅拌5~10 min，直至溶液澄清透明为止，冷却即得~0.15%邻二氮菲水溶液。
两种配制方法比较醇溶法：用于对含痕量或微量Fe试样中Fe的定量分析，分析方法为分光光度法或目视比色法。
热溶法：与醇溶法类似，但这种方法操作较为麻烦，而且浓度不易把握，甚至会出现溶解不完全的情况。
据Samaria亲自试验，按照上面给定的用量及温度要求，可以完全溶解，得到的邻二氮菲水溶液与醇溶法效果无异。
2.原理：在pH=2~9的溶液中，邻二氮菲与2价亚铁离子（Fe2+）发生显色反应，该反应的选择性很高，而且生成的橙红色络合物非常稳定，lgK稳=21.3（20℃），其溶液在510nm（可见光）有最大吸收峰，利用此显色反应，可以用可见光分光光度法测定微量铁。
3.使用注意事项在测定时需加入还原剂保持二价铁离子不被氧化成三价铁离子，如盐酸羟胺。
二、磺基水杨酸1.配制：用10g的磺基水杨酸溶于65ml水中，加入35ml 2mol/L的NaOH或KOH，摇匀即可。
加入的原因是为了酸碱中和,增加溶解度,易于和其它不溶于水的有机物分开2.原理：磺基水杨酸是一种光度分析中的常用试剂,在PH=1.8~2.5时与铁生成紫红色络合物,在PH=4~8时与铁生成红色络合物,在PH=8~11.5时与铁生成黄色络合物。
本方法采用黄色络合物进行检测,该络合物的最大吸收波长为420nm,颜色强度与铁的含量成正比。
3.使用注意事项在测定时最好加入氧化剂保证样品内所有组分被氧化，如氨水。
两者比较1.磺基水杨酸测定的是三价铁，邻二氮菲测的是二价铁2.邻二氮菲的价格是磺基水杨酸的20倍左右，且需新鲜配制，用盐酸羟胺还原，成本较高。
磺基水杨酸分光光度法测铁
O -COO-SO3-3Fe6-磺基水杨酸分光光度法测铁一、目的和要求1、练习使用移液管、容量瓶2、掌握用磺基水杨酸显色法测定铁的原理和方法。
3、掌握722型分光光度计的使用方法。
二、实验原理磺基水杨酸是分光光度法测定铁的有机显色剂之一。
磺基水杨酸（简式为H 3R ）与Fe 3+可以形成稳定的配合物，因溶液pH 的不同，形成配合物的组成也不同。
在 pH=9～11.5 的 NH 3.H 2O-NH 4Cl 溶液中，Fe 3+与磺基水杨酸反应生成三磺基水杨酸铁黄色配合物。
+ Fe 3+该配合物很稳定, 试剂用量及溶液酸度略有改变都无影响。
Ca 2+、 Mg 2+、 Al 3+ 等与磺基水杨酸能生成无色配合物, 在显色剂过量时, 不干扰测定。
F -、 NO 3-、 PO 43- 等离子对测定无影响。
Cu 2+ 、Co 2+、Ni 2+、Cr 3+ 等离子大量存在时干扰测定。
由于Fe 2+ 在碱性溶液中易被氧化，所以。
本法所测定的铁实际上是溶液中铁的总含量。
磺基水杨酸铁配合物在碱性溶液中的最大吸收波长为 420nm, 故在此波长下测量吸光度。
三、实验仪器及试剂1，15mlFeCl3溶液（0.05mg/L)2.4.8g 的NH4Cl 固体，50ml1mol/L 氨水稀释至500ml （pH=9的NH4CL-NH3缓冲溶液） 3，2ml10%磺基水杨酸溶液 4，752型分光光度计 5，50ml 容量瓶7个6，250ml 烧杯1个，500ml 烧杯1个 7.蒸馏水 8.移液管3个 9.塑料滴管1个 10.50ml 量筒1个 11.pH 计1个四、实验步骤1、进入实验室，将实验要用到的有关仪器从仪器橱中取出，把玻璃器皿按洗涤要求洗涤干净备用。
2、 系列标准溶液的配制 在6 只 5Oml 容量瓶中, 用移液管分别加入0.00 、1.00、 2.00、3.00、4.00 、5.00浓度为0.025mg/L 的铁盐标准溶液, 各加2ml 2%磺基水杨酸溶液, 滴加pH=9-11.5的NH4CL-NH3缓冲溶液）直到溶液变成黄色。
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磺基水杨酸法尿蛋白测定
原理：磺基水杨酸为生物碱制剂，在酸性环境下，其阴离子可与带正电荷的蛋白质结
合成不溶性蛋白盐而沉淀。
试剂：1）100g/L磺基水杨酸乙醇溶液：取磺基水杨酸20g，加水至100ml，取此液与等量95%乙醇混合。
2）200g/L磺基水杨酸溶液：取磺基水杨酸20g，加水至100ml。
操作：1）加尿标本：取小试管加尿液3-5ml
2）加试剂：加100g/L磺基水杨酸乙醇溶液3-4滴或磺基水杨酸溶液1-2滴，形成界面。
3）观察结果：1、阴性：尿液不显混浊，外观仍清晰透明。
2、可疑（+--）：轻微混浊，隐约可见，含蛋白量约为0.05-0.2g/L
3、阳性（+）：明显白色混浊，但无颗粒出现，含蛋白量约为0.3g/L
（++）：稀薄乳样混浊，出现颗粒，含蛋白量约为1g/L
（+++）：乳浊，有絮片状沉淀，含蛋白量约为3g/L
（++++）：絮状混浊，有大凝块下沉，含蛋白量约为≥5g/L
注意事项：
1、磺基水杨酸法灵敏度：0.05-0.1g/L尿
2、混浊尿处理：应先离心或过滤
3、强碱性尿处理：应加5%醋酸溶液数滴酸化后再做试验，否则可出现假阴性。
4、假阳性结果：可见有机碘造影剂、超大剂量使用青霉素；尿含高浓度尿酸或尿
酸盐（出现阳性反应与蛋白阳性反应结果不同，前者加试剂1-2分钟后出现白
色点状物，向周围呈毛刺状突起，并慢慢形成雾状）。