实验动物的微生物学及寄生虫学控制

第四节 清洁动物（Clean animal，简称CL动物）
定义：除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和 对科学研究干扰大的病原。
饲养条件：屏障系统大规模生产 来源：SPF动物扩群 应用：各种科研、教学用大小鼠
清洁级动物特点：
1、微生物特点 清洁级动物比普通级动物要求排除的微生
物和寄生虫多，但比SPF动物少。清洁级动 物除肉眼观察无病外，尸体解剖时，主要 脏器、组织无论是肉眼观看还是病理组织 切片均应无病变。
(1)盲肠肥大，比普通动物要大5-6倍。 (2)肠道肌层薄，肠绒毛变细变短。 (3)肝脏重量下降。
无菌动物特点
• 循环系统
(1)心脏变小 (2)白细胞数变少，且数量波动范围小
• 免疫系统 免疫机能基本处于原始状态。
(1)胸腺，淋巴组织，网状内皮系统发育不良
(2)脾脏小，无二级滤泡，网状内皮细胞功能下降
• 3、免疫学研究中的应用
无菌动物体内既无抗原也无特异性抗体，处于 一种“原始状态”，很适合用于各种免疫功能 的研究。 如，无菌动物暴露于微生物，先产生α球蛋白，
再产生β球蛋白，最后产生γ球蛋白。
常用无菌动物进行免疫抑制剂试验研究。
4、肿瘤学研究 （1）制备人体肿瘤模型需要免疫抑制
动物，而普通动物给予免疫抑制剂后常 继发感染死亡，所以可以应用无菌动物。
SPF动物 屏障系统 确知不带有的微生物
清洁动物 屏障系统 确知不带有的微生物
普通动物 开放系统 微生物情况不明确
二、对科染病 无
无
无 未知
寄生虫 无
无
无 未知
试验结果 明确 明确 明确 有疑问
用动物数 少 少
较少 多或大量
统计价值 很好 可能好 较好 不准确
必须饲养在温湿度恒定的百级空气净化的隔 离系统中，实行严格的微生物控制。
• 其他 与无菌动物比较。 悉生动物肠道内存在细菌可以合成维生素，
不会像无菌动物一样发生维生素缺乏症。 抵抗力、生活力较强，易于饲养管理。
无菌动物和悉生动物的应用
1、病因学的研究 如：猫瘟、龋齿的形成 2、微生物学中的研究 (1)微生物间的拮抗作用 (2)微生物和宿主之间关系 (3)病毒学研究
实验动物微生物等级
2001版国家标准根据微生物和寄生虫等级对实验动物等级 进行了重新设定。
❖ 小鼠
清洁级 SPF级 无菌级
❖ 大鼠
清洁级 SPF级 无菌级
❖ 地鼠 普通级 清洁级 SPF级 无菌级
❖ 豚鼠 普通级 清洁级 SPF级 无菌级
❖ 家兔 普通级 清洁级 SPF级 无菌级
❖犬
普通级
SPF级
7、放射医学研究 无菌动物可以耐受大剂量的放射线照射。可
用于区别放射引起的症状和继发感染的症状。 8、毒理学研究
药物的毒理作用常常与肠道细菌的代谢产物 有关。用无菌动物进行研究，可以准确地分 析药物的毒理作用和药物的合理作用。
9、心血管病研究 实验证实，许多心血管疾病与肌体内胆固醇代谢有关， 而肠道微生物可以分解胆汁酸，降低血液中胆固醇水 平。
第三章
实验动物的微生物学及寄生虫学控制
普通动物在开放系统条件下饲养，一 般都带有微生物、病毒和寄生虫并感染某 些疾病，因此用普通动物做实验，敏感性 较差、反应性不一致，实验结果不易重复。
要提高实验的准确性，必须对实验动 物进行遗传学、微生物学、寄生虫学控制， 培育出标准的合格的动物，使实验结果准 确可靠。
2、来源 清洁动物来源于SPF动物、无菌动物、悉
生动物或剖腹产动物。
3、饲养管理 清洁级动物饲养于温湿度恒定的万级空气净
化的屏障系统中。 其所用的饲料、垫料、饮用水、笼器具等都
经过消毒灭菌处理。 工作人员需换灭菌工作服、鞋、帽、口罩等
进入动物室进行操作。
清洁级动物的应用：
清洁级动物是根据我国国情而设立的等级 动物。
实验动物按微生物学控制的分类
按微生物学控制标准，结合我国实验动物的发展状 况，我国实验动物分为四个等级：
• 无菌动物(Germ free animal, GF)和 • 悉生动物(Gnotobiotic animal, GN) • 无特定病原体动物 • (Specific pathogen free animal, SPF) • 清洁动物(Clean animal, CL) • 普通动物(Conventional animal, CV)
• 2.生理学特点：
免疫功能
(1)血清中IgG、IgM水平低，几乎不存 在丙种球蛋白和特异性抗体
(2)免疫应答速度慢，过敏反应、对异体 移植物的排斥反应以及自身免疫现象消失 或减弱
• 生长率 不同种属影响不同 无菌鸟类生长率高于同种普通鸟 无菌大、小鼠与普通鼠差不多 无菌豚鼠和无菌兔比普通的慢
• 生殖
❖ 代乳动物的准备
• 3.放入隔离器进行饲养
• 二、悉生动物的培育程序 （1）获取无菌动物 （2）准备好特定的微生物材料 （3）把上述材料转入无菌饲育隔离器 （4）在隔离器内给无菌动物授入微生物
三、SPF动物和清洁动物
将无菌动物或悉生动物饲养于屏障系统使 其自然感染特定微生物以外的微生物，但 应严格防范特定病原体的污染，并需要定 期检查。
来源：经微生物学检查不带有上述病原体的动物， 或SPF动物降级。
应用：豚鼠、兔、犬、猴等大动物的实验研究。
普通动物特点：
1、微生物学特点 要求不携带所规定的人兽共患病病原和动物烈
性传染病的病原。 2、饲养管理
饲养于开放系统。但仍然对温度，湿度，饲料， 垫料，饮水，卫生等有一定控制。 3、生理学特点
第七节 洁净动物的培育
• 一、无菌动物的培育 • 1、无菌手术 小哺乳动物动物：子宫切除术（剖腹产） 大哺乳动物动物：子宫切开术（剖腹产） ❖鸟类：消毒卵
2、哺乳 ❖人工哺乳 ❖代乳
注意： ❖ 供胎动物：不携带垂直传播的微生物 ❖ 手术时间的选择 ❖ 手术速度 ❖ 无菌操作 ❖ 环境温度 ❖ 防止羊水呛入呼吸道 ❖ 手术后微生物的检查
它较普通级动物健康，又较SPF级动物 易达到质量标准，在动物实验中可免受动 物疾病的干扰，其敏感性与重复性亦较好。
目前在我国已成为适用于科研的标准级别 的实验物。
第五节 普通动物（Conventional animal，简称 CV动物）
定义：不携带所规定的人兽共患病病原和动物 烈性传染病的病原。
饲养条件：普通开放环境
长期实验 好 好 可能好 困难
死亡率 很少 少
较少 高
长期实验成活率100% 90%
80% 40%
实验标准设计 可能 可能 可能 不可能
结果讨论价值 很高 高
较高 有疑问
• 总之，使用无菌动物、悉生动物、及SPF动 物和清洁级动物，由于有明确的微生物背 景和可控的饲育环境，可大大提高动物实 验的重复性和准确性，因而得到广泛的应 用。
三、生物学特性的比较
洁净动物与普通动物相比，在血液学、血液 生化指标及主要脏器系数方面均产生一定变化。
如清洁级大鼠与普通大鼠相比，白细胞较 少，其中中性粒细胞少，淋巴细胞相对增加； 血清碱性磷酸酶、胆红素、胆固醇值较高；尿 素氮、肌酐值比较低；空肠淋巴结、脾脏较轻； 肺、肾组织形态比普通大鼠健康。
SPF动物特点
1、微生物特点 SPF动物除一、二级动物应排除的病原体 外，不携带主要潜在感染或条件致病和对 研究实验干扰大的病原。
2、来源 SPF动物来源于无菌动物或剖腹产动物。
3.饲养管理
SPF动物必须饲养在温湿度恒定的万级空气净 化的屏障系统中，实行严格的微生物控制。
SPF动物的应用
目前国际上公认SPF动物适用于所有科研实验， 是国际标准级别的实验动物。它的应用价值在于 它无人畜共患病，无主要传染病，无对实验研究 可能产生干扰的微生物。各种疫苗生产所采用的 动物应为SPF动物。如SPF蛋，（无垂直感染）， 以及生物学鉴定等。
猪
Whitenair,1960
马
Drummond等,1973
猴
Reyniers,1942
鸡
Reyniers,1943
鹌鹑
Woodard等,1965;Miles,1966
无菌动物特点
• 1.微生物特点：
在动物体内外任何部位均检不出任何 活的微生物和寄生虫。
注意“无菌”是个相对的概念。
无菌动物特点
2.形态学特点： • 消化系统
外观健康，饮食排泄正常，无异常分泌物，无 临床症状，脏器无眼观病灶。
普通动物的应用：
❖ 仅可作为生物医学中教学示教之用， ❖ 或作为某些科学研究为探索方法而从事的予试验
之用， ❖ 不可供科研、生产和检定之用， ❖ 由于普通级动物繁殖力强，生产量大，生产成本
低，适宜作一般性的教学实验和预实验用。
第六节 洁净动物与普通动物的比较
3. 画出实验动物微生物监测流程
洁净动物通常是指来源于剖腹产、实行严格 的微生物控制、饲养于空气净化系统设施 内的动物，包括清洁动物、SPF动物、悉生 动物和无菌动物。洁净动物与普通动物相 比，在很多方面均存在一定差异。
一、微生物控制比较
种 类 饲育环境
说明
无菌动物 隔离系统 无法检出任何生命体
悉生动物 隔离系统 确知带有的微生物
种类
培育者及育成时间
小鼠
Pleasants,1959
大鼠
Reyniers1946；Gustafsson,1948
豚鼠
Miyakawa1958; Tanami,1959;
兔
Wostmann1959; Luckey,1963
狗
Glimsedt,1946
猫
Bleby,1969
山羊、绵羊 Smith,1961,1966
(1)无菌大、小鼠略高于普通大小鼠